动物组织基因组的提取ppt课件
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动物基因组学PPT课件
常用动物模型
小鼠、大鼠、猴子、狗等都是常用的动物模型。
主要成果
通过动物模型研究，科学家们发现了许多与人类疾病和行为特征相关 的基因和机制，为人类生物学和医学研究提供了重要依据。
农业动物基因组学研究
01
农业动物基因组学研究
农业动物基因组学研究旨在通过基因组学手段改良农业动物的遗传性状，
提高其生产性能和健康水平。
疾病诊断与预防
动物基因组学有助于发现与人类疾病相关的基因变异，为疾病的早期诊断和预防提供依据 。
生物治疗
动物基因组学为生物治疗提供了新的手段，例如基因治疗和细胞治疗等，可用于治疗遗传 性疾病和癌症等疾病。
农业领域
品种改良
动物基因组学为农业领域提供了新的育种手段，通过基因编辑和基因转移等技术，可以 快速培育出抗逆性强、产量高、品质优良的动植物新品种。
主要研究对象
虎、狮、豹、过野生动物基因组学研究，科学家们深入了解了野生动 物的生物学特征、进化和保护情况，为野生动物保护和生 态平衡维护提供了重要依据。
04
动物基因组学应用前景
生物医药领域
药物研发
动物基因组学为药物研发提供了新的途径，通过研究动物基因的表达和调控，可以发现新 的药物靶点，提高药物研发的效率和成功率。
现状
目前，动物基因组学的研究已经取得了丰硕的成果，包括多种动物的基因组测序 和解析，以及基于基因组学的动物功能基因研究和应用探索。同时，随着新一代 测序技术和计算生物学的发展，动物基因组学的研究将更加深入和广泛。
02
动物基因组学基础知识
基因与基因组
01
02
03
基因
遗传信息的最小功能单位， 负责编码蛋白质或RNA分 子。
表观遗传学
小鼠、大鼠、猴子、狗等都是常用的动物模型。
主要成果
通过动物模型研究，科学家们发现了许多与人类疾病和行为特征相关 的基因和机制，为人类生物学和医学研究提供了重要依据。
农业动物基因组学研究
01
农业动物基因组学研究
农业动物基因组学研究旨在通过基因组学手段改良农业动物的遗传性状，
提高其生产性能和健康水平。
疾病诊断与预防
动物基因组学有助于发现与人类疾病相关的基因变异，为疾病的早期诊断和预防提供依据 。
生物治疗
动物基因组学为生物治疗提供了新的手段，例如基因治疗和细胞治疗等，可用于治疗遗传 性疾病和癌症等疾病。
农业领域
品种改良
动物基因组学为农业领域提供了新的育种手段，通过基因编辑和基因转移等技术，可以 快速培育出抗逆性强、产量高、品质优良的动植物新品种。
主要研究对象
虎、狮、豹、过野生动物基因组学研究，科学家们深入了解了野生动 物的生物学特征、进化和保护情况，为野生动物保护和生 态平衡维护提供了重要依据。
04
动物基因组学应用前景
生物医药领域
药物研发
动物基因组学为药物研发提供了新的途径，通过研究动物基因的表达和调控，可以发现新 的药物靶点，提高药物研发的效率和成功率。
现状
目前，动物基因组学的研究已经取得了丰硕的成果，包括多种动物的基因组测序 和解析，以及基于基因组学的动物功能基因研究和应用探索。同时，随着新一代 测序技术和计算生物学的发展，动物基因组学的研究将更加深入和广泛。
02
动物基因组学基础知识
基因与基因组
01
02
03
基因
遗传信息的最小功能单位， 负责编码蛋白质或RNA分 子。
表观遗传学
动物组织基因组DNA的提取
实验一动物组织基因组DNA的提取一、实验目的掌握从动物组织中提取总DNA的方法。
二、实验原理DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。
染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。
从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。
整个实验可分为细胞裂解、DNA分离与纯化和DNA 的洗脱收集。
1.细胞裂解：酶法（蛋白酶K）。
2. DNA 分离与纯化：细胞破碎后，常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA，主要有硅基质材料、阴离子交换树脂和磁珠等。
本实验采用TIANGEN血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒中的硅基质材料的离心吸附柱。
硅基质材料吸附核酸的原理，主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合，在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
