动物基因组DNA的提取
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
动物基因组DNA的提取流程总结
动物基因组DNA的提取1.切取组织5g 左右，用组织粉碎机或研钵将细胞分离。
注：1）少量结缔组织并不影响最后得到的DNA勺质量；2）若标本为血液，则只需肝素抗凝、离心后取白细胞层；3）若为培养的贴壁细胞，则用胰酶消化后收集，PBS洗涤即可。
2.加入5ml DNA提取缓冲液，（10mmol/L Tris-CI ,0.1 mol/L EDTA 0.5% SDS）, 混匀。
注：1）最好先加入Tris-Cl、EDTA再加入SDS 2）最好一边匀浆，一边加入液体，使之充分混匀。
3.加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml，混匀，37C温浴过夜。
注：1）致密组织（如小鼠尾巴）可以适当延长蛋白酶的作用时间；2）若组织量很大且组织比较疏松（如动物脾脏），或对所提取的DNA完整性要求不高时，可以不用蛋白酶K,而是剧烈振荡20分钟，将组蛋白与DNA分离。
此法可能会使部分DNA链断裂，但足以达到一般实验要求，并不影响后续处理；3）也可同时加入RNase。
4.加入等体积的酚－氯仿－异戊醇混合物（25:24:1），剧烈振荡10分钟，冰浴10 分钟，2500rpm 10 分钟离心收集水相。
注：不要混带中间蛋白层。
5.加1/10 体积3mol/L NaAc 及 2 倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀。
冰浴1小时，沉淀DNA注：冰浴时间从10分钟到2小时均可，只是时间太短会影响到最后的产量，但不影响质量。
6.用玻棒轻搅钩出DNA沉淀，置于另一离心管中。
注：如果确信没有混入蛋白，也可用离心的方法去除液体，但应在加入蛋白酶K的同时加入RNaseA7.70%^醇洗涤，晾干，加适量TE或灭菌水溶解，-20 C保存。
注：若要长久保存DNA（数年以上），最好将其沉淀以无水乙醇封闭后，置于-80 °C。
动物基因组DNA的分离和琼脂糖凝胶电泳
每组取1 μL 、2 μL DNA样品，加1 μL电泳上样缓冲液 （含溴酚蓝），少量的水（9、8 ul），混匀后加样于琼 脂糖凝胶孔内。 电泳（小胶100-120V，大胶150-180V）：使DNA移入琼 脂糖胶内。一般为溴酚蓝迁移至中间即可停止电泳。 用短波紫外线（254 nm）进行拍照，比较样品DNA与 DNA标准品（marker）的荧光强度（一般最亮的条带为 750bp，上样5 ul约100 ng），并计算出待测样品中DNA 的浓度。 如果DNA已经降解，DNA的带就会拖尾巴，或出现弥散 性分布，而不能形成清晰、紧凑的带纹，这样的DNA样 品不能用于进一步研究。
ห้องสมุดไป่ตู้
每小组取1.5 ml EP管，加入上述消化细胞液600ul ，加 入等体积酚／氯仿／异戊醇，缓慢颠倒离心管使两相均匀 混合形成乳浊液，12000 r/min，4℃离心10 min。 小心吸出EP管中的上层液体，即为含DNA的水相，注意 不要吸中间界面上一层厚的白色物质（蛋白质沉淀）。然 后加入等体积氯仿／异戊醇，12000 r/min，4℃离心10 min。(如果界面或水相中含蛋白质沉淀较多，可重复操作) 小心吸出上层含DNA的水相，加入1/10体积NaAc，充分 混匀，然后加入2倍体积的无水乙醇，充分混匀，置-20℃ 冰箱约2 h。 12000 r/min，4℃离心10 min，弃上清液，得到的白色 沉淀。加入1 mL 70％冷乙醇洗涤，继续离心，获得沉淀， 室温干燥。加入50 L TE缓冲液溶解，即可得到基因组 DNA。-20℃冰箱保存。 如果要对提取的DNA进行完整性鉴定，可通过琼脂糖凝 胶。方法是取1 l溶解的DNA样品，在1％的琼脂糖凝胶 中进行电泳，用溴化乙锭（或Goldenview）染色观察结 果。
动物基因组DNA的提取
动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。
[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。
动物组织中总DNA的提取
试剂
提取缓冲液：200 mmol/L Tris·Cl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS
24：1的氯仿：异戊醇 预冷无水乙醇
SDS抽提液配方(1000ml):
操作步骤
1. 肝脏1g左右, (剪碎) 置研钵中，加入2-3mL提取缓
目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为 CTAB法和使DNA得以 游离出来）。
SDS法提取动物组织DNA
SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性 剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉 淀下来。EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等 有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因 核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提 液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入 乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中， 即DNA溶液。
