黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钙的方法
高通量筛选葡萄糖酸钙高产菌株
米浆 1. 0 g，CaCO3 5. 0 g，琼脂 20. 0 g，pH 6. 5 ～ 7. 0。 培养基于 121℃ ，灭菌 20 min。
1. 3 主要与仪器
DHZ-D 大容量恒温振荡器，太仓市实验设备厂；
MJX-160C 型霉菌培养箱和 YXOQ-LS-75S11 立式蒸
汽灭菌器，上海博迅实业有限公司医疗设备厂； SW-
葡萄糖酸及其盐类广泛应用于食品、医药、化工、 建筑等行业，其中葡萄糖酸钙是白色晶体或粉末，不 仅能够预防钙缺乏症，促进牙齿和骨骼发育，还可治 疗血钙含量过低引起的抽搐和镁中毒等疾病。作为 营养药物，葡萄糖酸钙具有易溶解和吸收的特性，静 脉注射或口服皆可，因此在临床中用途广泛［1 － 3］。
葡萄糖酸 钙 的 制 备 普 遍 采 用 生 物 发 酵 法［4］，一 般以黑曲霉作为生产菌种。葡萄糖酸钙用途广，市场 需求量大，筛选高产菌种是提高其产量的关键。高通 量筛选技术是 20 世纪 80 年代发展起来的目的菌种 选育的新技术，具有微型、高效和低成本等优点，已广 泛应用于菌种选育［5 － 7］。本文以经紫外线-LiCl 复合 诱变处理的黑曲霉为研究对象，建立高通量筛选葡萄 糖酸钙高产菌种的方法。
发酵培养基（ g / L） ： C6 H12 O6 ·H2 O 330. 0 g，CO （ NH2 ） 2 0. 1 g，KH2 PO40. 02 g，MgSO4 ·7H2 O 0. 2 g， 玉米浆 1. 0 g，CaCO3 38. 0 g，pH 6. 5 ～ 7. 0。
上述培养基均于 115℃ ，灭菌 30 min。
致死率 /%
=
对照菌落数 － 处理菌落数 对照菌落数
× 100
1. 4. 2 葡萄糖酸钙的测定方法
1. 4. 2. 1 酶标板分光光度法
定量核磁共振波谱法测定葡萄糖酸钙原料药的绝对含量
中国医药生物技术2020年2月第15卷第1期Chin Med Biotechnol, February 2020, V ol. 15, No. 1 71 DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2020.01.014·技术与方法·定量核磁共振波谱法测定葡萄糖酸钙原料药的绝对含量李怡然，朱明慧，朱志玲，姚静，山广志葡萄糖酸钙作为临床常用药物，主要起降低毛细血管渗透性的作用。
适用于过敏性皮肤病，如荨麻疹、湿疹、皮肤瘙痒症、接触性皮炎等。
作为产后出血的辅助用药使用，能够减少心血管不良反应[1-3]，同时也是一种膳食补充剂，用于儿童、孕妇、老年人钙的补充[4]。
葡萄糖酸钙的制备方法有电解氧化法、溴化法、金属催化合成法、发酵法等。
发酵法因工艺稳定，成本低廉，被多数厂家应用。
发酵法是以黑曲霉为生产菌种，经菌种逐级培养，发酵代谢的酶将葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，再经碳酸钙中和精制而成[5]。
《中国药典》2015 年版采用EDTA 滴定法测定葡萄糖酸钙制剂中钙的含量[6]，对葡萄糖酸基仅采用鉴别反应进行考察，未对其含量进行控制。
有文献采用HPLC 法[7]或离子色谱法[8]测定葡萄糖酸钙的含量，但由于葡萄糖酸在水溶液中存在糖酸和内酯的转化，容易造成测量误差。
自1963 年qNMR 法[9]应用于定量分析以来，其应用范围日益广泛，各国药典均收载了该方法。
qNMR 技术的优势在于不需要对照品，仅以已知含量的核磁对照品作为内标，扫描待测物的共振峰面积直接计算H 的个数，对化合物进行绝对含量的测定[10]，适用于无对照品原料药的首次定量。