三、材料、试剂和设备1.材料：动物组织2.试剂：TIANGEN血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒，无水乙醇等3.设备：离心机，微量移液器等四、实验步骤1.处理材料：取动物组织10mg，尽量切碎，加200μl 缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
2.加入20μl蛋白酶K溶液，混匀后56℃水浴，直至组织溶解（不同组织裂解时间不同，通常需1-3小时即可完成）。
简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
（细胞裂解）3.加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁水珠。
（溶解DNA）注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。
如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA不纯。
动物组织基因组DNA提取
动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。
冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。
7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。
11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。
12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
实验四动物血液基因组DNA的提取ppt课件
用于稀释和清洗实验器 具。
用于离心和吸液操作。
实验设备
紫外分光光度计
用于检测DNA浓度和质量。
离心机
用于高速离心，使细胞沉淀。
移液器
用于准确移取液体。
冰箱和冷藏设备
用于储存试剂和血液样本。
微波炉或恒温水浴锅
用于加热和融化相关试剂。
03
实验操作步骤
样本准备
01
02
03
收集动物血液样本
使用无菌注射器采集动物 静脉血液，存放在无菌的 离心管中。
实验注意事项
样本来源
确保所使用的动物血液样 本来源合法，并符合伦理 要求。
试剂储存与使用
严格按照试剂说明书进行 DNA提取试剂的储存和使 用，避免试剂受到污染或 失效。
仪器操作
正确操作和使用相关仪器 设备，如离心机、PCR仪 等，确保实验结果的准确 性。
异常情况处理与应急措施
皮肤接触
若发生皮肤接触，立即用大量 清水冲洗，并及时就医。
//www.example/genomics-experimental-techniques)
THANKS。
了解基因组DNA的 理化性质和提取过程 中的注意事项。
实验原理
基因组DNA是生物体遗传信息 的载体，存在于细胞核中。
通过离心分离动物血液中的白细 胞和红细胞，利用细胞裂解液裂 解白细胞，释放出基因组DNA
。
利用吸附柱去除杂质，如蛋白质 和RNA，纯化基因组DNA。
实验步骤概述
1. 准备实验器材和试剂：离心 机、移液器、离心管、吸附柱 、细胞裂解液、洗涤缓冲液等 。
吸入
若发生吸入，立即离开实验区 域，呼吸新鲜空气，并及时就 医。
化学品泄漏
实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件
DNA鉴定
琼脂糖凝胶电泳
将提取的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳，观察电泳结果， 判断DNA的纯度和浓度。
紫外吸收法
利用紫外分光光度计测量 DNA溶液在260nm处的吸 光度值，计算DNA的浓度 和纯度。
荧光染料染色法
利用荧光染料染色DNA， 通过荧光分光光度计测量 DNA的荧光强度，判断 DNA的纯度和浓度。
细胞内的DNA。
DNA提取
离心
将匀浆后的样品进行离心，使细胞碎片和 杂质沉淀到底部，上清液中含有DNA。
洗涤
用洗涤液清洗吸附柱，去除未被吸附的杂 质。
吸附
将上清液加入到吸附柱上，DNA被吸附在 吸附柱的硅基质膜上，而蛋白质和其他杂 质被排除。
洗脱
用洗脱液将DNA从吸附柱上洗脱下来，收 集洗脱液中的DNA。
移液器
用于精确移取和量 取实验试剂。
电脑和PPT软件
用于制作和展示实 验课件。
03
实验步骤
样品处理
样品收集
选择新鲜的动物组织样品，确保 无菌条件下收集，避免样品受到
污染。
样品处理
将收集的动物组织切成小块，用 生理盐水或磷酸盐缓冲液冲洗，
去除表面的污物和血液。
样品匀浆
