动物基因组DNA的提取流程总结

动物基因组DNA的提取

1.切取组织5g左右，用组织粉碎机或研钵将细胞分离。

注：1）少量结缔组织并不影响最后得到的DNA的质量；2）若标本为血液，则只需肝素抗凝、离心后取白细胞层；3）若为培养的贴壁细胞，则用胰酶消化后收集，PBS洗涤即可。

2.加入5ml DNA提取缓冲液，(10m mol/L Tris-Cl，0.1 mol/L EDTA，0.5% SDS),

混匀。

注：1）最好先加入Tris-Cl、EDTA，再加入SDS；2）最好一边匀浆，一边加入液体，使之充分混匀。

3.加入25ul 蛋白酶K，使终浓度达到100ug/ml，混匀，37℃温浴过夜。

注：1）致密组织（如小鼠尾巴）可以适当延长蛋白酶的作用时间；2）若组织量很大且组织比较疏松（如动物脾脏），或对所提取的DNA完整性要求不高时，可以不用蛋白酶K，而是剧烈振荡20分钟，将组蛋白与ＤＮＡ分离。

此法可能会使部分DNA链断裂，但足以达到一般实验要求，并不影响后续处理；3）也可同时加入RNase。

4.加入等体积的酚－氯仿－异戊醇混合物(25:24:1)，剧烈振荡10分钟，冰浴

10分钟，2500rpm 10分钟离心收集水相。

注：不要混带中间蛋白层。

5.加1/10体积3mol/L NaAc 及2倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀。冰浴

１小时，沉淀DNA。

注：冰浴时间从10分钟到２小时均可，只是时间太短会影响到最后的产量，但不影响质量。

6.用玻棒轻搅钩出DNA沉淀，置于另一离心管中。

注：如果确信没有混入蛋白，也可用离心的方法去除液体，但应在加入蛋白酶K的同时加入RNaseA。

7.70%乙醇洗涤，晾干，加适量TE或灭菌水溶解，-20℃保存。

注：若要长久保存DNA（数年以上），最好将其沉淀以无水乙醇封闭后，置于-80℃。