本文采用qNMR 技术，利用无水氘代溶剂，排除了水分和残留溶剂及其他无机物干扰，准确测定了葡萄糖酸钙原料的绝对含量。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂Bruker Avance III HD 600 MHz 核磁共振波谱仪（BBO 探头）购自德国布鲁克公司；Mettler Toledo MS105 电子分析天平购自瑞士梅特勒-托利多公司；氘代DMSO（批号：PR-28072/07206DM1）购自美国Cambridge Isotope Laboratories 公司；葡萄糖酸钙（批号：LC80Q34）购自北京百灵威科技有限公司；顺丁烯二酸（批号：BCBM8127V，NMR对照品级，纯度：99.94%）购自美国Sigma-Aldrich 公司。
黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠分离纯化工艺
黑曲霉（Aspergillus niger）是一种常用的微生物菌株，可以利用其进行葡萄糖酸钠的发酵生产。
以下是黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠分离纯化工艺的简要流程：
1. 发酵生产：
黑曲霉通过代谢过程，将培养基中的碳源转化为葡萄糖酸钠。
发酵过程中需要控制发酵温度、pH值、氧气供应等因素，以提高产量和质量。
2. 分离：
将发酵液经过离心分离或压滤，将菌体和培养基分离。
分离后的发酵液中含有葡萄糖酸钠、杂质和其他副产物。
3. 过滤：
将分离后的发酵液通过滤器进行过滤，去除大颗粒的杂质，减少后续纯化步骤的负担。
4. 萃取：
使用适当的有机溶剂对过滤后的发酵液进行萃取，将其中的葡萄糖酸钠转移到有机层中。
将有机层与水层分离，得到含有葡萄糖酸钠的有机相。
5. 沉淀：
将有机相中的葡萄糖酸钠转化为钠盐沉淀，可以采用钠碳酸或氢氧化钠等化学物质进行反应。
沉淀后，对其进行过滤和洗涤，得到较为纯净的葡萄糖酸钠固体。
6. 干燥：
将葡萄糖酸钠固体在干燥器中进行干燥，去除其中的水分，得到最终产品。
以上是黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠分离纯化工艺的主要步骤。
在实际操作中，还需要对每个步骤进行具体的优化和控制，以提高产品的产量和质量。
葡萄糖氧化酶的发酵生产与发酵工艺的研究
２．２ 青霉菌发酵生产葡萄糖 氧化酶
工业化生产多采用黑曲霉， 其产酶水平较高。但青霉葡萄糖 氧化酶米氏常数小，反应速度 快，也引起人们较大的兴趣。
胡常英等人［６］以产葡萄糖氧 化酶的点青霉（ Ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｕ ｍ ｎｏｔａｔｕｍ）．８３１２为出发菌株，经紫外 线诱变处理，初筛、复筛得到了 一株（Ｎｏ Ｔ１１１）高产葡萄糖氧化酶 的菌株，连续 １２次对其传代试验， 该突变株遗传性状稳定，摇瓶产 酶水平达到 ５５．７Ｕ／ｍＬ，比出发株 （３６．２Ｕ／ｍＬ）提高了５３．９％。发酵液未 检出青霉素的成份。该诱变株的 建立和对所产酶的研究，为促进 青霉葡萄糖氧化酶工业化生产， 提高酶的应用质量，降低生产成 本提供了科学依据。
葡萄糖氧化酶的发酵生产
与发酵工艺的研究
宫艳艳，徐学明
（江南大学食品学院，无锡 ２ １ ４ ０ ３ ６ ）
摘 要：葡萄糖氧化酶是酶应用技术领域中一种非常重要的酶，作为国 家允许使用的酶制剂之一，它在食品、医药、饲料等行业中得到了广泛应用。 该文简要介绍了葡萄糖氧化酶及两种菌种的葡萄糖氧化酶的发酵生产，对发 酵工艺的影响进行了探讨，并展望了其在食品工业上的应用前景。
切关系，导致了它在科研、医药
和食品工业生产上广泛的应用。
２０ 世纪初 Ｍａｘｉｍｏｕ 在黑曲霉
培养物中发现吸氧酶系统。１ ９ ２ ４
年Ｍａｌｌｉａｒｄ发现了葡萄糖酸。１９２８
年，Ｍｕｌｌｅｒ 用黑曲霉菌丝体压制
进行葡萄糖酸形成的酶学研究，
探明在葡萄糖存在时能消耗氧，
黑曲霉葡萄糖酸发酵的工艺控制方法
