电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究虎杖中白藜芦醇苷是一种具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等多种生物活性的天然产物。
本文通过对虎杖中白藜芦醇苷的提取分离工艺进行研究,旨在寻找一种高效、经济、环保的提取方法,为进一步开发利用虎杖资源提供科学依据。
我们需要选择适宜的提取溶剂。
根据文献报道,乙醇是一种常用的提取溶剂,具有良好的溶解性和萃取效果。
因此,我们选择乙醇作为虎杖中白藜芦醇苷的提取溶剂。
我们需要确定合适的提取方法。
常用的提取方法有浸提法、超声波提取法、微波提取法等。
经过比较,我们选择了浸提法进行实验。
具体操作步骤如下:取一定量的虎杖粉末,加入适量的乙醇溶液中,与溶剂充分接触,反复搅拌一段时间,使白藜芦醇苷充分溶解于乙醇中。
然后,用滤纸过滤得到提取液。
提取液中的乙醇可以通过旋转蒸发或冷冻浓缩等方法进行回收利用,以提高经济效益。
同时,为了进一步提高提取效果,可尝试不同浓度的乙醇溶剂、不同提取时间和不同提取温度等条件进行优化。
接下来,我们需要对提取液进行分离纯化。
常用的分离纯化方法有固相萃取、薄层色谱、高效液相色谱等。
根据白藜芦醇苷的理化性质,我们选择了高效液相色谱进行分离纯化。
通过调整流动相组成、流速和检测波长等参数,可以实现白藜芦醇苷的有效分离。
我们对提取得到的白藜芦醇苷进行结构鉴定和质量分析。
常用的鉴定方法有紫外-可见光谱、红外光谱、质谱等。
这些方法可以帮助我们确定白藜芦醇苷的化学结构和相对分子质量,从而确保提取分离的物质具有一定的纯度和活性。
虎杖中白藜芦醇苷的提取分离工艺研究是一项重要的科研课题。
通过选择合适的提取溶剂、优化提取条件,以及采用适当的分离纯化方法,可以获得高纯度、高活性的白藜芦醇苷制剂。
这对于虎杖资源的开发利用具有重要的意义,也为相关药物的研发提供了有力支持。
希望本研究能为虎杖资源的深度开发与利用提供一定的参考和指导。
紫外分光光度法测定虎杖中白藜芦醇的含量
摘要 : 目的 建立虎杖提取物 中白藜芦醇含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法, 测定波长为35n 。结果 检测 0 m
m 范 围 内与 吸 光 度 线 性 关 系 良好 ( = .9 )。 结 论 该 方 法 简 便 、 速 、 确 , 作 为提 取 过 程 中 的 l r 0 9 90 快 准 可
s e to hoo ty wa d p e t ee to v l n t f3 5 m . Re Ils he e wa g o i e rr l t s i wih i h p cr p tme r s a o t d wih a d tc in wa e e gh o 0 n slt T r s o d ln a e ai on h p t n t e
维普资讯
L HZ E E IIEA DM T RAME IAR SA C 0 O .9N . I IH NM DCN N A E I DC E E R H2 8V L 1 O 8 S 0
时 珍 国 医 国 药 20 0 8年 第 i 第 8期 9卷
rn e f ag o 3~1 g( = .9 ) o cuin T em to i l, pd ac rt 6 r 0 9 90 .C nls h e di s er i ,cua . o h s mp a e
K e r : oy o u cs iau R s earl UV s eto h tmer y WO ds P lg n m upd tm; e vrto ; p crp oo t y
N rh n aw a g C , a ca g3 0 3 , hn ) N nh n 3 0 1 C ia
Ab t a t Obe t e T s bi e d t m n t n m to r ev r rl n e t c o o g n m c sia m .M e o s U s r c : j c v o et l ht e r iai e df sea o i x a t f l o u u d t i a s h e o h or t r P y p u t d V h
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎 杖 中 自藜 芦醇 和 白藜 芦 醇 苷 的提 取及 含 量 测定
刘仁 旺, 滕增辉 , 张邦乐, 宦梦蕾, 杨 茜, 周四元 ( 军医 第四 大学药学系 药理学教 研室, 西安 7 03 陕西 1 3) 0
【 摘 要 】目的 : 建立同时测定 白藜芦醇和 白藜芦 醇苷含量 的
Ex r ci n fr s e a r la d o y a i t a to o e v r t o n p lr tn d f o g a k t e rm int no we d r io e n is h z m a d t d t r i to e e m na i n
d s n( at d 3 l e ) w si r ue pii h ei 4 f o a e l g cr n s v s a n o cd t ot z te td o m e
t c n lg fe t cin. e h oo o x a to y r t e t t o t n fr s e ar la d I t oa c n e to e v r t lh l o n p ld t s t e e a u t n i d x RES oy a i a v l ai n e . n h o ULTS:Un e h pi d rte o t — mi d c r mao a h c c n i o z h o tg p i o dt n, t e r tn i f r s e ar l e r i h ee t t me o e v rto n oy a i wa 6 8 mi . n,r s e t ey,a d t e a d p ld t s . n a d 4 7 mi n n e p c i l n h y v c u d b e a ae el w t n e e e c .T e e ain o i e r o l e s p r t d w l i h it r r n e h q t fl a f u o n e r s i o ee ni t f e v r t oy ai wee Y rg e s n frd t ra ain o s e ar la d p ld t r = o n o r o n n
虎杖的化学成分及药理作用研究进展
虎杖的化学成分及药理作用研究进展一、本文概述Overview of this article虎杖,作为一种传统中药材,自古以来就在我国的医药体系中占有重要地位。
近年来,随着现代科学技术的发展,对虎杖的化学成分及药理作用的研究日益深入,为其在现代医学中的应用提供了更为坚实的理论基础。
本文旨在综述虎杖的化学成分及其药理作用的研究进展,以期为虎杖的开发利用和临床应用提供有价值的参考。
Tiger cane, as a traditional Chinese medicinal herb, has held an important position in China's medical system since ancient times. In recent years, with the development of modern science and technology, research on the chemical composition and pharmacological effects of Polygonum cuspidatum has become increasingly in-depth, providing a more solid theoretical basis for its application in modern medicine. This article aims to review the research progress on the chemical components and pharmacological effects of Polygonum cuspidatum, in order to provide valuable references for the development, utilization,and clinical application of Polygonum cuspidatum.文章首先将对虎杖的主要化学成分进行概述,包括多糖、黄酮类化合物、蒽醌类化合物等,并对这些成分的结构特点进行简要介绍。