絮状DNA沉淀。
结果分析与讨论
DNA提取原则
保证DNA结构的完整性
纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质
排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
实验原理
细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA） 称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋 白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液 中，而不溶于有机溶剂。
冲液， 研磨成浆；吸入10mL EP管中，摇动混匀；
2. 60℃水浴保温20min，不时颠倒混匀； 3. 室温下3000rpm离心10min； 4. 小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1
的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀；
5. 室温下3000rpm离心10min； 6. 小心将上层水相吸入另一只离心管中； 7. 重复4-5步2-3次; (此步不做） 8. 加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现
动物组织基因组DNA提取
动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。
冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。
7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。
11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。
12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
实验六哺乳动物基因组DNA的提取
• 实验材料与试剂：
• 材料：家兔的全血 • 器材：移液器、高速冷冻离心机、
台式离心机、水浴锅等。试源自：1、提取DNA所需的试剂配制
1 M Tris· Cl（pH 8.0） 0.5M EDTA（pH 8.0） 10% SDS STE 氯仿:异戊醇（24:1） 3M无水NaAc（pH5.2） TE缓冲液（pH8.0） 抗凝剂ACD PBS 0.5M NaCl 20 mg/ml 蛋白酶K 酚:氯仿（1:1） 冰乙醇
2、琼脂糖电泳所用的有关试剂
10×TBE缓冲液, 1.2%琼脂糖, 琼脂糖凝胶加样缓冲液, 10mg/ml溴化乙锭（EB）。
实验步骤
1、基因组DNA的提取
将冰冻的家兔血液在室温下溶化； 取0.6ml血液转入一无菌的1.5ml离心管中，加入等体积 的PBS磷酸盐缓冲液，充分混匀后12000rpm离心5min， 弃上清； 加入400µ l STE，14µ l的20%的SDS，37℃水浴1h； 加8µl的20mg/ml的蛋白酶K混匀，55℃水浴消化过夜 （10～14h）；
实验六 哺乳动物基因组DNA的 提取及琼脂糖凝胶电泳检测DNA
6学时
• 实验目的：学习和掌握用酚-氯仿抽提法
提取哺乳动物的基因组DNA的方法。
• 实验原理：真核生物DNA提取的材料来源
可以是培养的细胞、血液、肝、脾、肾等 组织，通常的方法是在有EDTA和SDS等去污 剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚 /氯仿/异戊醇抽提，可能得到哺乳动物基 因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100150kb。
观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化 乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的 一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。 在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙 锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并 通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位臵及其 与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产 率比游离溶液中染料有所增加。 DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染 料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的 能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭 -DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所 以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到 少至10ng的DNA条带。