收稿日期 :2008 - 01 - 22 作者简介 :蔡皓 (1970 - ) ,男 ,湖北武汉人 ,硕士 ,讲师 ,主要从事微生物发酵及后提取的研究 ; 通讯联系人 : 李庆 ,博士 ,讲师 。E2
mail :liqing @mail. hzau. edu. cn 。
6 4
蔡 皓等 :黑曲霉葡萄糖酸发酵的工艺控制方法/ 2008 年第 6 期
ED TA 定钙法[4] :发酵过程中葡萄糖酸的生成导 致发酵液 p H 值下降 ,利用 Ca (O H) 2 及 CaCO3 与葡萄 糖酸中和来维持发酵 p H 值时 ,生成葡萄糖酸的钙盐 , 通过直接测定发酵液中钙离子的含量可折算得到生成 的葡萄糖酸浓度 ( W G) 。
WHale Waihona Puke G=cE×V V
E S
(2) 种子培养基 (g ·L - 1 ) :葡萄糖 (水解糖) 40 ,麸 皮 32 , ( N H4 ) 2 H PO4 01 4 , KH2 PO4 01 2 , MgSO4 · 7 H2 O 01 2 ,CaCO3 10 ,p H 值 51 6 。
(3) 发酵培养基 ( g ·L - 1 ) : 葡萄糖 (水解糖) 100 ～ 300 , ( N H4 ) 2 H PO4 01 4 , KH2 PO4 01 2 , MgSO4 · 7 H2 O 01 15 ,CaCO3 27～81 ,p H 值 51 6 。 11 11 3 主要仪器
21 1 葡萄糖含量的控制方式 葡萄糖在较高含量下 ,对许多微生物的生长和代
谢都有抑制作用 ,使菌体生长速率和产物生成速率处 于较低水平 ,发酵时间大大延长 。
图 1 10 L 发酵罐中不同发酵方式对发酵产酸的影响 Fig. 1 Effect of mode of fermentation on production of
酶解法制备葡萄糖酸钙
获得葡萄糖酸钙溶液
试验结果
吸光值 1.414 2.682 2.891 2.958 3.01
浓度 （%）
0.5
1
3
5
7
样品的吸光值为1.636，通过表中的数据整合出的 标准曲线得出葡萄糖的浓度为0.58%
试验过程及其产物照片
（2）糖化酶（EC 3.2.1.3）又 称葡萄糖淀粉酶，它作用于淀 粉时，从淀粉分子的非还原端 开始逐个地水解α -1,4糖苷键， 生成葡萄糖和一些低聚糖，且 糖化酶还有一定的水解α -1,6 糖苷键和α -1,3糖苷键的能力
试 验 原 理
葡萄糖氧化酶 4C6H12O6+3O2+2H2O 4C6H12O7+2H2O2 2C6H12O7+CaCO3 过氧化氢酶 Ca(C6H11O7)2+CO2+H2O
淀粉糊化
操作步骤
冷却至55-60℃ 加入糖化酶
调节 ph=4.5 于60-65℃ 恒温水浴 糖化3-4h
三，糖化
抽滤，得到透 明糖液
加入活性 炭，在 80℃搅拌 30min
测量葡萄糖含量
操作步骤
葡萄糖+CaCO3 (过 量) 加过氧化氢酶和 葡萄糖氧化酶
四，双酶氧化
反应结束，加 活性炭脱色 35℃搅拌反应，通过pH 判断反应进行的程度
（4）过氧化氢酶 2H2O2 2H2O+O2 （EC1.1.1.1.6） 它以过氧化氢作 （ 3 ）葡萄糖氧化酶（ EC 1.1.3.4 ）是 为专一的底物， 一种糖蛋白，它能够特异性的氧化 β - 催化过氧化氢分 D-葡萄糖生成中间产物D-葡萄糖酸- δ 解为水和氧气保 - 内酯和过氧化氢，并发生非酶促反应 护酶受到过氧化 水解为葡糖酸。 氢的毒害。
固定化酶法制备葡萄糖酸钙的研究
生产葡萄糖酸钙的方法有发酵法 、化学法和酶法 ，其 固定化酶），１０ ３ ２ ０％ Ｈ０ ，２ ２２ ８℃振荡反应４ ｎ ｍｉ，
中发 酵 法 使 用 较 为 普 遍 ，但 是 生 产 成 本 较 高 ，纯 化 工 Ｊ ６ ０ｇ ３ ０ Ｌ ８％ Ｈ Ｓ ４ Ｈ ２Ｏ 终止反应 （ 照管先） Ｈ Ｓ ４ 对 Ｊ ２Ｏ 溶 Ｈ
