动物组织DNA的提取与鉴定
生物化学实验 实验八 动物组织中DNA的提取
四、实验操作
动物生物化学实验
实验八 动物组织中DNA的提取
一、实验目的
1.学习从动物组织细胞中提取DNA的基本原理。 2. 掌握提取DNA的基本方法。
二、实验原理
细胞中的DNA和RNA通常和蛋白质结合
成脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白而存在。这
两种核蛋白在不同浓度的盐溶液中，有不同 的溶解度。在稀盐溶液（0.15mol/L）中， 核糖核蛋白溶解度大，脱氧核糖核蛋白溶解 度小；而在高盐溶液中（ 1mol/L）中，脱氧 核糖核蛋白溶解度大，核糖核蛋白溶解度小。 利用此差异，可见两种核蛋白彼此分开。
分离到的脱氧核糖核蛋白，用十二 烷基硫酸钠（SDS）使蛋白质变性，让 DNA游离出来，再用氯仿-异戊醇混和 试剂沉淀除去变性的蛋白质。然后加入 95%乙醇，可将DNA沉淀析出。
为了防止DNA酶解，在提取过程中加柠 檬酸盐、EDTA盐并要求在40C以下进行，以 抑制DNA酶的活性。
三、实验试剂及器材
4. 将沉淀物转入小烧杯中，加入5倍体积的 0.15mol/LNaCl-0.1mol/L, EDTANa2溶液， 搅拌均匀。
5. 边搅拌，边慢慢滴加5%SDS溶液约6ml， 直至终浓度为1%。
6. 加入固体氯化钠约2.2g，使终浓度为 1mol/L，边加边搅拌，持续20分钟加完， 使氯化钠充分溶解。
1. 称取动物肝脏10g，剪碎后加入预冷的 0.15mol/LNaCl-0.015mol/L,pH7.0柠檬 酸钠溶液10ml，在组织捣碎机中捣成匀 浆。
实验五、动物细胞DNA的提取与鉴定
DNA酚抽提法示意图
主要试剂的作用：
EDTA：（乙二胺四乙酸）
EDTA起两个作用：（1）鳌合细胞膜和骨架上的Ca2＋、Mg2＋ ，从而使细胞
更易破碎；（2）鳌合Mg2＋ 使得内源性DNase没有Mg2＋ 不能发挥作用，保持DA
的稳定性，Tris起缓冲pH值的作用
SDS ：十二烷基硫酸钠
SDS是离子型表面活性剂，主要作用是：（1）破坏细胞膜及核膜；（2）解聚细 胞中的核蛋白；（3）与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下来；（4）抑制DNA酶 活性，使DNA分子尽量完整地分离出来
蛋白酶K：
水解蛋白质的作用，消化DNA酶和细胞中的蛋白质。
苯酚：蛋白质强变性剂
主要用于DNA提取时蛋白的去除，抑制DNA酶活性；
苯酚溶于有机溶剂，微溶于水；
提取DNA前苯酚用Tris-Hcl饱和，防止吸收过多DNA，降低DNA的 损失率； 氧化苯酚会破坏DNA。
氯仿：异戊醇（23：1）：
主要用于DNA或者RNA提取时蛋白的去除； DNA提取时候，氯仿起变性蛋白质和将第一次抽提后的水相中的 酚带走的作用。异戊醇能降低分子表面张力，能减少抽提过程中 的泡沫产生，同时异戊醇有助于分相，增加界面的稳定性。
实验五 动物细胞DNA的 抽取与鉴定
指导：刘满清
一 实验目的
了解并掌握提取动物基因组DNA的原理和常用 方法； 掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理和方法， 增强实验室安全意识。
二 实验原理
动物DNA的提取是分子遗传学的基本操作。DNA提取的 基本程序包括细胞破碎、蛋白质变性并去除、沉淀DNA 并去除其他杂质3步；
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取 方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其 细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异;
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
提取动物dna 实验报告
提取动物dna 实验报告
提取动物DNA实验报告
在生物科技领域，提取动物DNA是一项重要的实验技术，它不仅可以帮助科学家们研究动物的遗传信息，还可以为动物保护、医学研究等领域提供重要的数
据支持。
本文将介绍一项提取动物DNA的实验报告，以展示这一技术的重要性和应用价值。
实验目的：通过提取动物DNA，分析动物的遗传信息，为相关研究提供数据支持。
实验材料：实验所需的材料包括动物组织样本（如血液、组织等）、DNA提取
试剂盒、离心机、PCR仪等。
实验步骤：
1. 收集动物组织样本，如血液、皮肤组织等。
2. 将样本放入离心管中，使用离心机离心，分离出细胞。
3. 使用DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行DNA提取。
4. 将提取得到的DNA样本进行质量检测，确保提取的DNA质量符合实验要求。
5. 使用PCR技术对提取的DNA进行扩增，以获得更多的DNA样本。
实验结果：通过实验，成功提取了动物DNA样本，并进行了质量检测和PCR
扩增。
最终获得了足够的DNA样本，可以用于后续的遗传分析、基因测序等研究工作。
实验结论：提取动物DNA是一项重要的实验技术，它为科学家们研究动物的遗传信息提供了重要的数据支持。
通过这一技术，我们可以更深入地了解动物的
遗传特征，为动物保护、医学研究等领域提供有力的支持。
总结：提取动物DNA的实验技术在生物科技领域具有重要的应用价值，它为动物遗传信息的研究提供了重要的数据支持，为相关领域的科学研究和应用提供了有力的支持。
希望通过这一技术的不断发展和完善，能够更好地为动物保护和医学研究等领域提供更多的数据支持和科学依据。
动物dna的提取实验报告