基因组DNA提取
基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。
实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。
置于液氮中冻结。
2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。
3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。
4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。
如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。
如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。
5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。
6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。
7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。
二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。
实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。
将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。
2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。
3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc 实验目的：本实验旨在通过提取哺乳动物组织中的基因组DNA，以用于后续的PCR反应、基因测序、遗传变异研究等。
实验原理：哺乳动物基因组DNA提取的一般步骤为组织破碎、细胞膜破裂、蛋白质和RNA去除、DNA纯化、质量检测和保存。
下面介绍各个步骤的细节：1.组织破碎：将样本室温下用离心管剪碎，然后用离心机离心5min，上清液中的细胞保存备用。
2.细胞膜破裂：加入50-100μL裂解缓冲液（10 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，1% SDS），温和地在60℃下振荡消化30-60min，使细胞膜破裂。
为避免破坏DNA，需在缓冲液中添加RNase，以消化RNA。
整个过程中需注意避免搅拌过度或泡沫产生，以便保证DNA不被过度破坏。
3.蛋白质和RNA去除：加入蛋白质沉淀剂如氯化钾或盐酸盐，并冷藏至室温，使DNA 和蛋白质发生相互作用并形成凝胶。
离心15-20min使凝胶完整沉淀至管底。
注：蛋白质缓冲液中含氯化钾或盐酸盐，可使DNA的负电荷阴离子中和而凝聚起来。
此时，可以用琼脂糖凝胶电泳判断DNA的纯度和产量。
还可以用UV法检测DNA的浓度。
4.DNA纯化：将沉淀物用去离子水洗涤一次沉淀，使DNA更为纯洁。
用50%乙醇洗涤一次去除氯离子，离心以去除乙醇。
5.质量检测：用伊曼纹颅（EtBr）染料判断DNA纯度，光谱仪分析DNA浓度和质量。
6.保存：将DNA储存在-20℃的冰箱中，避免在各操作步骤中破坏DNA性状。
实验步骤：材料：1.全身组织2.标签离心管3.10 mM TrisHCl pH8.5，1 mM EDTA溶液5.RNase A（10 mg/ml）6.盐酸盐7.琼脂糖8.去离子水9.乙醇将实验室提供的全身组织（100mg）裹在湿润的巾纸中，然后将其研磨成粉末。
将粉末倒入银离子处理过的离心管中（1.5 mL），加入500μL的10 mM Tris HCl（pH 8.5）溶液中，轻轻振荡使样品完全混合，并置于4℃下保存备用。
动物基因组dna分离的原理
动物基因组dna分离的原理动物基因组DNA分离的原理主要涉及到DNA的提取、纯化以及分析等过程。
以下是该过程的详细解释：第一步：DNA的提取动物基因组DNA的提取是DNA分离的第一步。
一般来说，有两种常用的提取方法：有机溶剂法和无机盐法。
有机溶剂法是指使用有机溶剂（如苯酚和氯仿）将DNA从细胞中提取出来。
首先，细胞样品被加入一个细胞裂解缓冲液中，以破坏细胞膜，并释放出DNA 和其他细胞组分。
然后，加入有机溶剂混合液对溶解后的溶液进行提取，使DNA溶解在有机相中。
最后，通过离心加速分离有机相和水相，并将DNA从有机相中重新提取出来。
无机盐法是指使用一系列含有盐的溶液将DNA从细胞中提取出来。
这种方法基于DNA在高盐浓度下与溶液中的阳离子形成离子相关物质可能性较低的原理。
首先，细胞样品被加入盐裂解缓冲液中，经裂解后，DNA与其他细胞组分分离。
然后，高盐缓冲液加入溶液中，通过离心将DNA从其他细胞组分中分离出来。
最后，通过洗涤等步骤去除残余的细胞组分和盐，并得到纯化的DNA 样品。
第二步：DNA纯化DNA纯化是为了去除提取过程中的杂质和其他细胞组分，从而得到高质量的DNA。