ａ ｍｐ ｏ ｅ ｎ ｉ ｒ ｖ ｄＡＢＴ ａ ｉａ ａ ｉｎ ｄ ｃ ｌ ｒ ａｉ ｎ ａ ｓ ｙ Ｊ． ｒ ｅ Ｓ ｒ ｄ ｃ ｌｃ ｔ ｅ ｏ ｏ ｉ ｔ ｓ ａ ［］ Ｆ ｅ ｏ ｚ ｏ Ｒ ｄｃ ｏ Ｍｅ ， ９ ９ ２ （ —Ｏ ： ２ １ １ ３ ． ａ ｉ Ｂｉｌ ｄ １ ９ ， ６９ １ ） １ ３ — ２ ７
力 、清 除ＡＢＴ 由基 能 力 以及 油 脂 抗 氧 化 试 验 其 中 Ｓ自
品 科 学 ，２ ０ ，２ （ １ ： ８ 培６ ０８ ９ １） ４
筛 选 效 果 较 好 的 段 。结 果 表 明 白芍 提 取 物 的 不 同极 性 段 物 质 均 具 有 抗 氧 化 活 性 ， 其 中 乙酸 乙 酯 极 性 段 物 质
其次为氯仿段 、正丁醇段 ， 水段和石油醚 段表现 出的 抗动植物油脂氧化 能力。
抗 氧 化 能力 相 似 ，最 弱 。
４ 讨 论
参 考 文 献
［］ 苏 玮 ，郭 群 ． １ 白芍 的现 代 药 理 研 究 概 况 ［Ｊ中 医 药 信 息 ， １９ ， Ｊ＿ ９ ６
１ （０ ３ ０ ４） ： ９ ｌ ． 一 １
ｏ ｉａ ｅ （ ｘ ｄ ｓ ＧＯＤ）ａ ｄ ｃ ｔｌｓ ｎ ａａａ ｅ（Ｃ ）ｗｅｅ ｃ ｖ ｌｎ ｌ ｍｍｏ ｉ ｚ ｄ ｏ ｌｔｒ ｌｅ ｙ ｅｐ ｅｒ ａｅ ｈｔ ｓｎ Ｔ ｅ ＡＴ ｒ ｏ ａｅ ｔ ｉ ｙ ｂ ｌ ｅ ｎ ｇｕ ａａｄ ｈ ｄ — ｒｔｅ ｔｄ ｃ ｉ ａ ． ｈ ｉ ｏ
高产葡萄糖酸黑曲霉菌株的诱变选育
高产葡萄糖酸黑曲霉菌株的诱变选育作者：白长胜，孟维珊来源：《现代畜牧科技》 2018年第8期摘要：以一株产葡萄糖酸的黑曲霉为出发菌株，对其进行紫外线诱变处理，筛选得到一株产葡萄糖酸较高的菌株，产酸力比原始菌株提高了1. 16倍，经连续传代7代，产酸性能未出现较大的差异，具有较好的遗传稳定性。
关键词：黑曲霉；葡萄糖酸；紫外线诱变；产酸能力中图分类号：TQ9 21.2文献标识码：A文章编号：2095-9737(2018)08-0001-02Mutagenic breeding of yielding highly gluconic acid Aspergillus niger strainBai Changsheng,Meng Weishan(Institute of animal husbandry of Heilongjiang,Qiqihar, Heilongjiang161005 ,China)Abstract:The Gluconic acid production capacity of Aspergillus niger YS was done original fungus,after UV mutagenetic treat ment,a high- yielding mutant strain was obtained from a lot of mutants. The acid productivity of the mutantstrain was l.16times than the original strain. The mutant strain has stable acid production after subculture 7 times.Key words: Aspergillus niger; gluconic acid; UV mutation; acid productivity葡萄糖酸及其衍生物（如葡萄糖酸盐、葡萄糖酸δ-内酯）作为蓬松剂、凝固剂、鳌合剂、酸味剂而广泛应用于食品、化工、水处理、建材和医药等行业。
黑曲霉产葡萄糖酸工艺流程
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原料准备。
1. 培养基，葡萄糖、玉米淀粉、大豆粉、棉籽饼等。
黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠实习报告