动物dna的提取实验报告
动物DNA的提取实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取动物组织中的DNA，探究动物个体的遗传信息，并为后续的分子生物学研究打下基础。
实验材料与方法：
1. 实验材料：动物组织样本（如鸡肉、鱼肉等）、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、异丙醇、乙醇、盐酸、磷酸盐缓冲液等。
2. 实验步骤：
（1）取动物组织样本，将其放入离心管中；
（2）加入细胞裂解液和蛋白酶K，使细胞膜破裂，使DNA释放；
（3）加入异丙醇，使DNA与蛋白质分离；
（4）加入氯仿，使DNA与异丙醇分离；
（5）加入乙醇，沉淀出DNA；
（6）用盐酸和乙醇洗涤DNA，最后用磷酸盐缓冲液溶解DNA。
实验结果：
通过上述步骤，成功从动物组织样本中提取出了DNA。
在紫外光下，DNA呈现出明显的条带状，证明提取的DNA质量较高。
实验结论：
本实验成功提取了动物组织中的DNA，为后续的分子生物学研究提供了可靠的基础。
通过对提取的DNA进行进一步分析，可以了解动物个体的遗传信息，为动物遗传育种、种群遗传结构等研究提供重要的数据支持。
同时，提取DNA的
方法简单、快速、高效，具有较高的实用价值。
在未来的研究中，我们将进一步利用提取的DNA，开展相关的分子生物学实验，探究动物遗传信息的更多奥秘，为生物多样性保护和遗传资源利用提供更多的
科学依据。
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定实验七动物组织中核酸的提取和鉴定【原理】动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)⼤部分与蛋⽩质结合形成核蛋⽩。
核蛋⽩可被三氯醋酸沉淀，再⽤95％⼄醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后⽤10％NaCl 溶液提取出核酸的钠盐，加⼊醇可使核酸钠沉淀析出。
先⽤⽔由动物肝中提出核蛋⽩，再籍酚将核酸与蛋⽩质之间的结合键断裂，并⽤⼄醚抽提去蛋⽩质及其它杂质，最后⽤⼄醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸⽔解产⽣磷酸。
有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。
此三类化合物可⽤下列⽅法鉴定之。
1、磷酸：能与钼酸试剂作⽤⽣成磷钼酸，后者在还原剂的作⽤下。
还原成兰⾊的钼兰。
常⽤的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维⽣素C 等。
H 3PO 4＋12H 2MoO 4→H 3PO 4·12MoO 3+12H 2O H 3PO 4·12MoO 3H 3PO 4·6MoO 3·3Mo 2O 52、嘌呤碱：能与苦味酸作⽤形成针状结晶3、戊糖：(1)核糖：经与强酸(盐酸与硫酸)共热⽣成糠醛，后者可与3;5⼆羟甲基苯缩合成绿⾊化合物。
(2)脱氧核糖：在强酸中加热，可⽣成ω—羟基γ—酮基戊醛，后者再与⼆苯胺作⽤⽣成⼀蓝⾊化合物。
上述⼆反应如下【操作】(⼀)核酸提取l、⽤酚提取法：（1）取⼩⽩⿏⼀只，断头处死，剖腹取肝，置于研钵中，加⼊玻璃少许，研磨⾄糊状后，加⼊蒸馏⽔3ml，继续研磨约三分钟。
（2）于该研钵中再加酚液5ml，研磨约⼗分钟后，倒⼊—-圆底离⼼管中，离⼼5分钟（约2000转/分钟）。
（3）⽤⽑细管将上液吸出，置于⼀圆底离⼼管中，加⼄醚2ml，⽤拇指将管⼝按住，⽤⼒振摇1—2分钟(提出酚)，离⼼5分钟后，⽤⽑细滴管吸取全部下层液于⼀圆底离⼼管中。
（4）于该管中加⼊95％⼄醇2ml，⽤玻棒搅拌约2分钟，离⼼3分钟，取出．去上清液，沉淀部分即为核酸。
动物肝脏中DNA的提取和鉴定
动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3.学习核酸染色的方法。
二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。
由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。
动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。
对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。
细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。
因此易被机械张力剪短。
细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。
1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。
2.核酸的结构与功能核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。
天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。
DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。
RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。
3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。
