经颅磁刺激帕金森病模型小鼠体内神经干细胞的增殖

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经颅磁刺激在精神病学研究中的新进展

经颅磁刺激在精神病学研究中的新进展随着科技的不断发展，精神病学研究也逐渐受到了新技术的影响。

其中，经颅磁刺激（Transcranial Magnetic Stimulation, TMS）作为一种具有非侵入性的神经调控技术，在精神病学研究领域正迅速发展。

它通过对大脑神经元活动进行干预，可用于治疗精神病的相关症状，同时也为精神病的病理机制探索提供了新的视角。

一、经颅磁刺激的原理与应用经颅磁刺激的原理是利用磁场穿透颅骨，通过瞬间改变磁场的磁感应强度和方向，产生感应电流，从而对大脑神经元进行非侵入性的激活或抑制。

这项技术不需要手术操作，不会引起疼痛或不适感，对被试者的日常生活影响较小。

经颅磁刺激在治疗抑郁症、精神分裂症等精神疾病方面得到了广泛的应用。

临床研究表明，经颅磁刺激可以改善患者的心境和认知功能，减轻其相关症状，提高生活质量。

例如，对于抑郁症患者，经颅磁刺激可以调节大脑中与情绪有关的区域的活动，缓解患者的抑郁情绪。

对于精神分裂症患者，经颅磁刺激可以减少幻觉、妄想等阳性症状的表现。

二、经颅磁刺激在精神病病理机制研究中的应用除了在临床治疗中的应用，经颅磁刺激在精神病病理机制研究中也发挥着重要的作用。

利用这一技术，研究人员可以定点激活或抑制大脑中特定区域的神经元活动，从而观察其对精神病相关症状的影响，阐明病理机制。

例如，研究者使用经颅磁刺激技术刺激前额叶皮层，观察患有强迫症的患者是否具有症状改善。

实验结果显示，在刺激后，患者的强迫症状得到了显著缓解，证明了前额叶皮层在强迫症发病机制中的重要作用。

此外，经颅磁刺激还可以与其他研究技术相结合，如功能磁共振成像（Functional Magnetic Resonance Imaging, fMRI）、脑电图（Electroencephalogram, EEG）等，从不同层面上揭示精神病的神经生物学机制。

