肌肉组织中DNA的提取ppt课件
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选修一5.1DNA的粗提取和鉴定人教版高二生物下课件(共29张PPT)
再用来自mol/L的NaCl溶液溶 解DNA。
Q1：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，搅拌 1min，注意应沿一个方向，目的是？
目的是使DNA充分溶解
过滤溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液，目的是什么？
含DNA的滤液、除去不溶的杂质
含核物质的滤液
Q2：再加蒸馏水的目的是？同时搅拌的目的是？（轻轻地沿 一个方向不停地均与搅拌）过滤含DNA黏稠物的0．14mol/L 的NaCl溶液，目的是什么？
部分发生盐析(沉淀) 溶解 某些蛋白质可溶
（二）对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响。 ②60～80°C的高温中，蛋白质变性后溶解度降 低而产生沉淀，DNA在80°C以上才会变性。 ③洗涤剂瓦解细胞膜（脂质），对DNA没有影 响（在植物材料中提取DNA使用）。
DNA具有耐受性
提取DNA的方法：利用DNA与蛋白质、 RNA 和 脂质等在 物理和 化学 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
一、DNA的提取的原理： （一）溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中和酒精中的溶解度不同。
❖ 据图： ❖ ①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？
0.14 mol/L
课题 DNA的粗提取与鉴定
人教版高二年级 选修1
生物体内的DNA犹如“雾中花”，神秘莫 测，真实的DNA是什么模样？
探究DNA的提取与鉴定的原理
【问题思考】 1.细胞中有哪些生物大分子？ 2.DNA与蛋白质的物理化学性质有哪些主要差异？ 3.提取生物大分子的基本思路是什么？ 4.提取DNA分子的方法是什么？
DNA含量相对较高的组织，成功的可能性更大。
材料：新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）
Q1：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，搅拌 1min，注意应沿一个方向，目的是？
目的是使DNA充分溶解
过滤溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液，目的是什么？
含DNA的滤液、除去不溶的杂质
含核物质的滤液
Q2：再加蒸馏水的目的是？同时搅拌的目的是？（轻轻地沿 一个方向不停地均与搅拌）过滤含DNA黏稠物的0．14mol/L 的NaCl溶液，目的是什么？
部分发生盐析(沉淀) 溶解 某些蛋白质可溶
（二）对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响。 ②60～80°C的高温中，蛋白质变性后溶解度降 低而产生沉淀，DNA在80°C以上才会变性。 ③洗涤剂瓦解细胞膜（脂质），对DNA没有影 响（在植物材料中提取DNA使用）。
DNA具有耐受性
提取DNA的方法：利用DNA与蛋白质、 RNA 和 脂质等在 物理和 化学 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
一、DNA的提取的原理： （一）溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中和酒精中的溶解度不同。
❖ 据图： ❖ ①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？
0.14 mol/L
课题 DNA的粗提取与鉴定
人教版高二年级 选修1
生物体内的DNA犹如“雾中花”，神秘莫 测，真实的DNA是什么模样？
探究DNA的提取与鉴定的原理
【问题思考】 1.细胞中有哪些生物大分子？ 2.DNA与蛋白质的物理化学性质有哪些主要差异？ 3.提取生物大分子的基本思路是什么？ 4.提取DNA分子的方法是什么？
DNA含量相对较高的组织，成功的可能性更大。
材料：新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）
人教版高中生物选修一5.1《DNA的粗提取与鉴定》ppt课件
1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的 DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水 胀破。 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同， 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解 蛋白质，使提取出的DNA纯度较高 4、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水 解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易 于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔 韧性，减少断裂； 5、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细 胞膜，同时也能使蛋白质变性； 6、在60—75度条件下加温处理，蛋白质变性，而 DNA结构不会受到破坏，提取纯度较高的DNA 7、甲基绿能使DNA染成绿色
