实验4 动物组织中DNA的提取
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。
核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95%乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10%NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。
先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。
有机碱和戊糖。
此三类化合物可用下列方法鉴定之。
1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。
还原成兰色的钼兰。
常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。
H3PO4＋12H2Mo04→H3PO4·12Mo03+12H20H3P04·12Mo03
H3P04·6Mo03·3Mo205
2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖:
(⑴)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。
(2)脱氧核糖:在强酸中加热，可生成o一羟基y一酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。
提取动物dna 实验报告
提取动物dna 实验报告
提取动物DNA实验报告
在生物科技领域，提取动物DNA是一项重要的实验技术，它不仅可以帮助科学家们研究动物的遗传信息，还可以为动物保护、医学研究等领域提供重要的数
据支持。
本文将介绍一项提取动物DNA的实验报告，以展示这一技术的重要性和应用价值。
实验目的：通过提取动物DNA，分析动物的遗传信息，为相关研究提供数据支持。
实验材料：实验所需的材料包括动物组织样本（如血液、组织等）、DNA提取
试剂盒、离心机、PCR仪等。
实验步骤：
1. 收集动物组织样本，如血液、皮肤组织等。
2. 将样本放入离心管中，使用离心机离心，分离出细胞。
3. 使用DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行DNA提取。
4. 将提取得到的DNA样本进行质量检测，确保提取的DNA质量符合实验要求。
5. 使用PCR技术对提取的DNA进行扩增，以获得更多的DNA样本。
实验结果：通过实验，成功提取了动物DNA样本，并进行了质量检测和PCR
扩增。
最终获得了足够的DNA样本，可以用于后续的遗传分析、基因测序等研究工作。
实验结论：提取动物DNA是一项重要的实验技术，它为科学家们研究动物的遗传信息提供了重要的数据支持。
通过这一技术，我们可以更深入地了解动物的
遗传特征，为动物保护、医学研究等领域提供有力的支持。
总结：提取动物DNA的实验技术在生物科技领域具有重要的应用价值，它为动物遗传信息的研究提供了重要的数据支持，为相关领域的科学研究和应用提供了有力的支持。
希望通过这一技术的不断发展和完善，能够更好地为动物保护和医学研究等领域提供更多的数据支持和科学依据。
动物基因组DNA的提取
动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。
[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。
动物dna的提取实验报告
动物dna的提取实验报告
动物DNA的提取实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取动物组织中的DNA，探究动物个体的遗传信息，并为后续的分子生物学研究打下基础。
实验材料与方法：
1. 实验材料：动物组织样本（如鸡肉、鱼肉等）、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、异丙醇、乙醇、盐酸、磷酸盐缓冲液等。
2. 实验步骤：
（1）取动物组织样本，将其放入离心管中；
（2）加入细胞裂解液和蛋白酶K，使细胞膜破裂，使DNA释放；
（3）加入异丙醇，使DNA与蛋白质分离；
（4）加入氯仿，使DNA与异丙醇分离；
（5）加入乙醇，沉淀出DNA；
（6）用盐酸和乙醇洗涤DNA，最后用磷酸盐缓冲液溶解DNA。
实验结果：
通过上述步骤，成功从动物组织样本中提取出了DNA。
在紫外光下，DNA呈现出明显的条带状，证明提取的DNA质量较高。
实验结论：
本实验成功提取了动物组织中的DNA，为后续的分子生物学研究提供了可靠的基础。
通过对提取的DNA进行进一步分析，可以了解动物个体的遗传信息，为动物遗传育种、种群遗传结构等研究提供重要的数据支持。
同时，提取DNA的
方法简单、快速、高效，具有较高的实用价值。
在未来的研究中，我们将进一步利用提取的DNA，开展相关的分子生物学实验，探究动物遗传信息的更多奥秘，为生物多样性保护和遗传资源利用提供更多的
科学依据。
动物组织基因组DNA提取
动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。
冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。
7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。
11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。