要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。
DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告
实验目的：
1. 了解动物组织中核酸的提取方法；
2. 掌握核酸鉴定实验的基本步骤；
3. 实验中验证提取的核酸是否具有一定的纯度。
实验原理：
动物组织中的核酸主要包括DNA和RNA两种类型，可利用
溶解细胞膜、蛋白质酶解、沉淀和洗涤等步骤提取核酸，并通过酶切鉴定分离所得核酸的类型。
核酸的鉴定主要通过比色、电泳或光谱等方式识别。
此外，核酸的纯度可通过测量260
nm和280 nm的光密度比值来评估。
实验步骤：
1.取动物组织，并将其切碎放入离心管中；
2.加入溶解液（如Tris-HCl缓冲液 pH 8.0），彻底溶解组织；
3.加入蛋白酶，使蛋白质完全酶解，生成核酸；
4.加入溶液（如EDTA），停止蛋白酶的作用；
5.加入酒精，将核酸沉淀下来；
6.用乙醇洗涤核酸沉淀，去除杂质；
7.将核酸用去离子水溶解，并进行测量；
8.通过酶切反应鉴定核酸的类型；
9.通过比色、电泳或光谱等方式识别核酸；
10.通过测量260 nm和280 nm的光密度比值来评估核酸纯度。
实验结果：
提取的核酸样品通过酶切反应鉴定为DNA。
通过比色、电泳
或光谱等方式识别，验证了核酸的存在。
通过测量260 nm和280 nm的光密度比值为1.8，表明核酸具有一定的纯度。
实验结论：
本实验成功提取了动物组织中的DNA核酸，并通过酶切反应鉴定了其类型。
通过比色、电泳或光谱等方式识别，验证了核酸的存在，并通过测量260 nm和280 nm的光密度比值评估了核酸的纯度。
实验三、动物组织DNA的提取
——动物组
织DNA的提取
班级：动科1143 姓名：李胜浩 学号：201411331312
一．实验目的 掌握从动物组织中分离DNA的基本原理和方法。 二．基本原理 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白，能溶解在纯水或1mol/L 的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。2.在0.1mol/LNaCl溶液 中，DNA核蛋白的溶解度最小，仅为在纯水中的1%左右，而 RNA核蛋白的溶解度最大；但在1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋 白的溶解度却增大，至少是在纯水中的两倍，而RNA核蛋白 的溶解度却明显下降。3.分离得到DNA核蛋白后，应进一步 十二烷基硫酸钠使蛋白质变性，用含有异戊醇的氯仿除去变 性的蛋白质，以得到游离的DNA。4.DNA分子大而长，其水溶 液呈粘稠状，可用玻璃棒搅缠起来。为了获得大的DNA分子， 在试验中应尽量避免剧烈震荡、用力过猛。
研磨匀浆
匀浆转入离心管
离心后的匀浆
四、实验步骤
1.本实验以鸡或兔的肝脏为材料实验前动物应饥饿12h以上。 2. 称取肝脏 4g ，放在培养皿中，用剪刀剪碎，放入匀浆器研磨， 加入 6ml ，氯化钠 - 柠檬酸钠缓冲液，装在 10ml 离心管中。将匀 浆物在4000r/min下离心10min。 3. 将上述沉淀转入 50ml大试管中，加入 6ml 氯化钠 - 柠檬酸钠缓 冲溶液、3ml氯仿-异戊醇混合液，0.5mlSDS使其终浓度为0.41%， 手摇 15min ，然后缓慢加入氯化钠固体（有 0.55g ），使其终浓 度为1mol/L。慢摇5min是氯化钠充分溶解。 4. 将上述混合液在 4000r/min 离心 15min ，取上清液于 50ml 烧杯 中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在 玻璃棒的凝胶状物用滤纸吸取多余的乙醇，即得DNA粗品。 5. 显色反应：取上述反应物 2ml 加入二苯胺试剂 2ml沸水浴加热， 观察颜色。
实验二 动物基因组DNA的提取
1000mL。 4℃预冷。 TE 缓冲液：1M Tris-HCl (pH=8.0 ) 2mL，0.5M EDTA
(pH=8.0 ) 0.2mL与97.8mL双蒸水混匀。
四、实验步骤
（一）动物组织材料的采集、保存(以鱼类分子材料的采集为例)
✓ 取0.05-0.1g 左右的尾鳍组织，充分剪碎，放入1.5mL离心管中； ✓ 向离心管中加入10～15μL的蛋白酶K 、500μL的HOM buffer，在55℃
消化至少2-3h，每隔0.5-1h摇动一次； ✓ 加500μL氯化钠（4.5M），300μL氯仿，混5-20min，期间剧烈摇动。
13000r/min下离心10min； ✓ 转移上清液到新管（大概850μL左右），加595μL无水异丙醇
何掌握？ • 2）你的组织材料消化后消化液的颜色、透明度如何？
是否有未消化材料？未消化材料可能是什么？ • 3）在试验的各步骤你看到什么现象？ • 4）叙述高盐法提取动物基因组DNA的步骤。
• 5）生物科学专业作业：DNA的粗提取与鉴定实验是人教版全日制普 通高级中学《生物》必修二中要求学生掌握并完成的一个重要实验。
注意事项
• （1）材料应适量，过多会影响裂解，导致DNA量少，纯度低； • （2）离心分离两相时，应保证一定的转速和时间； • （3）沉淀后应用75％的乙醇洗涤，以除去盐离子等； • （4）室温干燥DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥）； • （5）若长期储存建议使用TE缓冲液溶解（pH值为8.0，可防止
• 7）用中性笔写上标签，编号为“地点编号年月日001”起，如 020120728001，其中0（地点编号）2012（年）07（月）08（日）001 （当天编号）。将标签放入离心管中。