DNA的鉴定
总结：
实验原理
DNA
的
粗
提
DNA粗提取
取
与
鉴
定
鉴定DNA
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应
选择适宜材料
破碎细胞
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
D． 有利于搅拌
3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗
涤剂和食盐，加入食盐的目的是
A. 利于DNA的溶解
B. 分离DNA和蛋白质
C. 溶解细胞膜
D. 溶解蛋白质
4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加
入蒸馏水的目的是
A．有利于溶解DNA的方案：
方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸 馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放 到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl 溶解液 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白 酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温 10~15分钟→过滤获得DNA滤液
实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件
DNA鉴定
琼脂糖凝胶电泳
将提取的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳，观察电泳结果， 判断DNA的纯度和浓度。
紫外吸收法
利用紫外分光光度计测量 DNA溶液在260nm处的吸 光度值，计算DNA的浓度 和纯度。
荧光染料染色法
利用荧光染料染色DNA， 通过荧光分光光度计测量 DNA的荧光强度，判断 DNA的纯度和浓度。
细胞内的DNA。
DNA提取
离心
将匀浆后的样品进行离心，使细胞碎片和 杂质沉淀到底部，上清液中含有DNA。
洗涤
用洗涤液清洗吸附柱，去除未被吸附的杂 质。
吸附
将上清液加入到吸附柱上，DNA被吸附在 吸附柱的硅基质膜上，而蛋白质和其他杂 质被排除。
洗脱
用洗脱液将DNA从吸附柱上洗脱下来，收 集洗脱液中的DNA。
移液器
用于精确移取和量 取实验试剂。
电脑和PPT软件
用于制作和展示实 验课件。
03
实验步骤
样品处理
样品收集
选择新鲜的动物组织样品，确保 无菌条件下收集，避免样品受到
污染。
样品处理
将收集的动物组织切成小块，用 生理盐水或磷酸盐缓冲液冲洗，
去除表面的污物和血液。
样品匀浆
将处理过的组织块放入匀浆器中， 加入适量的匀浆介质（如石英砂、 玻璃珠等），破碎细胞，释放出
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的 分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项
在紫外分光光度计检测过程中，需要注意消除样品中蛋白质、酚类等物质的干扰，以确保 纯度分析的准确性。同时，对于不同来源和性质的DNA样品，可能需要采用不同的纯度 分析方法。
专题DNA的粗提取与鉴定ppt
优劣分析
各种方法均有优缺点，应根据实际 情况选择合适的方法，或结合多种 方法提高鉴定准确性。
04
DNA粗提取实验结果分析与解读
实验结果展示
DNA粗提取结果
通过在显微镜下观察，可以看到细胞中的DNA呈现为细长的丝状，有时甚至可以看到 DNA的螺旋结构。
电泳结果
通过电泳技术，可以看到DNA在凝胶中的迁移情况。纯DNA应该呈现一条明亮的带状， 而杂质则会影响带状的形成。
紫外光谱分析
通过紫外光谱分析，可以确定DNA的纯度和浓度。纯DNA应该在260nm和280nm处有强 烈的吸收峰。
结果差异分析
01
DNA纯度差异
不同样品间的DNA纯度存在差异。有些样品的DNA纯度较高，而有
些则较低。这可能与样品的来源、提取方法等因素有关。
02 03
DNA浓度差异
不同样品间的DNA浓度也存在差异。有些样品的DNA浓度较高，而 有些则较低。这可能与样品中细胞的数目、细胞中DNA的含量等因素 有关。
。通过OD260/OD280 的比值来判断DNA的纯 度。
3. 将DNA溶液进行凝胶 电泳检测，观察DNA条 带的亮度、完整度和分 子量大小来判断DNA的 质量。
03
DNA粗提取中的关键步骤及注意事 项
细胞破碎方法的选择与优化
物理破碎
使用研磨杵、珠磨机、匀浆器等方 法破碎细胞。
化学破碎
使用溶菌酶、EDTA、SDS、Triton X-100等化学物质溶解细胞壁。
THANKS
谢谢您的观看
DNA粗提取涉及从生物样品中分离出细胞，破碎细胞并释放 出其中的DNA，接着通过一系列的洗涤和沉淀步骤将DNA分 子纯化出来。
DNA粗提取的重要性
DNA提取PPT课件
.