非水介质毛细管电泳导电检测虎杖中的白藜芦醇
第1 9卷 第 6 期 20 0 2年 6 月
应 用 化 学
CHI NES ouRN AL OF AP I EJ PL ED cHEM I RY
VoI 9 No.6 _1
Jn 2 0 u . 02
非水 介 质 毛 细 管 电泳 电导 检 测 虎 杖 中 的 白藜 芦 醇
Байду номын сангаас
毛细 管 电泳 ( E) 一种新 型 的高新 分离 分析 方 法 , 目前 多 在水 溶 液 中完成 , 求 被分 析物 具有 c 是 但 要
一
定 的亲水 性 , 使其应 用受 到 限制.非 水毛 细管 电泳 ( NAc ) 但拓 宽了毛 细管 电泳 ( E) E不 c 分析领 域 , 增
加 了可供优 化 的实验参 数 , 而且 可使用更 高 的 电压和离 子强度 , 因而有更 高 的分 离度 和灵 敏度 .电化学 检 测 以其 结构 简单 , 法 比较灵 活“ , 于非水 毛细 管 电泳 具有 更 大的检 测优 势 和发展 前 景 .白藜芦 方 一对
郑 妍 鹏 李 晓 东 莫金 垣 谢 天 尧 李凤 屏 李 娜
广州 507) 1 2 5
( 山大 学 化 学 与 化 学 工 程 学 院 中
美t 词 白藜 芦醇 . 杖 , 虎 分离 检 测 , 水 舟质 毛 细 管 电泳 非
中图分类号 : 5 06 8
文献标识码 A
文章编号 :0 00 1 (0 2 0 —5 50 1 0 5 8 20 )60 8 —3
电泳 条件 : 细管柱在 使用前 用 01mo/ OH、 和运 行 电泳介 质溶液 分别 洗 约 5mi, 毛 . lLNa HO n 每次
进样 后用 运行缓 冲溶 液洗柱 3ri.进 样采 用重力 进样 方式 , n a 进样 高度 为 1 m, 5c 进样 时间 为 1 , 离 0s分 电 压为 一1 V.实 验在恒 温 ( 5℃) 恒湿 ( 8k 2 、 相对 湿度 7 ) O 的实验条件 下进行 . 样 品分析 与加 标 回收实 验 : 最 佳条件 下 , 在 取样 品溶 液不 经稀 释直 接 进样测 定 , 回归 方程计 算 出 由
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定一、本文概述本文旨在探讨虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法及其含量测定技术。
虎杖作为一种具有广泛药用价值的天然植物,其中含有的白藜芦醇和白藜芦醇苷是其主要活性成分,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此,研究虎杖中这两种成分的有效提取和准确测定方法对于深入理解虎杖的药理作用以及优化其临床应用具有重要意义。
本文将综述当前虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取技术,包括溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等,并评价其优缺点。
本文还将介绍含量测定的常用方法,如高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等,并探讨其准确性和可靠性。
通过本文的综述,旨在为虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的深入研究和应用提供有益的参考。
二、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法虎杖,作为一种具有丰富生物活性的中草药,被广泛用于传统医学中。
其内含的白藜芦醇和白藜芦醇苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性,因此,对这两种成分的提取和含量测定具有重要的意义。
以下将详细介绍虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法。
我们需要新鲜的虎杖根茎,确保其来源清洁、无污染。
随后,将虎杖根茎进行清洗、干燥和粉碎,以便后续的提取操作。
由于白藜芦醇和白藜芦醇苷均具有一定的极性,因此,我们常选用极性溶剂如甲醇、乙醇等进行提取。
这些溶剂能够有效地溶解并提取出虎杖中的目标成分。
常用的提取方法包括浸泡提取、回流提取和超声波辅助提取等。
考虑到效率和提取效果,我们通常采用回流提取法。
具体操作如下:将粉碎后的虎杖粉末与提取溶剂混合,置于回流装置中,加热回流一定时间,使溶剂充分与原料接触,从而充分提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
提取完成后,需要对提取液进行处理,以去除其中的杂质,提高目标成分的纯度。
常用的处理方法包括过滤、浓缩和干燥等。
通过以上步骤,我们可以有效地从虎杖中提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
这为后续的含量测定和进一步研究提供了基础。
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究虎杖中白藜芦醇苷是一种具有多种生物活性的天然化合物,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。
为了充分利用虎杖中的白藜芦醇苷并满足市场需求,研究人员进行了白藜芦醇苷的提取和分离工艺研究。
白藜芦醇苷是一种存在于植物中的多元醇类化合物,具有较低的溶解度,因而在提取和分离过程中需要采用适当的方法。
目前常用的提取方法有超声波辅助提取、浸泡提取、水蒸气蒸馏提取等。
其中,超声波辅助提取是一种较为高效的提取方法,它利用超声波的机械作用和热效应来破坏细胞壁,促进白藜芦醇苷的释放。
在超声波辅助提取过程中,首先需要将虎杖样品粉碎成适当的颗粒大小,以增加提取效率。
然后将虎杖样品与适量的溶剂(如乙醇、甲醇等)混合,放入超声波提取仪中进行提取。
超声波的作用下,虎杖中的白藜芦醇苷会逐渐释放到溶剂中。
提取时间和温度是影响提取效果的重要因素,一般来说,提取时间越长、温度越高,提取效果越好。
但是过长的提取时间和过高的温度可能会导致白藜芦醇苷的降解,因此需要找到适当的提取条件。
提取完成后,需要对提取液进行分离和纯化。
常用的分离方法有溶剂萃取、硅胶柱层析、凝胶渗透层析等。
其中,硅胶柱层析是一种常用的分离方法,它可以根据样品中化合物的亲疏水性来进行分离。
在硅胶柱层析过程中,首先需要将硅胶填料充分膨胀,然后将提取液加入硅胶柱中。
根据白藜芦醇苷和其他成分在硅胶上的亲疏水性差异,通过溶剂梯度洗脱的方法,将白藜芦醇苷从其他杂质中分离出来。
最后,通过溶剂的挥发或其他方法将白藜芦醇苷纯化得到。
还可以利用高效液相色谱(HPLC)等技术进一步提高白藜芦醇苷的纯度。
HPLC是一种基于溶液动力学的色谱技术,可以对复杂样品进行分离和检测。
在HPLC分离过程中,需要选择合适的色谱柱和流动相,通过控制流速和梯度洗脱的方法,将白藜芦醇苷从其他成分中分离出来。
最后,通过检测器对分离得到的白藜芦醇苷进行检测和定量。
虎杖中白藜芦醇苷的提取和分离工艺研究是为了充分利用这一天然药物资源并满足市场需求。
虎杖中白藜芦醇的超声提取条件优化
效成分已进行了深入研究 , 白藜芦醇 、 蒽醌类化合物和黄酮类 成分为其主要有效成 分 , 白藜芦醇含量 最高。现代药理 学 以 实验证明 , 白藜芦醇具有抗 菌消炎 , 降血脂 , 预防心血管病 , 抗
肿瘤 , 抑制血小板活性 等生理 作用 。本试验采 用超声 波 辅助有机溶剂提取虎杖 中的活性物质 白藜芦醇 , 对提取条 件 进行 了系统研究 , 在单 因素试验 的基础上 , 过正交试验优化 通 提取条件 , 并对其含量进行荧光分析法检测 。
1 材 料 和 方 法
1 1 材 料 .
