绿蝇基因组DNA提取方法比较研究

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一种动物基因组DNA提取方法的改进

3国家自然科学基金重点项目(No.39730090)和中国科学院项目(KZ9512B12106,STZ 21205)资助;33现工作单位曲阜师范大学生物学系;333通讯作者;第一作者介绍　汪永庆,男,32岁,博士研究生;研究方向:分子生态学;收稿日期:1999212227,修回日期:2000208222一种动物基因组D NA 提取方法的改进3汪永庆①　王新国②　徐来祥①33　张知彬①333(①中国科学院动物研究所农业害虫害鼠综合治理研究国家重点实验室　北京　100080;②军事医学科学院生物工程研究所　北京　100071)摘要:介绍一种动物基因组DNA 提取方法。

该方法具有简便、快速、实用的特点,所获得的DNA 数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。

关键词:动物组织;基因组DNA ;快速提取中图分类号:Q9523　文献标识码:A 文章编号:025023263(2001)01227203A N e w R apid Method for Extraction of High Q uality of G enomic D NA from Animal TissuesWAN G Y ong 2Qing ①　WAN G Xin 2Guo ②　XU Lai 2Xiang ①　ZHAN G Zhi 2Bin ①(①Instit ute of Zoology ,Chi nese Academy of Sciences Beiji ng 100080;②Instit ute of Biological Engi neeri ng Beiji ng 100071,Chi na )Abstract :A very simple ,fast method for extracting high quality genomic DNA from different tissues of animal is described.The method does not require expensive and environmentally hazardous reagents and equipment.The amount of tissue required by this method is about 50mg.The quantity and quality of the DNA extracted by this method is high enough for per 2forming thousands of PCR 2based reactions of other DNA manipulation such as restriction di 2gestion ,Southern blot and cloning.K ey w ords :Animal tissues ;G enomic DNA ;Rapid extraction 重组DNA 技术的问世使得几乎所有的生物学学科都被带入分子生物学的大门,在该领域最激动人心的重大进展之一是利用DNA 分子水平上的变异作为遗传标记进行遗传作图。

实蝇DNA提取方法的比较

实蝇DNA提取方法的比较余洁;陈劲松;翁瑞泉;邱君志;关雄【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2004(12)6【摘要】在实蝇的口岸检疫鉴定工作中，主要以成虫的外部形态特征作为分类依据，而口岸截获的往往是幼虫或卵，通常的做法是对其进行室内饲养待获得成虫后再进行鉴定。

这样的检疫周期太长，并且不利于对世界或某一区域实蝇种群结构的了解。

分子生物学技术可以弥补传统方法的不足，能快速、准确和灵敏地检测出实蝇种类，揭示其种群间的亲缘关系并提早制定相应的防治方法。

本实验比较了5种实蝇基因组DNA提取方法，并进一步用RAPD技术快速鉴定其种类。

【总页数】2页(P741-742)【作者】余洁;陈劲松;翁瑞泉;邱君志;关雄【作者单位】福建农林大学教育部农药生物化学重点实验室,福州,350002;福建省泉州出入境检验检疫局,泉州,362200;福建省泉州出入境检验检疫局,泉州,362200;福建农林大学教育部农药生物化学重点实验室,福州,350002;福建农林大学教育部农药生物化学重点实验室,福州,350002【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.不同DNA提取方法对肺癌血浆循环DNA抽提效果比较 [J], 李旺胜;唐一通;张楚微;王书菲;徐洲;杜陈;金钊2.几种DNA提取方法对红树植物秋茄叶片DNA提取效果的比较 [J], 仇建标;丁文勇;陈少波3.五种DNA提取方法对鱼加工制品DNA提取效果的比较 [J], 李进波;盛婧;李想;潘良文;吕蓉;杨捷琳4.基于线粒体DNA序列的广西蜜柑大实蝇与日本蜜柑大实蝇的比较研究 [J], 李伟丰;唐侃;王湛军;唐绍清5.DNA提取方法对一串红不同部位DNA提取的比较 [J], 侯艳霞;汤浩茹;张勇;罗娅;董晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同物种的DNA提取方法

不同物种的DNA提取方法摘要DNA作为遗传微粒，为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献，而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA 的性质，而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能，进而使DNA的研究进入到了分子水平。

然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的，到现在还是一个热门课题，为了研究其作用，就需要从各种物种中提取DNA，由于不同物种结构的复杂性不同，导致提取DNA的方法也是各不相同，为此，我整理了一些物种的DNA提取方法。

关键词：物种、DNA提取1、月季DNA的提取方法：之所以提取高质量的月季DNA有难度，是因为其体内富含多糖及多酚类的物质，在一般的DNA提取方法中，很难被分离，这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。

为了解决这个问题，北京市园林科学研究所采取五种提取方法，在其最后的实验结果表明：Draper法提取月季DNA的纯度最高，完整性最好。

2、大麦小孢子DNA的提取方法：要想分离提取小孢子的DNA，就需要降解小孢子壁，而小孢子壁由外壁和内壁组成，内壁主要由纤维素和果胶组成，这类物质能够被相应的酶所水解，而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物，化学物质非常稳定，到目前为止，还没有相应的酶可以水解。

因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。

对此，莱阳农学院展开了研究，他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。

最后“DNA的提取”等一系列的步骤，在最后的统计结果中，发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果，而且DNA的得率和质量几乎一样。

这也证明了上述两种方法是有效而可行的，当然在这个研究过程，首次采用超声波法进行破壁，收到出乎意料的效果，也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。

所谓的CTAB，其中文名是十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续的PCR扩增、基因克隆、基因组测序等实验打下基础。

本报告将详细介绍植物基因组DNA提取的实验步骤、方法和结果。

实验材料和仪器。

1. 实验材料，植物叶片样品、液氮、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、等离子体膜、异丙醇沉淀液、乙醇、夹板、离心管、PCR管等。