37
引物设计的原则（二）
④避免引物内部出现二级结构
– 避免两条引物间互补， 特别是 3’端的互补，否则会形成引物二聚体， 产生非特异性的扩增条带。
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100 Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入P.CR，使利用热变性解链DNA模板可30行。
(%)
PCR反应循环
94℃
变性
55℃
退火
PCR循环
.
72℃
延伸
31
引物
5’
3’
3’
5’
变性、退火
延伸
变性、退火
延伸
PCR的指数. 扩增（2n）
32
.
33
G+C含量以40-60%为宜。引物退火温度计算：Tm=2（A+T）+4（C+G）。 Tm在55-65 ℃最好。
– G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。
– ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
– 引物的解链温度：两个引物之间的 Tm 值差异最好在 5℃之内。
.
5
（二）提DNA
酚抽提法： ① 加RNase，37℃1 h， ② 加蛋白酶K，50 ℃ ，3 h ； 或 37 ℃ 12 h , 不时mix
③ 加等体积酚，充分mix，9000rpm，3min，小心吸取上层粘稠水相。 ④ 加等体积酚，充分mix，9000rpm， 3min，小心吸取上层粘稠水相。 ⑤ 氯仿-异戊醇(24:1)抽提1次。9000rpm ，3min，小心吸取上层粘稠水
的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能 和多糖结合，有效去除多糖。
肌肉组织中DNA的提取
实验原理
动物的肌肉、心脏、肝、肾、脾等器官组织都是 DNA的良好来源,其中肝脏的DNA虽然产量最大,但肝脏中 丰富的基因组DNA酶对提取的DNA降解比较严重,相对来 说，肌肉组织则由于具有相对少量的DNA酶而使得提取的 DNA质量较好,尤其是新鲜组织的DNA产量高,质量好 。 肌肉DNA的提取一般有两种方法：SDS法和异硫氰酸 胍法，但我们一般采用前一种，即SDS法。 DNA是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细 胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可 使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽 提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降 解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
DNA的提取(34张)ppt课件
柠檬酸钠溶液
①
提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水
②
2. 溶解细胞核内的 DNA
2 m1／L的 NaCI溶液40 mL
③
3. 析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
④
4. 滤取含DNA物再溶解 2 mol／L的 NaCl溶液 20 mL
⑥
6. 过滤含DNA的 NaCl溶液
ppt课件完整
25
5．在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl
溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ C ）
A．有利于溶解DNA B．有利于溶解杂质 C．减少DNA的溶解度 D．减少杂质的溶解度
ppt课件完整
26
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方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度 为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl 溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。
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9
方案二：直接在滤液中加入嫩肉 粉，反应10-15min，嫩肉粉中木 瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
DNA
DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同
DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同
的
DNA与二苯胺呈现蓝色反应
粗
提
DNA粗提取
选择适宜材料
破碎细胞
取
与
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
鉴
定
鉴定DNA
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
ppt课件完整
21
1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加
入蒸馏水的作用是( B )。
肌肉组织中DNA的提取
目的
随着生物技术的不断发展，肌肉组织中DNA的提取技术也在不断改进和完善。传统的DNA提取方法通常使用化学试剂和离心机等设备，但这些方法可能会对DNA造成损伤或丢失。因此，开发更加高效、稳定和可靠的DNA提取方法对于生物医学研究具有重要意义。
背景
目的和背景
肌肉组织中DNA的提取是科学研究的重要基础。通过对肌肉组织中DNA的分析，科学家可以深入了解基因与疾病之间的关系，探索疾病的发病机制，为疾病的预防、诊断和治疗提供科学依据。
检测方法
影响DNA完整性的因素包括肌肉组织的保存状况、DNA的降解程度、提取过程中使用的试剂和操作方法等。
影响因素
完整性检测
04
结果分析
结果分析
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随着生物技术的不断发展，肌肉组织中DNA的提取技术也在不断改进和完善。传统的DNA提取方法通常使用化学试剂和离心机等设备，但这些方法可能会对DNA造成损伤或丢失。因此，开发更加高效、稳定和可靠的DNA提取方法对于生物医学研究具有重要意义。
背景
目的和背景
肌肉组织中DNA的提取是科学研究的重要基础。通过对肌肉组织中DNA的分析，科学家可以深入了解基因与疾病之间的关系，探索疾病的发病机制，为疾病的预防、诊断和治疗提供科学依据。
检测方法
影响DNA完整性的因素包括肌肉组织的保存状况、DNA的降解程度、提取过程中使用的试剂和操作方法等。
影响因素
完整性检测
04
结果分析
结果分析
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DNA的提取与鉴定ppt课件
琼脂糖浓度(％) 线型DNA分子的分离范围(kb)
0.3
5～60
0.6
1～20
0.7
0.8～10
0.9
0.5～7
1.2
0.9～6
1.5
0.2～3
12.0
0.1～. 2
.