12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
动物组织DNA提取
动物组织DNA提取方案1：1.液氮研磨组织2.加入10ml分离缓冲液3.加1ml10%SDS混匀4.加50ul 或1mg蛋白酶K，37℃保温1-2h.5.加1ml 的5mol/l NaCl ,混匀5000r/min ×10s6.取上清液于新离心管中，加等体积苯酚/氯仿/异戊醇抽提，待分层，12000r/min ×5min7.去上层水相于干净离心管，加2体积乙醚抽提8.移去上层乙醚，保留下层水相9.（加5ul 10mg/ml Rnasea ,37℃保温30min,用苯酚抽提）10.加1/10体积3mol/lNaAc(pH 5.2)，及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。
室温静止10-20min,DNA沉淀形成白色絮状物11.用玻璃棒勾出DNA，70%乙醇中漂洗，吸干。
12.溶解于1ml TE中，储存于4℃冰箱。
方案2：1．液氮研磨组织2．加入10ml分离缓冲液3．加1ml10%SDS混匀4．加50ul 或1mg蛋白酶K，55℃保温2h.5．加等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，混匀5min,待分层，12000r/min ×5min 6．取上层水相于干净离心管，加2体积无水乙醇—20℃放置2h或液氮放置5min 7．12000rmp ×5min 沉淀DNA，倾去上清液8．沉淀中加入75%乙醇500ul 轻轻混匀，12000r/min ×5min，倾去上清液，晾干。
9．在沉淀中加入200ulTE缓冲液，—20℃保存。
储液：1ml/L NaCl For 100ml 5.844g10×TE Buffer(for 100ml)1M Tris-HCl pH8.0 Tris-HCl 12.114g1M EDTA pH=8.0 EDTA 29.214g分离缓冲液：for100ml10mml/LTris-HCl(pH7.4) 1M Tris-HCl pH7.4 1ml10mml/L NaCl 1ml/L NaCl 1ml25mml/L EDTA 1M EDTA pH=8.0 2.5ml2×抽提缓冲液for100ml6mol/L NaCl 1ml/L NaCl 0.6ml100mmol/Tris-HCl(pH7.4) 1M Tris-HCl pH7.4 10ml40 mml/L EDTA(pH8.0) 1M Tris-HCl pH7.4 4ml1%SDS SDS 1g1×抽提缓冲液for100ml0.5%的2×抽提缓冲液2×抽提缓冲液0.5ml5mol/L尿素尿素30.025g10mml/L巯基乙醇巯基乙醇70ul5%苯酚苯酚5ml1×TE Buffer for 5ml组成浓度：10mM Tris-HCl pH8.0 1M Tris-HCl 50ul 1mM EDTA pH=8.0 1M EDTA PH=8.0 5ul至5ml。
动物肝脏中DNA得提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA得提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid得缩写),又称去氧核糖核酸,就是脱氧核糖核酸染色体得主要化学成分,同时也就是组成基因得材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因就是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA得一部分复制传递到子代中,从而完成性状得传播。
DNA就是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高得粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来得水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间得氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 得解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常得体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中得拟核内。
染色体上得染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其她蛋白质进行交互作用,进而调节基因得转录。
脱氧核糖核酸得结构DNA得结构: DNA得结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构与四级结构四个水平。
DNA就是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
实验四 肝脏DNA的提取
c) 苯酚抽提法 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降 解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联 结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯 酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。 离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇 沉淀DNA。 此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。