2. 实验仪器，搅拌器、冰箱、冷冻离心机、显微镜、紫外可见分光光度计等。

实验步骤。

1. 取少量植物叶片样品置于液氮中，研磨成细碎的粉末状。

2. 将研磨好的植物叶片样品加入细胞裂解缓冲液，混合均匀后浸泡于65°C水浴中。

3. 加入蛋白酶K，继续65°C水浴裂解。

4. 加入等体积的异丙醇，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。

5. 加入等体积的等离子体膜，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。

6. 加入等体积的异丙醇沉淀液，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。

7. 将混合液转移至PCR管中，加入等体积的乙醇，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。

8. 离心沉淀后，弃上清液，加入70%乙醇洗涤。

9. 将洗涤后的DNA溶解于TE缓冲液中，用紫外可见分光光度计检测DNA浓度和纯度。

实验结果。

通过上述步骤，成功提取了植物基因组DNA，并进行了浓度和纯度的检测。

实验结果显示，提取的DNA浓度为120 ng/μl，纯度（A260/A280）为1.8，符合后续实验的要求。

结论。

本实验通过简单、快速、高效的方法成功提取了植物基因组DNA，为后续的分子生物学实验提供了可靠的基础。

通过本实验，我们对植物基因组DNA的提取过程有了更深入的了解，为今后的科研工作积累了宝贵的经验。

总结。

植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本实验通过简单、快速、高效的方法成功提取了植物基因组DNA，并进行了浓度和纯度的检测。

动物基因组DNA的提取

动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。

通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。

[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。

5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。

绿头苍蝇的DNA

科学家发现，绿头苍蝇体内的DNA序列能够协助我们快速了解哺乳动物多样性。

停在动物尸体上的绿头苍蝇（丽蝇）并不但仅以腐肉为食，它们还抽取这些“食物”的DNA。

德国科学家发现，绿头苍蝇体内的这些DNA能长时间存有，并可被测序。

在人迹罕至的热带雨林中，绿头苍蝇体内的DNA序列能够协助我们快速了解哺乳动物多样性。

在科特迪瓦共和国，可怕的炭疽热曾杀死大量黑猩猩，但研究者们却对这种病毒的基因序列困惑不已，无法对其测序。

于是，他们从食用受感染动物的苍蝇体内取样，检测是否携带炭疽热病毒。

很快他们有了意外发现。

领导这项研究的塞巴斯蒂安•卡勒魏格纳克-斯宾塞（Sébastien Calvignac-Spencer）介绍说，“从苍蝇体内检测哺乳动物的DNA，能够很便捷地了解生物多样性，这是个很酷的方法。

斯宾塞是罗伯特•科赫研究所（ Robert Koch Institute，位于德国柏林）的一位进化生物学家。

在科特迪瓦的塔依国家公园和马达加斯加的奇灵地保护区，研究小组以肉为诱饵，用网捕获蝇类。

他们发现，40%的蝇体内携带哺乳动物DNA。

在科特迪瓦，研究人员对DNA测序，鉴别出16种哺乳动物，包括6到9种当地灵长类物种，还包括一种濒危动物——Jentink小羚羊（又被称作詹氏小羚羊），这种动物现存不到3500只。

在马达加斯加岛，研究小组鉴别出4种哺乳动物物种，其中包括两种狐猴，这代表了该岛八分之一的哺乳动物。

他们的研究发表在1月7日的《分子生态学》（Molecular Ecology）杂志上。

DNA中转站“这些DNA仅仅一些碎片，却很有用。

”斯宾塞说。

他的小组能恢复出数百个碱基对长的基因片段，而这种事情在动物、尤其是哺乳动物中则很难发生。

因为哺乳动物的内脏分泌胃酸和酶分解食物，消化太彻底，不留一点痕迹。

“而苍蝇的消化系统则没这么复杂，”他解释道。

斯宾塞建议，既然从苍蝇体内的DNA可鉴别出现存物种，生物学家能够用苍蝇来追踪濒危动物，这个方法肯定比活体寻找方便得多。

木本植物基因组DNA提取方法的对比研究开题报告

1.选题依据1.1 论文题目及研究领域1.1.1 论文题目: 木本植物基因组ＤＮＡ提取方法的对比研究1.1.2 研究领域: 木本植物DNA的提取研究1.2 论文研究的理论意义和应用价值DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。

植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作，实施分子标记，基因文库的构建，基因分离及遗传转化和鉴定等都是以提取DNA为前提。

如何简捷高效地提取到纯净、合格的DNA分子，一直是植物生物学者关注的问题。

随着DNA分子标记技术和重组DNA技术的发展，制备完整、纯度较高的基因组DNA日益显得重要。

我们在进行木本植物DNA水平遗传多样性研究时，首先遇到的问题是如何快速获得较完整、纯度较高的基因组DNA。

由于植物细胞与动物细胞不同，具有一层坚硬的细胞壁，且含有较多的多糖、色素、脂质和多酚等物质，给植物DNA提取带来很多困难，特别是多糖和多酚类物质不易与DNA分开。

相对于草本植物，多年生木本植物的次生代谢类物质含量更高，高质量的DNA提取难度更大[1]。

大多数植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白质、多糖、单宁和色素等杂质，这些杂质有时很难从DNA中除去，大多数蛋白质可通过酚-氯仿-异戊醇处理后变性、沉淀除去，绝大部分RNA可通过经RNase 处理后除去。