DNA纯化可以通过蛋白酶和蛋白质沉淀剂等酶消化、有机物沉淀和电泳等方法进行。
在酶消化方法中，蛋白酶被加入到DNA溶液中，以将DNA附着在蛋白酶或相关酶的组分上。
然后，使用有机物或其他方法除去蛋白酶和相关组分，使DNA 得到纯化。
有机物沉淀方法是通过将DNA与有机溶剂混合并离心沉淀去除其他细胞组分。
加入有机物（如异丙醇、以及其它盐类）的目的是改变DNA与溶液中的盐类和水分子的相互作用，从而促使DNA形成团状并沉淀。
离心作用向下压缩DNA并与有机溶剂一起沉淀，而其他细胞组分不受影响地保留在上层溶液中。
电泳是一种以电场为驱动力的方法，利用DNA的电荷特性将DNA分离出来。
DNA溶液被加载在含有琼脂糖的水平琼脂糖凝胶上。
然后，通过施加电场，DNA的负电荷会使其向正电极迁移。
动物基因组的提取原理
动物基因组的提取原理
动物基因组的提取原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞溶解：首先需要将动物细胞进行溶解，以释放细胞内的核酸。
常用的方法包括直接破碎细胞壁、低渗透压溶解细胞膜等。
2. 蛋白质降解：细胞溶解后，利用蛋白酶等酶类将细胞内的蛋白质降解。
这样可以使DNA或RNA与蛋白质的结合解开，便于后续步骤的处理。
3. DNA或RNA的纯化：通过加入盐溶液，使DNA或RNA与其他杂质分离。
常用的方法包括酚-氯仿法、离心柱法等。
酚-氯仿法是将DNA或RNA溶液与酚和氯仿相混合后，通过离心使DNA或RNA落入有机相中，将有机相转移至新的离心管中，用异丙醇沉淀，最后用洗涤液洗净获得纯化的DNA或RNA。
4. DNA或RNA的测定和分析：纯化后的DNA或RNA可以通过吸光光度计进行测定，以确定其浓度和纯度。
此外，还可以使用琼脂糖凝胶电泳等方法对DNA 或RNA进行分析，了解其大小、形态、片段等信息。
总的来说，动物基因组的提取过程主要包括细胞溶解、蛋白质降解、DNA或RNA 的纯化以及测定和分析等步骤。
这些步骤的目的是使DNA或RNA从细胞中获得并纯化，以便进行后续的实验操作。
动物组织基因组DNA的提取
二、实验原理
7、核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质 温度： ① 4℃ ——最佳最简单； ② -70℃——长期保存的良好温度； ③ -20℃ ； 保存介质： TE缓冲液（最常用） 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0 1mmol/L EDTA pH 8.0
三、实验试剂、仪器和耗材
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
提取
纯化
二、实验原理
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
① 微生物：溶酶菌、SDS裂解； ② 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法——蛋白酶、胰蛋白酶； 冰冻法 —— 反复冻融或液氮冻后 组织捣碎； ③ 动物：液氮处理后用匀浆器破碎； 以上原理
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和 高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对 核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更 有利，几个条件并用更好。 DNA ，抑制 Dnase 活力很容易，但防止机械拉 力张力更重要； RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但 抑制 Rnase 活力较难，故在 RNA 提取中设法抑制 Rnase更重要。
二、实验原理
4、核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质， 用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂， 去垢剂的作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； ② 溶解核糖体上面的蛋白，使其解聚，将核酸 释放出来； ③ 对Rnase和Dnase有一定的抑制作用； 如: SDS，脱氧胆酸钠，4-氨基水杨酸钠，萘-1， 5-二磺酸钠等
实验一 动物肝脏组织中基因组DNA提取和鉴定
微溶于低盐溶液（0.14mol/L）
RNA-Pro(RNP) 溶于低盐溶液（0.14mol/L） (存在于核仁及细胞质) 微溶于高盐溶液（1mol/L）
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三、仪器和试剂
1、仪器： 低速离心机、落地式高速冷冻离心机、摇床、稳 压电源、电泳槽、凝胶成像系统。 2、试剂： 0.14mol/L NaCl－0.15mol/L EDTA(pH=8.0)； 2.5mol/L NaCl；25% SDS；氯仿/异戊醇=24:1 （V/V）；95%乙醇；1×TAE；琼脂糖；上样缓冲液。
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四、实验步骤