将处理过的组织块放入匀浆器中， 加入适量的匀浆介质（如石英砂、 玻璃珠等），破碎细胞，释放出
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的 分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项
在紫外分光光度计检测过程中，需要注意消除样品中蛋白质、酚类等物质的干扰，以确保 纯度分析的准确性。同时，对于不同来源和性质的DNA样品，可能需要采用不同的纯度 分析方法。
实验五 动物组织中的DNA提取
实验二 动物组织中的DNA提取
实验目的
掌握动物组织中DNA提取的原理和方法。
实验原理
由于动物细胞没有纤维素外壁，细胞外被含有大量蛋 白质，用蛋白酶K进行消化可以裂解细胞。 等离子型表面活性剂十二烷基肌酸钠、十六烷基三乙 基溴化铵，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(简称SDS)能 溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA从 核中和结合状态释放出来到抽提液中。 水饱和酚和氯仿等能使蛋白质变性的有机溶剂加入后， 使抽提液分相。水溶性很强的核酸(DN,A、RNA)分布于 水相，各种脂溶性物质和大部分蛋白质在有机相，经离心 后即可从抽提液中除去细胞碎片沉淀和有机相中的各种其 他成分。上清液中加入异丙醇或无水乙醇使DNA沉淀， 沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即得动物总DNA溶液。
实验操作流程
称样、磨样 裂 解
电泳检测
抽
提
裂解细胞膜溶解Fra bibliotek沉 淀 淀
干
燥
洗
涤
实验结果与分析
Marker DNA
实验目的
掌握动物组织中DNA提取的原理和方法。
实验原理
由于动物细胞没有纤维素外壁，细胞外被含有大量蛋 白质，用蛋白酶K进行消化可以裂解细胞。 等离子型表面活性剂十二烷基肌酸钠、十六烷基三乙 基溴化铵，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(简称SDS)能 溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA从 核中和结合状态释放出来到抽提液中。 水饱和酚和氯仿等能使蛋白质变性的有机溶剂加入后， 使抽提液分相。水溶性很强的核酸(DN,A、RNA)分布于 水相，各种脂溶性物质和大部分蛋白质在有机相，经离心 后即可从抽提液中除去细胞碎片沉淀和有机相中的各种其 他成分。上清液中加入异丙醇或无水乙醇使DNA沉淀， 沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即得动物总DNA溶液。
实验操作流程
称样、磨样 裂 解
电泳检测
抽
提
裂解细胞膜溶解Fra bibliotek沉 淀 淀
干
燥
洗
涤
实验结果与分析
Marker DNA
动物组织基因组的提取讲解
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌 体，其或只含DNA，或只含有RNA。
2、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在
微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂
在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
三、动物基因组DNA的提取
主要方法： (1)浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。 1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
• •
组织匀浆液 （装入10ml离心管中） 10ml
100mmol／L NaCl：0.2ml（5M NaCl） 25 mmol／L EDTA(pH8.0)： 0.5ml（ 0.5M EDTA pH8.0) l0mmol／L Tris·HCIpH 8.0)：0.1ml（1M Tris·HCIpH 8.0) 加三蒸水: 9.2ml
DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。
动物医学-动物生物化学实验《动物DNA提取》课件
4
氯仿 ➢ 强蛋白质变性剂，使液相与有机相分开 ➢ 抑制DNA酶的活性
异戊醇 ➢ 消除抽提过程中出现的泡沫
95%乙醇 ➢ 沉淀DNA
5
三、实验步骤
取材
取出冻肝,待溶化后,称取3g,剪成碎块.