动物基因组dna分离的原理
动物基因组dna分离的原理动物基因组DNA分离的原理主要涉及到DNA的提取、纯化以及分析等过程。
以下是该过程的详细解释：第一步：DNA的提取动物基因组DNA的提取是DNA分离的第一步。
一般来说，有两种常用的提取方法：有机溶剂法和无机盐法。
有机溶剂法是指使用有机溶剂（如苯酚和氯仿）将DNA从细胞中提取出来。
首先，细胞样品被加入一个细胞裂解缓冲液中，以破坏细胞膜，并释放出DNA 和其他细胞组分。
然后，加入有机溶剂混合液对溶解后的溶液进行提取，使DNA溶解在有机相中。
最后，通过离心加速分离有机相和水相，并将DNA从有机相中重新提取出来。
无机盐法是指使用一系列含有盐的溶液将DNA从细胞中提取出来。
这种方法基于DNA在高盐浓度下与溶液中的阳离子形成离子相关物质可能性较低的原理。
首先，细胞样品被加入盐裂解缓冲液中，经裂解后，DNA与其他细胞组分分离。
然后，高盐缓冲液加入溶液中，通过离心将DNA从其他细胞组分中分离出来。
最后，通过洗涤等步骤去除残余的细胞组分和盐，并得到纯化的DNA 样品。
第二步：DNA纯化DNA纯化是为了去除提取过程中的杂质和其他细胞组分，从而得到高质量的DNA。
DNA纯化可以通过蛋白酶和蛋白质沉淀剂等酶消化、有机物沉淀和电泳等方法进行。
在酶消化方法中，蛋白酶被加入到DNA溶液中，以将DNA附着在蛋白酶或相关酶的组分上。
然后，使用有机物或其他方法除去蛋白酶和相关组分，使DNA 得到纯化。
有机物沉淀方法是通过将DNA与有机溶剂混合并离心沉淀去除其他细胞组分。
加入有机物（如异丙醇、以及其它盐类）的目的是改变DNA与溶液中的盐类和水分子的相互作用，从而促使DNA形成团状并沉淀。
离心作用向下压缩DNA并与有机溶剂一起沉淀，而其他细胞组分不受影响地保留在上层溶液中。
电泳是一种以电场为驱动力的方法，利用DNA的电荷特性将DNA分离出来。
DNA溶液被加载在含有琼脂糖的水平琼脂糖凝胶上。
然后，通过施加电场，DNA的负电荷会使其向正电极迁移。
DNA的提取及鉴定
六、实验操作
1）粗提 1．称取猪肝 8g于100ml的小烧杯中，用剪刀剪碎，加 入2倍重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液 （16ml），高速匀浆。
2．将匀浆液（ ~25ml）转移到 100ml 离心管中，在 4000r/min下离心10min，弃去上清液。沉淀中继续加 入25ml缓冲液，搅拌均匀后于 4000r/min离心20min， 取沉淀。
2）分离DNP、除蛋白 3．将上述沉淀转移至 250ml烧杯中，加入 40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液、 21ml氯 仿/异戊醇、4ml5%SDS，用保鲜膜封口，振摇 30min。
4．缓慢加入 3.6gNaCl （事先在研钵中研成粉末）使体 系终浓度为1mol/L。将混合液转移至离心管中于 3500r/min离心20min，取上清水相（用滴管吸取并量 体积）。
DNA鉴定或定量（二苯胺法）： 颜色反应可先完成标准曲线的制作，
或配置一个标准管。
(二)二苯胺法测定DNA含量
二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和
分别针对DNA和RNA的颜色反应方法
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在 酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该 物质在595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其 峰值与DNA含量成正比
DNA的提取及鉴定
一、动物肝脏中DNA的提取
一 . 实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取 DNA的原理和技术
了解分离提取DNA的一般原理
DNA的主要来源
1.动物组织及器官：脾、肝胚芽等 3.微生物：细菌、酵母菌等
核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形 式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及细胞质中。
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告1. 引言核酸（DNA和RNA）是生物体内存储遗传信息和调控基因表达的重要分子。
对于研究生物的遗传特征和进化过程，核酸的提取与鉴定是必不可少的实验步骤。
本实验旨在通过提取动物组织中的核酸，使用常用的鉴定方法分析核酸的质量和纯度。
2. 实验原理核酸提取与鉴定的基本原理是将动物组织中的核酸从其他的细胞组分（如蛋白质、唾液等）中分离出来，并通过吸光度测定和凝胶电泳等方法进行核酸的定性和定量。
2.1 核酸提取核酸提取的步骤包括细胞破碎、蛋白质的去除和核酸的沉淀。
常用的核酸提取方法包括酚-氯仿法、柱式提取法和商业试剂盒法等。
2.2 核酸定性和定量核酸的定性主要通过凝胶电泳进行，通过核酸带的迁移速度和分子量，可以初步判断核酸的纯度和是否受到降解。
核酸的定量则是通过吸光度测定，利用核酸特征的吸收峰波长（260 nm）测定核酸的浓度。
3. 实验材料与方法3.1 实验材料•动物组织样品•细胞破碎缓冲液•蛋白酶•酚-氯仿提取液•乙醇•TE缓冲液•焦亚硫酸铵•乙酸•0.8%琼脂糖凝胶3.2 实验步骤1.将动物组织样品切碎并加入细胞破碎缓冲液，用超声波破碎细胞壁。