目录1前言 (2)1.1 葡萄糖酸钠概述 (2)1.2 葡萄糖酸钠的制备工艺 (4)1.3 制备方法的比较 (6)1.4 葡萄糖酸钠的发展史 (6)2实验材料 (7)2.1菌种 (7)2.2培养基 (7)2.3主要试剂 (8)2.4主要仪器 (8)3 试验方法 (8)3.1 发酵培养 (8)3.2 检测 (8)3.2.1 DNS测定总糖和还原糖 (8)3.2.2 氨基氮的测定 (10)3.2.3 菌浓测定：离心体积和干重 (11)3.2.4 葡萄糖酸钠含量的测定 (11)4实验结果与讨论 (12)4.1 葡萄糖含量 (12)4.2 总糖和还原糖含量 (12)4.3 氨基氮 (13)4.4 葡萄糖酸钠 (14)4.5 菌体浓度的测定 (15)4.6 菌体生长情况 (15)4.7 在线检测 (16)5 展望 (19)1前言1.1 葡萄糖酸钠概述葡萄糖酸钠又称五羟基己酸钠，是一种白色或淡黄色结晶粉末，易溶于水，微溶于醇，不溶于醚。
其分子式为C6H11O7Na ，相对分子质量为218.14。
葡萄糖酸钠是葡萄糖的深加工产品，也是制备葡萄糖酸内酯、葡萄糖酸盐(锌、铜、亚铁盐) 等的基础原料。
该产品热稳定性好，无潮解性，由于其优良的螯合性能而被广泛用于水质处理、电镀、金属与非金属的表面清洗及水泥生产等多种工业部门，在化工、食品、医药、轻工等行业有着广泛的用途。
工业级的葡萄糖酸钠是建筑工业上混凝土的塑化剂，食品级的葡萄糖酸可作为食品行业的酸味剂。
另外葡萄糖酸钠的毒性和腐蚀性极小，能与某些二价或三价金属离子形成水溶性络合物，因此在医疗和化工行业作为清洗剂被利用。
美国及日本等国在20世纪50年代就开始工业化生产，我国自1955年由轻工业部上海工业试验所试制葡萄糖酸成功后发展迅速，目前全国已有几十家葡糖酸。
葡萄糖酸钠的主要用途有：用作钢铁表面清洗剂钢铁表面如需要镀钵、镀铬、镀锡、镀镍以适应特殊用途时，如制造马口铁，镀锌板，表面镀铬（电度）等，其钢坯表面均需经过严格清洗，使镀层物与钢铁表面牢固结合，这时候其清洗药剂中添加葡萄糖酸钠将会达到十分理想的效果。
一步法合成葡萄糖酸钙
一步法合成葡萄糖酸钙陈建初(科研处)摘 要 采用双金属作催化剂,在碱液中氧化葡萄糖,一步制取葡萄糖酸钙,产品收率82.1%,并研究了催化剂、反应物浓度、温度、pH 值、搅拌速度等工艺参数对葡萄糖催化氧化的影响.关键词 葡萄糖;催化氧化;葡萄糖酸钙;工艺分类号 TQ 460.31;TQ 426.820 引 言收稿日期:1996—09—02陈建初:男,1957年2月生,高级工程师 葡萄糖酸钙是一种医药和精细化学品.作为药物,它能促进骨骼和牙齿的钙化、维持神经与肌肉的正常兴奋性、降低毛细血管的渗透性;作为精细化学品,它可作为食品添加剂、水质稳定剂和水泥助剂1葡萄糖酸钙的生产方法有电解法、溴化法和发酵法,目前大多数厂家采用发酵法.国内发酵法生产已有几十年的历史,工艺技术仍然存在着黑霉菌的培养、分离、副产物控制、废水处理等难题[1].为了寻求较好的合成葡萄糖酸钙新工艺,作者曾作过一些探索[2～4].如,用双酶法水解淀粉成葡萄糖溶液,然后在氢氧化钠的碱性条件下,催化氧化得到葡萄糖酸钠.通过离子交换法、中和法等工艺过程处理,得到葡萄糖酸钙[2].但该工艺路线过长,收率低,未进行中试研究.以葡萄糖为原料,经“三步合成法”[3],在小试的基础上,进行了中试放大,并已批量生产出葡萄糖酸钙产品[4].作者在开发葡萄糖酸钙的合成路线中,采用双金属作催化剂,一步合成制取葡萄糖酸钙,使其合成路线得到简化.1 实验部分1.1 原辅材料葡萄糖:湖北省葡萄糖厂企业标准,食用级.氧化钙:工业纯.双金属催化剂:自备.1.2 工艺合成原理葡萄糖在氢氧化钙的水溶液中,在双金属催化剂的存在下,经空气的氧化,其分子上的醛基被氧化成羧基,葡萄糖酸与氢氧化钙反应得到葡萄糖酸钙.其化学反应式为:C 6H 12O 6O 2催化剂C 6H 12O 7Ca (OH )2Ca (C 6H 11O 7)2 H 2O1.3 工艺流程与制备方法图1为一步合成葡萄糖酸钙的工艺流程.