中国人B细胞性非霍奇金淋巴瘤中BCL-6基因异常的探究

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中国人Ｂ细胞性非霍奇金淋巴瘤中ＢＣＬ－－６基因异常的研究

研究生：闵大六

导师：施达仁教授

目的：系统性地研究中国人Ｂ．ＮＨＬ常见类型中ＢＣＬ一６基因的异常，并探讨其临床病理意义。

方法：对１３５例中国人常见类型的Ｂ－ＮＨＬ和对照组５例Ｔ－ＮＨＬ、５例结节型淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（ＮｏｄｕｌａｒｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｃｅＨｏｄｇｌｄｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａ，ＮＬＰＨＬ）以及１０例淋巴结反应性增生（Ｌｙｍｐｈｏｉｄｒｅａｃｔｉｖｅｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ，ＬＲＨ）石蜡包埋组织进行形态学观察和ＢＣＬ．６、ＣＤｌ０以及ＢＣＬ．２等抗体的免疫组织化学染色；应用ＰＣＲ扩增及ＤＮＡ直接测序方法检测上述全部样本中ＢＣＬ．６基因５＂－非编码区突变，以看家基因Ｂ—Ａｃｔｉｎ作为内对照检测ＤＮＡ质量；应用断裂分离探针间期核ＦＩＳＨ技术检测其中２２例结内ＤＬＢＣＬ石蜡组织、１０例结内ＤＬＢＣＬ新鲜组织和５例ＬＲＨ中ＢＣＬ一６基因的重排。

结果：（１）ＢＣＬ一６和ＣＤｌ０阳性表达均只见于ＬＲＨ、结内ＤＬＢＣＬ、结外ＤＬＢＣＬ、ＦＬ以及ＢＬ，阳性率分别为：１００％（１０／１０）和１００％（１０／１０）、７２．７％（１６／２２）和４０．９％（９，２２）、７５．９％（２２，２９）和４１．４％（１２／２９）、８８．９％（１６／１８）和７２．２％（１３／１８）以及１００％（５／５）和１００％（５／５）。其余Ｂ－ＮＨＬ如Ｂ．ＳＬＬ、ＭＣＬ、ＭＡｕｌ＿Ｌ、ＬＰＬ、ＬＢＬ以及Ｔ＿ＮＨＬ和ＮＬＰＨＬ中均未见ＢＣＬ．６和ＣＤｌ０蛋白的表达。ＢＣＬ一２蛋白表达只见于结内ＤＬＢＣＬ、结外ＤＬＢＣＬ、ＦＬ、Ｂ．ＳＬＬ、ＭＣＬ、ＭＡＬＴ－Ｌ以及ＬＢＬ，阳性率分别为：３６．４％（８／２２）、２７．６％（８／２９）、８３．３％（１５／１８）、８８．９％（１６／１８）、８６．７％（１３／１５）、７２．７％（１３／１８）和３３．３％（１／３）；而ＬＰＬ、ＢＬ、Ｔ－ＮＨＬ以及ＮＬＰＨＬ均未见ＢＣＬ一２蛋白表达。（２）ＤＬＢＣＬ中ＢＣＬ．６的表达形式可以分为四种类型：ＧＣ／ＦＬ型、中间型、散在型和阴性型；４０．９０／＇０（９／２２）的结内ＤＬＢＣＬ、４１．４％（１２／２９）的结外ＤＬＢＣＬ、７２．２％（１３／１８）的ＦＬ以及１００％（５／５）的ＢＬ为ＢＣＬ一６＋／ＣＤｌＯ十表达，其中ＢＣＬ一６蛋白表达均为ＧＣ／ＦＬ型。在临床特征上，ＢＣＬ一６＋／ＣＤｌ０＋的淋巴瘤与非ＢＣＬ一６＋／ＣＤｌ０＋的淋巴瘤相比，前者的ｌ临床分期好于后者（ｐ＜Ｏ０５）。（３）１３５例Ｂ－ＮＨＬ中ＢＣＬ－６突变率为１４．８％（２０／１３５），