b) 细胞的破碎 机械法 物理法 化学破碎方法 酶学破碎方法
c) 细胞器的分离 在提取细胞线粒体和叶绿体DNA时，必须首先把 线粒体和叶绿体与其它细胞器分离出来，一般 采取在适当介质中的差速离心法分离。
d) DNA的提取 去除蛋白质：酚、氯仿 去除多糖、脂类：高盐 抑制DNase活性：去污剂，如SDS、CTAB DNA的沉淀：乙醇或异丙醇
脱氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid, DNA)
细胞核
遗传信息的携带者
核糖核酸 (ribonucleic Βιβλιοθήκη cid, RNA) 细胞质 细胞质
蛋白质的 生物合成， 表达调控
DNA的一般提取步骤： a) 生物材料的选择
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。由于DNA 分子量较小，提取时易保持其结构完整 性。 细菌及高等动植物中，DNA 分子量较大，易被机械张力剪断。
2.器材 匀浆器或研钵研杆 移液枪 离心机 天平 恒温水浴箱 玻璃棒 解剖剪及镊子 50ml离心管等
离心前请两两离心管配平，对称放置。
⑴旋转拇指按钮设置吸取溶液的 体积值，数字要完整地出现在显 示窗中； ⑵ 套上枪头，旋紧； ⑶ 垂直持握可调式移液器用大拇 指按至第一档； ⑷ 将枪头插入溶液，徐徐松开大 拇指，使其复原； ⑸ 将可调式移液器移出液面，必 要时可用纱布或滤纸拭去附于枪 头表面的液体 ( 注意 : 不要接触 枪头孔口 ) ； ⑹ 排放时，重新将大拇指按下， 至第 — 档后，继续按至第二档以 排空液体。 注意： 移取另一样品时，按卸尖 按钮弃掉吸头并更换新吸头。 旋转按钮设置体积时，绝对不能 超过每个移液器的最大值，扭过 头。
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc 实验目的：本实验旨在通过提取哺乳动物组织中的基因组DNA，以用于后续的PCR反应、基因测序、遗传变异研究等。
实验原理：哺乳动物基因组DNA提取的一般步骤为组织破碎、细胞膜破裂、蛋白质和RNA去除、DNA纯化、质量检测和保存。
下面介绍各个步骤的细节：1.组织破碎：将样本室温下用离心管剪碎，然后用离心机离心5min，上清液中的细胞保存备用。
2.细胞膜破裂：加入50-100μL裂解缓冲液（10 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，1% SDS），温和地在60℃下振荡消化30-60min，使细胞膜破裂。
为避免破坏DNA，需在缓冲液中添加RNase，以消化RNA。
整个过程中需注意避免搅拌过度或泡沫产生，以便保证DNA不被过度破坏。
3.蛋白质和RNA去除：加入蛋白质沉淀剂如氯化钾或盐酸盐，并冷藏至室温，使DNA 和蛋白质发生相互作用并形成凝胶。
离心15-20min使凝胶完整沉淀至管底。
注：蛋白质缓冲液中含氯化钾或盐酸盐，可使DNA的负电荷阴离子中和而凝聚起来。
此时，可以用琼脂糖凝胶电泳判断DNA的纯度和产量。
还可以用UV法检测DNA的浓度。
4.DNA纯化：将沉淀物用去离子水洗涤一次沉淀，使DNA更为纯洁。
用50%乙醇洗涤一次去除氯离子，离心以去除乙醇。
5.质量检测：用伊曼纹颅（EtBr）染料判断DNA纯度，光谱仪分析DNA浓度和质量。
6.保存：将DNA储存在-20℃的冰箱中，避免在各操作步骤中破坏DNA性状。
实验步骤：材料：1.全身组织2.标签离心管3.10 mM TrisHCl pH8.5，1 mM EDTA溶液5.RNase A（10 mg/ml）6.盐酸盐7.琼脂糖8.去离子水9.乙醇将实验室提供的全身组织（100mg）裹在湿润的巾纸中，然后将其研磨成粉末。
将粉末倒入银离子处理过的离心管中（1.5 mL），加入500μL的10 mM Tris HCl（pH 8.5）溶液中，轻轻振荡使样品完全混合，并置于4℃下保存备用。
生化实验4动物肝脏DNA的提取和鉴定
▪ 1、核酸的理化性质
▪ RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结 晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核 苷酸大都呈酸味。
▪ DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物， 一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸 性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或 弱碱性溶液中较稳定。
酸钠混合盐）
（2） 提取液（ SDS 2mMOL/L溶液） （3）氯仿：辛醇溶液 （4）无水乙醇（置冰箱中冷却） （5）H2SO4溶液 （6）二苯胺溶液溶液 （7）NAOH溶液 （8）AgNO3溶液 (9)钼酸胺－溶液 （10）Vc---氯化亚锡溶液
三．操作步骤
取鸡肝2.5克，用剪刀剪碎，置乳钵（或 匀浆器）中研磨5分钟，加匀浆液5ml，进一 步研碎，倾入离心管离心（3500r.p.m ╳10 ),弃上清（RNP部分），
实验五
动物肝脏DNA的提取和鉴定
(教材1A在细胞内多以核蛋白体形 式存在---DNP 、 RNP．
分离提取核酸时首先要破碎细胞去除蛋 白质和其他物资, 用0.14mol/L Nacl(含柠 檬酸钠)匀浆液溶解细胞中的RNA及其他物资, 离心，去上清,然后加入提取液（十二烷基硫 酸钠，SDS）溶液溶解DNA，然后加入氯仿 -辛醇，以去除其余核蛋白和杂蛋白．再离心 除去沉淀(杂蛋白)部分,收集上清部分(DNA).