其制备方法如下.在备有搅拌水浴加温及供氧气装置的五口1000mL 烧瓶中,加入葡萄糖110g ,工艺用水至葡萄糖质量浓度为0.40kg m 3,双金属催化剂2.2g ,起动搅拌,将氧化钙的水溶液缓缓滴1998年3月JOU RNAL O F W U HAN I N ST ITU T E O F CH E M I CAL T ECHNOLO GY M ar .1998图1 一步合成葡萄糖酸钙工艺流程入烧瓶中,控制反应液pH 值为10,温度40℃,再通入氧气,其流量为70L h 左右.保持反应条件8h 后,测定葡萄糖的转化率,当转化率达到95%时,停止反应.将反应液趁热过滤,滤出催化剂,滤液用活性炭脱色至6#色,再趁热过滤,活性炭渣和催化剂分别保留回收再用.滤液浓缩,使其相对密度达到1.10,然后进行第二次脱色,控制色相4#色以下,过滤,滤液静置过夜,冷却结晶.次日过滤、洗涤,80℃干燥至含水量≤3%,即得到成品.结晶过滤、洗涤后的母液( )通过脱色、浓缩、结晶、分离,得到的回收半成品进入二次脱色工序操作过程,回收其中葡萄糖酸钙,精制得到成品.成品重合计90.1g .2 结果与讨论2.1 产品质量本品经湖北省药品检验所测试,产品质量符合我国药典八五版规定.10个试样批号,产品收率平均达82.1%,详见表1.表1 各批试样收率明细表试样批号葡萄糖投入量 g 成品量 g 一次结晶成品母液重结晶成品收率(%)9200111080920021105092003120869200411065.99200511081.19200612085.79200711082.29200811081.69200911082.39201011082.1前五批合计:67.0后五批合计:72.084.961.382.872.185.983.487.887.287.987.7合计1120780.9139.0平均82.12.2 工艺条件对葡萄糖氧化转化率的影响2.2.1 催化剂的用量 在葡萄糖质量浓度为0.40kg m 3、pH 值为10、温度为45℃、氧气流量≥70L h 、搅拌速度1600r m in 的反应体系中,改变催化剂的用量,其对应的葡萄糖转化率变化情况见图2.由图2可见,此种催化剂的用量为葡萄糖量的2%是合适的.从生产成本的角度来考虑,应避免催化剂过量的问题.2.2.2 葡萄糖质量浓度 在催化氧化过程中,其它工艺参数与本实验制备过程的参数保持不变,葡萄糖质量浓度增高,则反应转化率降低,结果如图3所示.由图3可见,选择葡萄糖质量03武汉化工学院学报第20卷 图2 催化剂用量与转化率关系浓度为0.40kg m 3左右合适.2.2.3 反应温度 固定本实验制备过程中氧化反应的工艺参数,只改变温度,测其不同的转化率,用数据作图4.由图4看出,氧化转化率随温度的升高而升高,室温以下反应,氧化转化率很低.温度60℃,糖氧化的转化率虽增长很快,但葡萄糖酸的量几乎没上升,其原因是产生了葡萄糖二酸、葡萄糖醛酸、羟甲基糠醛等副反应物.因此,氧化反应温度为40℃左右较合适.图3 葡萄糖质量浓度与转化率的关系 图4 反应温度与转化率的关系2.2.4 溶液的酸度 氧化反应过程中,部分葡萄糖氧化成葡萄糖酸,遇到碱性的钙离子发生中和反应,生成了葡萄糖酸钙,使氧化反应的生成物葡萄糖酸的浓度不断减小,有利于氧化反应向正方向进行.实验中发现,反应液的pH 接近中性时,反应到达终点的时间要超过15h ;增加pH 值,在同一参数体系中,反应终点时间相对缩短,但是,当溶液的pH 值为11以上时,生成物中有大量的糖二酸的钙盐副产物,经筛选,反应液保持pH 10±0.5,葡萄糖酸钙的生成量比较接近理论生成量.2.2.5 搅拌速度 本实验的反应是气液固三相体系,要使反应充分完成,就要克服传质的阻力.对葡萄糖氧化三相体系的反应,搅拌达到较高速度才有好的传质效果[5].