2.加入蛋白酶进行蛋白质的消化。
3.加入酚-氯仿提取液，离心分离上层的核酸。
4.将上层的核酸转移到新离心管中，加入等体积的冷乙醇沉淀核酸。
5.离心沉淀的核酸，去除上层的乙醇并用TE缓冲液重悬核酸。
6.使用吸光度计测定核酸的纯度和浓度。
7.进行凝胶电泳，观察核酸的迁移带和分子量。
4. 结果与分析4.1 核酸提取结果通过核酸提取实验，成功从动物组织中提取到了核酸。
提取的核酸样品呈现无色透明的状态，说明核酸净化得较好。
4.2 核酸定性和定量结果将提取得到的核酸样品进行凝胶电泳，观察到了明显的核酸带。
通过与分子量标准品的比较，可以初步判断核酸的分子量范围是否正常。
通过吸光度测定，确定了核酸的浓度。
5. 结论通过本实验，成功提取到了动物组织中的核酸，并通过凝胶电泳和吸光度测定等方法对核酸进行了定性和定量分析。
动物组织中核酸的提取与鉴定(DNA&RNA)
实验一动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。
提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。
本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。
核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。
这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR 反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。
为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。
高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。
细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。
【实验材料】1.实验器材材料：小牛胸腺或动物肝脏；研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋等。
2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl (PH8.0)，0.1mol/L EDTA (PH8.0)，0.5%(m/V) SDS，20µg/mg无Dnase的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。
RNase在用前适量加入。
(2)溶液D(变性液)：4 mol/L 硫氰酸胍，25mmol/L 柠檬酸钠. 2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V )月桂基肌酸钠溶于293 ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、月旨类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中Dnase的活性;而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris（pH8.0）100mmol/LEDTA（pH8.0）500mmol/LNaCL20mmol/LSDS10%胰RNA酶20ug/ml(2)蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，C20°C备用。
(3)TE缓冲液(pH8.0):高压灭菌，室温贮存。
(4)酚？氯仿？异戊醇(25:24:1)、(5)异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1.取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3)，尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)20pl,混匀。
在65C恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37C水浴12〜24h,间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000rpm离心5min,取上清液入另一离心管中。
2•加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul吸头挑出，凉干，用200ulTE 重新溶解。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
DNA的提取及鉴定
一、动物肝脏中DNA的提取
一 . 实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取 DNA的原理和技术
了解分离提取DNA的一般原理
DNA的主要来源
1.动物组织及器官：脾、肝、胸腺、鱼类精子 等。 2.植物：种子的胚芽等 3.微生物：细菌、酵母菌等 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形 式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及细胞质中。
三、提取DNA的注意事项