匀浆
➢ 加入5 mL 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液充分匀 浆;
3
主要试剂及其作用
EDTA ➢ 螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子 ➢ DNase作用时需要一定的金属离子作辅基 ➢ 抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用
SDS ➢ 抑制核糖核酸酶的作用 ➢ 溶解细胞膜上的脂质与蛋白，溶解膜蛋白而破坏细胞膜 ➢ 与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白 质变性而沉淀下来
➢ 再快速加入1mL 25% SDS,轻轻混匀10min； ➢ 加入3mL 5mol/L NaCl溶液(终浓度为1.07mol/L),继续轻轻混匀10min; ➢ 加入(14mL)一倍体积的氯仿-异戊醇混合液.于带磨口塞的锥形瓶中震摆
10min; ➢ 分别引流入三支小试管，3000rpm离心20min,分为三层:
8
上层-----水相 中间层---蛋白质 下层-----有机相
➢ 小心用皮头滴管吸取上层水相于小烧杯中,加入 2 倍体积的95%的乙醇,静 置；将DNA丝状物缠绕在玻棒上.
7
四、思考题
① 用95%酒精提抽DNA时为什么要轻轻搅动; ② 结合本人操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子
DNA的降解.
实验六 动物肝脏DNA的提取 动物医学院动物生化教研室
一、实验目的
① 了解从动物组织中提取DNA的一般原理； ② 掌握DNA提取的方法和步骤。
氯仿 ➢ 强蛋白质变性剂，使液相与有机相分开 ➢ 抑制DNA酶的活性
异戊醇 ➢ 消除抽提过程中出现的泡沫
95%乙醇 ➢ 沉淀DNA
5
三、实验步骤
取材
取出冻肝,待溶化后,称取3g,剪成碎块.
匀浆
➢ 加入5 mL 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液充分匀 浆;
3
主要试剂及其作用
EDTA ➢ 螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子 ➢ DNase作用时需要一定的金属离子作辅基 ➢ 抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用
SDS ➢ 抑制核糖核酸酶的作用 ➢ 溶解细胞膜上的脂质与蛋白，溶解膜蛋白而破坏细胞膜 ➢ 与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白 质变性而沉淀下来
➢ 再快速加入1mL 25% SDS,轻轻混匀10min； ➢ 加入3mL 5mol/L NaCl溶液(终浓度为1.07mol/L),继续轻轻混匀10min; ➢ 加入(14mL)一倍体积的氯仿-异戊醇混合液.于带磨口塞的锥形瓶中震摆
10min; ➢ 分别引流入三支小试管，3000rpm离心20min,分为三层:
8
上层-----水相 中间层---蛋白质 下层-----有机相
➢ 小心用皮头滴管吸取上层水相于小烧杯中,加入 2 倍体积的95%的乙醇,静 置；将DNA丝状物缠绕在玻棒上.
7
四、思考题
① 用95%酒精提抽DNA时为什么要轻轻搅动; ② 结合本人操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子
DNA的降解.