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突变仅见于结内ＤＬＢＣＩ…ＦＩ、ＭＡＬ』Ｔ＿Ｌ和结外ＤＬＢＣＬ中，突变率分别为：２７．３％、２２．２％、２２．２％，ｆｎ２０．７％。Ｂ—ＳＬＬ、ＭＣＬ、ＬＰＬ、ＢＬ、ＬＢＬ、Ｔ－ＮＨＬ以及ＮＬＰＨＬ中均未见ＢＣＬ一６突变。ｌ例（１０％）ＬＲＨ的生发中心细胞可见有ＢＣＬ一６突变。结内和结外ＤＬＢＣＬ巾ＢＣＬ．６突变率无显著性差异（ｐ＞Ｏ０５）。突变频率为０．１４×１０／ｂｐ～Ｏ．６８×１０。Ｃｏｐ：突变类型全部为碱基替换点突变。发生ＢＣＬ．６基因突变的ＤＬＢＣＬ中血清ＬＤＨ高于『Ｆ常值（芦＜口０５）。（４）结内ＤＬＢＣＬ样本中ＢＣＬ．６基因重排阳性率为２８．１％（９／３２），其中ＤＬＢＣＬ石蜡组织样本中ＢＣＬ．６基因重排阳性率为２７．３％（６／２２）；ＤＬＢＣＬ新鲜组织样本中ＢＣＬ．６基因重排阳性率为３０％（３／１０），二者间无显著性差异（口＞ｎ０５）。５例ＬＲＨ样本中均未检测到ＢＣＬ．６基因重排，阳性率为Ｏ％，与ＤＬＢＣＬ相比，有统计学显著性差异（ｐ＜ｎ０５）。ＢＣＬ．６基因重排与其蛋白表达、５＇－非编码区突变以及临床特征之间均无显著相关性（ｐ＞ｎ∞）。

结论：（１）在中国人Ｂ－ＮＨＬ常见类型中，ＢＣＬ．６和ＣＤｌ０蛋白主要表达于ＤＬＢＣＬ、ＦＬ和ＢＬ，联合检测ＢＣＬ一６与ＣＤｌ０的蛋白表达，可能更有助于对ＤＬＢＣＬ、ＦＬ和ＢＬ，特别是真正ＧＣ－Ｂ细胞起源的ＤＬＢＣＬ的诊断。（２）ＢＣＬ一６的表达形式可以分为四种：ＧＣ／ＦＬ型、中间型、散在型和阴性型，在ＢＣＬ一６＋／ＣＤｌｏ＋的淋巴瘤中，其ＢＣＬ．６的表达形式均为ＧＣ／ＦＬ型，可能具有更好的临床预后。（３）ＢＣＬ．６、ＣＤｌ０和ＢＣＬ－２蛋白的联合检测，可以用于ＦＬ、ＭＣＬ、ＭＡＬＴ－Ｌ、Ｂ．ＳＬＬ等部分Ｂ－ＮＨＬ的鉴别诊断。（４）中国人Ｂ－ＮＨＬ中ＢＣＬ－６突变率为１４．８％，低于国外文献报道。突变仅见于结内ＤＬＢＣＬ、ＦＬ、ＭＡＬＴ－Ｌ和结外ＤＬＢＣＬ中，提示ＢＣＬ一６基因突变可能只在一定程度上参与中国人Ｂ－ＮＨＬ的发生和发展。（５）ＢＣＬ．６基因突变频率为０．１４×１０。２／ｂｐ－４）．６８×１０。２／ｂｐ：突变类型全部为碱基替换点突变。（６）应用间期核ＦＩＳＨ技术可以检测新鲜或石蜡淋巴瘤组织样本中ＢＣＬ一６基因的重排。（７）中国人结内ＤＬＢＣＬ样本中ＢＣＬ－６基因的重排阳性率为２８．１％；ＬＲＨ样本中均未检测到ＢＣＬ．６基因重排，提示ＢＣＬ．６基因重排可能参与了中国人结内ＤＬＢＣＬ的发生。

关键词：Ｂ细胞性非霍奇金淋巴瘤；ＢＣＬ一６基因；突变；基因重排；ＦＩＳＨ

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ＡｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅＢＣＬ－６ｇｅｎｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎＢ－ｃｅｌｌＮｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ

ＭｉｎＤａｌｉｕ

Ｔｕｔｏｒ：ｐｒｏｆｅｓｓｏｒＳｈｉＤａｒｅｎ

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅＢＣＬ一６ｇｅｎｅａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎＢ—ｃｅｌｌＮｏｎ—Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａｓ（Ｂ－ＮＨＬ）ｉｎＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃ—ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃｓｔｕｄｉｅｓａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｅｓｏｆＢＣＬ－６，ＣＤＩＯａｎｄＢＣＬ一２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎ１３５ｃａｓｅｓｏｆＢ－ＮＨＬｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓａｎｄ５ｃａｓｅｓｏｆＴ－ＮＨＬ．５ｃａｓｅｓｏｆｎｏｄｕｌａｒｌｙｒｅＩｐｈｏｃｙｔｅｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｃｅＨｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａⅢＬＰＨＬ）ａｎｄ１０ｃａｓｅｓｏｆｒｅａｃｔｉｖｅｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａｏｆｌｙｍｐｈｎｏｄｅｒＬＲＨ）ｗｉｔｌｌｐａｒａｆｆｉｎ—ｅｍｂｅｄｄｅｄｔｉｓｓｕｅｓ．Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ａｎｄｄｉｒｅｃｔＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅ５＇－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＢＣＬ－６ｇｅｎｅｉｎａｌｌａｂｏｖｅｍｅｔｉｏｎｅｄｓａｍｐｌｅｓ．Ｈｏｕｓｅ－ｋｅｅｐｉｎｇｇｅｎｅＢ－ＡｃｔｉｎｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＤＮＡ．Ｕｓｉｎｇｉｎｔｅｒｐｈａｓｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）ｗｉｔｈｄｕａｌｃｏｌｏｒｂｒｅａｋａｐａｒｔｐｒｏｂｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅＢＣＬ一６ｇｅｎｅｉｎ２２ｃａｓｅｓｏｆｎｏｄａｌｄｉｆｆｕｓｅｌａｒｇｅＢ・－ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ（ＤＬＢＣＬ）ｐａｒａｆｆｉｎ－－ｅｍｂｅｄｄｅｄｔｉｓｓｕｅｓａｎｄ１０ｃａｓｅｓｏｆｎｏｄａｌＤＬＢＣＬｆｒｅｓｈｔＪｓｓｕｓｅｓａｓｗｅｌｌａｓ５ｃａｓｅｓｏｆＬＲＨｐａｒａｆｆｉｎ－ｅｍｂｅｄｄｅｄｔｉｓｓｕｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：（１）ＢＣＬ・６ａｎｄＣＤｌ０ｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｌｍｏｓｔｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙｉｎＬＲＨ，ｎｏｄａｌＤＬＢＣＬ，ｅｘｔｒａｎｏｄａｌＤＬＢＣＬ，ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｌｙｍｐｈｏｍａ（ＦＬ）ａｎｄＢｕｒｋｉｔｔ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａ（ＢＬ），ｔｈｅｒａｔｅｓｏｆｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅ１００％（１０／１０）ａｎｄ１００％（１０／１０），７２．７％（１６／２２）ａｎｄ４０．９％（９／２２）．７５．９％（２２／２９）ａｎｄ４１．４％（１２／２９），８８．９％（１６／１８）ａｎｄ７２．２％（１３／１８）ａｓｗｅｌｌａｓｌ００％（５／５）ａｎｄｌ００％（５／５）．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＢＣＬ一６ａｎｄＣＤｌ０ｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｎｏｔｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｏｔｈｅｒＢ－ＮＨＬｓｕｃｈａｓｓｍａｌｌｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｅｌｙｍｐｈｏｍａ（Ｂ－ＳＬＬ），ｍａｎｔｌｅｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ（ＭＣＬ），ｅｘｔｒａｎｏｄａｌｍａｒｇｉｎａｌｚｏｎｅＢ—ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａｏｆｍｕｃｏｓａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｌｙｍｐｈｏｉｄｔｉｓｓｕｅ（ＭＡＬＴ－Ｌ），Ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃｌｙｍｐｈｏｍａ（ＬＰＬ）ａｎｄｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｙｍｐｈｏｍａ（ＬＢＬ）ａｓｗｅｌｌａｓＴ－ＮＨＬａｎｄＮＬＰＨＬ．ＢＣＬ一２ｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｎｏｄａｌＤＬＢＣＬ，ｅｘｔｒａｎｏｄａｌＤＬＢＣＬ，ＦＬ，Ｂ—ＳＬＬ，ＭＣＬ．ＭＡＬＴ－ＬａｎｄＬＢＬ，ｔｈｅｒａｔｅｓｏｆｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅ３６．４％（８／２２），２７．６％（８／２９），

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