▪ RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在 0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，
▪ 常用此法分离这两种核蛋白。
将提取得到的DNA放在滤纸上,将液体吸干,将 其置于试管内,加入3毫升硫酸进行酸水解，进而分 三份，分别对其脱氧核糖、嘌呤碱、及磷酸进行 鉴定。
动物组织基因组DNA的提取
二、实验原理
7、核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质 温度： ① 4℃ ——最佳最简单； ② -70℃——长期保存的良好温度； ③ -20℃ ； 保存介质： TE缓冲液（最常用） 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0 1mmol/L EDTA pH 8.0
三、实验试剂、仪器和耗材
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
提取
纯化
二、实验原理
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
① 微生物：溶酶菌、SDS裂解； ② 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法——蛋白酶、胰蛋白酶； 冰冻法 —— 反复冻融或液氮冻后 组织捣碎； ③ 动物：液氮处理后用匀浆器破碎； 以上原理
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和 高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对 核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更 有利，几个条件并用更好。 DNA ，抑制 Dnase 活力很容易，但防止机械拉 力张力更重要； RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但 抑制 Rnase 活力较难，故在 RNA 提取中设法抑制 Rnase更重要。
二、实验原理
4、核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质， 用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂， 去垢剂的作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； ② 溶解核糖体上面的蛋白，使其解聚，将核酸 释放出来； ③ 对Rnase和Dnase有一定的抑制作用； 如: SDS，脱氧胆酸钠，4-氨基水杨酸钠，萘-1， 5-二磺酸钠等
动物组织DNA的提取与鉴定
*鉴定：
1、安装电泳槽 将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的 开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。 2、琼脂糖凝胶的制备 称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂 糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的 DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶） 置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸 腾），取出摇匀。 3、灌胶 将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上 4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然 后拔出梳子。
三、实验仪器及试剂
• 1. 仪器： 恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度 计、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭 菌）、吸头（灭菌）、 电泳仪，电泳槽、 紫外透射反射仪、微波炉、微量进样器
2. 试剂： （1）细胞裂解缓冲液： Tris (pH8.0) 100 mmol/L EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L NaCL 20 mmol/L SDS 10% 胰RNA酶 20ug/ml （2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌 的双蒸水中，20℃备用。
冰无水乙醇
可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出， 无水乙醇使用前冰冻，可以减少DNA沉淀析 出过程释放热量DNA的损伤。
75%乙醇：
洗涤DNA的作用，主要去盐和有机杂质。
四、实验步骤
*提取：