实验六 动物肝脏DNA的提取 动物医学院动物生化教研室
一、实验目的
① 了解从动物组织中提取DNA的一般原理； ② 掌握DNA提取的方法和步骤。
动物组织DNA提取最终ppt课件
实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分 沉淀不完全
③
对 策
④ ⑤ ⑥
④
洗涤时DNA丢失
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二、实验方法及一般步骤
2）破碎抽提核酸除去杂质
首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与其它 成分分离 使核酸与蛋白质分离 除去脂类 多糖的除去
二、实验方法及一般步骤
3）核酸的纯化
根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染, 并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机溶剂等） 杂质，最后得到均一的核酸样品。
二、实验方法及一般步骤
核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用： 1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造 成蛋白污染。
2.使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。
3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
二、实验方法及一般步骤
核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase：降解RNA 蛋白酶K：降解蛋白质 溶菌酶：破碎细胞
二、实验方法及一般步骤
4）核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
用紫外分光光度计检测DNA浓度与纯度
增加70％乙醇洗涤 的次数（2-3次）
③
③
五、 DNA提取常见 问题
问题二：DNA降解
原 因
① ②
①
③
④ ⑤
材料不新鲜或反复冻 融 未很好抑制内源核酸 酶的活性 提取过程操作过于剧 烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 DNA样品反复冻融
实验17 动物组织核酸提取与鉴定ppt课件
实验原理—DNA提取
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸 物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可 使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在 DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原 理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相 分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。 而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙 醇沉淀来纯化和浓缩DNA。
实验步骤
（三）DNA的纯度测定与定量
1. 取DNA提取液0.1 mL，用水或缓冲液稀释一定浓度，用 紫外分光光度计分别测定同一样品的260 nm和280 nm的吸 光值（OD），检测DNA的纯度及浓度。 a) 若A260 nm / A280 nm 接近于1.8，则说明DNA样品的纯度高； b) DNA浓度（μg/mL） = A260 nm × 50 × 稀释倍数 × （1/光 经） c) DNA得率（mg）= DNA浓度 × 最终DNA原液（mL）
动物组织中DNA的提取与鉴定
实验目的
1. 掌握动物组织中DNA提取的原理和操作过程 2. 了解DNA的组分，掌握DNA的定性检测的具 体方法 3. 掌握DNA纯度检测和浓度测定方法
实验原理—DNA提取
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖 核酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。 RNA核蛋白和DNA核蛋白在不同浓度氯化钠溶液 中的溶解度有显著区别。DNA核蛋白在0.14 mol/L 氯化钠中溶解度低，但在1 – 2 mol/L氯化钠中溶 解度高；RNA核蛋白在0.14 mol/L氯化钠中溶解度 仍有相当大的溶解度。调节氯化钠浓度，可使 RNA核蛋白和DNA核蛋白分步提取开来。
实验原理—DNA鉴定
DNA是由脱氧核糖核苷酸单体构成，其组成部分包括磷酸、 有机碱（嘌呤与嘧啶）、戊糖（脱氧核糖）。
基因组dna的提取课件
纯度（OD260/OD280）
紫外分光光度计进行测量（选择正确的稀释倍数）
OD260/OD280 < 1.7
说明有蛋白的污染
OD260/OD280 ＝1.8 (1.7～1.9) 说明纯度很好
OD260/OD280 > 1.9 说明有部分降解或有RNA污
染
得率
紫外分光光度计进行测量
Yield＝ OD260×50ng/μL×稀释倍数（双链DNA）
干心吸得附到材的料溶中液残再余加的入漂吸洗附液柱; CB3中， 室 温 放 置 2min ， 12,000rpm 离 心 将2m吸in附；柱转入干净的离心管中，向吸 附膜的中间部位悬空滴加100uL洗脱 缓洗冲脱液液T的E，pH室值温对放于置洗5m脱in效；率有很大 影响，应在7.0-8.5范围内； 12,0OOrpm离心2min，将DNA溶液收集 到DN离A心产管物中应保存在－20℃。
裂解的样本 加入吸附柱 缓冲液冲洗 DNA洗脱收集
沉淀核酸 核酸吸附
漂洗去杂 洗脱DNA
注意:
洗脱前要充分空甩，以除去乙醇 的影响；
采用合适的缓冲液 将洗吸脱附缓柱冲放液回体收积集不管应中少，于1520,0μ0L0，rp体m，
离积心过2小m影in响，回倒收掉效废率液；: 将为吸增附加柱基开因盖组放D置NA5m的i得n，率以，彻可底将晾离
17
【操作流程Ⅱ】 (总结)
加 乙醇 200 µL
充分混匀 短暂离心
动作 轻柔
溶液和絮状 勿加入组 沉淀转入 织块！！
12,000rpm,离心 30s ，弃废液
加 GD 500 µL
12,000rpm,离心 30s ，弃废液
加 PW 700 µL
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主要存在于细胞核的染色体中。 核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA
（cpDNA），质粒DNA。
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌
体，其或只含DNA，或只含有RNA。
ppt课件.
ppt课件.