这些研究将有助于更深入地理解精神病的发生和发展过程。

三、经颅磁刺激的发展前景与限制经颅磁刺激作为一种新兴的精神病学研究技术，其发展前景广阔。

帕金森病模型细胞中p53、增殖细胞核抗原表达与细胞增殖和凋亡

doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.07.003帕金森病模型细胞中p53㊁增殖细胞核抗原表达与细胞增殖和凋亡①李　季　郭继东　张晓杰　杨　宏　李尊严　宋天琦　孙　微　冯　伟　李大伟(北华大学第一临床医院,吉林132011) 中图分类号　R74 文献标志码　A 文章编号　1000⁃484X (2020)07⁃0780⁃05①本文为吉林省卫生技术创新项目(No.2016J078)和吉林省教育厅十三五”科学技术(JJKH20170047K)资助项目㊂作者简介:李　季,男,硕士,主治医师,主要从事神经系统变性病及神经免疫方面的研究,E⁃mail:99831817@㊂通讯作者及指导教师:郭继东,男,硕士,主任医师,硕士生导师,主要从事神经系统变性病及神经免疫方面的研究㊂[摘　要]　目的:探讨帕金森病(PD)模型细胞中p53㊁增殖细胞核抗原(PCNA)表达与细胞增殖㊁凋亡相关性及病理变化特征㊂方法:以不同浓度的1⁃甲基⁃4⁃苯基⁃吡啶离子(MPP +)诱导PC12细胞损伤,建立PD 模型,PC12细胞分为空白组和MPP +不同浓度组(0.5mmol /L㊁1mmol /L㊁2mmol /L)共4组,采用MMT 方法检测每组细胞生存率;DCFH⁃DA 检测活性氧水平(ROS);吖啶橙和溴化乙锭(AO /EB)凋亡染色及酶联免疫吸附法(ELISA)测定单链DNA;Western blot 检测各组p53和PCNA 表达㊂结果:随MPP +浓度增加,与对照组相比,PC12细胞生存率及该细胞凋亡呈剂量依赖性降低(P <0.05或P <0.01),ROS 生成逐渐增加与剂量正相关(P <0.05或P <0.01);PCNA 蛋白表达逐渐减少,其上游信号p53蛋白表达逐渐升高㊂结论:MPP +诱导PC12细胞凋亡可能机制之一是通过p53介导PCNA 降解实现的㊂[关键词]　帕金森病;MPP +;PC12细胞;增殖细胞核抗原;p53Expressions of p53and proliferative cell nucleoantigen with neuronal proliferation and apoptosis in a cell model of Parkinson′s diseaseLI Ji ,GUO Ji⁃Dong ,ZHANG Xiao⁃Jie ,YANG Hong ,LI Zun⁃Yan ,SONG Tian⁃Qi ,SUN Wei ,FENG Wei ,LI Da⁃Wei .The First Hospital of Beihua University ,Jilin 132011,China[Abstract ]　Objective :To investigate the pathological characteristics and correlation of expressions of p53and proliferating cellnuclear antigen (PCNA)with neuronal proliferation and apoptosis in a cell model of Parkinson′s disease.Methods :The cell model ofParkinson′s disease was created by rat pheochromocytoma (PC12)cells with different concentrations of MPP +(0,0.5,1,2mmol /L).The MTT assay was performed to detect the cells viability,reactive osygen species (ROS)was detected by DCFH⁃DA assay.AO /EB staining and ELISA assay were done to confirm cells apoptosis and ssDNA respectively.Western blot was performed to detect the expressions of p53and PCNA.Results :The measurements revealed a decrease in cell viability and a increase in apoptotic neurons and DNA fragmentation (P <0.05or P <0.01)following the exposure of PC12cells to MPP +in a dose⁃dependent manner,and exposure to MPP +induced a significant increase in ROS production (P <0.05or P <0.01)in PC12cells.The results also revealed that PCNAprotein expression was downregulated in PC12cells treated with MPP +,whereas p53expression was upregulated.Conclusion :One of the possible mechanisms of MPP +⁃induced PC12apoptosis is achieved by p53⁃mediated PCNA degradation.[Key words ]　Parkinson′s disease;MPP +;PC12cell;Proliferating cell nuclear antigen;p53 帕金森病(Parkinson′s disease,PD)是神经系统常见变性疾病,其主要病理变化为中脑黑质多巴胺能神经元逐渐变性凋亡,进而递质失衡而出现运动障碍为主的临床症状[1]㊂国内外文献证明外源性及内源性神经毒素诱导多巴胺能神经细胞变性凋亡在PD 发病机制中发挥重要作用,而氧化应激在PD病理过程中起重要作用[2,3]㊂1⁃甲基⁃4⁃苯基⁃1,2,3,6⁃四氢吡啶(MPTP)是诱发PD 的常见环境毒素㊂MPTP 通过血脑屏障后代谢生成毒性1⁃甲基⁃4⁃苯基吡啶离子(MPP +),进入线粒体抑制呼吸链进而生成大量活性氧(reactive osygen species,ROS),最终导致多巴胺能神经细胞变性凋亡[4]㊂氧化应激导致多巴胺能神经细胞变性凋亡的分子机制至今未完全阐明,但DNA 氧化损伤在PD 病理过程中具有重要作用[5]㊂目前,体外培养黑质多巴胺能神经元非常困难,因此可行的方案是以能大量增殖的类神经细胞作为对象来探讨MPP+细胞毒作用机制㊂PC12细胞系是一种分化程度较低的肿瘤细胞,从大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤分离得到,在形态㊁生理和生化功能等方面相似于正常神经细胞,且具有中等水平的多巴胺β⁃羟化酶活性㊂诱导PC12细胞损伤模型,模拟体内自由基诱导细胞凋亡的过程,可作为多种神经性疾病的体外细胞模型[6]㊂本研究建立了MPP+诱导的PC12细胞PD模型,探讨p53㊁PCNA表达与细胞增殖㊁凋亡及病理变化特征,探索多巴胺能神经元在氧化应激病理条件下变性凋亡的分子机制,为PD治疗提供新靶点及策略㊂1　材料与方法1.1　材料1.1.1　主要试剂　DMEM高糖培养液及胎牛血清购于美国Gibco公司;胰蛋白酶购于瑞士LONZA公司; MPP+㊁2′,7′⁃二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH⁃DA)㊁二甲基亚砜(DMSO)购于美国Sigma公司;小鼠抗大鼠PCNA单克隆抗体和p53抗体购于美国BD公司;辣根过氧化物酶包被抗小鼠二抗购于美国Pierce公司;单链DNA试剂盒购于美国Chemicon Int公司㊂1.1.2　细胞株　PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)购于中科院上海细胞库㊂1.1.3　主要仪器　CO2培养箱购于美国Cellstar公司;超净工作台购于北京亚泰科隆公司;2S⁃1型紫外线消毒车购于上海跃进医疗器械厂;液氮生物容器购于上海跃进医疗器械厂;电热恒温水浴箱购于上海跃进医疗器械厂;4℃冰箱购于中国西门子公司;荧光倒置显微镜购于日本欧林帕斯公司;550型酶标仪购于美国Bio⁃Rad公司;流式细胞仪购于美国BD公司, FACSCantoⅡ㊂1.2　方法1.2.1　PC12细胞复苏与传代　从液氮罐中取出PC12细胞冻存管,常规消毒㊂无菌条件下稍松动瓶盖后拧紧,封口膜封闭,快速置于37℃水浴箱中摇动融化㊂细胞解冻后取出冻存管,超净台中常规消毒后取出细胞悬液,经离心处理后弃上清,重悬细胞并接种于25cm2培养瓶中,放置于37℃㊁5%CO2㊁90%湿度培养箱中进行培养㊂倒置显微镜观察细胞生长状态,细胞增殖达80%左右汇合进行传代㊂弃培养液并用PBS清洗细胞,然后用0.25%胰蛋白酶消化贴壁细胞㊁细胞计数㊂将细胞悬液在1000r/min㊁18℃的条件下离心5min㊂根据计数结果调整细胞密度为1×105个/ml接种传代培养㊂传至3代细胞状态良好时选取对数生长期的细胞进行试验㊂1.2.2　MPTP诱发PC12损伤模型的建立　参考文献[6]建立MPTP诱发PC12损伤模型㊂取对数生长期PC12细胞,调整至1×105个/ml,吸取0.2ml 接种于96孔板中,放入37℃㊁5%CO2培养箱中孵育24h,弃去培养液,加入浓度为0(空白)㊁0.5㊁1㊁2mmol/L的MPP+的DMEM培养基200μl/孔,37℃㊁5%CO2培养箱中继续孵育24h,每孔加入10μl MTT(5mg/ml),37℃㊁5%CO2培养箱培养4h,弃掉孔内液体,每孔加入150μl DMSO并轻轻振荡以充分溶解甲臜颗粒,在酶标仪570nm处测量各孔的吸光度(OD)值,观察MPP+对PC12细胞的毒性损伤作用㊂1.2.3　细胞内ROS检测　取对数生长期PC12细胞,按损伤模型进行分组,加入无胎牛血清稀释的DCFH⁃DA(终浓度20μmol/L),37℃继续培养30min㊂收集各组细胞,流式细胞仪530nm波长处检测ROS㊂1.2.4　细胞凋亡检测　DNA氧化应激损伤使用AO/EB凋亡染色进行检测㊂PC12细胞处理完成后加入荧光染料AO/EB,在荧光显微镜下观察细胞核形态㊂细胞核完整且被染成绿色的为存活细胞,核浓缩的为早期凋亡细胞,浓缩和碎裂且染成橘红色的为晚期凋亡细胞㊂同时,采用酶联免疫单链DNA 试剂盒检测各组细胞DNA损伤,加入抗单链DNA 单克隆抗体和过氧化物酶标记的二抗,在酶标仪405nm处测各孔吸光值㊂1.2.5　Western blot检测p53和PCNA表达　各组细胞经相应处理培养结束后,收集细胞并裂解提取蛋白,测定浓度㊂参考文献[6]方法,进行各组蛋白电泳分离㊁转膜㊁洗膜㊂β⁃actin作为内参㊂小鼠抗大鼠PCNA单克隆抗体孵育过夜,经TBST洗涤,加入二抗室温孵育2h显影㊂1.3　统计学处理　每组实验重复3次,相同条件设4个平行,结果以x±s表示㊂统计分析采用单因素方差分析或t检验,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2　结果2.1　不同浓度MPP+对细胞存活率影响　采用不同浓度MPP+(0㊁0.5㊁1㊁2mmol/L)处理PC12细胞,反应48h后,使用MTT法检测细胞活力,结果显示细胞活力随MPP+浓度增加而相应减少,呈剂量依赖性,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05, P<0.01),见图1㊂2.2　细胞ROS测定　MPP+诱导PC12细胞产生ROS,可以通过荧光染料DCFH⁃DA由流式细胞仪测定㊂DCFH⁃DA 可通过细胞膜并在细胞内酯酶作用下生成DCFH㊂在细胞内ROS 作用下,DCFH 生成具有较强荧光性的DCF㊂结果显示随着MPP +浓度增强,荧光强度逐渐增强,与对照组比较,差异具有统计学意义(P <0.01),见图2㊂2.3　A0/EB 凋亡染色检测细胞凋亡　单链DNA 测定进一步证实随着MPP +浓度增加,PC12细胞变图1　不同浓度MPP +对PC12细胞存活率影响Fig.1　Effects of different concerntration of MPP +onviability of PC12cellsNote:Compared with control,*.P <0.05,**.P <0.01.图2　不同浓度MPP +对PC12细胞产生ROS 的影响Fig.2　Effects of different concentration of MPP +onROS productionNote:Compared with control,**.P <0.01.图3　A0/EB 染色观察不同浓度MPP +对PC12细胞凋亡影响(×200)Fig.3　Effects of MPP +on apoptosis of PC12cells (×200)Note:Compared with control,*.P <0.05,**.P <0.01.性凋亡亦随之增加,与对照组比较,差异具有统计学意义(P <0.05,P <0.01),见图3㊁4㊂2.4　MPP +对PCNA 和p53蛋白表达的影响　采用Western blot 检测了PD 细胞模型中PCNA 和p53蛋白的表达变化㊂结果表明当使用1mmol /L MPP +处理PC12细胞后,在12㊁24㊁48h MTT 测得的细胞活力分别为87%㊁77%㊁61%,而PCNA蛋白表达水平图4　不同浓度MPP +对PC12变性凋亡DNA 变化的影响Fig.4　Effects of MPP +on DNA fragments of apoptosis ofPC12cell linesNote:Compared with control,*.P <0.05,**.P <0.01.图5　MPP +对细胞活力和PCNA 表达影响Fig.5　Effects of MPP +on viability and expression ofPCNA of PC12cellsNote:Compared with control,*.P <0.05,**.P <0.01.图6　不同浓度MPP +对p53和PCNA 蛋白表达影响Fig.6　Effects of different concentration of MPP +on expr⁃ession of p53and PCNANote:Compared with control,*.P <0.05,**.P <0.01.