后用粉碎机粉碎成粉末 , 2 过 o目筛 , 备用。用电子天平准确称
量 5000g虎杖粉末 , .0 放入 20m 5 L圆底烧瓶 中, 入一定量 加 的溶剂 超 声萃 取 , 后 采用 300 rr n的 转速 离 心 分 离 然 0 / i a
液。料 液比筛选 : 8 % 乙醇 和 8 %丙酮 为 1: ( 在 0 0 2 体积 比) 做提取 液 , 超声提取 1 i, 0m n 超声提取温度 5 0℃ 的条件下 , 料
虎杖 ( 购于河北安 国药材市 场 ) 白藜 芦醇标准 品 ( 国 ; 中 药品生物制品检定 所提供 ) 乙醇 、 酮、 ; 丙 乙酸 乙酯、 氯仿 、 硝 酸铝等试剂均为分析纯。 主要仪器设备 : 4 0 F一 50荧光分光光度计 ( 日本 日立公 司
(. 1 石家庄学 院化工学院 , 河北石家庄 00 3 ; . 50 5 2 石家庄市第 3 8中学 , 河北石家庄 0 0 0 ) 5 0 0
摘要 :以中药虎杖粉末为原料 , 利用超声波强化提取 白藜芦醇化合物 , 用荧光分析法分析其含量 。在单 因素试验 的基础上 , 采用 正交试验 , 考察了溶剂、 料液 比、 温度、 时间对 白藜芦醇提取率 的影响 。试验结果表明 , 虎杖 中白藜芦醇 的最佳提取条件为 8 %乙醇 : 0 0 8 %丙酮 I: ( 3 体积 比) 为提取液 、 液比 1 6 质量体积 比, m ) 超声温度 7 料 :( g: L 、 0℃ 、
电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究
缓冲液定容I 同法配制空白溶液 。 取所配制溶液 6 L m 于专用电解池中 , 再将该电解池置于超微弱化学发光 测 量 仪 暗 室 中 } ME 一2 型 多 功 能 电化 学 分 析 用 C 1B 仪 。 制扫 描速 度 为 2mV ・ ~, 0 3 . v. 控 0 s 在 . ~O 8V(s AgA C ) / g I电位范 围内进行 阳极化扫描, B L 用 P C超
60 00
白藜 芦 醇 (evrto) 在 于 多种 植 物 中 。 rsear1存 目前 报道 的从葡萄等植物中提取分离较多 。 我们从中药虎 杖 ( lg n m.C s,口 Se.E uc 中提取 Poy o u .p ̄ £m ib t c) d Z 分离得到一种 白色针状结 晶体, 经结构测定为白藜芦 醇 苷 。 白藜 芦 醇苷 分子 中存 在 2个酚 羟基 。 从化 学结 构上看具有较强的抗氧化性 } 文献报道。 , 白藜芦 醇具有抗肿瘤、 抗炎和防治心血管疾病等作用。对白 藜芦醇苷的测定, 已有 H L 、 P C 质谱 、 气相色谱 、 毛细 管 电泳等方法报道“ , 化学发光法和电化学发光法
测定法还未 见报道 白藜 芦 醇 苷在 磷 酸盐 中性 介 质 中 , 06V(s 在 . v Ag Ag I左 右 , / C) 白藜 芦 醇 苷对 L mio 在 铂 电极上 u nl
的电化学发光有强烈的抑制作用, 基此建立了测定白 藜芦醇苷 电化学发光新方法 。 并成功地测定了中药虎
12 电位范围内。 . V 循环扫描 5 i。 n 最后 用二次蒸馏 a r 水将电极冲洗干净” 。 3 结 果 3 1 测定 条件 的选 择 L mio 在 p . u nl H=7 4P S . B - H: 介质中的 电化学发光 已有报道 。我 们发现在 O。 P Sp B (H一7 4 介质中 , .) 白藜芦醇苷对鲁米诺 的电化 学发光有强烈的抑制作用 ( 见图 1 ) 为建立测定白藜 芦醇 苷的电化学发光新方法 , 我们对 缓冲介质、 u L— mi l n 浓度、 。 : o H O 浓度、 扫描速度、 C 浓度和静置时 KI 间等进行 了选择。
虎杖中白藜芦醇提取分离研究
虎杖中白藜芦醇提取分离研究【摘要】目的考察虎杖中白藜芦醇苷的最佳提取分离工艺。
方法研究酶法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件,从酶的种类、温度、pH值、酶解时间等方面分析。
结果最佳提取工艺为:采用植物水解酶,提取温度40℃,酶解pH值3.0,酶解时间7h,为最佳提取条件。
结论酶处理后,可显著提高虎杖中白藜芦醇的得率,且该提取工艺稳定性好且简便易行。
【关键词】虎杖;白藜芦醇;提取分离;研究虎杖为蓼科植物虎杖的根茎,主要含有[1]蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份。
白藜芦醇和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分。
白藜芦醇作为一类亲脂性多酚物质,具有抗血小板凝聚,保护肝脏,抗肿瘤活性等药理作用,特别是对心脑血管系统具有较强的药理活性。
本实验采用酶法实验,对虎杖中的白藜芦醇进行提取分离,本研究旨在为虎杖开发利用提供科学依据。
1仪器与试药1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪;AG285分析天平;KS-600d超声清洗器;Delta320pH计;HHW420型三用恒温水箱。
1.2试药虎杖粉末,批号:20060829;纤维素酶,批号:F20071116;植物水解酶、植物提取酶;白藜芦醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号:1535-200001,纯度:99.5%;甲醇、乙醇、磷酸、磷酸二氢钾(分析纯);乙腈(色谱纯);蒸馏水。
2方法与结果2.1白藜芦醇的测定方法色谱条件色谱柱ODSC18;流动相乙腈∶水(0.02%磷酸)30∶70;流速1ml/min;柱温30℃;检测波长303nm;20μl进样环。
理论塔板数不低于3000;分离度大于1.5。
精密称取干燥白藜芦醇对照品330μg,置10ml容量瓶中加甲醇制成浓度33μg/ml的溶液作为对照品溶液[2]。
2.2单因素考察①试样的制取:精密称取虎杖粉末若干份,每份约0.1g,再每份加入pH=5.0缓冲盐溶液5ml。
摇匀,在45℃酶解18h后,加入20ml95%乙醇超声提取30min,取出放冷,定容至25ml,摇匀,过滤,取续滤液。
虎杖中白藜芦醇提取技术研究
采用微生物 ( at a A 转化技术处理虎杖 原料 , Bc r ) e N i 有效
促进 白藜芦醇苷水解转化为 白藜芦醇 , 同时使顺 式结构 向稳 定 的反式结构转 化。通过对 发酵时 间、 酵原料 含水 量 、 发 发
研 究表 明, 白藜 芦醇具 有 以下药理 功 能 : 抗血 小板凝 集 、 降
白藜芦醇 ( evr rl 4 ,- R se t , ’5 三羟基二苯 乙烯 ) 一类 a o 3, 是
活性多酚物质 。具有顺 式和反式两种构象 , 中反式为具 有 其
低 低密度脂蛋 白的氧化 , 而预防动脉硬 化、 从 防止冠 心病 ; 降
低 血清和肝脏 的脂 质 , 护肝脏 ; 保 对癌 变过程 中细胞 和组织
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湖 南林业 科技 20 年第 3 卷第3 08 5 期
研究 报告
虎 杖 中 白藜 芦 醇 提 取 技 术 研 究
蒋胜铎 周晓勤 , ,邬定才
(. 1湖南省林业科技推广总站 , 湖南 长沙 4 00 ; 2 怀化 市林 业科技推广站 , 1 7 0 . 湖南 怀化 4 80 ) 1 0 0
2 FrsySi c n eh o g oua ztnSao f ui aCt, ui a 100 C i ) . o t c neadT cnl Pp l i i t i o a u i H a u 80 , h a er e o y r ao tn H h y h 4 n
Ab ta t h e v r t lw src oy o u c s d tm.T e r s e ar l sa1 mp r n l ia p l a in v u au a l — s r c :T e r s e ar a hi P lg n m upioe o i n h e v r t J i o t t i c la p i t a e n t r mut o wa a cn c o l l i
川产虎杖中自藜芦醇与虎杖苷的含量测定
[ 文献标识码 】 B
学科分类代码 : 3 2 0 2 4