琼脂糖凝胶电泳有许多优点：
操作简单，电泳速度快，分离核酸范围广； 电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好； 电泳后区带易染色，便于定量测定； 可用于核酸的纯化和分离（电洗脱法）； 可制成干膜可长期保存。
经离心后溶液分为三层：上层是核酸溶液、 中间不溶物为变性蛋白质，下层是苯酚氯 仿溶液。
核酸溶液 蛋白质 苯酚氯仿
.
3.沉淀DNA
有机溶剂沉淀DNA：2倍体积无水乙醇（或1倍体积的异戊醇） 再用75%乙醇清洗多次。
4.重新溶解DNA
将DNA溶于水或TE溶液。
.
DNA提取的一般流程
.
二、核酸的鉴定
.
电泳
根据电泳支持介质分为
琼脂糖凝胶电泳： 多用于鉴定较大核酸片段（0.1~60 kb）
聚丙烯酰胺凝胶电泳： 用于鉴定较小的核酸片段（50~1000 bp）
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖是从琼脂中提纯出来的一种多糖。凝胶具有刚性的滤孔，凝胶孔径的 大小决定于琼脂糖的浓度，低浓度的琼脂糖形成较大的孔径，而高浓度的琼 脂糖形成较小的孔径。
（3）培养细胞： 离心，弃细胞培养液； 用缓冲液多次漂洗；
.
3、微生物培养物样品
离心获取菌体细胞， 加缓冲液洗涤， 加缓冲液悬浮菌体细胞。
4、微生物混合样品
用缓冲液悬浮菌体，低速离心，沉淀杂质。 高速离心获取菌体细胞。 用缓冲液洗涤菌体细胞。 加缓冲液悬浮菌体细胞。
动物组织DNA提取最终ppt课件
实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分 沉淀不完全
③
对 策
④ ⑤ ⑥
④
洗涤时DNA丢失
LOGO
二、实验方法及一般步骤
2）破碎抽提核酸除去杂质
首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与其它 成分分离 使核酸与蛋白质分离 除去脂类 多糖的除去
二、实验方法及一般步骤
3）核酸的纯化
根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染, 并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机溶剂等） 杂质，最后得到均一的核酸样品。
二、实验方法及一般步骤
核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用： 1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造 成蛋白污染。
2.使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。
3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
二、实验方法及一般步骤
核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase：降解RNA 蛋白酶K：降解蛋白质 溶菌酶：破碎细胞
二、实验方法及一般步骤
4）核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
用紫外分光光度计检测DNA浓度与纯度
增加70％乙醇洗涤 的次数（2-3次）
③
③
五、 DNA提取常见 问题
问题二：DNA降解
原 因
① ②
①
③
④ ⑤
材料不新鲜或反复冻 融 未很好抑制内源核酸 酶的活性 提取过程操作过于剧 烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 DNA样品反复冻融
DNA的提取与鉴定讲解ppt课件
4D不 溶、N解同AD，，和NA而利蛋的当m大D一液在m随逐时ND使用N白o中，氯Na原o溶N，N渐lAC杂这lA／溶浓化质/aa理l的D降L的溶解CC质L解度钠一时N等，ll溶时低溶液溶溶A或为性的沉特，可其解，；解浓溶液液析物淀D以点0D度他在度度解浓浓出质．NN，使最，0又继成度度度A的1A.或D14的低续逐选的最的低量分4N者m。溶增渐溶小浓增于择A在mo相利 在加度增解解；加0ol适不／.l1为用 盐度时大反当而度/4当LL同时最这 溶， 。2的浓，盐度浓的度Na就C能l溶使液D中N溶A解充度分
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩。
对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。
3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水 浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。
三、实验小结
1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”