亦逐渐降低㊂随着MPP+浓度增加,p53蛋白表达水平逐渐增加PCNA蛋白表达水平逐渐降低,见图5㊁6㊂3摇讨论PD临床主要特征为肌肉强直㊁运动减少㊁震颤及姿势步态异常,主要由中脑黑质多巴胺能神经元变性凋亡导致,其机制至今未明[7]㊂但更多证据表明,氧化应激促发了一系列凋亡信号,参与了PD多巴胺能神经元变性凋亡过程[8]㊂多巴胺能神经元因富含铁和脂质以及多巴胺自身代谢的原因,更易受氧化攻击[9,10]㊂PD尸检和动物实验均证实DNA 氧化损伤更易出现在中脑黑质多巴胺能神经元,也证实了DNA氧化损伤是PD的重要病理机制[7]㊂DNA对细胞死亡和存活具有决定作用,因常遭受体内外有害物质攻击,因此DNA修复对于保持完整性极为重要㊂本研究在PD细胞模型中显示随MPP+浓度增加,ROS生成增多,呈剂量依赖性,多巴胺能神经元凋亡随之增加,进一步证实氧化应激与细胞凋亡关系密切,以及氧化应激参与PD病理过程,与国外报道一致[6,10]㊂PCNA作为多功能蛋白,在染色体重组及DNA 修复和细胞周期调控中具有重要作用[8]㊂PCNA无内在酶活性,可通过调节多种蛋白如周期蛋白依赖性激酶㊁周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21等发挥其调节功能㊂PCNA在DNA氧化损伤修复中亦有重要作用[9]㊂实验证实随MPP+浓度和剂量增加, PCNA蛋白表达呈剂量依赖性减少,支持此蛋白参与了MPP+对多巴胺能神经元毒性损伤过程㊂另一方面,PCNA对维持DNA稳定性,抵御各种致病因素包括氧化应激对DNA的损伤具有重要作用,表达较少加重DNA在病理条件下损伤[10]㊂酶联免疫单链DNA测定同样证实了随着MPP+浓度增加,DNA 损伤逐渐加重㊂提示PCNA表达降低与DNA氧化损伤程度具有相关性㊂转录因子p53调节一系列靶基因,参与细胞生物过程,包括细胞周期㊁DNA修复㊁细胞凋亡和细胞应激反应[11]㊂在神经组织,p53介导细胞凋亡主要通过DNA损伤途径实现㊂氧化应激激活转录因子p53,引起DNA在氧化应激状态下损伤,其损伤机制在PD中未见报道㊂p53是PCNA上游信号蛋白,与特定序列结合后,调节此蛋白表达㊂高浓度野生型p53抑制PCNA启动子,减少PCNA蛋白生成[12]㊂在PD动物模型中已证实p53高表达与多巴胺能神经元变性凋亡密切相关,p53抑制因子可有效阻止PD模型中多巴胺能神经元在氧化应激状态下损伤[13]㊂本实验在PD细胞模型中,MPP+增加ROS 生成和p53表达,证实氧化应激激活p53使其高表达,及p53参与PD病理多巴胺能神经元变性凋亡过程,与文献报道一致[14,15]㊂本实验同样证实了随着MPP+增加PCNA表达减少,且与p53表达量呈负相关;随着PCNA表达减少,DNA氧化损伤逐渐加重,多巴胺神经元凋亡逐渐增加㊂这些实验提示在PD模型中,PCNA介导细胞凋亡可能是PD多巴胺能神经元变性凋亡分子机制之一,且ROS/p53/PCNA信号途径参与这一过程㊂通过PC12细胞建立的PD模型病理变化特征,我们推测MPP+介导多巴胺能神经元氧化损伤可能机制之一是通过p53/PCNA信号途径实现的㊂氧化应激激活p53,减少下游信号蛋白PCNA生成,加重DNA氧化损伤,导致多巴胺能神经元变性凋亡㊂这一分子机制需进一步证实,可为PD治疗提供新分子靶点和策略㊂参考文献:[1]　Subramaniam SR,Chesselet MF.Mitochondrial dysfunction andoxidative stress in Parkinson′s disease[J].Prog Neurobiol,2013, 106⁃107:17⁃32.[2]　Park J,Lim CS,Seo H,et al.Pain perception in acute model miceof Parkinson′s disease induced by1⁃methyl⁃4⁃phenyl⁃1,2,3,6⁃tet⁃rahydropyridine(MPTP)[J].Mol Pain,2015,11:28. [3]　Zhang TM,Yu SY,Guo P,et al.Nonmotor symptoms in patientswith Parkinson disease:A cross⁃sectional observational study[J].Medicine,2016,95:e5400.[4]　Luo Y,Li X,Liu T,et al.Senkyunolide H protects against MPP(+)⁃induced apoptosis via the ROS⁃mediated mitogen⁃activated protein kinase pathway in PC12cells[J].Environ Toxicol Pharmacol,2019,65:73⁃81.[5]　Xicoy H,Wieringa B,Martens GJM.The role of lipids inParkinson′s disease[J].Cells,2019,8(1):27.[6]　张艳梅.MPP+诱导的PC12细胞帕金森病模型的蛋白质组学研究[D].长春:吉林大学,2007.Zhang YM.Proteomic studies of PD model induced by MPP+in PC12cells[D].Changchu:Jilin Univ,2007.[7]　Zhang S,Wang R,Wang G.Impact of dopamine oxidation on do⁃paminergic neurodegeneration[J].ACS Chem Neurosci,2019,10: 945⁃953.[8]　钟德芳.帕金森病痴呆的临床特征及诊治研究进展[J].中外医学研究,2016,14(7):163⁃164.Zhong DF.Progress in clinical features and diagnosis of Parkinson Disease dementia[J].Chin Fore Med Res,2016,14(7):163⁃164.(下转第788页)Biochem Mol Biol,2007,37(2):107⁃127.[11]　Doucoure S,Cornelie S,Patramool S,et al.First screening ofAedes albopictus immunogenic salivary proteins[J].Insect MolBiol,2013,22(4):411⁃423.[12]　Ribeiro JM,Martin⁃Martin I,ArcãB,et al.A deep insight into thesialome of male and female aedes aegypti mosquitoes[J].PLoSOne,2016,11(3):1⁃20.[13]　李方站,程金芝,王　涛,等.白纹伊蚊唾液腺34ku⁃2基因克隆与原核表达[J].中国病原生物学杂志,2015,10(2):165⁃169.Li FZ,Chen JZ,Wang T,et al.Cloning and prokaryotic expressionof the gene coding for salivary secreted protein34ku⁃2fromAedes alpictus[J].J Pathog Biol,2015,10(2):165⁃169. [14]　杜志强,林　涛.重组Lv⁃SWD蛋白的表达㊁纯化与细菌结合试验[J].湖北农业科学,2014,53(5):1189⁃1190.Du ZQ,Lin T.Expression,purification and bacteria binding test ofa recombinant Lv⁃SWD protein[J].Hubei Agricul Sci,2014,53(5):1189⁃1190.[15]　郭秀霞,王怀位.蚊虫先天免疫分子机制的研究进展[J].中国寄生虫与寄生虫病杂志,2015,33(1):52⁃58.Guo XX,Wang HW.Research progress on the molecularmechanisms of mosquito innate immunity[J].Chin J ParasitolParasit Dis,2015,33(1):52⁃58.[16]　王燕红,王举梅,江　红,等.蚊虫对病原体的免疫机制研究[J].中国媒介生物学及控制杂志,2013,24(6):477⁃482.Wang YH,Wang JM,Jiang H,et al.Research advances onimmune mechanism against pathogens in mosquitoes[J].Chin JVector Biol Control,2013,24(6):477⁃482.[17]　Liu J,Cao X.Cellular and molecular regulation of innateinflammatory responses[J].Cell Mol Immunol,2016,13(6):711⁃721.[18]　沈雪莹,方传雷,刘志华.NOD蛋白与免疫应答[J].中国免疫学杂志,2017,33(6):801⁃810.Shen XY,Fang CL,Liu ZH.NOD proteins and immune response[J].Chin J Immunol,2017,33(6):801⁃810.[19]　Ribeiro JM,Arca B,Lombardo F,et al.An annotated catalogue ofsalivary gland transcripts in the adult female mosquito,Aedesaegypti[J].BMC Genomics,2007,8:6.[20]　Arca B,Lombardo F,Francischetti IM,et al.An insight into thesialome of the adult female mosquito Aedes albopictus[J].InsectBiochem Mol Biol,2007,37(2):107⁃127.[21]　Hastings AK,Uraki R,Gaitsch H,et al.Aedes aegypti NeSt1protein enhances Zika virus pathogenesis by activating neutrophils[J].J Virol,2019,93(13):eD0395⁃19.[22]　Surasombatpattana P,Ekchariyawat P,Hamel R,et al.Aedesaegypti saliva contains a prominent34⁃kDa protein that stronglyenhances dengue virus replication in human keratinocytes[J].JInvest Dermatol,2014,134(1):281⁃284.[23]　孙　宇.白纹伊蚊雌蚊唾液腺蛋白质组学初步分析[D].贵阳:贵阳医学院,2012.Sun Y.Proteomic analysis of the salivary glands for the blood⁃fedand unfed Aedes albopictus[D].Guiyang:Guiyang MedCollege,2012.[收稿2019⁃04⁃17　修回2019⁃06⁃19](编辑　倪　鹏)(上接第783页)[9]　Sanders LH,Greenamyre JT.Oxidative damage to macromoleculesin human Parkinson disease and the rotenone model[J].Free Radic Biol Med,2013,62:111⁃120.[10]　De March M,De Biasio A.The dark side of the ring:role of theDNA sliding surface of PCNA[J].Crit Rev Biochem Mol Biol,2017,52:663⁃673.[11]　Li DW,Li GR,Zhang BL,et al.Damage to dopaminergic neuronsis mediated by proliferating cell nuclear antigen through the p53pathway under conditions of oxidative stress in a cell model ofParkinson′s disease[J].Int J Mol Med,2016,37:429⁃435. [12]　郭冰洁,苑广信,张　静,等.鹿骨胶水解物抗氧化活性及对H2O2损伤PC12细胞保护作用的研究[J].安徽农业科学,2019,47(7):193⁃196.Guo BJ,Yuan GX,Zhang J,et al.Study on antioxidant activity ofhydrolysates of Deer Bone Glue and its protective effect on PC12cells induced by H2O2[J].J Anhui Agric Sci,2019,47(7):193⁃196.[13]　王丹萍.6⁃羟基多巴胺诱导的SH⁃SY5Y细胞帕金森病模型差异蛋白质组学研究[D].长春:吉林大学,2010.Wang DP.Proteomic studies of model of Parkinson diseaseinduced by6⁃Hydroxydopamine in SH⁃SY5Y cells[D].Changchun:Jilin Univ,2010.[14]　裴　媛,马　进,李　姗.帕金森病模型的研究进展[J].中国老年学杂志,2014,34(2):543⁃547.Pei Y,Ma J,Li N.Research progress on Parkinson disease model[J].Chin J Gerontol,2014,34(2):543⁃547.[15]　Das D,Biswas A,Roy A,et al.Cognitive impairment in idiopathicParkinson′s disease[J].Neurol India,2016,64:419⁃427.[收稿2019⁃08⁃08　修回2019⁃10⁃22](编辑　张晓舟)。