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽 量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞 裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离 心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混 匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转 入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。 于台式离心机以12000 r/min离心5min，取上清 液入另一离心管中。 2.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝 状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重 新溶解。
DNA提取
实验1、从动物组织中提取基因组DNA（一）实验目的通过实验掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和基本方法。
(二) 实验原理在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K笑话细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动物基因组DNA，用此法得到的DNA长度为100-150kb，适用于噬菌体构建基因组文库和DNA 印迹分析。
（三）试剂、材料、仪器与器材1. 试剂与材料1)Tris–HCL 1mol/L PH8.0 50ml配制方法：40ml双蒸水，6.057g固体Tris放入烧杯中溶解，用浓盐酸调PH值到8.0，转移到50ml 容量瓶中，加入双蒸水定容，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。
2)生理盐水: 0.85%NaCL 100ml配制方法：在20ml双蒸水中溶解0.85g固体NaCL，加水定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。
3)EDTA 0.5mol/L PH8.0 50ml配制方法：将9.08g的EDTA·Na2·2H2O溶解于40ml双蒸水，用1g的NaOH颗粒（慢慢逐步加入）调PH值到8.0，用50ml容量瓶定容，如果EDTA难溶，先加NaOH溶解，然后逐步加EDTA·Na2·2H2O。
4)TES缓冲液（释放DNA） 100ml配制方法：将0.5844g的5 mol/lNaCl溶解于80ml双蒸水，在分别加入1ml的0.5 mol/l EDTA、0.2ml的Tris-HCl (pH=8.0)，加定容至100ml, 摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。
5)10% SDS（变性剂破细胞壁）100ml配制方法：将10g的十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于80ml双蒸水于68℃加热溶解，用浓HCl调至PH=7.2，定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，4℃保存备用。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告实验报告：动物肝脏DNA的提取一、实验目的本实验旨在提取动物肝脏中的DNA，了解和掌握动物组织中DNA提取的基本原理和方法，通过实验操作培养实验技能和加深对生物化学知识的理解。
二、实验原理DNA提取主要是根据DNA和蛋白质的理化性质，利用酶解、吸附和解吸附等步骤将DNA从动物组织中分离出来。
动物肝脏中含有丰富的核苷酸，因此成为DNA提取的理想材料。
本实验将采用试剂盒法提取动物肝脏DNA。
三、实验步骤1.准备所需试剂和器材，包括动物肝脏组织、DEPC水、DNA提取试剂盒、离心管、移液器等。
2.将动物肝脏组织放入研钵中，加入适量DEPC水研磨成匀浆。
3.将研磨后的匀浆转入离心管中，加入适量DNA提取试剂盒中的裂解液，轻轻混匀。
4.将混合液放入离心机中，以12000rpm的转速离心10分钟，分离出上清液。
5.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的酚-氯仿混合液，轻轻混匀后离心10分钟，分离出上清液。
6.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，轻轻混匀后离心10分钟，分离出上清液。
7.将上清液转移至新的离心管中，加入适量DNA沉淀剂，轻轻混匀后静置10分钟，使DNA充分沉淀。
8.将混合液倒入离心管中，以12000rpm的转速离心10分钟，分离出DNA沉淀。
9.用DEPC水溶解DNA沉淀，保存于-20℃冰箱中备用。
四、实验结果与分析1.通过观察和记录实验过程，我们成功地从动物肝脏组织中提取出了DNA。
在实验过程中，我们使用了DEPC水来消除组织中的RNase酶活性，确保了提取的DNA不会被降解。
同时，利用试剂盒中的裂解液和酚-氯仿、氯仿-异戊醇混合液等试剂将蛋白质和其他杂质去除，使DNA得到有效纯化。
2.通过比较实验前后的组织样品和提取的DNA溶液，我们可以看到组织样品的颜色为红色，而提取的DNA溶液呈现出透明无色，说明提取的DNA具有较高的纯度。
此外，通过观察和记录实验结果，我们可以看到在离心管中明显看到DNA沉淀，说明提取的DNA具有较高的浓度。
实验四、 动物组织中DNA的制备
搅出DNA。
• 注意事项
1. 防止核糖核酸酶的水解作用。加入柠檬酸钠和 EDTA钠，既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性 而与核酸分离。
2. 避免剧烈震荡，或用过大的离心力，以防DNA断 裂。。
3. 取材时以DNA含量丰富的组织部位为主，如动物
出肝脏，浸入预冷后的0.15mol/L NaCl-0.015 柠檬酸钠溶液中，除去脂肪等杂物。。