12
核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase：降解RNA 蛋白酶K：降解蛋白质
溶菌酶：破碎细胞
ppt课件.
13
3. 核酸制备的一般步骤：
I.材料准备
破碎组织细胞
II.破碎细胞或包膜－内容物释放
提取
III.核酸分离、纯化
纯化
IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质
V.核p酸pt课溶件. 解在适量缓冲液或水中 14
3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中
4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
ppt课件.
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三、动物基因组DNA的提取
（2）阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性, 可以直接从生物材料中 提取DNA。
由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合, 而阴离子 去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。
ppt课件.
6
核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH及盐的浓度，都利于对核酸酶活 性的抑制，但均不如利用核酸酶抑制剂更有利，当然， 几个条件并用更好。
对于DNA，抑制DNase活力很容易，但防止机械张力 拉断则更重要。
对于RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但抑 制RNase活力较难，故在RNA提取中设法抑制RNase更 重要。
ppt课件.
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三、动物基因组DNA的提取
（3）苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时, 由于蛋白与DNA 连接键已断, 蛋白分子表面又 含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次 重用）
微生物：溶菌酶、SDS裂解。 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。
酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶， 冰冻法：反复冻融或液氮冻后组织捣碎。 动物：液氮处理后用匀浆器或者研钵破碎。 细胞器DNA：首先纯化细胞器。
以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂
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2）破碎抽提核酸除去杂质 ➢ 首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与其它
保存介质：
灭菌水
TE缓冲溶液(最常用)：
10mmol/L Tris-Cl pH8.0
1mmol/L EDTA pHpp8t课.0件.
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三、动物基因组DNA的提取
主要方法： (1)浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。
1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液
2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化
成分分离 ➢ 使核酸与蛋白质分离 ➢ 除去脂类 ➢ 多糖的除去
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3）核酸的纯化
根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染, 并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机溶剂等）
杂质，最后得到均一的核酸样品。
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4）核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
分离纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性； ②排除其它分子(蛋白，脂类，多糖类)的污染。
核酸纯化应达到的要求： ①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高 浓度的金属离子； ②其它生物大分子的污染应降低到最低程度； ③排除其它核酸分子的污染。
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核酸制备时应注意的事项: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。 ③减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解：排除核酸酶。 ⑤排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除 RNA，反之亦然。
实验一、动物组织基因组DNA提 取
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实验一 动物基因组DNA的提取 一、实验目的
➢ 学习和掌握从动物组织或细胞中提取核酸的原理和操 作技术
➢ 了解提取DNA的几种方法，原理和优缺点
➢ 学习测定DNA含量和质量的基本原理及方法
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二、实验原理
1、核酸的分类 DNA (脱氧核糖核酸)
3
2、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在 微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂 在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA溶液粘度很大，RNA的粘度较小
在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来
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2、核酸制备的一般原则
如：SDS、脱氧胆酸钠、4-氨基水杨酸钠、萘-1.5-二磺酸 钠、三异丙基萘磺酸钠
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核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用： 1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造
成蛋白污染。
2.使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。
3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作 用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
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DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。
②去垢剂、蛋白变性剂及DNase抑制剂也可使 DNase失活。
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RNase抑制
①操作要带手套。 ②所有器皿要严格消毒， ③试剂处理 ④低温操作
⑤在分离过程中要加入一定的RNase抑制剂。
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常用的RNA酶抑制剂
• 焦磷酸二乙酯（DEPC）
抑制强烈、不彻底
• 异硫氰酸胍
有效抑制、分解核蛋白
• 氧钒核糖核苷复合物
有效抑制
• RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin） 有效抑制
• 其它：SDS、尿素、硅藻土等
有效抑制
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核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核酸 提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。 去垢剂的作用： 1．溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； 2．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出 来； 3．对RNase、DNase有一定的抑制作用。
（cpDNA），质粒DNA。
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌
体，其或只含DNA，或只含有RNA。