1.避免过酸、过碱及高温 2.加入DNA酶抑制剂：柠檬酸、氰化物、砷酸 盐、EDTA、SDS、苯酚等 3.蛋白变性剂反映不宜过于剧烈，以防机械张 力使核酸链破坏。 4.加入RNA降解酶除RNA 5.操作迅速
四、实验器材
• • • • • • • • • • • 1. 捣碎机 2. 离心机 3. 手术剪 4. 离心管 5. 刻度吸管 6. 烧杯（100ml，250ml） 7. 玻棒 8. 新鲜动物肝脏 9.石英比色皿 10.量筒（10ml，100ml） 11.容量瓶（50ml）
核酸提取的主要步骤：
1.破碎细胞：研磨、组织匀浆、超声波、冻融； 一硫氰酸胍、碱裂解；酶解（溶菌酶） 2.除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生 物大分子：酚/氯仿抽提、蛋白质变性（SDS、 异硫氰酸胍等）、蛋白酶处理、高盐洗涤 3.除去其他不需要的核酸分子 4.沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质
100℃ DNA +
NH
蓝色物
冰醋酸，少量硫酸
CECS 694-02 Introduction to Bioinformatics University of Louisville Spring 2004 Dr. Eric Rouchka
DNA鉴定或定量（二苯胺法）： 空白管 标准管 测定管 标准DNA溶液 0 1.0 待测样品溶液 1.0 蒸馏水 2.0 1.0 1.0 二苯胺试剂 4.0 4.0 4.0 60°C水浴30-40min，冷却，595nm比色。
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氯仿；异戊醇（23:1）
（1）主要用于DNA或者RNA提取时蛋白的去除； （2）DNA提取时候，氯仿起变性蛋白质和将第一次抽提 后的水相中的酚带走的作用。异戊醇能降低分子表面张 力，能减少抽提过程中的泡沫产生，同时异戊醇有助于 分相，增加界面的稳定性
3.加等量的酚：氯仿：异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。 4.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿异戊醇， 振荡混匀，离心12000 rpm，5min5. 取上层溶液至另 一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的 无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。
• TE缓冲液（pH8.0）: 100mmol/lTris.Cl（pH8.0）、1mol/lEDTA （pH8.0）、室温保存； • 氯仿-异戊醇（23：1）：体积23:1 • 其他试剂：Tris饱和酚（购买）、无水乙醇、 75%乙醇。
*各种试剂的作用
EDTA（乙二胺四乙酸）
（1）螯合细胞膜和骨架上的Ca2+、Mg2+,从而 使细胞更易破碎。 （2）螯合Mg2+使得内源性Dnase没有Mg2+不 能发挥作用，保持DNA的稳定性，Tris起缓存 pH值的作用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮 存。
（4）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1） （5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。 盐酸，醋酸钠，琼脂糖，溴酚蓝，溴化乙锭。
*主要的试剂及配置：
• DNA提取液SET： 10mmol/LTris.Cl（pH8.0）、
100mmol/lEDTA、500mmol/lNaCl、20%SDS
动物组织DNA的提取与鉴定
一、实验目的
• 1.了解并掌握提取动物基因组 DNA的原理和常用方法。
• 2.学习和掌握琼脂糖电泳法鉴定 DNA的原理和方法。
二、实验原理
• 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基 硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/ 异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从 溶液中析出。 • 琼真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基 因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内， 因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等 分离，又要保持DNA分子的完整。 • 脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。 琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷， 是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（pH8.0的缓冲液） 带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子 片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化 乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外 线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选 重组子的目的。