2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”
四、实验原理拓展介绍。
1.DNA的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释 放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以 大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌 的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释 放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放 的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。 在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解， 析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。 因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解 度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA 的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶 液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。
DNA提取教学课件ppt
疾病诊断和治疗
提取病变组织的DNA可以进行疾病诊断和治疗 ，如癌症、遗传性疾病等的诊断和治疗方案的 制定。
分子生物学研究
DNA提取是分子生物学研究的基础，通过提取 DNA可以开展基因克隆、基因测序、分子标记 等研究工作。
dna提取的基本原理
细胞裂解
通过物理、化学或酶学方法将 细胞裂解，使细胞膜和细胞壁
提取DNA可以用于基因克隆、基因测序、分子标记等研究工
作，有助于深入探究生物学的奥秘。
亲子鉴定、犯罪鉴定
03
通过提取DNA可以进行亲子鉴定和犯罪鉴定，为司法鉴定提
供重要依据。
dna提取的发展历程
19世纪末期
DNA的发现和初步研究阶段，人们开始认识到DNA在遗传和细胞分裂中的重要性。
20世纪50年代至80年代
DNA提取是PCR技术的前提和基础，PCR技术需要以提取得到的DNA为模板 ，通过特定的引物进行扩增。
DNA提取与基因测序技术的关系
DNA提取是基因测序技术的重要步骤，只有经过有效的DNA提取，才能保证 测序结果的准确性。
dna提取技术的未来发展趋势
自动化和高通量
随着生物技术的发展，未来DNA提取技术将朝着自动化和高通量的方向发展，提 高提取效率和质量的同时，降低实验操作成本。
破裂，释放出其中的DNA。
沉淀与纯化
通过加入沉淀剂和纯化剂将DNA 从裂解液中沉淀出来，去除其中 的蛋白质、脂肪、糖类等杂质。
干燥和保存
将纯化后的DNA干燥并保存，以 便后续的分析和应用。
dna提取的应用
疾病诊断和治疗
01
通过提取病变组织的DNA，可以用于疾病诊断和治疗方案的
制定。
分子生物学研究
02
提取病变组织的DNA可以进行疾病诊断和治疗 ，如癌症、遗传性疾病等的诊断和治疗方案的 制定。
分子生物学研究
DNA提取是分子生物学研究的基础，通过提取 DNA可以开展基因克隆、基因测序、分子标记 等研究工作。
dna提取的基本原理
细胞裂解
通过物理、化学或酶学方法将 细胞裂解，使细胞膜和细胞壁
提取DNA可以用于基因克隆、基因测序、分子标记等研究工
作，有助于深入探究生物学的奥秘。
亲子鉴定、犯罪鉴定
03
通过提取DNA可以进行亲子鉴定和犯罪鉴定，为司法鉴定提
供重要依据。
dna提取的发展历程
19世纪末期
DNA的发现和初步研究阶段，人们开始认识到DNA在遗传和细胞分裂中的重要性。
20世纪50年代至80年代
DNA提取是PCR技术的前提和基础，PCR技术需要以提取得到的DNA为模板 ，通过特定的引物进行扩增。
DNA提取与基因测序技术的关系
DNA提取是基因测序技术的重要步骤，只有经过有效的DNA提取，才能保证 测序结果的准确性。
dna提取技术的未来发展趋势
自动化和高通量
随着生物技术的发展，未来DNA提取技术将朝着自动化和高通量的方向发展，提 高提取效率和质量的同时，降低实验操作成本。
破裂，释放出其中的DNA。
沉淀与纯化
通过加入沉淀剂和纯化剂将DNA 从裂解液中沉淀出来，去除其中 的蛋白质、脂肪、糖类等杂质。
干燥和保存
将纯化后的DNA干燥并保存，以 便后续的分析和应用。
dna提取的应用
疾病诊断和治疗
01
通过提取病变组织的DNA，可以用于疾病诊断和治疗方案的
制定。
分子生物学研究
02
DNA的粗提取 PPT
实验 DNA的粗提取