但大多数木本植物富含多糖、多酚类物质，DNA常受到严重的多酚污染，造成DNA沉淀物难以溶解或溶液色深；多糖污染直接影响基因组DNA的限制性核酸内切酶的酶切效果。

多酚类、多糖物质的污染会造成AFLP酶切连接等后续实验效果差，甚至后续PCR没有扩增产物[2]。

在大多数木本植物基因组DNA 的提取方法中，SDS法和CTAB法是目前最为常用的两种方法。

植物基因组DNA的提取与检测

生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。

二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。

2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。

而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。

DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。

DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。

因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。

三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。

3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。

两种动物基因组DNA提取方法的比较

收稿日期:2004209230 作者简介:肖波(1972—),男,讲师,硕士,主要从事分子生物学的教学与研究工作,(E -mail )xboyantai @s .两种动物基因组DNA 提取方法的比较肖　波,李　岩,屈慧歌,王艳华(烟台师范学院生命科学学院,山东烟台264025)摘要:分别用酚抽提法和盐洗法提取鼠、鲤、鲍三种动物基因组DNA ,利用分光光度计测定其OD 260与OD 280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA 片段在凝胶中的位置,鉴定DNA.最终确定了一种简便、快捷、经济并适用于大多数动物基因组DNA 提取的方法.关键词:基因组DNA ;DNA 提取;OD 值中图分类号:Q781 文献标识码:A 文章编号:100424930(2005)0120056203 20世纪50年代初,DNA 被证明是所有生物最主要的遗传物质.随着生物化学、分子生物学和遗传学的发展以及基因工程等生物技术的创立,有关DNA 的实验技术也得到了飞速发展.无论是基因工程,还是蛋白质工程,首先都需要从生物体中提取基因组DNA (genomic DNA )[1],所以DNA 的分离提取在分子生物学以及相关学科的研究中是一个非常重要的步骤,分离得到DNA 样品质量的好坏直接关系到下一步实验的成败.而基因组DNA 提取和纯化方法的灵敏度、特异性直接影响DNA 的质量.因此,许多学者一直在努力探索各种基因组DNA 的提取方法.目前,国内外已有多种提取DNA 的方法,如水煮法、酚抽提法、甲酰胺解聚法、盐酸胍裂解法、盐洗法等.在众多方法中,虽然有人对其进行过比较,但究竟哪一种方法更适用于普遍意义上的DNA 提取,还未见报道.本实验采用常用的酚抽提法和盐洗法对三种动物基因组DNA 进行提取,经比较找出了一种简便、快捷、实用的基因组DNA 提取方法.1　材料和方法111　实验材料、仪器及试剂实验用小白鼠由烟台绿叶制药有限公司提供.皱纹盘鲍、鲤鱼由我校孙振兴老师提供. 实验仪器主要有Y XS 型数显恒温水浴锅(山东省甄城永兴仪器厂)、超净工作台(苏净集团安泰制造)、TG L 216C 型台式离心机(上海安亭科学仪器厂制造)、DYY 22稳压稳流电泳仪(北京市六一仪器厂)、W D 29403C 型紫外投射反射仪(北京市六一仪器厂)等. 试剂有NaCl (莱阳市化工股份有限公司)、E DT A 2Na (江苏盐城双源化工厂)、T ris 碱(天津市远航化学品有限公司)、S DS (上海华美医用精细化工厂)、NaAc (山东省蓬莱市化学试剂厂)、蛋白酶K (上海生工公司)、RNA 酶(大连宝生物公司)、柠檬酸三钠、平衡酚(上海生工公司)、氯仿(江苏阜宁益林化学试剂厂)、异戊醇(天津市博迪化工有限公司)、乙酸钠(天津石英钟厂)、无水乙醇(莱阳市化工股份有限公司)等[2,3].112　基因组DNA 的提取方法 1)方法一(盐洗法)　参照文献[2]稍作修改,具体步骤如下. (1)取动物的新鲜肝脏012g ,用0114m ol/L NaCl -0115m ol/L E DT A 溶液洗去血液,剪碎,加入1m L 上述溶液,置于匀浆器中研磨.将糊状物离心15min ,弃去上清液,沉淀用上述溶液洗2—3次. (2)向上述沉淀中加入0114m ol/L NaCl -0115m ol/L E DT A 溶液250μL ,然后滴加25%S DS 溶液25μL ,边加边搅拌.然后,置60℃水浴保温10min (不停搅拌),溶液变得粘稠并略透　烟台师范学院学报(自然科学版)　Y antai N ormal University Journal (Natural Science )2005,21(1):56—58　明,取出冷至室温. (3)加入5m ol/L NaCl 溶液100μL ,使NaCl 的最终浓度超过1m ol/L ,搅拌15min ,加入约一倍体积的氯仿2异戊醇混合液,振摇10min ,离心10min.去掉沉淀,向上清液中徐徐加入2倍95%的乙醇(沉淀DNA ),DNA 沉淀析出,用玻璃棒慢慢搅动,将DNA 丝状物缠在玻璃棒上. (4)将D N A 粗制品置于225μL 01015m ol/L NaCl -010015m ol/L 柠檬酸三钠溶液中,再加入25μL 115m ol/L NaCl -0115m ol/L 柠檬酸三钠溶液,搅拌均匀.