重复经颅磁刺激治疗帕金森病的研究进展

现代实用医学2019年4月第31卷第4期• 429 ••专家论坛•重复经颅磁刺激治疗帕金森病的研究进展胡巧霞，张宝荣doi:10.3969/j.issn,1671-0800.2019.04.001【中图分类号】R742【文献标志码】C【文章编号】随着人口老龄化，帕金森病(PD)发病率有逐年上升的趋势，给家庭和社会都带来了严峻挑战。

多巴类药物替代仍为PD主要治疗手段,但随着病程进展，苗物治疗后期会出现疗效减退、异动症及精神症状等并发症。

因此，探寻无创且能避免不良反应的新疗法是当前神经科学研究的热点。

重复经颅磁刺激(rTMS)具有无创、安全性好、操作简单等特点，已被广泛应用于P D的治疗。

目前对治疗起决定作用的参数国际上仍存在较大的争议，甚至有些研究结果互相矛盾。

本文就rTMS治疗PD的研究做一综述。

1rTM S的分类和原理U分类根据频率不同，rTMS可以分为低频和高频。

低频rTMS:通过一组H z的低频率的多序列脉冲作用于大脑皮质神经元，在脑深部产生感应电流，以降低皮质局部或远处的神经元兴奋性，是一种抑制性刺激模式。

高频rTMS:通过一组多5H z的高频率的多序列脉冲作用于大脑皮质神经元，在脑深部产生感应电流，以提高皮质局部或远处的神经元兴奋性，是一种兴奋性刺激模式。

0爆发式电刺激 (TBS)是一种新型模式化的rTMS,基础模式包含每〇.2s发放1次,基础为5Hz,其中3次为50Hz爆发式刺激串。

按照治疗过程中间隔时间的不同分为间歇性 TBS(iTBS)和连续性 TBS(cTBShiTBS每 10 秒发放20个循环的持续2 s的刺激串，中间有间歇;而cTBS则在20或40 s内持续发放100或200个刺激串，中间无间歇。

cTBS可以降低运动皮层兴奋作者单位：315000宁波，宁波大学医学院附属医院(胡巧霞)；浙江大学医学院附属第二医院(张宝荣）通信作者：张宝荣，教授，主任医师，博士生导师。

帕金森病模型大鼠经颅磁刺激运动诱发电位波幅的研究

作者简介孙丽君,硕士研究生,研究方向帕金森病。

内蒙古医学院附属医院神经内科。

j @。

【论著】帕金森病模型大鼠经颅磁刺激运动诱发电位波幅的研究孙丽君,赵世刚,李春阳(内蒙古医学院附属医院神经内科,内蒙古　呼和浩特　010050)【摘要】　目的:探讨帕金森病(PD )模型大鼠经颅磁刺激运动诱发电位波幅的变化(a mp litude of mo t or ev oked poten ti al ,M EP a mp )。

方法:实验分两组,健康S p rague -Dawley (S D )雄性大鼠40只,随机分为2组:①实验组(P D 模型组)28只,②对照组(生理盐水组)12只,选取右侧黑质致密部(s ubstan ti a nigra p ars comp act a,S Nc)与中脑腹侧背盖(ventra tegmental area,VT A )为手术靶点,实验组注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备帕金森病动物模型,对照组注射同等剂量的生理盐水,于制模前、制模后1周、3周分别行双下肢运动诱发电位波幅检查。

结果统计采用S PSS 11.5统计软件处理,P <0.05为差异有显著性。

结果:术后1周,实验组大鼠左下肢MEP amp 与对照组比较无统计学意义(P >0.05),实验组自身左右侧T M S -MEP 比较,左下肢波幅较右下肢增加(P <0.05);制模前、术后1周、术后3周实验组大鼠左下肢MEP amp 进行性增加(P <0.01),实验组大鼠右下肢波幅三个时间点比较无统计学意义(P >0.05);对照组大鼠左侧及右侧下肢波幅三个时间点比较均无显著性差异(P >0.05)。

结论:PD 模型大鼠损毁侧皮层兴奋性增加,PD 模型大鼠病情越重、病程越长,波幅增加越明显。

【关键词】　帕金森病模型;大鼠;经颅磁刺激;运动诱发电位;波幅[中图分类号]　R742.5 [文献标识码]　A [文章编号] 0369(2007)11-0195-04The study of am plitude of m otor evoked poten t i a l of M otor evoked poten ti a lsby tran scran i a l ma g neti c stim ul a ti on for m odel ra ts of Pa rk i n son ’s disea seS U N Li -jun,Z H A O Shi -g ang,L I Chun -yang(The Affilia t ed Hos p ital of I nner Mong olia Medical C ollege,I nner Mong olia 010050,China )【Abstra c t 】　O bjec ti ve:The ai m of the research is t o m ake c lear if PD ha s amplitude of mo t or ev oked potentia l of T M S -M EPabnor m ality and if amplitude of mot or ev oked potential changes with the devel op ing sta t e of an illne ss .M ethod s :Ra ts were rando m ly a ssigned i nto e ithe r expe ri m ental gr oup (n =28)or control gr oup (n =12),select the ope rated targe t in right subst anti a nigra parscompac ta (S Nc )and ri ght ventra teg mental area (VT A ).S Nc and VT A we re injected each 2μl (4μg /μl 6-OHDA in PBS )soluti on of 6-OHDA i n ex pe ri m enta l group.Sa line containing 2%vita m in C with is o m etry i njec t ed to sa m e locati on in control group.Exam i 2na ting amp litude of motor ev oked po t enti a l(M EP amp)before operati on,a week and t hree weeks la t e r after ope ra tion .Sta tistica l ana ly 2sis was done using SPSS11.5s oft w are .Re sults :The re we re no sig nificant diffe rence of T MS -M EP (P >0.05)bet ween t he ex pe ri 2menta l gr oup and control gr oup bef o re operation .Left lo wer li mb co mpared w ith right l owe r li m b for t he expe ri m ental group and the con 2trol grou p before o pe ra ti on has n o si gnificant difference (P >0.05).A week after o p era ti on,T here wa s n o si gnificant difference of M EP amp of left l o wer li m b bet ween the ex peri mental group and the control group (P >0.05).T here was n o significant di ffe rence of T M S -MEP of rig ht l owe r li mb be t w een the ex pe ri m enta l grou p and the control grou p (P >0.05).T hree weeks afte r o pe ra ti on,M EP amp of left lo we r li mb wa s significantly high in the ex p eri mental gr oup (P <0.01)as compa red with the contr ol group .There was n o significant difference of T MS -M EP of right lo we r li m b bet ween the expe ri m ental gr oup and the contr ol group (P >0.05).I n the ex 2pe ri m ental gr oup,MEP a mp of left lo wer li mb significantly highe r than right (P <0.01).In t he contr ol grou p,the re was no signi ficant difference be t ween left lo we r li m b and ri ght l o wer li mb w ith respec t t o M EP a mp ,In the ex pe ri m ent a l group of l eft l o we r li mb,compa ri 2s on before opera ti on and aft e r ope ra ti on one week and t h ree weeks late r,M EP amp was gradually increa sed (P <0.01).Con clu si o n s:Our study revealed the cort ex excitabilitywas i ncrea sed .PD mode l Foll owing st a te of the ill ness g o tworse and the course of disease g ot l onger in P D mode l rats,t he cortex excit ability was more inc reased .【Key wor d s 】Pa rkins on ’s dis ea se mode l ;Ra ts ;Transcranial m agnetic sti mula ti on;Motor evoked potentia ls ;A mp lit ude of mot o rev oked potenti a l 以往的观点认为P D 的病变限于锥体外系统,随着神经电生理学的发展,发现P D 除锥体外系病变外,其它神经通路也受累,对帕金森病T MS -MEP 的研究,目前尚无一致结论,且均为对P D 病人的T MS -MEP 的研究,因临床病人的混杂因素多,很难达到一致性,为此,本实验拟采用6O D 右侧黑::Em ail :h e uan sun s oh u .co m -H A质致密部和中脑腹侧背盖两点注射法制备偏侧帕金森病大鼠模型,对模型大鼠于不同时间点行T MS-MEP检测,观察帕金森病是否存在运动传导通路的损害,以及T MS-MEP是否随着病情变化。