1．实验原理 (1)DNA提取的原理：DNA在NaCl溶液中的溶 解度，随着NaCl浓度的变化而改变。DNA在物 质的量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度 最低，利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液 中的DNA析出。
【实验链接】鸡血细胞中的DNA主要位于鸡血 细胞核中，通常先向鸡血细胞液中加入蒸馏水， 并搅拌，使细胞膜和核膜涨破，将DNA释放出 来，然后用较高浓度的NaCl溶液溶解，再加入 蒸馏水降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出。 (2)DNA纯化的原理：DNA不溶于酒精，而细 胞中某些物质可溶于酒精，从而可提取出含杂 质较少的DNA。
2．做“DNA的粗提取”实验时，选用鸡血而 不用猪血的原因是( ) A．鸡血的价格比猪血的价格低 B．猪的成熟红细胞没有细胞核，不易提取到 DNA C．鸡血不凝固，猪血会凝固 D．用鸡血比用猪血提取操作简便
解析：选B。DNA主要存在于细胞核中，而哺 乳动物成熟的红细胞中无细胞核，因此用猪血 做实验不能提取到DNA。实验中一般用鸡血， 这是因为鸡属于鸟类，血液中的红细胞数量多， 并且红细胞中有细胞核，可以提取到较多的 DNA。
3．在DNA的粗提取实验过程中，有两次DNA 沉淀析出，其依据的原理是( ) ①DNA在物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶 液中溶解度最低 ②DNA在冷却的体积分数为 95%的酒精中有沉淀析出 A．两次都是① B．两次都是② C．第一次是①，第二次是② D．第一次是②，第二次是①
解析：选C。第一次析出DNA是利用DNA在 0.14 mol/L 的NaCl溶液中溶解度最低，第二次 是为了获得较纯净的DNA，利用的是DNA在冷 却的体积分数为95%的酒精中能沉淀析出。
_________________________________________ _______________________________。 (3)取沉淀物，置于2 mL 2 mol/L NaCl溶液中， 使DNA溶解，再加2 mL的苯酚充分振荡后静置， 待其分层后弃其上层苯酚。该步骤的目的是除 去_______________________________。
1．实验原理 (1)DNA提取的原理：DNA在NaCl溶液中的溶 解度，随着NaCl浓度的变化而改变。DNA在物 质的量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度 最低，利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液 中的DNA析出。
【实验链接】鸡血细胞中的DNA主要位于鸡血 细胞核中，通常先向鸡血细胞液中加入蒸馏水， 并搅拌，使细胞膜和核膜涨破，将DNA释放出 来，然后用较高浓度的NaCl溶液溶解，再加入 蒸馏水降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出。 (2)DNA纯化的原理：DNA不溶于酒精，而细 胞中某些物质可溶于酒精，从而可提取出含杂 质较少的DNA。
2．做“DNA的粗提取”实验时，选用鸡血而 不用猪血的原因是( ) A．鸡血的价格比猪血的价格低 B．猪的成熟红细胞没有细胞核，不易提取到 DNA C．鸡血不凝固，猪血会凝固 D．用鸡血比用猪血提取操作简便
解析：选B。DNA主要存在于细胞核中，而哺 乳动物成熟的红细胞中无细胞核，因此用猪血 做实验不能提取到DNA。实验中一般用鸡血， 这是因为鸡属于鸟类，血液中的红细胞数量多， 并且红细胞中有细胞核，可以提取到较多的 DNA。
3．在DNA的粗提取实验过程中，有两次DNA 沉淀析出，其依据的原理是( ) ①DNA在物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶 液中溶解度最低 ②DNA在冷却的体积分数为 95%的酒精中有沉淀析出 A．两次都是① B．两次都是② C．第一次是①，第二次是② D．第一次是②，第二次是①
解析：选C。第一次析出DNA是利用DNA在 0.14 mol/L 的NaCl溶液中溶解度最低，第二次 是为了获得较纯净的DNA，利用的是DNA在冷 却的体积分数为95%的酒精中能沉淀析出。
_________________________________________ _______________________________。 (3)取沉淀物，置于2 mL 2 mol/L NaCl溶液中， 使DNA溶解，再加2 mL的苯酚充分振荡后静置， 待其分层后弃其上层苯酚。该步骤的目的是除 去_______________________________。
组织DNA的提取与纯化PPT学习教案
第19页/共26页
检 测 DNA浓 度 、 纯 度
取完全溶解后的DNA原液进行1:100稀释 ， 即1μ紫l原外液分+光9光9μ度l水计，检混测匀：。
A260 = ? A280 = ?