加入一倍体积氯仿2异戊醇混合液,振摇10min ,离心10min ,倾出上清液,加入115倍体积95%的乙醇,离心,DNA沉淀析出. (5)将上步所得沉淀溶于225μl 01015m ol/L NaCl -010015m ol/L 柠檬酸三钠溶液中,然后徐徐加入2倍体积95%的乙醇,边加边搅拌,取出丝状DNA ,依次用70%,80%,95%及无水乙醇洗涤,干燥. 2)方法二(酚抽提法)　按文[3]方法进行.113　DNA 质量检测 DNA 经稀释后用紫外分光光度计测定260和280nm 的光吸收值,并结合电泳检测(经1%琼脂糖凝胶电泳)提取的DNA 浓度及纯度.2　结果与讨论211　产量的比较在波长260nm 下,根据1个OD 260双链DNA等于50μg/m L ,可计算出所提基因组DNA 的产量.即OD 260×核酸稀释倍数×50×体积/1000(表1).表1　两种方法提取DNA 产量的比较动物名称方法OD 260DNA 产量/(μg ・g -1)鼠方法一01052234.0方法二0102299.0鲤方法一01090405.0方法二010*******鲍方法一010*******方法二0102090.0　注:核酸稀释倍数为600倍.212　纯度的比较纯度主要根据260和280nm 下的吸光值来判断,同时结合电泳进行观察(图1),比值在117—119之间为纯度较好(表2)[4].图1　部分DNA 电泳结果2,4,6为方法二的结果;1为M arker ;3,5,7为方法一的结果表2　两种方法提取的DNA 纯度比较动物名称方法OD 260OD 280OD 260/OD 280鼠方法一01052010301173方法二01022010102122鲤方法一01090010501180方法二01047010222104鲍方法一01035010201175方法二01020010092122 从表1,2可以看到,采用方法一提取的基因组DNA 产量较高,纯度也相对较好,能够达到1170—1180;方法二提取的基因组DNA 产量较低,纯度也相对较低,且电泳图有拖尾现象(图1),这说明DNA 分子有少量的断裂[5].此外,方法一用于鱼类的DNA 提取获得的产量明显高于其他两种生物. 方法一是利用不同浓度的NaCl 溶液,将DNP 和RNP 从样品中抽提出来.将抽提得到的核蛋白用S DS 处理,DNA 即与蛋白质分开.可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去,而DNA 则溶解在溶液中.向溶液中加入适量的乙醇,DNA 即析出.为了防止DNA 酶解,提取时加入E DT A (乙二胺四乙酸)抑制DNase.而方法二进行动物基因组DNA 提取纯化,是先用去垢剂(S DS )破坏细胞组分,再用蛋白酶K 消化除去蛋白质,特别是要除去与DNA 结合的蛋白质,然后用酚、氯仿去掉蛋白质和细胞膜成分.其标准程序为,先用饱和酚抽提一次,再用酚/氯仿/异戊醇进行第二次抽提,而酚抽提对DNA 确实存在一定的剪切作用(图1),且使用次数越多,对DNA 分子的损伤越大.同时酚具有高度腐蚀性,对人体健康不利[6].另外,用方法一提取基因组DNA 步骤简洁,耗时短,DNA 提取纯化过程所需时间在2—3h ,而方法二步骤较繁琐,反复溶解抽提,不仅增加了对DNA 的剪切作用,降低DNA 的产率,而且时间长,整个过程持续2d　第1期肖　波,等:两种动物基因组DNA 提取方法的比较57左右,工作量大.可见,方法一简便易行,快速经济,避免了常规方法中酚等因素的危害,保证了所提DNA 的完整性和纯度,同时,简化了实验操作步骤,缩短了提取过程,所需试剂少,且不需要频繁更换E ppendorf 管,能避免交叉污染.对三种动物而言,方法一提取的DNA 产量均高于方法二的产量,尤其对于鱼类DNA 提取获得了较高的产量,这可能也是由于方法一的机械剪切作用小的缘故.可见,方法一是一种切实可行、经济的方法.至于为什么方法一对鱼类DNA 提取的效果明显好于其他两种动物,有待进一步研究.参考文献:[1]　苏小鹏.适用于RAPD 分析的三种基因组DNA 提取方法比较[J ].汕头大学学报(自然科学版),2002,17(3):10—14.[2]　杨建雄,等.生物化学与分子生物学实验技术教程[M].北京:科学出版社,2002.71—131.[3]　魏群,等.分子生物学实验指导[M].北京:高等教育出版社,1999.59—68.[4]　乙引,罗在柒,柯波,等.几种DNA 提取方法的比较[J ].生物学通报,2004,39(3):55.[5]　童大跃,伍新尧,陆惠玲,等.DNA 提取方法的比较及改良[J ].中山大学学报(医学科学版),2003,24(4):411—412.[6]　杨文新,苏秀榕,杨志彪,等.鲍基因组DNA 提取新方法研究[J ].水产科学,2003,22(1):33—35.The Comparison of the Tw o Methods of G enome D NA Extraction of AnimalsXI AO Bo ,LI Y an ,QU Hui 2ge ,W ANG Y an 2hua(School of Life Sciences ,Y antai N ormal University ,Y antai 264025,China )Abstract :The genome DNAs of m ouse ,carp and abalone were extracted with tw o methods separately 1Then the ra 2tion of OD 260and OD 280was determined by ultraviolet spectrophotometer 1The purity of the nucleic acid was calculat 2ed and the position of DNA segments in the gel was observed by agar sugar gel electrophoresis 1Finally ,a sim ple ,convenient ,swift and economic method of genome DNA extraction is determined 1K ey w ords :genome DNA ;DNA extraction ;OD value(责任编辑　司丽琴)58　烟台师范学院学报(自然科学版)第21卷　。