不同频率经颅磁刺激治疗帕金森病的研究进展

ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｃｔｉｏｎｓｉｎａｇｅｄｍｉｃｅ￣］．ＪＭｏｌＮｅｕｒｏｓｃｉ，２０１４，５２（２）：２８６ — ２９３．［２３】ＤｕＬＬ，ＸｉｅＪＺ，ＣｈｅｎｇＸＳ，ｅｔａｌ，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｓｉｒｔｕｉｎ１ａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃｅｒｅｂｒａｌ
可靠的治疗方法。但同样存在一个重要问题，对治疗起决定作用的参数国际上至今无统一的标准，甚至存在较
大的争议，许多研究结果互相矛盾，这给临床工作带来
血流和代谢嘲。２．１高频ｒＴＭＳ对ＰＤ的作用机制（１）诱导脑内多巴胺的释放。Ｏｈｎｉｓｈｉ等圄研究发现，在ＰＤ模型猴子的初级运动皮质区（Ｍ１区）给予５ＨｚｒＴＭＳ的刺激，可促进
［２４］ＢｒｅｍｎｅｒＪＤ，ＮａｒａｙａｎＭ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＥＲ，ｅｔａ１．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅｒｅｄｕｃ — ｔｉｏｎｉｎｍａｊｏｒｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＡｍＪＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０００，１５７（１）：１１５ — １１８．
【关键词】帕金森病；经颅磁刺激；物理治疗技术；大脑皮层／病理学；电生理学

经颅磁场刺激(TMS)综述

经颅磁场刺激（TMS）综述21世纪是脑科学世纪，认识脑，保护脑，创造脑是现代科学中的重大课题，本项目涉及到人类健康第一杀手的脑血管疾病的治疗与康复。

经颅磁场刺激是神经科学中科研，诊断，治疗的新技术，能够无创无痛直接刺激大脑皮质，调节大脑皮质的兴奋性，可塑性，促使大脑皮质和刺激回路的神经元发生生理生化和细胞结构的修复性改变，达到大脑神经功能康复的目的。

TMS技术的刺激参数包括：刺激部位，刺激强度，刺激时间，间歇时间，刺激频率，刺激模式，6个主要参数的排列组合能模拟大脑神经网络的信息编码模式，要达到刺激效果，必须对神经解剖生理，神经调节机理，神经损伤修复原理有深刻理解，必须熟练掌握肌电图诱发电位技术，经颅磁刺激技术，康复治疗技术，康复评定技术。

神经功能成像技术的应用在飞速发展。

脑科学研究领域出现了四大技术。

1是正电子发射断层扫描PET技术，由计算机建立与能量代谢有关的大脑功能图像。

2是功能性磁共振成像技术fMRI，射频信号与血红蛋白的含氧量有关，因此能对不同脑区的活动给出非常灵敏的测量。

3是脑磁图MEG，利用低温超导的高灵敏度传感器检测磁场来给大脑功能区定位。

具有很高的时间分辨率和空间分辨率。

4是经颅磁场刺激TMS技术，利用电磁感应原理，颅外的磁场通过颅骨在颅内感应出电流，无损无痛的刺激大脑局部神经，通过观察刺激的效果来给刺激区功能定位。

最重要的是TMS不仅是大脑功能检测定位的诊断设备而且是调节大脑功能的治疗设备。

脑神经刺激是一门专业技术，包括术中大脑电刺激、迷走神经刺激、大脑深部刺激、小脑电刺激、经颅电刺激和电休克等，这些都要进行麻醉或手术。

唯一只有TMS能在觉醒状态、无损无痛的刺激大脑局部、‘直接引发或干扰神经功能。

大脑是一个神经网络，各个脑功能区区既有分工又有协作，TMS可以直接研究神经网络功能活动的因果关系。

TMS主要工作机理为，1由刺激引发清晰的生理反应如肌肉收缩：2把刺激作为虚拟损伤，干扰大脑正在进行的活动：3双向调节神经的兴奋性，引起神经内分泌、神经免疫机制的变化发挥长效治疗作用。

银杏叶提取物促进帕金森病模型小鼠室管膜下区神经干细胞增殖作用的研究

ＰＮＮｓｎ阳性细胞；ＣＡ、ｅｔｉ银杏叶提取物治疗２，ＣＡＮｓｎ８ｄＰＮ／ｅｔ双标细胞的数量较模型组明显增多。结论：ｉ银杏叶提取物可促进帕金森病模型小鼠脑内金森病；小鼠；神经干细胞；室管膜下区
（．ｅｉｎｅｉｈｎｓＭｄｉ，ｅｉ００９２ｏＪｎｏｅｅｏＢｉｎｎｅｉｈｎｓｅｉｎ，ＢｉｎＵｉｒｔｏＣｉｅｅｉｎＢｉｎ１０２；．ｎａｇＣｌｇｅｉＵｉｒｔｏＣｉｅＭｄｃｅｊｇｖｓｙｆｅｃｅｊｇＤｌｆｊｇｖｓｙｆｅｉ
ｔｏｓｒｅｔｅｉａｔｏｎＮＳｓｐｏｉｒｔｎａｄｄｆｒｎｉｔｎｉｕｖｎｒｕａｏｅ（Ｖｏｅｏｐｓｅｓｄ．ｏｂｅｖｈｍｐｃｓｆＢｏＣｒｌｅａｉｎｉｅｅｔｉｎｓｂｅｔｃｌｒｎＳＺ）ｎｔｐｏｉｉｅＧＥｆｏｆａｏｉｚｈｔ
分成正常组、型组和银杏叶提取物治疗组（称治疗组）采用ＭＰＰ腹腔注射建立帕金森病小鼠模型，模简。Ｔ利用免疫
组化单标和双标技术观察银杏叶提取物对小鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖分化的影响。结果：银杏叶提取物
治疗７ｄ，脑室室管膜下区的ＰＮＮｓｉ侧ＣＡ、ｅｔｎ阳性细胞较模型组明显增多，可见大量从背外侧角沿胼胝体排列的并
ＲｅｕｔＯｎｔｅ７ｈｄｙ，ｈｕｅｓｏＣＮＡｎｓｉｏｉｉｅｃｌｎＧＢＥｔｅｔｎｏｐｗｅｅｉｃｅｓｄａｐｒｎｌｓｌｓ：ｈｔａｔｅｎｍｂｒｆＰａｄＮｅｔｐｓｔｅｌｉｎｖｓｒａｍｅｔｇｕｒｎｒａｅｐａｅｔｒｙｉａｅａＶＺｃｍｐｒｄｗｉｈｓｎｍｏｅｒｕ．ｓｆｕｄｔａｕｅｆＰｎｌｔｒｌＳｏａｅｔｔｏｅｉｄｌｇｏｐＩｗａｏｎｈｔａｎｍｂｒｏＣＮＡｎｓｉｏｉｖｅｌｒａｇｄｈｔａｄＮｅｔｎｐｓｔｅｃｌａｒｎｅｉｓ

经颅磁刺激的临床应用简介1985 年Barker 首次发表了TMS 的论文报道1992 年出现了第一台重频磁刺激器定义

经颅磁刺激的临床应用简介1985 年Barker 首次发表了TMS 的论文报道1992 年出现了第一台重频磁刺激器定义：磁刺激是利用时变电流流入线圈，产生时变磁场，在组织内感应出电流，使某些可兴奋组织产生兴奋的无创性诊断和治疗技术。

例如经颅磁刺激( transcranial magnetic stimulation,TMS) 设备两个部分组成能量发生器刺激线圈TMS 分类TMS 按刺激脉冲不同分为三种刺激模式单脉冲TMS(sTMS) ：sTMS 产生的弱电流场引起皮层去极化双脉冲TMS(pTMS) ：p TMS 中第一个刺激引起神经元的活化后, 可以降低神经元对下一个刺激的反应阈重复性TMS(rTMS) 慢rTMS(≤1Hz ) 慢刺激模式趋向于引起皮层的抑制快rTM S(≥5Hz) 快刺激模式则引起兴奋TMS 的参数设置运动阈值（MT ）:刺激皮质运动区引起对侧手指产生50uV 运动诱发电位时的最小刺激。