第20页/共26页
DNA纯度鉴定
酚、蛋白质污染
A260 / A280 ＜ 1.6 ≈ 1.8 ＞ 2.0
视为纯度 较高的 DNA
第18页/共26页
记 录 上 清 液 体积， 吸取上 清液至 玻璃管 ，加入 5mol/LNaCl,并 稀 释 至0.3mol/L,再 加 入2.5倍 体积 冰无水 乙醇， 缓慢摇 匀，出 现絮状 沉淀
5mol/L×VNaCl=0.3mol/L×(V上清液+VNaCl) VNaCl= （3×V上清液 ） / 47
组织DNA的提取与纯化
会计学
1
一、概述
DNA在生物组织中以核蛋白 的形式存在于细胞核中。
单倍体人类DNA平均相对分 子量为6×1010 道尔顿，相当 于1.3×105kb。
第1页/共26页
DNA的分类有：
真核DNA 病毒DNA 细菌DNA 质粒DNA
第2页/共26页
DNA样品的来源 ：
• 组织 – 肝脏、赘生物、肌肉、培养细胞 • 血液 • 细菌 – 培养细菌、质粒
第3页/共26页
二、实验原则
➢ 保证DNA一级结构的完整 性
➢ 排出其他干扰性分子的污 染
第4页/共26页
干扰分子
对酶有抑制作用的物质
有机溶剂、高浓度的金属离子等
样品中存在的其他生物大分子
蛋白质、多糖和脂类 应尽量将此类物质的浓度降低到最小程度
相应抽提对象之外的核酸污染
DNA抽提时，应避免RNA干扰
检 测 DNA浓 度 、 纯 度
取完全溶解后的DNA原液进行1:100稀释 ， 即1μ紫l原外液分+光9光9μ度l水计，检混测匀：。
A260 = ? A280 = ?
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DNA纯度鉴定
酚、蛋白质污染
A260 / A280 ＜ 1.6 ≈ 1.8 ＞ 2.0
视为纯度 较高的 DNA
第18页/共26页
记 录 上 清 液 体积， 吸取上 清液至 玻璃管 ，加入 5mol/LNaCl,并 稀 释 至0.3mol/L,再 加 入2.5倍 体积 冰无水 乙醇， 缓慢摇 匀，出 现絮状 沉淀
5mol/L×VNaCl=0.3mol/L×(V上清液+VNaCl) VNaCl= （3×V上清液 ） / 47
组织DNA的提取与纯化
会计学
1
一、概述
DNA在生物组织中以核蛋白 的形式存在于细胞核中。
单倍体人类DNA平均相对分 子量为6×1010 道尔顿，相当 于1.3×105kb。
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DNA的分类有：
真核DNA 病毒DNA 细菌DNA 质粒DNA
第2页/共26页
DNA样品的来源 ：
• 组织 – 肝脏、赘生物、肌肉、培养细胞 • 血液 • 细菌 – 培养细菌、质粒
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二、实验原则
➢ 保证DNA一级结构的完整 性
➢ 排出其他干扰性分子的污 染
第4页/共26页
干扰分子
对酶有抑制作用的物质
有机溶剂、高浓度的金属离子等
样品中存在的其他生物大分子
蛋白质、多糖和脂类 应尽量将此类物质的浓度降低到最小程度
相应抽提对象之外的核酸污染
DNA抽提时，应避免RNA干扰
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动物的肌肉、心脏、肝、肾、脾等器官组织都是 DNA的良好来源,其中肝脏的DNA虽然产量最大,但肝脏中 丰富的基因组DNA酶对提取的DNA降解比较严重,相对来 说，肌肉组织则由于具有相对少量的DNA酶而使得提取的 DNA质量较好,尤其是新鲜组织的DNA产量高,质量好 。 肌肉DNA的提取一般有两种方法：SDS法和异硫氰酸 胍法，但我们一般采用前一种，即SDS法。 DNA是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细 胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可 使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽 提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降 解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
实验步骤
• 1. 取新鲜或冰冻动物肌肉组织块0.1g，用冷生理盐水洗3 次，置于培养皿中剪碎（动作要快），将碎肌肉组织转入 玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液， 匀浆至不见组织块 （低温操作） • 2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防 止未碎的组织进入离心管）， 5000rpm离心2min； • 3、弃上清，沉淀加0.25 mL灭菌水，用微量移液器吸嘴 吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细 胞裂解缓冲液，盖上 离心管盖子，颠倒混匀； • 4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水 浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心 管数次；