一种简易的昆虫基因组DNA提取方法_田英芳

第27卷　第4期陕西师范大学学报(自然科学版)V ol.27　N o.4　1999年12月Jo ur nal o f Shaanxi No rm al U niver sity(N atural Science Edit ion)D ec.1999　一种简易的昆虫基因组DNA提取方法田英芳,　黄　刚,　郑哲民,　魏朝明(陕西师范大学动物研究所,陕西西安710062)摘　要:报道了一种改进的昆虫基因组DNA的提取方法.结果表明,该方法可在常温条件下,对多种昆虫及人体组织进行酚/氯仿抽提,DNA得率较高,OD260/280的值在1.6～1.9之间.关键词:基因组DNA;提取;昆虫中图分类号:Q523　文献标识码:A　文章编号:1001-3857(1999)04-0082-03在分子生物学研究中,基因组DNA的应用十分广泛,提取方法在国内外亦有不少报道.概括起来可分为两大类:(1)盐析提取法;(2)有机溶剂提取法.本文介绍的提取方法即属于后者,该方法参照M archant(1988)蝗虫基因组DN A的提取方法,并综合其他提取方法的优点而建立.1　材料与方法1.1　材料本文以蟋蟀、螽蜞斤、蝗虫、天牛、蜻蜓以及人的血液、肝脏、胃癌组织等作为实验材料,人的血液、肝脏、胃癌组织为-80℃冻存材料,昆虫标本则包括新鲜标本、-30℃冻存标本、酒精浸泡标本及干标本等.1.2　试剂及溶液1.2.1　匀浆缓冲液　由8份A液,1份B液及1份C液组成(用时新鲜配制). A液:T ris0.05m ol/L;NaCl0.1mo l/L;EDTA0.1m ol/L;pH7.0～8.0. B液:5%的SDS. C液:2mg/mL的蛋白酶K.1.2.2　平衡酚　pH6.7～7.8.另外,氯仿∶异戊醇(24∶1);无水乙醇及70%乙醇.1.3　操作步骤1.3.1　研磨　取少量动物组织迅速剪碎于装有0.6mL匀浆液的1.5m L离心管中,用特制的与离心管相匹配的小杵研磨.1.3.2　水浴　37℃水浴1～3h,直至混合液消化得很清亮为止.1.3.3　酚抽提　在混合液中加入等体积的平衡酚,上下缓慢颠倒十次,切勿剧烈振荡,在台式基金项目:国家自然科学基金资助项目(3957010)收稿日期:1998-12-05作者简介:田英芳,女,26岁,硕士高速离心机上6000r /min 离心10min,取上清液.1.3.4　重复步骤3　直至水相与酚相的界面处看不到白色的蛋白质层为止,取上清液.1.3.5　氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提　在上清液中加入等体积的氯仿∶异戊醇,上下缓慢颠倒十次,在台式高速离心机上8000r/m in 离心10m in,取上清液.1.3.6　沉淀DNA 在上清液中加入2×体积的冷无水乙醇(预先置-20℃冰箱内)沉淀DNA .冰箱内放置10min ,12000r /m in 离心10min ,弃上清液.1.3.7　洗涤DNA 在留有沉淀的离心管中加入1m L70%的冷乙醇洗涤DNA ,在台式高速离心机上10000r/min 离心5min,倾去上清液.1.3.8　保存　自然干燥,冰箱内4℃长期保存,使用时加入超纯水或T E 溶解.1.4　DNA 样品的检测0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测.紫外分光光度计检测.图1　部分基因组DN A 的电泳图谱L 1(La ne Ⅰ,泳道Ⅰ)为DN A 分子量标记入DN A /EcoR Ⅰ+Hind Ⅲ.L 2～L 5分别为人的胃癌组织,绒毛膜,血液,肝脏组织,L 6、L 7为蟋蟀,L 8、L 9为螽蜞斤,L 10、L 11为蝗虫,L 12为天牛,L 13为蜻蜓的基因组DN A 电泳图谱2　结果与讨论图1为按照本方法提取的各类标本的基因组DNA 电泳图谱.基因组DN A 电泳谱带整齐,紧随带后无拖尾,说明提取的DNA 大分子较为完整.同时,紫外分光光度计的检测结果表明,DNA 样品的OD260/280值普遍在1.6～1.9之间,说明提取的DNA 较为纯净,如用RNase 处理样品,可基本消除RNA 的干扰,使OD260/280的值趋于1.6～1.8之间.同其他的提取方法相比较,本方法具有以下优点:(1)适合小型昆虫或少量标本的基因组DNA 提取.许多提取方法需在液氮条件下,研钵中研磨组织,或在匀浆器中匀浆后再转移至离心管中,麻烦费时,又损失一部分材料,对于小型昆虫或少量标本,则显不适.本法改进了研磨条件,将材料剪碎于装有匀浆液的离心管内,用特制的与离心管相匹配的小杵直接在管内研磨,省时简单,研磨充分,样品损失少,DNA 得率较高.在实验中,我们可仅取虫体的某一部分进行DNA 提取,余下的标本仍可进行分类鉴定或其他研究,这对于某些珍贵或小型标本来说,更显得重要.(2)适合不同处理材料的基因组DNA 提取.在提取昆虫基因组DNA 时,许多方法采用新鲜或冻存标本,而酒精浸泡标本及干标本的提取则较少涉及,或是提取条件苛刻,普通实验室难以进行,而本方法却可以成功地用于酒精浸泡标本及两年以内自然干燥标本的DNA 提取,标本杀死后快速干燥及良好的保存环境会延长干标本的提取年限.83 第4期田英芳等:一种简易的昆虫基因组DN A 提取方法 84 陕西师范大学学报(自然科学版) 第27卷 (3)无需低温操作.以前的许多提取方法多强调低温操作,如液氮条件下研磨,冷冻离心,而本方法的提取过程可全部在常温下完成.室温30℃时,提取的DNA质量依然很好,并且成功地用于RAPD扩增.(4)适用范围广.不仅适用于昆虫基因组DNA的提取,还适用于其他动物基因组DNA的提取.在本方法中,匀浆缓冲液的pH值有一个变动范围(7.0～8.0),在实验中,可以通过改变匀浆液的pH值,使本方法适用于不同动物的基因组DNA提取.由此看来,本方法简便快速,适用范围广,对试剂设备要求不高,不失为一种较好的昆虫基因组DNA提取方法.参考文献:[1]卢圣栋.现代分子生物学技术[M].北京:高等教育出版社,1993.[2]J萨姆布鲁克,E F弗里奇,T曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南[M].第2版.金冬雁译.北京:科学出版社,1996.[3]M archant A D.A ppar ent intro gr ession of mit ochondr ial DN A acr oss a nar ro w hy br id zo ne in the Ca lediacaptiv a-co mplex[J].Her dity,1988,60:39～46.[4]Philips A J,Simon C.Simple,effect,and no ndestr uctive DN A ext raction pro toco l for ar thro po ds[J].Ento molog ical Society of A mer ica,1995,88(3):281～283.[5]So lignac M.P repar atio n and visualizatio n o f mito chondr ial DN A for RFL P analysis[C].NA T O A SI Se-r ies,Vo l.H57M olecular T echniques in T axo nomy.Ber lin Heidelberg:Spring er-V erlag,1991.295～319.〔责任编辑　王　勇〕A simple method for isolation of insect total DNAT IAN Ying-fang,HU ANG Gang,ZHENG Zhe-min(Institute o f Zoolo gy,Shaanx i Norm al U niversity,710062Xi′an,Shaanxi,PRC)Abstract:An improv ed method for iso lation o f insect total DNA is presented.T he results show that it can ex tract DNA from kinds of insects and hum an tissues at ro om tem perature w ith phenol and chloroform and OD260/280r ange fro m1.6～1.9.Key words:total DNA;isolation;insect。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告
实验报告：
实验目的：
本实验旨在从植物样品中提取基因组DNA，为后续的分子生物学研究打下基础。