近几年 , 由于 白藜芦醇和虎杖苷在治疗心血管疾病有 着 独特的疗效 而备受关 注 , 且 两者 又是虎杖 的主要 有效 成分 , 所 以虎杖作 为提取 白藜芦 醇与 虎杖 苷 的原料 亦受 到 关注 。 文献报道 中多 以 H P L C法对 虎杖 中 自藜 芦醇 与虎杖 苷 的含 量进行测定 , 但是在报道 中对 四川地 区虎杖 的质量 的评 价研 究 尚未见报道 , 所 以本实 验根据 实际境 况 , 采集 了来 自四川 1 O个不同地区 的虎杖药材 , 用H P L C法对其 中的自藜芦 醇与 虎杖苷含量进行 了测 定。 1 川产虎杖 中自藜芦醇的含量测定 1 . 1 实验材料 : 虎杖 , 经中药品种质量鉴定实验室万德 光教 授鉴 定 为 蓼 科 植 物 虎杖 P o l y g o n u m c u s p i d a t u m S i e b .e t
—
1 . 4 色谱条件: 色谱 柱 为 依 利 特 H y p e r s i l O D S C 1 8柱 ( 5 m, 4 . 6×1 5 0 m m) ; 流 动相 为 乙腈 一水 ( 2 3 : 7 7 ) , 检测 波长 为3 0 6 a m; 流速 1 . 0 m L / ai r n ; 柱温 2 9℃ 。 1 . 5 供试品溶液 的制备 与测定 1 . 5 . 1 供试品溶液 的制备 : 取本 品粉末 O . 1 g ( 精 密称定 ) , 精密加入 9 5 % 乙醇 2 5 mL , 称定重量 , 超声处 理 3 0 ai r n , 取 出 冷却 , 再称定 重量 , 用9 5 % 乙醇补 足减失 的重量 , 摇匀 , 取 上 清液 , 过 滤即得供试品溶液 。( 注意 : 在提取过程避光 ) 1 . 5 . 2 样品 的测定 : 分 别精 密吸取 供试 品溶液 各 l 0 L注 入液相色谱仪 , 测定 , 即得 。HP L C色谱 图见 图 l 、 图 2, 试 验 结果见表 2 。
虎杖中白藜芦醇的研究进展
3H u n . na me ia un v riy u t ,hu n ha g ha e e i 2 9 na e n s l v l n 00 41 0 , C na 0 07 hi ;
通醇 提取法提高3 , 倍 缩短 了提取时 间 , 降低 了生产成本 。 蒋
明廉 等[ 用 超 滤 膜 对 醇 提 白藜 芦 醇 进 行 分 离 , 键 是 选 择 7 1 采 关 合 适 截 流 相 对 分 子 量 的 超 滤 膜 , 用 截 流 相 对 分 子 量 4 0 的 使 00
结合态两种形式存在于虎杖 、 葡萄 、 花生等多种植物 中 , 中 其 以虎杖 中含量最 为丰富。 是一种重要 的植 物抗毒 素。 白藜芦 醇具有多种药理活性 , 如抗菌 、 抗氧化 、 抗癌 、 抗血小板凝 聚 、 抗艾滋病毒活性 等 , 能修复非典 型肺 炎方剂所致的细胞 D A N 损伤 , 尤其 对人类健康 的大敌——肿瘤 和心脏病的治疗和预 防有 明显 的作用 1 。 随着 白藜芦醇 的广泛应用 , 针对 白藜芦
展 , 白藜芦醇的研 究和应 用提 供 了非常重要 的参 考。 为
【 关键 词】 白 藜 芦 醇 ; 取 ; 提 近侧 ; 物 合 成 生 [ 图分 类 号 】 R 8 [ 标 识 码 】 A 【 编 号 】 17 — 5 X 2 1 )8 02 - 3 中 2 2 文献 文章 6 2 9 1 (0 0 0 - 1 10
[e o s rsea o; x at n rxm l boy t s K y w r 】 evrt l et ci ;poi a; i nh i d r r o s es
不同采收期虎杖中自藜芦醇苷含量比较
【 关键词】 虎杖; 白藜芦醇苷; 不同采收期 【 中图分类号】 R3 91
中药虎杖 为蓼科 多年生 长草本 植 物虎杖 ( o gnm CS Pl ou U. y p a m S be Z e ) 干燥 根茎 和根 , 性 味微 苦、 i t i . ue 的 du e t 其 微寒 , 归
含量 , 提高高密 度脂 蛋 白的含 量。本 实验 采用 H L P C法 测定 广西柳州地区虎杖药材 不 同时期采 收期 白藜芦 醇苷 的含 量 ,
所 得 结 果 对 药 材 采 收 时 间选 择 有 指 导 意 义 。
白藜芦醇苷 可与杂质峰完全分开 。( 见色谱图) 。
I 实验材料 与仪 器
2 方 法 与结 果
2 I 色谱条件 . 色谱柱为 Ko afC。 中国科学 院大连化学 r s ( m l
肝、 、 胆 肺经。具有祛风利 湿 , 散瘀 定痛 , 咳化 痰等 功效“ 。 止 J
虎杖的主要活性成分是 白藜 芦醇苷 , 代药理 及药效 的研究 现 表 明, 白藜芦醇 苷具 有强心、 扩血管 、 抗高血 压 、 张冠状动脉 扩
物理研究 所 20m 5 m×46m 5l ) 流动相 为 乙腈. (0 . m, i ; a n 水 3:
7 ) 波 长 35r 柱 温 为 3 ℃ , 速 1m/ i。在 上 述 条 件 下 0; 0 m; i o 流 l n m
等活性 ; 可以降低血 中总胆固醇、 油三酯和低密度脂蛋 白的 甘
8mn 含 盐 量 2 , A B c 。 i, % 即 3 3 2
性好, 操作 方便 , 污染 , 无 火力 和时 间可控制 。本 实验 为应 用 微 波法炮制 盐黄柏提供科 学依据 , 值得推广应用。
膜分离法分离虎杖中白藜芦醇的工艺研究与含量测定
S u y n o e sofs pa a i s e a r lf o e r nKen ri t e br ne s p aton t c ni e a he de e - t d o pr c s e r tng Re v r t o r m G nti t n wih m m a e ar i e h qu nd t t r
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ti - . 1 p o p o o sa i ,t ef w aewa mlmi t ed tcin wa ee gh wa 0 n R s l ; h ai reO 0 % h s h ru c l d h l r t o s l / n, h ee t v ln t s 3 3 m. e u t T ec l o s —
miain JAN n — a , IZ ifi a nn nt uefrF o n u o to , a nn 3 0 1 C ia n t /I G Migl n L h—e∥N n igIsi t o o da dDrgC nrl N n ig50 0 , hn o i t
(. 1 广西 区南 宁食 品 药品检验 所 , 西 南宁 5 0 0 ;2 桂 林 医 学院 , 广 30 1 . 广西 桂 林 5 1 0 ) 4 0 4
摘要 : 目的: 采用膜分离技术对 白藜 芦醇分 离、 纯化 , 使其纯度 达到 9 %p =并且 建立 白藜 芦醇的 HP C含量测 定方 5 A I, - L
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量摘要:采用高效液相色谱法测定了虎杖不同生长条件及不同部位的白藜芦醇含量。建立了以色谱柱为Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(35∶65,V/V),流速为0.8 mL/min,检测波长为306 nm,柱温为室温,进样量为80 μL 的高效液相色谱方法。结果表明,白藜芦醇浓度在2~100 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为99.1%,RSD=1.2%(n=6)。野生虎杖和组织培养虎杖白藜芦醇含量存在较大差异,虎杖不同部位白藜芦醇含量也存在较大差异,其中以野生虎杖根中白藜芦醇含量最高。虽然在不同培养条件下,虎杖的不同部位都含有白藜芦醇,但与野生虎杖根相比含量差距较大,不能代替野生虎杖根的药用价值。