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核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase：降解RNA 蛋白酶K：降解蛋白质
溶菌酶：破碎细胞
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3. 核酸制备的一般步骤：
I.材料准备
破碎组织细胞
II.破碎细胞或包膜－内容物释放
提取
III.核酸分离、纯化
纯化
IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质
V.核p酸pt课溶件. 解在适量缓冲液或水中 14
3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中
4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
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三、动物基因组DNA的提取
（2）阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性, 可以直接从生物材料中 提取DNA。
由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合, 而阴离子 去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。
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核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH及盐的浓度，都利于对核酸酶活 性的抑制，但均不如利用核酸酶抑制剂更有利，当然， 几个条件并用更好。
对于DNA，抑制DNase活力很容易，但防止机械张力 拉断则更重要。
对于RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但抑 制RNase活力较难，故在RNA提取中设法抑制RNase更 重要。
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三、动物基因组DNA的提取
（3）苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时, 由于蛋白与DNA 连接键已断, 蛋白分子表面又 含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次 重用）
微生物：溶菌酶、SDS裂解。 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。
酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶， 冰冻法：反复冻融或液氮冻后组织捣碎。 动物：液氮处理后用匀浆器或者研钵破碎。 细胞器DNA：首先纯化细胞器。
以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂
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2）破碎抽提核酸除去杂质 ➢ 首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与其它
保存介质：
灭菌水
TE缓冲溶液(最常用)：
10mmol/L Tris-Cl pH8.0
1mmol/L EDTA pHpp8t课.0件.
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三、动物基因组DNA的提取
主要方法： (1)浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。
1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液
2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化
成分分离 ➢ 使核酸与蛋白质分离 ➢ 除去脂类 ➢ 多糖的除去
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3）核酸的纯化
根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染, 并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机溶剂等）
杂质，最后得到均一的核酸样品。
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4）核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
分离纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性； ②排除其它分子(蛋白，脂类，多糖类)的污染。
核酸纯化应达到的要求： ①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高 浓度的金属离子； ②其它生物大分子的污染应降低到最低程度； ③排除其它核酸分子的污染。
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核酸制备时应注意的事项: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。 ③减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解：排除核酸酶。 ⑤排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除 RNA，反之亦然。
实验一、动物组织基因组DNA提 取
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实验一 动物基因组DNA的提取 一、实验目的
➢ 学习和掌握从动物组织或细胞中提取核酸的原理和操 作技术
➢ 了解提取DNA的几种方法，原理和优缺点
➢ 学习测定DNA含量和质量的基本原理及方法
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二、实验原理
1、核酸的分类 DNA (脱氧核糖核酸)
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2、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在 微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂 在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA溶液粘度很大，RNA的粘度较小
在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来
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2、核酸制备的一般原则
如：SDS、脱氧胆酸钠、4-氨基水杨酸钠、萘-1.5-二磺酸 钠、三异丙基萘磺酸钠
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核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用： 1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造
成蛋白污染。
2.使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。
3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作 用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
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DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。
②去垢剂、蛋白变性剂及DNase抑制剂也可使 DNase失活。
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RNase抑制
①操作要带手套。 ②所有器皿要严格消毒， ③试剂处理 ④低温操作
⑤在分离过程中要加入一定的RNase抑制剂。
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常用的RNA酶抑制剂
• 焦磷酸二乙酯（DEPC）
抑制强烈、不彻底
• 异硫氰酸胍
有效抑制、分解核蛋白
• 氧钒核糖核苷复合物
有效抑制
• RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin） 有效抑制
• 其它：SDS、尿素、硅藻土等
有效抑制
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核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核酸 提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。 去垢剂的作用： 1．溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； 2．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出 来； 3．对RNase、DNase有一定的抑制作用。