实验原理：
基因组DNA提取是利用化学或物理方法将细胞壁和细胞膜溶解，使基因组DNA裸露并获得。

提取过程包括浸泡、分离、洗涤、溶解等步骤。

具体步骤如下：
取所需植物材料，洗净、切碎样品；
加入提取缓冲液（Tris-HCl pH 8.0，EDTA，SDS，NaCl），使样品充分混合，破坏细胞膜和核膜；
加入蛋白酶K，分解蛋白质，避免DNA被酶水解；
加入异丙醇或氯仿使蛋白质、核酸等组分分层，去除上层杂质；
加入70%乙醇将DNA沉淀，并进行清洗和干燥；
加入TE缓冲液（Tris-HCl pH 8.0, EDTA）溶解DNA。

实验步骤：
取植物样品（番茄、酸枣等）粉碎，加入4ml提取缓冲液，放入离心管中；
加入1μl蛋白酶K，轻轻颠倒离心管使样品混合均匀；
培养30分钟于65°C恒温器内；
加入1ml氯仿并振荡10次后，离心5分钟，将上层液体转移至新的离心管中；
加入1ml异丙醇，并离心5分钟，将上层液体转移至新的离心管中；
加入1ml70%乙醇，并离心5分钟，将上层液体倒掉，留下沉淀；
加入1ml去离子水，将沉淀溶解，得到DNA提取液。

实验结果：
经过以上步骤，成功从植物样品中提取到基因组DNA。

通过分光光度法检测DNA浓度为200 ng/μl，纯度可达到A260/A280=1.8。

结论：
本实验成功从植物样品中提取到基因组DNA，提取效果良好，为后续的分子生物学实验打下基础。

基因组DNA提取

基因组DNA的提取图片
实验报告要求： 1 提供小组DNA提取的电泳带结果； 2 分析DNA的质量及纯度； 3 针对结果，分析实验中出现问题的原因。

注意事项： A 实验前将部分药品（酚、氯仿、异戊醇、异丙醇）4℃预冷。 B 消化液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进 DNA溶解 C 避免在操作过程中机械振动过于剧烈，以免造成DNA的断裂。 D 使用离心机要注意安全，先定时，再将转速从零慢慢增大。 E 乙醇洗涤DNA后一定要晾干，否则电泳点样时样品容易上漂。
4）小心吸取上清转移至新的离心管中。加入400μl异丙醇，轻轻混匀3min，此时可见白色线团状物质出现。
5）14000rpm离心10分钟，让线团状物质沉到管底或管壁，小心倒出液体。
6）用400μl 70％的乙醇洗涤沉淀，12000rpm离心5min, 倒掉乙醇，倒置晾干至乙醇味道消失，沉淀用50μl TE 缓冲液溶解。 7）取5-8μl DNA溶液,与2μl上样buffer混合,然后上样于 0.7％的琼脂糖凝胶上，120伏电压下电泳30min。 8）将琼脂糖凝胶置于紫外分析仪中观察DNA条带的绿色荧光。
二、实验原理
使用消化缓冲液使DNA从细胞内释放出来， 65度温育可以加速DNA溶解，酚——氯仿异戊醇抽提可以将蛋白质与DNA分离，冷的异丙醇沉淀DNA，70％的乙醇洗去DNA表面的残留有机溶剂。
三实验材料
新鲜存活的果蝇或－20℃冻存的果蝇5～10 个。
四实验仪器及用具玻璃棒、烧杯、离心管、量筒、分析天平、水浴锅、台式高速离心机、4℃冰箱、长玻璃吸管、微量加样器、枪头、紫外分析仪、琼脂糖电泳装置。
电炉上加热至沸腾，待凝胶冷却至50℃左右（手试微烫），加入3μl GoldViewTW荧光染料，混匀后将胶倒入插好梳子的制胶板上，冷却后备用。