手指收缩时的运动阈值为AMT ，手指静止时的运动阈值为RMT ，MT 代表皮质兴奋性，常为刺激量的基本单位，具有个体差异性检测时常用单刺激，治疗常用重复刺激rTMS 刺激量：以百分比的MT 或仪器最大输出百分比表示刺激频率(Hz) ：每秒钟刺激的个数（0.1-100 ）刺激时间：一个序列、串刺激时间刺激间歇：每串刺激中间的停止时间治疗时间：（刺激时间+刺激间歇）x 重复次数刺激部位：皮质功能区或脑电图10-20 系统疗程：一般每周5天，每天刺激1-2 次，根据病情可减量延长治疗磁刺激的优点磁刺激没有电流密度十分集中的区域，受试者无疼痛感肌肉骨骼等不良导体对脉冲磁场进入人体没有衰减作用，磁刺激可达深部组织，刺激深部神经磁刺激操作简单，位置可变磁刺激无痛，无创，安全性好安全性应用T MS 首先要保证被试的安全,因此应该遵从国际公认的技术要领。

国际经颅磁刺激学会( International Society of Transcranial Magnetic Stimulation ,IST S) 网址上有关于安全性和技术要领的大量的规范2009 年最新的安全指南禁忌症：1. 佩戴心脏起搏器者2. 严重心脏疾病，严重躯体疾病3. 体内有金属植入物4. 有颅内压增高者5. 孕妇，儿童6. 患者脑内靠近刺激线圈处有金属材料7.有癫痫发作风险: 重度颅脑疾病、创伤、特发性癫痫、近期服用三环类等降低痫性发作阈值副作用rTMS 技术是安全的，但仍有潜在的副作用：高频rTMS( ＞10 Hz) 可能诱发癫痫，特别对有癫痫家族史者要慎重，必要做时要配备所有抢救设施。

神经细胞的增殖和分化研究

神经细胞的增殖和分化研究神经系统是人体中非常重要的一部分，它包括了大脑、脊髓、周围神经等组织，控制着人体的各种生理功能。

而神经细胞则是构成神经系统的基本单位，能够传递神经冲动，实现信息的传递和处理。

然而，由于神经细胞的数量和位置对人体的正常运作至关重要，因此人们已经开始研究神经细胞的增殖和分化，以期更好地了解神经系统的构成和功能。

神经细胞是一种非常特殊的细胞，它具有高度的可塑性，可以通过增殖和分化来不断更新和补充神经系统的组织。

尽管神经细胞在大脑和脊髓中的增殖速度相对缓慢，在其他区域，如嗅球和迷路中，神经细胞的增殖速度则比较快。

研究表明，神经细胞的增殖和分化与神经系统的发育和修复密切相关。

目前，研究神经细胞增殖和分化的方法主要包括以下几个方面：1. 经典的卵壳膜移植法：这种方法主要是通过卵壳膜的移植来诱导神经干细胞分化为神经元。

由于卵壳膜中包含了一些细胞外基质和生长因子，可以帮助神经干细胞转化为神经元，因此这一方法被广泛应用于神经细胞的分化研究。

2. 体外培养法：这种方法主要是将神经干细胞或神经前体细胞在适当的条件下进行培养，使其分化为神经元。

由于体外培养可以控制细胞的条件和环境，因此可以得到较为纯净的神经元群体，从而更好地研究神经细胞的生理和病理过程。

3. 基因编辑技术：这种技术主要是通过基因编辑的方式，改变神经细胞的基因组和表观遗传学特征，从而影响其增殖和分化。

例如，可以针对某些关键基因进行编辑，促进神经干细胞向神经元分化，或者抑制神经干细胞的转化为非神经元细胞。

在研究神经细胞增殖和分化的过程中，科学家们发现了一些重要结论。

首先，神经细胞的增殖和分化与神经干细胞的存在和起始状态密切相关。

在神经干细胞的存在下，神经细胞能够源源不断地增殖和分化，并不断刷新神经系统的组织。

此外，神经干细胞向神经元分化的过程并不是一帆风顺的。

它需要通过各种调节因子和信号通路的作用，进行严格的调控和协调。

因此，如果在神经干细胞分化的过程中出现异常，就会导致神经元数量减少或功能异常，甚至导致神经系统疾病。

经颅磁刺激治疗帕金森病影响因素的研究进展

异性，受多种因素影响，包括内存因素和外在因素。本文将ｔｏｒｃｏｄｅｘ，ＰＭＣ）、辅助运动区（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｍｏｔｏｒａｒｅａ，ＳＭＡ）
对ＴＭＳ治疗ＰＤ的影响因素的最新进展综述如下。
以及头眼协调运动区等脑区组成。根据患者不同的临床特
见的变性疾病，其药物治疗存在一定的局限性，而且随着病ｒＴＭＳ刺激大脑皮质辅助区在３０～４５ｍｉｎ内可使ＰＤ症状恶
程进展逐渐衰退，部分患者对多巴胺治疗不能耐受。经颅化，且持续１周左右。目前，对ＴＭＳ频率的选择存有较大争
１磁刺激线圈的选择
点刺激不同脑区，其中最常见的是刺激Ｍ１区。刺激Ｍ１区
磁刺激仪本身性能，尤其是线圈的各项参数，决定所产可引起对侧上肢不自主收缩，易于定位，而且多数选择刺激
医学创新２０１１年１月箜鲞篁塑
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经颅磁刺激治疗帕金森病影响因素的研究进展
唐强胡非非王艳高潇
【关键词】经颅磁刺激；帕金森病；影响因素
帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）属于中枢神经系统常而，Ｂｏｙｌａｎ… 曾报道高频（１０ｎｚ）、高强度（１５０％运动阈值）

神经干细胞的增殖与分化调控机制研究

神经干细胞的增殖与分化调控机制研究神经干细胞是具有自我复制和分化潜能的干细胞，可以分化为多种神经元和神经胶质细胞。

神经干细胞的增殖和分化调控是神经发育和再生的基础，对于神经系统相关的疾病的治疗和康复具有重要意义。

本文将介绍神经干细胞增殖和分化的调控机制，包括细胞内信号通路、外环境因素以及表观遗传学等方面的研究进展。

一、细胞内信号通路神经干细胞增殖和分化的调控主要是由一系列复杂的信号通路调节的。

其中，Wnt、Notch和Hedgehog等信号通路起着重要的作用。

Wnt信号通路是最为熟知的神经干细胞生长因子之一，对神经干细胞的增殖和分化都具有调节作用。

Wnt信号的激活可以导致β-catenin的稳定和聚集，从而激活与之相关的基因，包括c-myc、cyclin D1等。

同时，Wnt信号还可以通过Axin-LRP5/6-Fz复合物的形成促进神经干细胞的自我更新。

Notch信号通路也是调节神经干细胞生长和分化的重要信号通路之一，通过Notch与Delta或Jagged等配体的结合，激活Notch受体并抑制神经干细胞向神经元的分化，同时促进胶质细胞的分化。

Hedgehog信号通路是最近发现的重要的神经干细胞增殖和分化调控因子，具有复杂的信号调节机制。

Hedgehog信号通路与Ptc、Smo、Gli等分子相互作用，调节神经干细胞的增殖和分化。

目前Hedgehog信号通路在神经系统肿瘤的治疗方面已经得到了广泛的应用。

二、外环境因素神经干细胞增殖和分化的调控不仅受到内部信号通路的调节，还受到外部环境因素的影响。

细胞外基质、化学物质、神经因子等因素都是影响神经干细胞增殖和分化的重要因素。

细胞外基质的组成和刚度对于神经干细胞增殖和分化的影响已经成为了一个新兴的研究领域。

细胞条件培养下，刚度为1-100kPa的基质可以促进神经干细胞向神经元的分化；而刚度为1-10kPa的基质则可以促进神经干细胞向胶质细胞的分化。

此外，细胞外基质中的天然物质如胶原蛋白、Laminin等可以通过与细胞表面分子相互作用来调节神经干细胞增殖和分化。

经颅磁电刺激在帕金森病中的应用价值分析

广元，６２８００１）
【摘要】目的：探讨经颅磁电刺激（ＴＭＳ）在帕金森病（ＰＤ）治疗中的应用价值。方法：选取我院在２０１２年１月至２０１４年１月收治的ＰＤ患者４０例，随机分为干预组和对照组，对照组常规治疗，干预组在常规治疗的基础上加用ＴＭＳ治疗，并比较两组疗效。结果：
运动功能，使其生活能力下降，从而产生严重抑郁情绪，同时有研究显示
可能与５一羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）等递质紊乱有关ｔ３］，而无论与何种因素
有关，ＨＡＭＤ评分的显著下降表明ＴＭＳ可显著改善帕金森患者伴随的抑郁状态，并对促进疾病的恢复具有重要作用。综合实验结果，ＴＭＳ在帕金森疾病的治疗中可增强皮层内抑制而延
１．２治疗方法
后的中枢静息期（ＣＳＰ）和焦虑评分ＨＡＭＤ的变化情况均显著优于仅行
常规治疗的对照组（Ｐ＜Ｏ．０５），其中ＣＳＰ可反映大脑运动皮质区的抑制作
用，ＣＳＰ指标的升高可提示ＴＭＳ具有加强皮层内抑制，改善帕金森患者
长中枢静息期，并可显著减轻患者伴随的抑郁状态，而这均对促进帕金
行评分，总分＜８分为正常，８～２０分为可能抑郁；２０～３５分为肯定抑郁，＞３５分为严重抑郁，得分越高说明患者抑郁程度越明显。１．４统计学方法
今日健康
・
２０１４年６月
第ｌ３卷第６期