本实验选择的搅拌速度为1600r m in ,转化率达到95%左右.3 结 语与发酵法工艺技术相比,本工艺技术难度小,设备简单,避开了黑霉菌的培养、分离以及副产物的控制、三废污染的难题,且生产规模设计可大可小,生产周期短,工艺简便,产品收率较高.实验使用双金属催化剂,催化氧化葡萄糖一步成钙盐,与“三步合成法”比,简化了工序,具有更好的效益.不足的是,双金属催化剂的使用周期只有四至五批,五批循环使用后,催化活性大大降低,其原因有待进一步研究.13第1期陈建初:一步法合成葡萄糖酸钙23武汉化工学院学报第20卷 参考文献1 林 勇.淀粉与葡萄糖的生产.南昌:江西科技出版社,1986.2 陈建初.酶水解与化学合成制取葡萄糖酸钙.湖北化工,1988,(4):32～333 陈建初,刘丽华.葡萄糖酸衍生物的开发研究.淀粉与淀粉糖,1989,(3):14～194 陈建初.三步合成法制葡萄糖酸钙.淀粉与淀粉糖,1992,(4):16～195 Ju taro O kada.糖的氧化.药学杂志,1969,(7):1326～1337The Syn thesis of Ca lc iu m Glucona teby the One Step ProcessChen J ianchu(D epartm en t of Science and T echn ical,W uhan In stitu te of Chem ical T echno logy,W uhan430073,Ch ina)Abstract A new m ethod of the p rep aring calcium gluconate is p resen ted by the catalytic ox i2 dati on of the gluco se.T he yield of calcium gluconate w as82.1%.T he effects of catalysis, concen trati on of se so lu ti on,tem p eratu re,pH etc.on the tran sfo rm ati on of gluco se have been studied.Key words gluco se;catalytic ox idati on;calcium gluconate;techno logy。
黑曲霉A9葡萄糖氧化酶的酶学性质研究
文章编号:1000-1573(2006)04-0069-05黑曲霉A9葡萄糖氧化酶的酶学性质研究王志新, 于宏伟, 韩 军, 李 宁, 林 杨, 贾英民y(河北农业大学食品科技学院,河北保定071000)摘要:为研究葡萄糖氧化酶的酶学性质,对黑曲霉A9发酵液提取纯化,酶蛋白达到电泳纯,然后对纯酶进行酶学性质研究。
结果表明:葡萄糖氧化酶的分子量为138200Da,糖基化程度为2 67%,最适pH 为6 7,最适温度为30 ,该酶的pH 稳定范围较宽,而且热稳定性很好,Ag +、Hg 2+、亚硫酸氢钠对酶有强烈的抑制作用,该酶对葡萄糖的Km 值为35 74mmo l L 。
该研究表明,黑曲霉葡萄糖氧化酶具有潜在的应用价值,最适合应用于食品、医药及生物等领域。
关 键 词:葡萄糖氧化酶;黑曲霉;性质中图分类号:Q 93-3 文献标识码:AStudies on the properties of glucose oxidasefrom Aspergillus niger A 9WAN G Zhi xin ,YU H ong wei ,H AN Jun ,LI N in g ,LIN Yang ,JIA Ying min(Department of Food Science and T echnolog y,A gricultural U niversity of Hebei,Baoding 071000,China)Abstract :In order to study the properies of g lucose ox idase,we