1、DNA的提取 （4）将上述沉淀转移至100mL锥形瓶中，加入10mL预冷的 0.14mol/L NaCl-0.14mol/L EDTA溶液，缓慢搅拌，同时加 入750uL 25%SDS溶液，用封口膜封口，置于摇床中，30℃ 150r/min震荡30min。 （5）加入7mL 2.5mol/L NaCl，用封口膜封口，置于摇床中， 30℃ 150r/min震荡10min。 。 （6）再加入17mL 氯仿:异戊醇溶液，用封口膜封口，置于 摇床中，30℃ 150r/min震荡20min。 。
离子去污剂法：利用SDS、CTAB（十六烷基三甲基溴化
铵）等去污剂使蛋白质变性，直接从生物材料中提取 DNA。
苯酚抽提法：苯酚既是蛋白变性剂，又能抑制DNase的 降解。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA连接键已 断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。 蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
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四、实验步骤
1、DNA的提取 （7）将混合液转移至50mL刻度离心管中， 3500r/min离心 10min ，取上清至一个新的50mL刻度离心管。 （8）加入20mL95%乙醇溶液，上下颠倒混匀后，出现丝状 物，用枪头挑取丝状物，或者3500r/min离心5min 。 （9）弃去上清液（注意：缓慢倒去上清液），沉淀物质即 为DNA，空气干燥后即可加入适量的TE缓冲液。
实验二动物基因组DNA的提取
01
02
03
04
掌握了动物基因组DNA 提取的基本原理和操作 流程。
了解了不同动物组织对 DNA提取的影响因素和 注意事项。
学会了使用离心机、移 液器等实验器材，提高 了实验操作技能。
培养了团队合作和实验 数据分析的能力。
本实验的不足之处和改进建议
实验操作过程中，部分步骤不
够规范，可能导致提取的DNA
学生将了解基因组DNA提取在法医学、生物多 样性保护和生物进化等领域的应用，以及其在 解决人类健康问题中的潜在价值。
02
实验原理
基因组DNA的组成和结构
基因组DNA
是指构成生物体基因组的全部DNA， 它包含生物体的全部遗传信息。
DNA结构
DNA由四种不同的脱氧核苷酸组 成，它们按照一定的顺序排列， 形成两条互补的螺旋链。
DNA提取的基本原理
01
02
03
细胞裂解
通过物理或化学方法将细 胞膜破裂，释放出细胞内 的DNA。
核酸吸附
利用核酸结合物（如硅胶、 玻璃等）将DNA吸附，去 除其他杂质。
洗涤与洗脱
通过洗涤去除杂质，然后 用洗脱液将DNA从吸附剂 上洗脱下来。
动物基因组DNA提取的常用方法
酚-氯仿提取法
利用酚-氯仿混合液反复抽提细胞 裂解物，使DNA充分释放并溶解 在氯仿中，然后进行离心分离。
纯度检测
利用紫外分光光度计测定DNA样品在260nm和280nm处的吸光度，计算 OD260/OD280比值，用以评估DNA样品的纯度。比值接近1.8表示DNA样品 纯度较高。
DNA提取的成功率和产量分析
成功率分析
根据DNA提取的质量和纯度检测结果， 评估提取的DNA是否可用于后续实验， 如PCR扩增、测序等。提取质量良好 且纯度较高的DNA样品成功率较高。
动物组织基因组的提取讲解
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌 体，其或只含DNA，或只含有RNA。
2、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在
微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂
在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
三、动物基因组DNA的提取
主要方法： (1)浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。 1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
• •
组织匀浆液 （装入10ml离心管中） 10ml
100mmol／L NaCl：0.2ml（5M NaCl） 25 mmol／L EDTA(pH8.0)： 0.5ml（ 0.5M EDTA pH8.0) l0mmol／L Tris·HCIpH 8.0)：0.1ml（1M Tris·HCIpH 8.0) 加三蒸水: 9.2ml
DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
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动物基因组DNA的提取
[实验原理]
在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。
[仪器、材料与试剂]
(一)仪器
1.台式离心机
2.玻璃匀浆器
3．高压灭菌锅
4．恒温水浴
(二)材料
1．1.5mL微量离心管
2．微量取样器和吸头
3．无菌过滤器(一次性)
4．10 mL注射器
5．鼠肝
6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)