神经干细胞治疗帕金森病的

神经干细胞可以通过两种方式进行移植：胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞具有更强的分化能力，可以分化为任何类型的神经细胞。而成
体干细胞则主要分化为特定类型的神经细胞。
移植后的神经干细胞可以与宿主大脑建立突触联系，传递神经信号，从而改善帕金森病的症状。
神经干细胞治疗帕金森病的实验研究
实验研究已经证明，神经干细胞移植可以显著改善帕金森病的症状，包括减少震颤、提高运动能力和改善生活质量。
疗效评估困难
目前缺乏有效的手段来评估神经干细胞治疗的疗效，需要进
一步研究。
伦理与法律问题
伦理原则
法律监管
在利用人类胚胎干细胞进行研究时，必须遵循不伤害、尊重和公正的伦理原则。
各国对干细胞研究的法律监管存在差异，需要遵守相关法律法规。
知情同意
资源公平分配
在进行干细胞治疗之前，必须确保患者或其家属充分了解治疗的风险和可能的副作用，并签署知情同意书。
然而，实验研究也发现了一些问题，如移植细胞的存活率较低、免疫排斥反应等。这些问题需要进一步研究和解决。
实验研究还发现，神经干细胞移植可以减少脑部多巴胺能神经元的死亡，促进新的多巴胺能神经元的生成，并改善大脑的神经网络连接。
神经干细胞治疗帕金森病的前景与展望
神经干细胞治疗帕金森病是一种具有潜力的治疗方法，但仍需要进一步的研究和临床试验来验证其安全性和有效性。
神经干细胞治疗帕金森病
目录
• 神经干细胞简介 • 帕金森病的现状与治疗 • 神经干细胞治疗帕金森病的研究 • 神经干细胞治疗帕金森病的挑战
与伦理问题 • 神经干细胞治疗帕金森病的临床
试验与案例
01
神经干细胞简介
神经干细胞的定义与特性

MPTP诱导帕金森病小鼠的神经干细胞治疗与干细胞微环境研究共3篇

MPTP诱导帕金森病小鼠的神经干细胞治疗与干细胞微环境研究共3篇MPTP诱导帕金森病小鼠的神经干细胞治疗与干细胞微环境研究1近年来，神经干细胞治疗作为一种新颖的治疗方法备受关注。

神经干细胞治疗通过将健康的神经干细胞移植至损伤的神经系统中来代替受损的神经元，以达到治疗神经系统疾病的目的。

然而，在神经干细胞治疗中，关键问题是如何提高神经干细胞的成活率和分化程度。

因此，研究神经干细胞微环境对神经干细胞治疗的影响非常重要。

本文将会讨论MPTP诱导帕金森病小鼠的神经干细胞治疗和干细胞微环境研究。

MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢嘧啶）是一种常用的诱导帕金森病小鼠的实验药物。

由于MPTP可导致脑内多巴胺水平下降，因此MPTP诱导帕金森病小鼠可作为帕金森病的模型动物。

据研究表明，神经干细胞治疗可以显著改善MPTP诱导帕金森病小鼠的症状。

Irving Weissman等研究小组用人类胎儿神经干细胞治疗MPTP诱导帕金森病小鼠，结果显示移植的神经干细胞可分化成多巴胺能神经元，并增加了多巴胺水平。

Robin Sawamoto等研究小组同样用人类胎儿神经干细胞治疗MPTP诱导帕金森病小鼠，结果表明移植的神经干细胞可以分化成多巴胺神经元，提高了小鼠运动能力。

神经干细胞治疗的一个关键问题是提高神经干细胞在宿主组织中的成活率。

干细胞微环境是影响神经干细胞成活率的一个重要因素。

干细胞微环境包括细胞外基质以及周围细胞等一系列的因素。

Lutolf等研究小组发现，通过调节干细胞周围的生长因子、细胞外基质和细胞间信号通路等因素可以调控神经干细胞的命运，进而提高神经干细胞的成活率。

李婷等研究小组发现，通过调控骨髓干细胞对内皮细胞的诱导分化可以促进神经再生。

除了骨髓干细胞，造血干细胞也是一种重要的干细胞资源。

Ji-Hyeon Lee等研究小组发现，通过从造血干细胞中分离出CD11b+细胞，可以获得具有神经干细胞特征的干细胞。

经颅磁刺激的临床应用简介1985 年Barker 首次发表了TMS 的论文报道1992 年出现了第一

经颅磁刺激的临床应用简介1985 年Barker 首次发表了TMS 的论文报道1992 年出现了第一台重频磁刺激器定义经颅磁刺激的临床应用简介1985 年Barker 首次发表了TMS 的论文报道1992 年出现了第一台重频磁刺激器定义：磁刺激是利用时变电流流入线圈，产生时变磁场，在组织内感应出电流，使某些可兴奋组织产生兴奋的无创性诊断和治疗技术。

例如经颅磁刺激( transcranial magnetic stimulation,TMS) 设备两个部分组成能量发生器刺激线圈TMS 分类TMS 按刺激脉冲不同分为三种刺激模式单脉冲TMS(sTMS) ：sTMS 产生的弱电流场引起皮层去极化双脉冲TMS(pTMS)：pTMS 中第一个刺激引起神经元的活化后, 可以降低神经元对下一个刺激的反应阈重复性TMS(rTMS) 慢rTMS(≤1Hz ) 慢刺激模式趋向于引起皮层的抑制快rTMS(≥5Hz) 快刺激模式则引起兴奋TMS 的参数设置运动阈值（MT ）:刺激皮质运动区引起对侧手指产生50uV 运动诱发电位时的最小刺激。

手指收缩时的运动阈值为AMT ，手指静止时的运动阈值为RMT ，MT 代表皮质兴奋性，常为刺激量的基本单位，具有个体差异性检测时常用单刺激，治疗常用重复刺激rT MS 刺激量：以百分比的MT 或仪器最大输出百分比表示刺激频率(Hz) ：每秒钟刺激的个数（0.1-100 ）刺激时间：一个序列、串刺激时间刺激间歇：每串刺激中间的停止时间治疗时间：（刺激时间+刺激间歇）x 重复次数刺激部位：皮质功能区或脑电图10-20 系统疗程：一般每周5天，每天刺激1-2 次，根据病情可减量延长治疗磁刺激的优点磁刺激没有电流密度十分集中的区域，受试者无疼痛感肌肉骨骼等不良导体对脉冲磁场进入人体没有衰减作用，磁刺激可达深部组织，刺激深部神经磁刺激操作简单，位置可变磁刺激无痛，无创，安全性好安全性应用TMS 首先要保证被试的安全,因此应该遵从国际公认的技术要领。