2、取5g肝组织，在试剂0.15mol/L NaCl-0.015 柠檬酸钠 中洗涤后，剪 碎，置50ml离心管中， 加0.15mol/L NaCl-0.015柠檬酸钠 10mL；匀 浆（10000r/min，5秒）。
的肝脏、脾脏、肾脏等。
• 思考题
1.如何才能获得尽可能完整的动物组织DNA？
2. 在DNA的提取过程中防止脱氧核糖核酸酶的水解 作用，应采取哪些措施？
பைடு நூலகம்
实验四 动物组织中染色体DNA的制备
一、目的：
1.掌握动物组织中染色体DNA的制备的原理和方法。 2.熟悉动物组织中染色体DNA制备过程中注意事项。
二、原理 :
调整NaCl浓度使DNA和RNA分离。 通过SDS使蛋白质变性析出 氯仿除去变性蛋白质和脂类。 最后用乙醇将DNA析出。
三、试剂与仪器
（1）0.15mol/LNaCL — 0.015mol/L，pH7.0柠檬 酸钠溶液。
（2）0.15mol/LNaCL — 0.1mol/L，EDTANa2溶 液。
（3）5%（w/v）十二烷基硫酸钠（SDS）溶液。 （4）氯仿—异戊醇溶液。 （5）95%乙醇 （6）组织捣碎机。 （7）冷冻离心机
三、操作（注意事项；请认真阅读130页内容） 1、实验动物饥饿24h，颈部放血处死，迅速取
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实验步骤
2)纯度检查含量测定及鉴别
沉淀的离心管中加入蒸馏水2mLeabharlann 。振摇至沉淀溶解， 得DNA溶液；
取1ml核酸提取液，置50ml容量瓶中，用纯化水定容， 摇匀。测定260、280nm吸光度，计算A260/A280。 剩余1ml，加入二苯胺试剂1ml，摇匀，于沸水浴中加 热25分钟后，观察颜色之变化
实验4 动物组织中DNA的提取
1、任务背景
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于 DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。动植物中小牛胸 腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中，谷氨 酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。 从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。对于低等生物，如从病 毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。 从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。细菌DNA相对分子质量较大，一般达 2×109Da。因此易被机械张力剪短。细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等 2、任务目标 学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 3、工作原理 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将两者分离，常用的方法是用1mol/L氯化钠 提取抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使之乳化，再离心除去蛋 白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积 95%乙醇可将ＤNA钠盐分离出来。也可用0.15MNaCl液反复洗涤细胞破碎液除去RNP， 再以1mol/L NaCl提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿-异戊醇法除去蛋白。两种方法比较，后 种方法使核酸降解可能少一些。以稀盐溶液提取DNA时，加入适量去污剂，如SDS可有 助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中DNase对DNA的降解作用，在氯 化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的络合剂。通常用1.5mol/L NaCl，0.015mol/L 柠檬酸钠，并称为SSC溶液，提取DNA。
实验步骤
1）DNA提取 取新鲜动物肝，称取1g，切成小块，置10ml离心管中，加入4ml 0.14mol ／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液，用匀浆机匀浆，以4000r／min的转速离 心 10min，倒掉上清；用4ml 0.14mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液洗 涤一次。 在上述沉淀物中加入0.14mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液，使总体积 为 2mL，然后在60℃下，滴加 20％SDS溶液2－3滴，边加边摇动，再摇动 10min，使核酸与蛋白质分离。 加固体氯化钠0.2g混匀，使其最终浓度达到l.4mol／L，水浴30min。 加等体积的氯仿一异戊醇，混匀，摇动5min以4000r／min的转速离心 10min。离心管内的物质分为三层，上层为含DNA的水相层，下层为氯仿 一异成醇混合物，中间层为变性蛋白凝胶。 吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预冷），产生沉淀。 再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去上清液 (沉淀用80％乙醇溶液 离心洗涤)。