关键词:虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法Determination of Resveratrol in Polygonum cuspidatum by HPLCAbstract: The contents of resveratrol in different growing condition and different part of Polygonum cuspidatum were detected by HPLC. The separation was performed on Zorbax CB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) in methanol-water (V/V=35/65)with the flow rate of 0.8 mL/min and detected at 306 nm in room temper ature after injecting 80 μL sample. The linear range of resveratrol was 2~100 μg/mL with an average recovery of 99.1% (RSD=1.2%,n=6). The content of resveratrol in wild and tissue culture of Polygonum cuspidatum were different, and the contents of resveratrol in different parts of Polygonum cuspidatum also varied. The highest resveratrol in Polygonum cuspidatum was observed in wild plants. Though resveratrol of Polygonum cuspidatum differed in different culture conditions, the highest resveratrol content was detected in the roots of wild Polygonum cuspidatum, which indicated that the medical value of wild Polygonum cuspidatum was irreplaceable.Key words: Polygonum cuspidatum; resveratrol; HPLC白藜芦醇(Resveratrol)又称芪三酚,现代药理研究证明:白藜芦醇具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗炎、抗自由基、保护肝脏、保护心血管和抗心肌缺血、免疫调节、降血糖、降血脂等作用[1,2]。另外白藜芦醇还有抗衰老、皮肤保健和美容功效[3,4]。朱鸿津采用HPLC法测定虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)中白藜芦醇含量,测定结果表明,虎杖根中白藜芦醇含量可高达千分之一,可作为白藜芦醇的提取原料[5]。然而,由于虎杖根的野生资源有限,大量采挖使野生资源日趋减少,近年来有一些利用组织培养快速繁殖虎杖的报道。文涛等[6]测定发现虎杖愈伤组织中也含有白藜芦醇,并对虎杖不同部位白藜芦醇含量进行分析,结果发现虎杖根、茎、叶中均含有白藜芦醇,其中多年生根中含量最高[7]。综上所述,虎杖不同生长条件、不同部位均含有白藜芦醇。准确测定虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量,将为虎杖资源进一步开发利用提供参考。1材料与方法1.1仪器与材料高效液相色谱仪检测站(含Waters 1525二元泵、Waters 2487双通道紫外检测器、Breeze分析软件)(美国,沃特斯公司);Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm)色谱柱(美国,安捷伦公司);Gzx-9146 MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);TGL-16G台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂);W201D恒温水浴锅、申科R-205旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公司);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州市上街华科仪器厂);FA2004N电子分析天平(上海精科天平仪器厂);JL-360DT型金利牌超声波清洗器(上海杰理科技有限公司)。野生虎杖于2007年11月份采集于安徽科技学院中药种植园,由中药教研室时维静教授鉴定,为蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.);虎杖组织培养苗由安徽科技学院生物工程实验室提供,是由野生虎杖经组织培养而来。白藜芦醇标准品(Sigma公司,纯度99.9%);乙酸乙酯(天津市北方天医化学试剂厂,分析纯);甲醇(TEDIA公司,色谱纯);去离子水;其余试剂均为分析纯。1.2虎杖白藜芦醇的提取把待测虎杖于50 ℃干燥箱内过夜烘干,准确称取1.000 g样品,加1 g石英砂,于研钵中研碎,加10 mL乙酸乙酯,倒入50 mL具塞三角烧瓶中,再加10 mL乙酸乙酯冲洗研钵,一并倒入三角烧瓶中,室温避光提取12 h;然后将提取液以1 000 r/min 离心10 min,取上清于棕色试剂瓶中保存,残渣加15 mL乙酸乙酯继续提取12 h(共提取3次)。将3次提取液与去离子水以1∶1(V/V)混合,抽提30 min,以1 000 r/min室温离心15 min,取有机相。将提取液于50 ℃、80 r/min旋转减压挥干。用色谱纯甲醇9 mL洗涤干燥瓶,倒入10 mL容量瓶中,用色谱纯甲醇定容至10 mL,再转入棕色试剂瓶中,待测。1.3色谱分析条件流动相:甲醇-水(V/V=35/65);流速:0.8 mL/min;测定波长:306 nm;柱温:室温。1.4标准溶液的配制准确称取白藜芦醇标准品10.0 mg,用色谱纯甲醇定容至10 mL,配制得1.0 mg/mL 标准白藜芦醇溶液,然后依次稀释为100 μg/mL、33.3 μg/mL、20 μg/mL、12.5 μg/mL 和2 μg/mL等5个不同浓度的工作溶液,待测。2结果与分析2.1标准曲线的绘制将上述5个不同浓度的标准白藜芦醇溶液用0.45 μm滤膜过滤。对过滤后的流动相进行超声脱气10~20 min,依次进样,每次进样80 μL。以标准品不同浓度为横坐标,对应峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。由图1获得回归方程为:y=20 000 000x-22 343,其中R2=0.999 9。2.2精密度试验按上述色谱条件,精密吸取质量浓度为20 μg/mL的对照品溶液,重复进样6次,每次80 μL,根据对照品峰面积积分值,计算RSD为1.35%(n=6)。2.3HPLC法测定白藜芦醇含量用0.45 μm滤膜过滤样品。对过滤后的流动相进行超声脱气10~20 min。依次进样,进样量为80 μL,测定结果见图3和表1。图3为野生虎杖茎(即表1中的A1B3)白藜芦醇含量色谱图。根据白藜芦醇标准品曲线的回归方程y=20 000 000x-22 343,按外标峰面积法求得各样品的白藜芦醇含量。实验测得的数据有两个影响因素,生长条件(A)和部位(B),即A因素有2个水平,B因素有3个水平,共有6个组合,每一组合有3个检测值,则一共有18个检测值。测定结果见表1。2.4资料的方差分析将表1资料用SPSS 13.0软件作方差分析,以固定模型作F测验。由表2可知,生长条件的F=31.226,P<0.01,部位的F=41.547,P<0.01,生长条件与部位互作的F=31.743,P<0.01,表明生长条件、部位及生长条件与部位互作虎杖中白藜芦醇含量均有极显著差异,即虎杖在不同生长条件下,白藜芦醇含量存在极显著的差异;虎杖不同部位白藜芦醇含量存在着极显著的差异;虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量存在着极显著的差异。3小结与讨论从测定结果看,野生和组织培养虎杖不同部位白藜芦醇含量差异很大,经方差分析表明有极显著差异。就部位而言,根部白藜芦醇含量显著高于叶和茎的白藜芦醇含量,而茎和叶白藜芦醇含量则无显著差异,这与张烜等研究的HPLC法测定花生不同部位白藜芦醇含量中花生根部白藜芦醇含量最高相符[8]。所有样品中白藜芦醇含量最高的是野生根,野生根中白藜芦醇含量高达0.696 1 mg/g。这主要因为虎杖是多年生草本植物,在其根部积累的白藜芦醇含量较高,这与传统的药用部位相符,而野生的叶和野生茎都是1年生,组织培养虎杖培养时间为1个月左右,所以虎杖中白藜芦醇含量较低。另一方面,野生的生长条件对白藜芦醇的合成创造了良好的逆境条件。利用组织培养手段获得的虎杖无菌组培苗虽然具有繁殖率高、生长速度快等优点[9],但由于生长条件相对单一而稳定,导致“逆境物质”白藜芦醇合成能力下降。在虎杖组织培养时,我们可以从人工创造有利于白藜芦醇合成的生长条件方面研究,如调节光照、温度等条件,以提高虎杖中白藜芦醇含量。参考文献:[1] 李旭波,谢人明. 白藜芦醇的药理作用研究进展[J]. 西部药学,2007,4(1):37-39.[2] 郜海燕,于震宇,陈杭君,等. 白藜芦醇功能和作用机理研究进展[J]. 中国食品学报,2006,6(1):411-416.[3] 韩晶晶,刘炜,毕玉平. 白黎芦醇的研究进展[J]. 生物工程学报,2008,24(11):1851-1859.[4] 李延华,王伟君,张兰威,等. 白藜芦醇的研究现状及应用前景[J]. 中国酿造,2008,184(7):10-12.[5] 朱鸿津. HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量[J]. 中国野生植物资源,2001,20(1):49-50.[6] 文涛,梁莉,曾杨,等. 不同光照强度对虎杖愈伤组织的影响[J]. 中国中药杂志,2007,32(13):1277-128[7] 夏海武,吕柳新. 虎杖不同部位白藜芦醇含量的分析[J]. 植物资源与环境学报,2005,14(3):55-56.[8] 张烜,胡君萍,韩玫,等. HPLC法测定花生不同部位中白藜芦醇的含量[J]. 新疆医科大学学报,2003,26(5):440-441.[9] 杨培君,李会宁,赵桦. 虎杖的组织培养与快速繁殖[J]. 西北植物学报,2003,23(12):2192-2195.。