7.十二烷基硫酸钠(SDS)
8．乙二胺四乙酸(EDTA)
9．蛋白酶K
10．RNA酶
11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物
(三)试剂
1、1.5 mol／L NaCl
2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.0
3．0.5 mol／L EDTA pH8.0
4．3 mol／L NaAc pH5.2
以上均高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)
6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)
7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS
8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存
9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)
10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)
11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)
12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液
14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125
[实验步骤]
本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。
整个操作过程中，应尽量避免DNA酶的污染，特g4注童动作温和，减少对DNA的机械捌伤。
1、取0.2g鼠肝，用冰冷的生理盐水洗3次，然后置于2.0mL匀浆掖中，用玻璃匀浆器匀浆至无明显组织块存在(冰浴操作，切匆将细胞破碎，可镜检观察)。
2、将组织细胞移至1.5ml离心管中，50000rpm离心30-60sec，(尽可能在低温下操作)，弃上清，若沉淀中血细胞较多，可再加入1倍于细胞体积的匀浆液洗一次。
3、沉淀加0.8mL无菌水迅速吹散，分两管，再加0.4mL酵解液，翻转混匀(动作一定要轻)55℃水浴处理12-18 h；
4、沉淀加RNase至终浓度200µg／mL，37℃水浴1 h；
5、加入等体积酚／氯仿／异戊醇抽提一次，(慢慢旋转混勾，倾斜使两相接触面增大)。
4℃、10min、10000rpm离心；
6、有时如果DNA含量过高，水相在下层，实验时应注意观察。
用扩口吸头移出含DNA 的水相(注意勿吸出界面中蛋白沉淀)，加等体积氧仿／异戊醇，4℃、
10 000rrpm离心10rain (若界面或水相中蛋白含量多，可重复1．6操作)。
7、用扩口吸头小心吸出上层含DNA的水相，加1／10体积的NaAc，小心混匀(要充分)，再向每管中加入2.5倍体积的无水乙醇，-20 过夜。
8、12 000rpm离心19min，弃上清，75％冷乙醇洗涤一次，12000rpm离心15min室握温干燥(不要大干，否则DNA不易溶解)，加入适量TE缓冲液，存放于4℃，轻摇溶解过夜，即可得到实验动物基因组DNA。
9、电泳鉴定DNA，由于基因组DNA相对分子质量较大，用0.3％的琼脂糖凝胶电泳鉴定，先在底部锦一层1％的支持胶，凝固后再铺上一层0.3％琼脂糖凝胶，插上梳子(枚子不能瑾到的支持胶)。
取1.5µL溶解的DNA、1µL上样缓冲液和35µl无菌水混匀后小心上样(可在另一孔加DNA相对分于质量标准)，观察基因组DNA大小，用溴化乙锭染色观察结果。
[注意事项]
1、操作过程尽量在低温下进行，避免DNA降解。
2、琼脂糖凝胶脆弱，应小心操作。
3、提取得到的基因组DNA应为单一条带，DNA降解可形成弥散带型。
生物实验高清视频，细胞、分子生物学、蛋白检测技术实验高清视频教程
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生物实验高清视频，细胞、分子生物学、蛋白检测技术实验高清视频教程，约7G大小，22个实验项目。
适用于教学和学习！
本套实验视频制作耗资上百万，由专业的影视和后期制作团队拍摄+生物、医学领域的教授专家指导+Thermo、Roche等著名企业参与共同制作完成。
分子生物学实验技术共6个视频，包括:DNA甲基化检测、分子克隆技术、高分辨溶解曲线分析技术（HRM）、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、荧光定量PCR（real time QPCR）、原位杂交（ISH）。
蛋白检测技术共6个视频，包括:TUNEL法检测细胞凋亡、酶联接免疫吸附测定（ELISA）、免疫印迹法（Western blotting）、免疫组化（IHC）、凝胶迁移实验（EMSA）、染色质免疫沉淀技术（ChIP）。
细胞检测技术共10个视频，包括:siRNA转染、大鼠骨骼肌细胞培养、全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞、细胞传代、细胞冻存、细胞复苏、细胞划痕、细胞侵染、质粒DNA 转染、组织块贴壁法培养大鼠平滑肌细胞。
每个实验视频内容包括详细的实验操作流程，原理讲解，结果分析及疑难解答，并配有相应的详实的文字文档和参考文献！。