动物组织基因组DNA的提取

2、核酸制备的一般原则
分离纯化核酸总的原则： ① 应保证核酸一级结构的完整性；
② 排除其它分子的污染；
核酸纯化应达到的要求：
① 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
② 其它生物大分子的污染应降到最低程度；
③ 排除其它核酸分子的污染；
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二、实验原理
③ 动物：液氮处理后用匀浆器破碎；
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以上处理时均要加入核酸酶抑制剂。 13
二、实验原理
6、核酸制备的步骤
破碎细胞提取
① 首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与其它成分分离； ② 使核酸与蛋白质分离； ③ 除去脂类； ④ 多糖的除去；
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二、实验原理
6、核酸制备的步骤破碎细胞
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
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二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更有利，几个条件并用更好。
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五、实验结果
检测DNA的浓度和质量：
取出一部分的DNA，用elution buffer稀释到一定的倍数，用紫外分光光度计分别测定OD260，OD280， OD320.
DNA浓度: （ug/ml）= 50 x OD260 x 稀释倍数
DNA质量: 2.0 ≥ OD260-320/OD280-320 ≥ 1.7

基因组dna提取的基本步骤

基因组dna提取的基本步骤嘿，咱今儿个就来唠唠基因组 DNA 提取的那些事儿！这可是个相当重要又有趣的过程呢！你想想看，就好像在一个巨大的宝库中寻找珍贵的宝藏一样。

首先呢，得把细胞给弄破，这就好比打开宝库的大门。

细胞就像是一个个装着宝贝的小箱子，咱得想办法把它们弄开。

然后呢，就是要把那些乱七八糟的杂质给去掉。

这就跟挑拣珍珠似的，把那些不是珍珠的沙石啊什么的都给剔除掉，只留下咱们想要的DNA。

这可不是个容易的事儿，得细心再细心。

接下来，就是让 DNA 沉淀下来啦。

就好像让那些珍贵的宝贝慢慢从溶液中显现出来，乖乖地聚集在一起。

再之后，把沉淀的 DNA 收集起来。

嘿，这可就像是把找到的宝贝小心翼翼地放进小口袋里，可不能弄丢了哦。

之后还得把它洗一洗，把那些可能还残留的杂质给洗掉，让 DNA 变得干干净净的。

提取基因组 DNA 可不比咱平时做个简单的手工活呀，这得非常认真才行。

要是不小心出了错，那可就前功尽弃啦！就好像你千辛万苦走到宝库门口，结果钥匙掉了，那多可惜呀！在这个过程中，每一步都得稳稳当当的，不能有丝毫马虎。

就像走钢丝一样，得时刻保持平衡，稍有不慎就会掉下去。

而且呀，不同的样本可能还会有不同的情况呢！这就好比有的宝库门好开，有的可就难开啦。

所以咱得根据具体情况来调整方法，可不能死脑筋哦。

提取基因组 DNA 这件事啊，真的是既充满挑战又充满乐趣。

当你成功地提取出纯净的 DNA 时，那种成就感，哇，真的是无与伦比！就好像你终于找到了传说中的宝藏，那种兴奋和喜悦简直无法用言语来形容。

所以呀，别小看了这基因组 DNA 提取，这里面的学问可大着呢！咱可得认真对待，好好钻研，说不定哪天你就能成为这方面的专家啦！嘿嘿，加油吧！。

动物基因组提取的方法

动物基因组提取的方法嘿，咱今儿就来讲讲动物基因组提取的那些事儿！你想想啊，动物的身体就像一个神秘的宝库，而基因组呢，就是那宝库中最珍贵的宝藏。

要提取这宝藏，首先得选好材料呀。

就像你要去挖宝，总得找个有宝的地方吧。

动物的各种组织都可以成为我们的目标，比如血液、肌肉、肝脏啥的。

然后呢，就得把这些组织处理一下啦。

就跟咱收拾房间似的，把那些乱七八糟的东西清理掉，留下有用的。

接下来就是关键步骤啦！得让细胞破开，把基因组给释放出来。

这就好像打开一个密封的盒子，让里面的宝贝现身。

可以用一些化学试剂或者物理方法来达到这个目的。

比如说，有些试剂就像一把神奇的钥匙，轻轻一扭，细胞就开了。

提取出来后，还得把杂质去掉呢。

这就好比淘米，把那些沙子、石子啥的都筛出去，留下干净的米粒，也就是我们要的基因组。

这一步可得仔细着点儿，不然杂质混进去了，可就不好啦。

然后呢，就得把基因组浓缩一下啦。

想象一下，就像把一大盆水变成一小瓶精华液，让基因组变得更纯更浓。

提取动物基因组可不简单啊，就跟一场冒险似的。

每一步都得小心翼翼，稍有差错可能就前功尽弃啦。

这过程中得有耐心，还得有细心，就跟绣花似的。

你说，要是能成功提取出动物基因组，那得多有成就感啊！那可是解开动物生命密码的钥匙啊！咱就能更深入地了解动物的奥秘啦，多有意思呀！而且这对生物学研究、医学研究啥的都有着重要的意义呢。

总之啊，动物基因组提取虽然有点复杂，但只要咱掌握了方法，有耐心有细心，就一定能成功。

咱就像探险家一样，在动物的世界里寻找那珍贵的宝藏，为科学的进步贡献自己的一份力量！怎么样，是不是感觉很神奇很有趣呀？还等啥，赶紧去试试吧！。

DNA提取方法

DNA提取方法植物总基因组DNA提取纯化方法综述(转)默认分类2010-07-27 09:08:38 阅读179 评论1 字号：大中小订阅DNA 提取是植物分子生物学研究的基础技术。

目前植物分子的DNA 提取,已经发展了多种方法,成功地从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部等组织器官中提取出DNA。

但是有些情况下,不同植物甚至是同一种类植物组织材料的来源、部位、形态等外在性质的不同以及化学成分、组织结构等内在特点的差异,在提取基因组植物分子DNA 时需要选择不同的方法或作一些特殊的处理。

从富含多糖、多酚、单宁、色素及其他次生代谢物质的木本植物中提取的方法难度就相对大于大多数的禾谷类及蔬菜类植物。

从这些植物中分离出的DNA 由于多酚被氧化成棕褐色,多糖、单宁等物质与DNA 会结合成粘稠的胶状物,获得的DNA 常出现产量低、质量差、易降解,影响了DNA 质量和纯度,不能被限制性内切酶酶切,严重的甚至不能作为模板进行PCR 扩增。

