动物组织总DNA的提取与浓度测定

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2、DNA纯度及含量测定
取待测DNA溶液20ml放入1cm内经石英比色皿,加蒸 馏水至2ml（稀释100倍），以蒸馏水作空白对照， 于紫外分光光度计上测定230nm、260nm、280nm和 270nm波长下的光吸收值。然后计算出OD260/OD280 和OD260/OD270的比值。 DNA浓度（ng/μ l）=( OD260nm /(0.02×d))×稀 释倍数, d：为石英比色皿的内径，单位为cm。 若OD260/OD280＜1.8，说明还残存有蛋白质； OD260/OD270＞1.2，说明还残存有酚； OD260/OD230＜2.0，则残存基酸、核苷酸、基酸盐 等物质。
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实验十四 动物组织中总DNA的提取与纯度鉴定
湖南农业大学动物科技学院
贺长青Fra Baidu bibliotek
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一、实验目的
动物DNA的提取原理和方法 动物DNA纯度的鉴定技术
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四、实验方法
1、动物DNA的提取
取猪耳或其它组织器官约1.5g，洗净，切碎，移至1.5ml离心管中； 加入DNA提取液0.5ml； 加入蛋白酶K （10mg/ml） 15μ l，充分混匀； 放于45℃摇床消化，转速120 rmp，以完全消化为准； 加入等体积饱和酚，充分摇匀，10000 rmp离心5′，取上清液； 加等体积氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，10000 rmp离心5′，取上清液 加入2倍体积冰冷的无水乙醇，轻轻混匀，7000 rmp离心2′，弃去上清液。 加入适量TE溶解。
三、实验的材料、仪器及试剂
1、实验材料：猪耳或其它组织器官 2、仪器设备： 高速离心机、离心管、微加热系统、移液枪、紫外分光光度计 3、试剂 （1）DNA提取液（PH 8.0）: ① EDTA： 10mM； ② Tris-Hcl： 10mM； ③ SDS： 2%； ④ Nacl： 30mM （2）饱和苯酚 （3）氯仿:异戊醇混合液（24：1） （4）无水乙醇 （5）蛋白酶K （6）TE：Tris-Hcl 10mM ； EDTA 1mM （PH 8.0）
二、实验原理
去污剂如SDS（十二烷基硫酸钠）使组织细胞裂解，并 破坏蛋白质的二级、三级结构； 蛋白酶K水解蛋白质； 有机溶剂如苯酚/氯仿抽提去除变清的蛋白质及多糖、 脂类等杂质物质，氯仿抽提去除多余的酚； 无水乙醇：含DNA的上清液DNA分子发生凝聚（脱水） 离心得到DNA沉淀
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