中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建

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达出分子量均为１９ｋＤ的ｃＰ和ＣＲＰ。将二者从凝胶中切下，乳化后免疫新西兰大耳兔４次，获得了两种蛋白的多克隆抗体。ＥＬＩＳＡ检测表明，ＣＷＭＶＣＰ和ＣＲＰ抗血清的效价分别为１：４０９６和１：２０４８。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明该抗血清只与感染ＣＷＭＶ的小麦有特异性反应，而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含Ｔ３启动子的引物通过ＲＴ—ＰＣＲ扩增出ＣＷＭＶＲＮＡ２全长片段，经Ｔ／Ａ克隆连接到ｐＭＤ１８一Ｔ，获得质
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＴｈｅｉｒＲＮＡ２ＩｎｆｅｃｔｉｏｎＣｌｏｎｅｓ
ＫｏｎｇＦａｎｈｕｉ，ＴｕｏＪｉａｎｂｏ，ＷｅｉＪｉａｏ，ＴａｎｇＷｅｉ，ＬｉＸｉａｎｇｄｏｎｇ，ＣｈｉＳｈｅｎｇｑｉ，ＴｉａｎＹａｎｐｉｎｇ，ＹｕＪｉｎｆｅｎｇ ‘
中国小麦花叶病毒ＣＰ和ＣＲＰ蛋白的原核表达、抗血清制及ＲＮＡ２侵染性克隆构建
孔凡惠，脱建波，魏娇，唐伟，李向东ｈ，迟胜起，田延平，于金凤
（１．山东农业大学植物保护学院植物病理学系，山东泰安２．青岛农业大学农学与植物保护学院，山东青岛２７１０１８；
山东农业科学２０１５，４７（８）：６～１０
ＤＯＩ：１０．１４０８３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１— ４９４２．２０１５．０８．００２
ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
关键词：中国小麦花叶病毒；衣壳蛋白（ＣＰ）；富含半胱氨酸蛋白（ＣＲＰ）；抗血清制备；侵染性克隆
中图分类号：Ｓ１８８＋￥４３５．１２１．４文献标识号：Ａ文章编号：１００１ — ４９４２（２０１５）０８ — ０００６ — ０５
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｆＰｏｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉａｎ２７１０１８，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙａｎｄＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６１０９，Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔＣｈｉｎｅｓｅｗｈｅａｔｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ（ＣＷＭＶ）ｉｓａｆｕｒｏｖｉｕｓｒｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｂｙＰｏｌｙｍｙｘａｇｒａｍｉｎｉｓａｎｄｉｎ —
粒ｐＭＤ１８一Ｔ— ＣＷＭＶ— ＲＮＡ２。该质粒经ＸｂａＩ线性化后，利用Ｔ３ＲＮＡ聚合酶进行体外转录，转录产物摩
擦接种本氏烟，１５ ℃培养３天后，利用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ可从接种叶片中检测到瞬时表达的ＣＷＭＶＣＰ蛋白。
２６６１０９）
摘
要：中国小麦花叶病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｗｈｅａｔｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＣＷＭＶ）引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海
等地危害严重。本研究克隆了ＣＷＭＶ烟台分离物的衣壳蛋白（Ｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＰ）及富含半胱氨酸蛋白（Ｃｙｓｔｅ — ｉｎｅ —ｒｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）基因，并将其连接到原核表达载体ｐＥＨＩＳＴＥＶ，转化大肠杆菌Ｒｏｓｅｔｔａ。经ＩＰＴＧ诱导，表
ｄｕｃｅｓｓｏｉｌ—ｂｏｒｎｅｗｈｅａｔｍｏｓａｉｃｄｉｓｅａｓｅ．ＩｔｈａｓｃａｕｓｅｄｓｅｖｅｒｅｄａｍａｇｅｔｏｗｉｎｔｅｒｗｈｅａｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＹａｎｔａｉａｎｄ
ＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＡｎｔｉｓｅｒｕｍＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＷｈｅａｔ
ＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓ（ＣＷＭＶ）ＣＰａｎｄＣＲＰａｎｄ