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
注意事项
• 1．动物肌肉应新鲜，处理应迅速，细胞破碎应完 全。 • 2．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA 的损伤。 • 3．取上层清液时，注意不要使其浑浊吸起中间的蛋 白质层。
• 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。
• 5. 在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散， 以减少DNA团块形成。
肌肉组织中DNA的提取
主讲内容
1 .实验目的 2 .实验原理 3 .实验器材与试剂 4 .实验步骤 5 .注意事项
实验目的
• 1. 学习并掌握动物组织中DNA的提取方法 及其原理 • 2. 熟悉肌肉中提取DNA的基本操作以及使 用各个器材的基本方法。
• 3. 了解现今从组织中提取DNA的方法
实验原理
•
8、 用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管 中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇， 盖上离心管盖子， 缓慢颠倒混匀， 冰浴30 min后10000 rpm离心5min；
实验步骤
• 9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口 的残余液滴除掉； • 10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心 1min； • 11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口 的液滴，短暂离心，用吸嘴将附 于管壁的残余液滴除掉， 室温干燥； • 12、加100μL TE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃ 或-20℃保存备用。
实验步骤
• 1. 取新鲜或冰冻动物肌肉组织块0.1g，用冷生理盐水洗3 次，置于培养皿中剪碎（动作要快），将碎肌肉组织转入 玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液， 匀浆至不见组织块 （低温操作） • 2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防 止未碎的组织进入离心管）， 5000rpm离心2min； • 3、弃上清，沉淀加0.25 mL灭菌水，用微量移液器吸嘴 吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细 胞裂解缓冲液，盖上 离心管盖子，颠倒混匀； • 4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水 浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心 管数次；
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
注意事项
• 1．动物肌肉应新鲜，处理应迅速，细胞破碎应完 全。 • 2．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA 的损伤。 • 3．取上层清液时，注意不要使其浑浊吸起中间的蛋 白质层。
• 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。
• 5. 在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散， 以减少DNA团块形成。
肌肉组织中DNA的提取
主讲内容
1 .实验目的 2 .实验原理 3 .实验器材与试剂 4 .实验步骤 5 .注意事项
实验目的
• 1. 学习并掌握动物组织中DNA的提取方法 及其原理 • 2. 熟悉肌肉中提取DNA的基本操作以及使 用各个器材的基本方法。
• 3. 了解现今从组织中提取DNA的方法
实验原理
•
8、 用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管 中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇， 盖上离心管盖子， 缓慢颠倒混匀， 冰浴30 min后10000 rpm离心5min；
实验步骤
• 9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口 的残余液滴除掉； • 10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心 1min； • 11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口 的液滴，短暂离心，用吸嘴将附 于管壁的残余液滴除掉， 室温干燥； • 12、加100μL TE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃ 或-20℃保存备用。