不同强度低频重复经颅磁刺激对帕金森病大鼠行为学的影响

不同强度低频重复经颅磁刺激对帕金森病大鼠行为学的影响何晓阔;尤春景;王云甫;艾志兵【期刊名称】《中国生物学文摘》【年(卷),期】2006(020)011【摘要】目的：探讨0．2Hz刺激频率的低频重复经颅磁刺激改善帕金森模型大鼠行为学的最佳刺激强度．方法：实验于2003—09／2004—08在同济医学院康复医学实验室进行．取50只SD大鼠用6-羟基多巴损毁右侧中脑黑质致密部多巴胺能神经元，建立部分损毁帕金森模型．16只造模成功大鼠随机分为0％，35％，55％，75％最大刺激强度4组，每组4只，进行0．2Hz重复经颅磁刺激，强度分别为最大刺激量2T的0％，35％，55％，75％，连续14d．在刺激前、刺激1，14d后观察模型大鼠对阿朴吗啡（0．5mg／kg）诱发的旋转行为和前肢功能实验的影响．结果：16只大鼠进入结果分析．①阿朴吗啡诱发的旋转实验结果：不同强度的单次刺激不能降低帕金森病大鼠阿朴吗啡诱发的旋转行为；14次刺激后55％，75％最大强度刺激组的潜伏期是（4．9±0．85），（5．2±0．81）min，长于0％和35％最大强度刺激组[（3．2±0．85），（3.8±0．85），P〈0．05]，但二者间没有明显差异（P〉0．05）；55％，75％最大强度刺激组的平均转速为（1．98±0．73），（2．19±1．26）r／min，均比35％最大刺激组减慢[（3．54±1．38）r／min，P〈0．05]，二者之间差异不明显（P〉0．05）．【总页数】1页(P18)【作者】何晓阔;尤春景;王云甫;艾志兵【作者单位】郧阳医学院附属十堰市太和医院神经内科,湖北省十堰市442000;华中科技大学同济医学院附属同济医院康复医学科,湖北省武汉市430022【正文语种】中文【中图分类】Q189【相关文献】1.不同强度低频重复经颅磁刺激预处理对癫痫大鼠痫性发作的影响 [J], 王顺先;许可2.低频重复经颅磁刺激对帕金森病大鼠行为学的影响 [J], 孙秀巧;王彦永;王铭维;孙海民;郭记宏;时军;王培芝3.不同剂量左旋多巴对帕金森病大鼠神经行为学的影响 [J], 丁宏娟;何建成;王文武4.不同强度低频重复经颅磁刺激对帕金森病大鼠行为学的影响 [J], 何晓阔;尤春景;王云甫;艾志兵5.不同剂量鱼藤酮对拟帕金森病模型大鼠行为学及纹状体多巴胺含量的影响 [J], 张如意;张丽;吴燕川;张兰;李林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

经颅磁刺激研究及应用进展

经颅磁刺激研究及应用进展
张新;李建军
【期刊名称】《中国康复理论与实践》
【年(卷),期】2006(012)010
【摘要】经颅磁刺激(TMS)是一种非侵入性无痛性的神经系统检测和治疗技术.通过TMS可以检测运动诱发电位(MEP)、中枢运动传导时间(CMCT)、皮质静息期、运动皮质兴奋性等,对中枢神经系统疾病的诊断、评价和监测有重要意义,可提供疾病病理生理机制方面的重要信息.重复TMS具有的调节病变区皮质兴奋性等复杂机制,使其在抑郁症、帕金森病、癫痫、脊髓损伤、卒中等疾病的实验性和应用性治疗研究方面具有的巨大潜在价值,并逐渐被应用于临床神经学、神经康复学和精神心理学领域.
【总页数】4页(P879-882)
【作者】张新;李建军
【作者单位】首都医科大学康复医学院,北京市,100068;首都医科大学康复医学院,北京市,100068
【正文语种】中文
【中图分类】R74
【相关文献】
1.重复经颅磁刺激和经颅直流电刺激在卒中患者上肢运动功能恢复中应用的研究进展 [J], 朱琳
2.经颅直流电刺激和经颅磁刺激在脑卒中上肢运动功能恢复的应用进展 [J], 柯嘉洽;邹晓佩;王春燕;商建青;张少填;黎洪展;周先举
3.重复经颅磁刺激治疗神经病理性疼痛的进展 [J], 邹志鑫;卢惠苹
4.基于生物学标志物的经颅磁刺激治疗脑卒中作用机制的研究进展 [J], 徐硕(综述);贾杰(审校)
5.重复经颅磁刺激治疗慢性失眠障碍的研究进展 [J], 刘雅妮;隋晓杰;白银霞;韩子亮;陈彦超
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深部脑磁刺激对帕金森病模型大鼠运动症状治疗的安全性评价

深部脑磁刺激对帕金森病模型大鼠运动症状治疗的安全性评价刘俊华;王勇;王颜颜;王晓民【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2017(38)2【摘要】Objective To explore the security via DMS to treat motor symptoms in hemi-parkinsonian rats.Methods Rats were injected with 6-hydroxydopamine (6-OHDA) into right striatum to establish unilateral parkinsonian model.Sham group received the same volume of normal saline by the same procedure.After screened via apomorphine,the successful parkinsonian rats were randomly grouped into model,δ rhythm DMS treatment (DMS-δ) and γ rhyt hm DMS treatment (DMS-γ).Among each DMS treatment group,40 minutes trains of DMS were administered daily for 4 weeks.Cylinder tests were conducted to detect motor outcomes.Body weight determination,peripheral blood lymphocytes classification & counting,HE staining were executed to evaluate the security of DMS.Results ①The lesioned side forelimb usage ratio in Sham and DMS-γ groups were significantly higher than that in Modelgroup.②There was no significant difference of body weight between each group,indicating that DMS had no significant effects on bodyweight.③There was no significant difference of the number and percentage of total lymphocytes & T cells between each group,while the natural killer (NK) cells number and percentage in DMS-δ group weresignif icantly higher than that in Model group.④Results of HE staining for major organs showed no significant histopathological change.Conclusion DMS-γ treatment alleviated bilateral limb asymmetry in PDrats.Meanwhile,DMS treatment showed no significant sideeffects,indicating that DMS showed satisfactory security in the treatmentof motor symptoms in PD rats.%目的评估深部脑磁刺激(deep-brain magnetic stimulation,DMS)对单侧帕金森病(Parkinson`s disease,PD)模型大鼠运动障碍的治疗作用及DMS治疗的安全性.方法立体定位注射六羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)于大鼠右侧纹状体制备单侧帕金森病模型,假手术对照组(Sham组)依据同样方法注射0.9%(质量分数)氯化钠注射液.利用阿扑吗啡筛选模型后,造模成功的动物采用均衡随机化分组的方式分为模型对照组(Model组)、δ节律DMS治疗组(DMS-δ组)、γ节律DMS治疗组(DMS-γ组),其中两种DMS 治疗组行每天40 min、持续4周的DMS治疗.通过碰壁实验检测大鼠运动行为,通过大鼠体质量的测定、外周血淋巴细胞的分类及计数、主要组织器官的苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin staining,HE)染色评价DMS治疗的安全性.结果①检测大鼠运动行为显示,DMS-γ治疗组损伤侧的肢体利用率显著高于Model组,差异具有统计学意义(P<0.05),而DMS-δ组相较于Model组差异无统计学意义(P>0.05).②Sham组、Model组、DMS-δ组、DMS-γ组大鼠体质量差异均无统计学意义(P>0.05).③Sham组、Model组、DMS-δ组、DMS-γ组大鼠外周血总淋巴细胞与T细胞的数量和比例差异均无统计学意义(P>0.05).DMS-δ组大鼠的自然杀伤(natural killer,NK)细胞数量和比例相较于Model组有显著改善.④HE染色显示,DMS对大鼠主要器官包括心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、睾丸均未造成明显的组织病理变化.结论 DMS-γ治疗可改善PD大鼠双侧肢体不对称性运动障碍,且DMS对PD大鼠运动行为的治疗中无明显不良反应,表明DMS在对PD大鼠运动症状的治疗中具有很好的安全性.【总页数】8页(P260-267)【作者】刘俊华;王勇;王颜颜;王晓民【作者单位】首都医科大学基础医学院神经生物学系,北京 100069;教育部神经变性病重点实验室,北京 100069;北京脑重大疾病研究院,北京 100069;教育部神经变性病重点实验室,北京 100069;北京脑重大疾病研究院,北京 100069;首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系,北京 100069;首都医科大学基础医学院神经生物学系,北京 100069;教育部神经变性病重点实验室,北京 100069;北京脑重大疾病研究院,北京 100069;首都医科大学基础医学院神经生物学系,北京 100069;教育部神经变性病重点实验室,北京 100069;北京脑重大疾病研究院,北京 100069【正文语种】中文【中图分类】R742.5【相关文献】1.丘脑底核深部脑刺激术对帕金森病非运动症状影响效果的研究进展 [J], 刘秀梅;张婷婷;孙莉2.高频重复经颅磁刺激治疗帕金森病非运动症状的疗效 [J], 于苏文;郑秀琴;陈升东;崔红霞3.脑深部电刺激治疗帕金森病非运动症状的疗效分析 [J], 张宇清;李勇杰;庄平;李建宇;马敬红4.重复经颅磁刺激治疗帕金森病非运动症状的研究概况 [J], 张志伟;胡玉英;胡跃强5.重复经颅磁刺激用于帕金森病非运动症状治疗的研究进展 [J], 周哲;沈夏锋;吴毅;吴雪娇;荣积峰;陈真因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。