针对这一现象,已有许多学者对植物特别是顽拗型木本植物的基因组DNA 提取纯化进行了改良和发展。

笔者就植物DNA 提取各个环节,如样本的采集与保存、提取缓冲液成分的作用、DNA 提取纯化方法等进行归纳,同时对DNA 提取过程中的常见问题、原因及应对策略作简要的分析。

1 植物样品的采集与保存植物组织材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。

通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料,采集的过程中应尽可能使组织材料保持水分,在取样时立即用浸湿的纱布包裹采集的组织材料,放置在密闭的冰盒中,这样可使组织材料3～5 d 仍然保持新鲜。

野外远距离采集样本时,在可能的条件下冷冻保存(如放置于液氮中) ;当不具备冷冻条件时, 最好用盛有无水CaSO4 的瓶子分别保存, 使其迅速干燥, 这种方法可将材料保存数月,返回后应尽快进行DNA 的提取工作。

对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等) 的植物材料, 应尽可能采集幼嫩组织外, 最好进行冷冻保存并在短时间内进行DNA 提取。

不同植物总DNA的提取及亲缘关系的研究

不同植物总DNA的提取及亲缘关系的研究一、实验目的：核酸的分离纯化是核算制备及分析的前提和基础，通过本实验将学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法，并通过分光光度法和电泳等实验技术研究核算的性质，同时掌握用限制性内切酶酶解技术分析不同材料之间亲缘关系的方法。

二、实验原理DNA是遗传的物质基础，分离纯化DNA是研究基因结构与功能的首要前提。

细胞内DNA是与蛋白质结合存在的。

在提取DNA的过程中必须将其中的蛋白质降解除去，同时需要尽可能保证其DNA分子的完整性，因此，必须在温和的条件下进行提取，注意避免核酸内切菌引起DNA的降解；酸、碱和离子强度等化学因素，以及温度、机械张力、剪切等物理因素引起DNA的降解。

植物组织中制备基因组DNA一般有下列几个策略：(1)细胞壁的破碎。

通常将植物组织放在研钵中与液氯或干冰粉末(用于冰时先将干冰碾成粉末)。

(2)细胞膜的破坏常用去污剂(如SDS或CTAB)。

(3)保护DNA免受内源核随菌的破坏，这包括多方面的措施。

去污剂的加入和EDTA的存在都能破坏或抑制酶的活性，因EDTA是种整合剂，它能结合大多数核酸酶的辅因子Mg2+。

此外，用氮仿和苯酚乳化州A提取液时，同时也使蛋白质变性，分离蛋白质和DNA。

(4)尽量减少DNA的断裂。

即使溶液的振荡也会使DNA断裂，在操作中不特别小心的话，获得的DNA是50一100 kb。

(5)研磨植物组织时尽量保持在冰冻状态(掖氯或于冰中)，直至与提取经冲浪混合，以避免DNA的降解。

(6)高等植物材料往往含有多糖，面多糖常常是某些限制酶或连接菌的抑制剂，所以大多数提取方法还需进一步用既费时又昂贵阳氮化铂密度梯度离心法除去多糖，但对有些种类的植物或有些组织类型来说，用CTAB的核酸提取法也可得到纯的高相对分子质量的DNA，它利用核随和多糖在cTAB存在时溶解度不同面分离。

在用异丙醉或乙醇沉淀植物组织DNA时，能观察到白色的纫纤丝及纤维团，若用钩子将所有的DNA都轻轻绕在钩子上取出并洗涤，这样得到的DNA与用离心沉淀法取得的DNA相比，前者的纯度更高些。

动物基因组DNA的提取流程总结

动物基因组DNA的提取1.切取组织5g 左右，用组织粉碎机或研钵将细胞分离。

注：1）少量结缔组织并不影响最后得到的DNA勺质量；2）若标本为血液，则只需肝素抗凝、离心后取白细胞层；3）若为培养的贴壁细胞，则用胰酶消化后收集，PBS洗涤即可。

2.加入5ml DNA提取缓冲液，（10mmol/L Tris-CI ,0.1 mol/L EDTA 0.5% SDS）, 混匀。

注：1）最好先加入Tris-Cl、EDTA再加入SDS 2）最好一边匀浆，一边加入液体，使之充分混匀。

3.加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml，混匀，37C温浴过夜。

注：1）致密组织（如小鼠尾巴）可以适当延长蛋白酶的作用时间；2）若组织量很大且组织比较疏松（如动物脾脏），或对所提取的DNA完整性要求不高时，可以不用蛋白酶K,而是剧烈振荡20分钟，将组蛋白与DNA分离。

此法可能会使部分DNA链断裂，但足以达到一般实验要求，并不影响后续处理；3）也可同时加入RNase。

4.加入等体积的酚－氯仿－异戊醇混合物（25:24:1），剧烈振荡10分钟，冰浴10 分钟，2500rpm 10 分钟离心收集水相。

注：不要混带中间蛋白层。

5.加1/10 体积3mol/L NaAc 及 2 倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀。

冰浴1小时，沉淀DNA注：冰浴时间从10分钟到2小时均可，只是时间太短会影响到最后的产量，但不影响质量。

6.用玻棒轻搅钩出DNA沉淀，置于另一离心管中。

注：如果确信没有混入蛋白，也可用离心的方法去除液体，但应在加入蛋白酶K的同时加入RNaseA7.70%^醇洗涤，晾干，加适量TE或灭菌水溶解，-20 C保存。

注：若要长久保存DNA（数年以上），最好将其沉淀以无水乙醇封闭后，置于-80 °C。