动物组织中总DNA的提取

操作步骤
1. 肝脏 左右, (剪碎 置研钵中，加入 肝脏1g左右 剪碎 置研钵中，加入2-3mL提取缓 左右 剪碎) 提取缓 冲液， 研磨成浆；吸入10mL EP管中，摇动混匀； 管中， 冲液， 研磨成浆；吸入 管中 摇动混匀； 2. 60℃水浴保温 颠倒混匀； ℃水浴保温20min，不时颠倒混匀； ，不时颠倒混匀 3. 室温下 室温下3000rpm离心 离心10min； 离心 ； 4. 小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1 小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的 另一只离心管中 氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀； 的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀； 5. 室温下 室温下3000rpm离心 离心10min； 离心 ； 6. 小心将上层水相吸入另一只离心管中； 小心将上层水相吸入另一只离心管中； 将上层水相吸入另一只离心管中 7. 重复 步2-3次; (此步不做） 重复4-5步 次 此步不做 此步不做） 8. 加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现 加入等体积预冷无水乙醇 预冷无水乙醇， 絮状DNA沉淀。 沉淀。 絮状 沉淀
实验十 动物组织中 DNA的提取 总DNA的提取
Total DNA extraction from eukaryotic tissue
实验目的Βιβλιοθήκη Baidu
了解真核生物基因组DNA提取的一 了解真核生物基因组DNA提取的一 般原理 通过动物组织DNA的提取，掌握 通过动物组织DNA的提取，掌握 DNA 提取的方法和步骤
试剂
提取缓冲液： 提取缓冲液：200 mmol/L Tris·Cl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS 24：1的氯仿：异戊醇 的氯仿： ： 的氯仿 预冷无水乙醇
SDS抽提液配方 SDS抽提液配方(1000ml): 抽提液配方(1000ml):
SDS法提取动物组织 SDS法提取动物组织DNA 法提取动物组织DNA
SDS（十二烷基硫酸钠 SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性 剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉 淀下来。EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等 淀下来。EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等 有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相， 有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因 核酸(DNA RNA)水溶性很强 (DNA、 水溶性很强， 核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提 液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。 液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入 乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中， DNA沉淀 DNA溶于双蒸水或TE溶液中 乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中， DNA溶液 溶液。 即DNA溶液。
DNA提取原则 DNA提取原则
保证DNA结构的完整性 保证DNA结构的完整性
纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质
排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
实验原理
细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA） 细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA） 称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋 称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋 白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液 白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液 中，而不溶于有机溶剂。 目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为 目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为 CTAB法和SDS法（表面活性剂 CTAB法和SDS法（表面活性剂，能溶解细胞膜 表面活性剂， 和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以 和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使 得以 游离出来）。 游离出来）。
高等动物、植物的基因组相当宠大， 高等动物、植物的基因组相当宠大， 如人类细胞基 因组由30亿个碱基对组成， 包含了该物种生长， 因组由30亿个碱基对组成， 包含了该物种生长 ，发 育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，获得 繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量， 纯度高、 基因组相对完整的基因组是以后 PCR分析 ， 纯度高 、 基因组相对完整的基因组是以后PCR 分析， 基因文库的构建，基因探测等的研究的基础。 基因文库的构建，基因探测等的研究的基础。 动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首 先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等 细胞内杂质污染；最后纯化出ＤＮＡ。
结果分析与讨论