*鉴定：
1、安装电泳槽 将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的 开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。 2、琼脂糖凝胶的制备 称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂 糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的 DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶） 置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸 腾），取出摇匀。 3、灌胶 将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上 4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然 后拔出梳子。
5、加样 将DNA样品与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混 合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和 加样量。 6、电泳 安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打 开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶 前沿1-2cm时，停止电泳。 7、染色和观察 取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可 在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为 DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致 癌剂，操作时要小心，必须戴手套。
5.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将 附于管壁的残余液滴除掉。
6.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。
7.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上， 将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。 8.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或 20℃保存备用。 9.将提取物置于子之间的水，使DNA沉淀析出， 无水乙醇使用前冰冻，可以减少DNA沉淀析 出过程释放热量DNA的损伤。
75%乙醇：
洗涤DNA的作用，主要去盐和有机杂质。
四、实验步骤
*提取：
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽 量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞 裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离 心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混 匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转 入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。 于台式离心机以12000 r/min离心5min，取上清 液入另一离心管中。 2.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝 状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重 新溶解。
三、实验仪器及试剂
• 1. 仪器： 恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度 计、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭 菌）、吸头（灭菌）、 电泳仪，电泳槽、 紫外透射反射仪、微波炉、微量进样器
2. 试剂： （1）细胞裂解缓冲液： Tris (pH8.0) 100 mmol/L EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L NaCL 20 mmol/L SDS 10% 胰RNA酶 20ug/ml （2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌 的双蒸水中，20℃备用。
蛋白酶K
水解蛋白质的作用，消化DNA酶和细胞中的 蛋白质
SDS（十二烷基硫酸钠）
SDS是离子型表面活性剂，主要作用是： （1）破坏细胞膜及核膜； （2）解聚细胞中的核蛋白； （3）与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下 来； （4）抑制DNA酶活性，使DNA分子尽量完整 的分离出来。
苯酚：蛋白质强变性剂