purified glucose oxidase from As p ergillus niger A9fermenting liquor to obtain a single com ponent,then studied the properies of the purified glucose oxidase in this experiment.It is show n that the molecular w eight,the optimal pH,and temperature is 138200Dalton,6 7and 30 respectively,the pH stability is w ide and the thermal stability is very good,the glucose ox idase w as inhibited strongly by Ag +、H g 2+、NaHSO 3and the Km of g lucose w as 35 74mmol L.This research indicated that glucose oxidase had poten tial applied value and fitted to apply in the fields of food,medicine and biolog y etc.Key words :glucose oxidase;A sp ergillus niger ;properties 葡萄糖氧化酶(Glucose Ox idase,简称GOD)系统名为 -D-葡萄糖:氧化还原酶(EC1.1.3.4)。
论复方葡萄糖酸钙口服液的制备与质量控制分析
论复方葡萄糖酸钙口服液的制备与质量控制分析发布时间：2021-12-23T05:32:16.352Z 来源：《中国科技人才》2021年第26期作者：张强[导读] 复方葡萄糖酸钙口服液具有补钙作用，可用于钙缺乏症的预防与治疗，如骨质疏松症、手足抽搐、佝偻病、骨质增生，也可应用于儿童、孕妇、哺乳期妇女、绝经期妇女及老年人的补钙。
本文探讨了复方葡萄糖酸钙口服液的制备与质量控制。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：复方葡萄糖酸钙口服液具有补钙作用，可用于钙缺乏症的预防与治疗，如骨质疏松症、手足抽搐、佝偻病、骨质增生，也可应用于儿童、孕妇、哺乳期妇女、绝经期妇女及老年人的补钙。
本文探讨了复方葡萄糖酸钙口服液的制备与质量控制。
关键词：复方葡萄糖酸钙口服液；制备；质量控制复方葡萄糖酸钙口服液是一个复方制剂，主要有效成分包括葡萄糖酸钙和乳酸钙，主要起补充钙质作用。
钙对人体的生理活动、新陈代谢有重要作用，特别是对骨骼的发育有着重要功效，能参与骨骼的形成和骨折后骨组织的重建，并且钙对机体的肌肉收缩、神经传递、凝血功能都有着重要作用，同时钙也可降低毛细血管的通透性。
在临床上，复方葡萄糖酸钙口服溶液主要用于预防和治疗钙缺乏所导致的相关疾病，如可用于骨质疏松、手足抽搐症、佝偻病，也可用于儿童妊娠和哺乳期妇女、绝经期妇女或老年人的钙补充。
因此，复方葡萄糖酸钙口服溶液主要起补充钙的作用。
一、复方葡萄糖酸钙口服液概述复方葡萄糖酸钙口服液主要成分是葡萄糖酸钙和乳酸钙，具有促进骨骼和牙齿的钙化形成，维持神经与肌肉的正常兴奋性和降低毛细血管通透性等作用。
用于预防和治疗钙缺乏症，为矿物质类非处方药药品，含葡萄糖酸钙和乳酸钙。
二、复方葡萄糖酸钙常见制备方法1、发酵法。
发酵法作为现今国内葡萄糖酸钙工业化生产方式中最常用的方法，具有快速发酵且易于控制及提取的特点。
该法使用的生产菌种为黑曲霉，利用其发酵时产生的葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶将发酵底物葡萄糖转化为葡萄糖酸，加入碳酸钙进行中和后再经精制工序制备出高纯度葡萄糖酸钙。