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定刘仁旺,滕增辉,张邦乐,宦梦蕾,杨茜,周四元【摘要】目的:成立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法,优化虎杖中有效成份白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺. 方式:采纳梯度法成立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱方式,以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标,设计以乙醇浓度、溶剂倍数及醇提温度等为阻碍因素的4因素3水平的正交实验,确信虎杖中上述有效成份的最正确提取工艺. 结果:在选定的色谱条件下,虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷能够达到基线分离. 检测白藜芦醇及其苷的线性回归方程别离为Y=0.0006X-0.183 (r=0.9996),Y=0.0011X-0.478(r=0.9993);线性范围别离为0.48~38.4 mg/L和0.47~38.2 mg/L. 日内、日间周密度都小于5%,回收率在90%~105%之间,样品分析时刻小于7 min. 虎杖中有效成份白藜芦醇和白藜芦醇苷的最正确提取工艺为乙醇浓度80%,溶剂倍数15,醇提温度70℃,提取时刻2 h. 结论:成立了准确靠得住、分析速度快可同时检测虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方式,优化了质量可控的提取工艺.【关键词】虎杖;白藜芦醇;白藜芦醇苷;高效液相色谱0引言虎杖(polygonum cuspidtum sieb)为蓼科蓼属连年生草本植物虎杖的干燥根茎,要紧含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份[1]. 白藜芦醇(3,4′,5三羟基二苯乙烯)和白黎芦醇苷是虎杖的要紧功效成份,具有爱惜心脏、抗血栓、降血脂[2]等药理作用. 白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近,但其极性却相差较大. 本研究探讨一种兼顾白藜芦醇及白藜芦醇苷的提取工艺,并成立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),旨在为虎杖的药理作用研究和科学合理利用提供实验依据.1材料和方式1.1材料白藜芦醇苷和白藜芦醇的对照品均由中国药品生物制品检定所提供;虎杖的干药材购自西安市胡家庙药材市场. 2695型高效液相色谱仪,2996型二极管阵列检测器(美国Waters公司);调温式电热套(北京科伟永兴仪器);色谱纯乙腈,甲醇(美国TEDIA公司),其他试剂均为国产分析纯.1.2.1工作曲线的成立别离周密称取白藜芦醇苷及白藜芦醇对照品10 mg置100 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成100 mg/L的白藜芦醇苷和白藜芦醇对照品混合储蓄液,备用. 别离周密吸取两对照品储蓄溶液0.05,0.2,1,2, 4 mL 配制成浓度为0.5,2,10,20, 40 mg/L的混合对照品的标准溶液,依次取20 μL进样. 色谱条件为:色谱分析柱:C18(250 mm×4.6 mm,5 μm,美国Phenomenix 公司);流动相:乙腈和水,梯度洗脱如表1所示. 检测波长:315 nm;流速:1 mL/min;柱温为30℃. 按上述色谱条件测定峰面积积分值,以峰面积积分值为纵坐标,对照品浓度值为横坐标绘制工作曲线,应用Excel软件采纳最小二乘法计算回归方程.表1HPLC流动相梯度表时刻(min)〖〗乙腈(%)〖〗水(%)〖〗流速(mL/min)〖〗梯度类型0〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗67〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗69〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗620〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗11.2.2周密度和准确度测定别离周密吸取白藜芦醇及白藜芦醇苷储蓄液0.1,0.5,3 mL,配成浓度为1,5,30 mg/L混合对照品的标准溶液. 每一个浓度6个样本,持续测定3 d,与标准曲线的成立同时进行. 代入当日的回归方程计算标准溶液的浓度,将结果进行方差分析,即取得本方式的周密度. 将1,5,30 mg/L三个浓度标准溶液的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定浓度值与标准溶液的标示浓度相较,即得方式回收率.1.2.3虎杖有效成份提取工艺的优化在本生产工艺研究中,依照药物有效成份、药理作用及理化性质特点,选择醇提法进行正交实验,以提取时刻(A 1,2,3 h),乙醇浓度(B 70%,80%,90%),醇提温度(C 50,60,70 ℃)和溶剂倍数(D 10,15,20)作为考察因素,选择3个水平,综合评判提取工艺, 选用L9(34)正交表,安排正交实验.取虎杖10 g,按L9(34)正交表设计的顺序,各加入设定的乙醇量,加热煎煮规按时刻和次数,滤过,归并滤液,将滤液用甲醇稀释10倍后取样20 μL,用HPLC法测定白藜芦醇及白藜芦醇苷的峰面积,带入回归方程中,计算出白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量.2结果2.1HPLC检测方式的特异性在本实验选定的洗脱及检测条件下,白藜芦醇和白藜芦醇苷的保留时刻别离为6.8 min和4.7 min. 白藜芦醇及白藜芦醇苷峰和杂质峰能实现基线分离,样品峰的测定不受杂质峰的干扰(图1)..478(r=0.9993). 结果说明,白藜芦醇及其苷别离在0.48~38.4 mg/L和0.47~38.2 mg/L范围内呈良好的线性关系. 2.3周密度和准确度测定1,5,30 mg/L浓度的白藜芦醇苷的日内周密度别离为4.0%,2.6%和2.0%;日间周密度别离为4.2%,4.3%和2.6%;方式回收率别离为(101±3.4)%,(94±2.3)%和(95±1.3)%.白藜芦醇的日内周密度别离为5.0%,3.0%和2.0%;日间周密度别离为4.8%,3.9%和1.1%;方式回收率别离为(96±5.1)%,(95±2.6)%和(95±1.6)%. 结果显示本方式准确、重复性好.2.4虎杖有效成份提取工艺的优化将测得值进行方差分析(表2),因素B不同具有统计学意义(P<0.01 ). 由表3中进行直观分析可知,A 因素中各水平实验结果的和比较为:K2>K1>K3,平均含量以第2水平为高;B 因素中各水平实验结果的和比较为:K1>K2>K3,平均含量以第1水平为高;C 因素中各水平实验结果的和比较为:K3>K1>K2,平均含量以第3水平为高;D 因素中各水平实验结果的和比较为:K2>K1>K3,平均含量以第2水平为高. 选择最正确的提取工艺为提取时刻2 h,乙醇浓度为70%,醇提温度为70℃3讨论最近几年来有较多关于虎杖有效成份白藜芦醇和白藜芦醇苷提取及含量研究的报导,多采纳单因素、正交实验及大孔吸附树脂吸附法研究白藜芦醇的提取条件[3-4];正交实验法及乙醇回流法优选白藜芦醇提取工艺[5-7];以白藜芦醇苷为指标,研究虎杖的提取条件等[8],这些方式均以白藜芦醇或白藜芦醇苷单个成份为指标. 由于虎杖中的活性成份白藜芦醇和白藜芦醇苷都具有爱惜心脏、抗血栓、降血脂等药理作用,因此咱们在本实验中测定样品中的白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量并以此作为评判指标是合理可行的. 咱们的实验结果说明,正交实验及方差分析结果虎杖醇提取工艺最大阻碍因素为乙醇浓度B,第二为溶剂倍数D,再次为醇提温度C和提取时刻A. 最正确工艺乙醇浓度为80%,溶剂倍数为15,醇提温度为70℃,提取时刻为2 h.目前对虎杖中白藜芦醇或白藜芦醇苷的测定方式很多[9-10],可是同时对白藜芦醇及其苷测定的报导较少[11],要紧存在诸如样品处置方式复杂、分析时刻较长等问题. 本研究成立的同时测定虎杖中白藜芦醇及其苷的方式选用315 nm作为检测波长,使检测方式取得了较高的灵敏度. 采纳乙腈和水作为流动相,白藜芦醇和白藜芦醇苷与其他化合物达到基线分离. 白藜芦醇和白藜芦醇苷别离在6.8 min和4.7 min出峰,快速有效地实现了分离检测.综上所述,本研究成立的虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的HPLC检测方式具有灵敏、准确、迅速和工艺稳固、经济等特点,可用于虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量测定和有效成份提取的质量操纵.【参考文献】[1]肖凯,宣利江,徐亚明,等. 虎杖的化学成份研究[J]. 中国药学杂志,2003,38(1):12-15.[2]黄永洪,史假设飞. 虎杖的活性成份及其在心血管方面的研究进展[J].牡丹江医学院学报,2006,27(1):58-60.[3]朱立贤金征宇.虎杖中白藜芦醇提取分离工艺的研究[J]. 安徽农业科学,2005,33(1):77-78.[4]许汉林,付宜和,高鹏,等. 虎杖中白藜芦醇的提取与分离工艺研究[J]. 时珍国医国药,2006,17(8):1424-1425.[5]余淑娴,郑湘娟,余祖兵,等. 正交实验法优选虎杖中自藜芦醇的提取工艺[J]. 时珍国医国药,2006,17(4):594-595.[6]江曙,朱蓉蓉,张芳,等.虎杖中白藜芦醇提取方式及工艺的优化[J]. 南京中医药大学学报, 2006,22(3):197-199.[7]耿艳辉,李梦青,刘桂敏,等. 从虎杖中提取白藜芦醇的工艺研究[J]. 应用化工,2005,34(11):708-710.[8]许汉林,孙芸,邵继征,等. 正交法优化虎杖中白藜芦醇苷提取工艺的研究[J]. 湖北中医学院学报,2006,8(2):29-30.[9]曾建国,候团章,张胜.高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量[J].中国中医药科技,2000,7(3):175-177.[10]朱鸿津. HPLC法测定虎杖中白藜芦醇的含量[J].药学进展,2001,25(1):110.[11]周春山,向海燕,肖建波,等.高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇及其苷的含量[J].药物分析杂志,2005,25(5):534-536.。
中药虎杖的药理研究进展
中药虎杖的药理研究进展通过对近年来国内外期刊杂志中有关虎杖研究的文献进行检索,综述了虎杖具有抗菌抗病毒、抗炎镇痛、保护心血管系统、肝保护、抗肿瘤、提高免疫力等药理作用,提示中药虎杖是极有开发和应用价值的药物。
标签:虎杖;白藜芦醇;药理;进展虎杖是一种临床常用的中药材,为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖Polygonum Cuspidatum Sieb.et Zucc的干燥根茎和根。
我国大部分地区均产,主产于江苏,江西、山东、四川等地。
别名阴阳莲、苦杖、酸杖、斑杖、土大黄、大叶蛇总管等,入药始见于《雷公炮炙论》。
药用历史悠久,具祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰功效,主要用于关节痹痛、湿热黄疸、闭经、癥瘕、咳痰、水火烫伤、跌扑损伤、痈肿疮毒等[1]。
虎杖中主要含有蒽醌类,主要包括大黄素,大黄素甲醚等,二苯乙烯类化合物,包括白藜芦醇、白藜芦醇苷等;亦含鞣质和多糖等。
虎杖药源丰富,具有广泛的药理活性,对人体多个系统多种疾病具有治疗作用。
近年来对虎杖及有效成分的抗病毒、抗艾滋病的药理作用的研究逐渐成为热点。
本文就近年来虎杖药材药理作用的研究进展作综合报道。
1 抗菌、抗病毒作用自从1898 年Beijerinck 首次提出病毒概念以来,病毒的种类发展迅速,至今已有4 000 多种,临床多以西药为主。
但是,抗病毒西药长期应用易产生耐药性,降低疗效,成为临床治疗及新药开发的重要问题。
而中药及其有效成分具有抑制病毒复制、调节免疫功能、镇痛抗炎等综合功效。
中药虎杖及其有效成分对多种细菌及病毒具有较强的抗菌抗病毒活性。
现有资料表明,20%虎杖煎剂在体外对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性链球菌、卡他球菌、大肠杆菌、变形杆菌、福氏痢疾杆菌、绿脓杆菌等均有较强抑制作用,并且对钩端螺旋体有杀灭作用[2]。
古小琼等[3]研究成果表明,40 g及40 g 以上的虎杖煎剂可以抑制非meca基因介导的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生长,50 g及50 g以上的虎杖中药汤则可抑制meca基因介导的MRSA 生长。
虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量标准值与不确定度评估分析方法研究
虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量标准值与不确定度评估分析方法研究刘淑聪;张宝喜;杨世颖;马林;吕扬【摘要】目的利用国家级有证纯度标准物质的量值传递,采用高效液相色谱(HPLC)技术和多家协作分析方法,完成中药材虎杖中的虎杖苷和白藜芦醇成分含量标准值及不确定度评估方法研究.方法通过对检测方法中的各种影响因素分析,建立了不确定度评估的数学模型,实现对复杂中药材体系中两种化学成分含量的标准值及不确定度评估研究.结果采用HPLC法,可同时完成对中药材虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量的标准值及扩展不确定度评估,虎杖苷含量为(1.47±0.04)%、白藜芦醇含量为(0.29±0.01)%.结论所建立的针对中药材复杂体系中两种化学成分含量的标准值及不确定度评估方法,可准确定量表征不同化学成分含量,为中药材或中成药中的相关成分质量控制,提供了与国际分析化学接轨的科学检测分析技术与新的检测评价分析方法,对于中药的标准化和质量控制具有重要的科学意义和应用价值.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2013(022)018【总页数】5页(P33-37)【关键词】虎杖;虎杖苷;白藜芦醇;含量标准值;不确定度;高效液相色谱法【作者】刘淑聪;张宝喜;杨世颖;马林;吕扬【作者单位】北京协和医学院·中国医学科学院药物研究所,药物晶型研究中心,晶型药物研究北京市重点实验室,北京100050;北京协和医学院·中国医学科学院药物研究所,药物晶型研究中心,晶型药物研究北京市重点实验室,北京100050;北京协和医学院·中国医学科学院药物研究所,药物晶型研究中心,晶型药物研究北京市重点实验室,北京100050;北京协和医学院·中国医学科学院药物研究所,药物晶型研究中心,晶型药物研究北京市重点实验室,北京100050;北京协和医学院·中国医学科学院药物研究所,药物晶型研究中心,晶型药物研究北京市重点实验室,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0虎杖为蓼科植物虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎及根,主要有效成分为蒽醌类及芪类化合物,具有清热解毒、利胆退黄、祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰的功效,属常用中药材品种[1]。
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电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究唐玉海,靳菊情,刘 芸,郑晓晖,刘宏浪(西安交通大学理学院应用化学系,陕西西安710061)摘要:基于发现的白藜芦醇苷对L um ino l电化学发光强烈的抑制作用,建立了电化学发光法测定白藜芦醇苷含量的新方法。
白藜芦醇苷浓度在0105~1216m g・L-1范围内与发光减少值分段呈良好的线性关系。
检出限为0105m g・L-1。
对0125m g・L-1白藜芦醇苷平行测定11次,其相对标准偏差为2125%。
该法具有简便、快速、灵敏的特点,应用于中药虎杖中的白藜芦醇苷的测定,结果满意。
关键词:电化学发光分析法;虎杖;白藜芦醇苷中图分类号:R92712 文献标识码:A 文章编号:100422407(2002)0120006203 白藜芦醇(resveratro l)存在于多种植物中,目前报道的从葡萄等植物中提取分离较多。
我们从中药虎杖(P oly g onum.C usp id a tum Sieb.E t Zucc)中提取分离得到一种白色针状结晶体,经结构测定为白藜芦醇苷。
白藜芦醇苷分子中存在2个酚羟基,从化学结构上看具有较强的抗氧化性;文献报道〔1~3〕,白藜芦醇具有抗肿瘤、抗炎和防治心血管疾病等作用。
对白藜芦醇苷的测定,已有H PL C、质谱、气相色谱、毛细管电泳等方法报道〔4,5〕;化学发光法和电化学发光法测定法还未见报道。
白藜芦醇苷在磷酸盐中性介质中,在016V(vs A g A gC l)左右,白藜芦醇苷对L um ino l在铂电极上的电化学发光有强烈的抑制作用,基此建立了测定白藜芦醇苷电化学发光新方法,并成功地测定了中药虎杖中的白藜芦醇苷含量,该法具有简便、快速、灵敏的特点。
1 仪器与试药111 仪器 M EC212B型多功能电化学分析仪(江苏电分析仪器厂);B PCL超微弱化学发光测量仪(中国科学院生物物理研究所);工作电极为铂片电极(4mm ×5mm),对极为铂电极(7mm×10mm),参比电极为A g A gC l电极。
电化学发光系统的构造同文献〔6〕。
112 试药 白藜芦醇苷(美国Sigm a公司)配成712×10-4g・mL-1水溶液;L um ino l储备液510×10-3 m o l・L-1,用0110m o l・L-1的N aOH溶液配制; H2O2,011m o l・L-1PB S缓冲液均按常规方法配制;试剂均为分析纯。
实验所用水均为二次蒸馏水。
虎杖(市售)。
2 实验方法准确移取一定量白藜芦醇苷溶液于25mL的量瓶中,分别加入015mL0130%H2O2和115mL510×10-5m o l・L-1的L um ino l,用0110m o l・L-1PB S 缓冲液定容;同法配制空白溶液。
取所配制溶液6mL 于专用电解池中,再将该电解池置于超微弱化学发光测量仪暗室中;用M EC212B型多功能电化学分析仪,控制扫描速度为20mV・s-1,在013~018V(vs.A g A gC l)电位范围内进行阳极化扫描,用B PL C超微弱化学发光测量仪记录电化学发光信号,同时M EC212B 型多功能电化学分析仪记录电化学信号。
以L um ino l2 H2O2体系电化学发光信号的峰高I0与L um ino l2H2O2体系中加入白藜芦醇苷后的电化学发光信号的峰高I s 的差值∃I s进行白藜芦醇苷的定量分析。
处理电极:每次测量前,工作电极及辅助电极先在酒精灯上灼烧吸附有机物,然后在0110m o l・L-1 H2SO4中,以100mV・s-1的扫描速度,在-012~+ 112V电位范围内,循环扫描5m in,最后用二次蒸馏水将电极冲洗干净〔7〕。
3 结果311 测定条件的选择 L um ino l在pH=714PB S2 H2O2介质中的电化学发光已有报道。
我们发现在PB S (pH=714)介质中,白藜芦醇苷对鲁米诺的电化学发光有强烈的抑制作用(见图1)。
为建立测定白藜芦醇苷的电化学发光新方法,我们对缓冲介质、L um ino l浓度、H2O2浓度、扫描速度、KC l浓度和静置时间等进行了选择。
图1 电化学发光强度—电位曲线图31111 扫描速度的选择 扫描速度在5~50mV・s-1扫描时,发现对白藜芦醇苷抑制L um ino l的电化学发光影响较小,考虑到分析速度,选取扫描速度为20 mV・s-1。
31112 缓冲介质的选择 考察了0110m o l・L-1磷酸盐(pH618,714,718);0110m o l・L-1硼酸盐(pH810,815),0110m o l・L-1碳酸盐(pH916, 1010)缓冲液中,白藜芦醇苷对L um ino l的电化学发光的抑制作用。
实验表明:在硼酸盐和碳酸盐缓冲液的碱性条件下,L um ino l的电化学发光强度很大,但白藜芦醇苷的抑制作用相对较小;而在磷酸盐的中性条件下,白藜芦醇苷的抑制作用相对较大。
为了获得较大的灵敏度,因此,选择0110m o l ・L -1磷酸盐缓冲液(pH =714)为缓冲介质。
考察白藜芦醇苷对L um ino l 电化学发光的抑制作用受KC l 浓度影响的情况(见图2)。
实验结果表明,KC l 浓度为0110m o l ・L -1时,抑制程度最大,因此,本实验中选取KC l 浓度为0110m o l ・L -1。
为了操作简便,控制0110m o l ・L -1磷酸盐缓冲液中KC l 浓度为0110m o l ・L -1。
图2 KCl 浓度对电化学发光信号的影响31113 L um ino l 浓度的选择 无L um ino l 存在时,没有电化学发光信号产生。
L um ino l 为电化学发光试剂,其浓度的大小对背景电化学发光及抑制电化学发光均有很大的影响,实验结果见图3。
由图3可见,随着L um ino l 浓度的增加,抑制程度增加,当浓度达到310×10-6m o l ・L -1时,抑制程度最大,此后随L um ino l 浓度的增加,抑制程度减小。
所以,实验中选取L um ino l 浓度为310×10-6m o l ・L -1。
图3 L u m i nol 浓度对电化学发光信号的影响31114 H 2O 2浓度的选择 H 2O 2浓度对电化学发光抑制的影响见图4,随着H 2O 2浓度的增加,抑制程度增加,当浓度达到210×10-4m o l ・L -1时,抑制程度图4 H 2O 2浓度对电化学发光信号的影响最大,此后随过氧化氢浓度的增加,抑制程度减弱。
所以实验中选取过氧化氢浓度为210×10-4m o l ・L -1。
白藜芦醇用甲醇溶解,因此,还考察了甲醇对电化学发光抑制作用的影响。
当加入甲醇与溶液体积比为0120%~410%时,甲醇对抑制作用无影响。
312 线性范围 在优化的实验条件下,白藜芦醇苷浓度在0105~1216m g ・L -1范围内与发光减少值分段呈良好的线性关系。
白藜芦醇苷浓度在0105~1126m g ・L -1范围内的线性回归方程为Y =3156C +57,R 2=019956;白藜芦醇苷浓度在1126~1216m g ・L -1范围内的线性回归方程为Y =18C +362,R 2=019969。
根据I U PA C 的规定,计算得到检出限为01025m g ・L -1。
对0125m g ・L -1白藜芦醇苷平行测定11次,其相对标准偏差为2125%。
313 干扰试验 按实验方法,试验了一些常见无机离子和一些有机物对白藜芦醇苷测定的干扰。
在白藜芦醇苷浓度为0114m g ・L -1,在误差允许的范围内(5%),发现10倍于白藜芦醇苷的酒石酸、麦芽糖,1000倍于白藜芦醇苷的蔗糖、葡萄糖、果糖、乳酸、乙酸、柠檬酸没有干扰。
同倍的A l 3+,2倍的Co 2+,M n 2+,3倍的Fe 2+,Cu 2+,10倍的M g 2+不影响白藜芦醇苷的测定结果。
314 虎杖中白藜芦醇苷的含量测定 取适量中药材虎杖,经前处理后〔4〕,用甲醇煮沸提取。
处理后的样品采用校准曲线法测定其中的白藜芦醇苷含量。
同法做回收率试验。
实验测得中药虎杖中白藜芦醇苷含量为4197m g ・L -1(n =4,R SD =1169%),相当于原药中白藜芦醇苷含量为2180g ・kg -1,回收率在94%~105%之间。
4 讨论本文利用白藜芦醇对L um ino l 电化学发光的抑制作用,建立了电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇的新方法。
实验结果表明白藜芦醇苷浓度在0105~1216m g ・L -1范围内与发光强度减小值分段呈线性关系,利用该方法测定药材虎杖中白藜芦醇苷含量为2180g ・kg -1,回收率在94%~105%之间,相对标准偏差为1169%。
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