超微电极快速扫描法检测六味地黄丸中的丹皮酚

第40卷第8期 辽 宁 化 工 Vol.40，No. 8 2011年8月 Liaoning Chemical Industry August，2011基金项目：安徽中医药高专校级基金ZRKX1014 收稿日期：2011-04-22超微电极快速扫描法检测 六味地黄丸中的丹皮酚张 叶，吴 剑，李 端，赵 波（安徽中医药高等专科学校， 安徽 芜湖 241000）摘 要：目的 利用丹皮酚在超微电极上的电化学行为，建立六味地黄丸中丹皮酚含量监控方法。

方法 以50%的乙腈-水为提取液，超声提取六味地黄丸中的丹皮酚，使用超微电极、快速方波伏安扫描（SWV)技术进行电化学检测。

结果 可获得丹皮酚的重现性良好的氧化峰，该峰电流与丹皮酚的浓度在1×10-3~5×10-7 mol/L 范围内成呈良好的线性关系，线性回归方程为：I = 4 012.12C + 0.002（r = 0.999 3），检出限为1×10-7mol/L。

结论 该方法快速、准确、检测灵敏度高、重现性好、仪器便携，在六味地黄丸质量监控方面有广泛的应用前景。

关 键 词：六味地黄丸； 丹皮酚； 超微电极中图分类号：O 657 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2011）08-0884-03六味地黄丸因由六位中药材组成，其中熟地黄为君药，故名，其源于宋代医学家钱乙的《小儿药证直诀》，是滋补肾阴的基础方剂，现代医学研究，六味地黄丸还具有增强免疫、抗衰老、抗疲劳等作用。

2010年版药典[1]中六味地黄丸的检测项目为马钱苷（山茱萸）和丹皮酚（牡丹皮），检测方法均为高效液相色谱法。

由于六味地黄丸的检测项目有两个，且都利用高效液相色谱方法，又采用不同的检测流动相，每更换一个流动相均需要对色谱柱较长时间的冲洗，这就导致了检测时间的延长不利于对六味地黄丸的生产过程进行及时监控。

所以发展一种简单易行的检测方法来检测丹皮酚可以作为药典检测方法的必要补充。

目前丹皮酚的检测方法还有紫外光谱法（UV）[2]、近红外光谱法（NIR）[3]、电化学方法[4]等。

超微电极具有可以提高法拉第电流与充电电流的比值，增大信噪比的优点所以可以提高分析的灵敏度，降低检测限[5-7]，作者利用丹皮酚在微电极上的快速扫描所获得的氧化峰的重现性好的特点，建立了六味地黄丸中丹皮酚含量的检测方法，研究表明该方法具有操作简便、检测速度快、仪器便携性好等优点，可以作为药典检测方法的补充应用在在六味地黄丸生产过程中的质量监控方面。

1 实验部分1.1 仪器及试剂CHI660B 电化学工作站（上海辰华仪器公司），三电极系统：超微铂电极（Φ=10 μm）为工作电极，饱和甘汞电极（SCE）电极为参比电极，铂丝为对电极；FL2200高效液相色谱仪（浙江温岭福立分析仪器有限公司）,ODS,15 cm ×3.9 mm 色谱柱。

pHS-25精密酸度计（上海伟业仪器）。

无水乙腈（上海国药集团）、NaOH（上海国药集团）、NaH 2PO 4（上海国药集团）、NaOH-NaH 2PO 4缓冲溶液（pH=11.21）、六味地黄丸（河南宛西制药厂）、丹皮酚标准品（中国药品生物制品检定所，批号：708-200205）所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水，高纯氮除氧。

1.2 实验方法1.2.1 标准曲线绘制精密称取丹皮酚标准品16.6 mg 以50%乙腈溶解并定容于10 mL 的棕色容量瓶中配置成丹皮酚标准溶液，使用时逐步稀释。

准确移取一定量的标准丹皮酚溶液，及NaOH-NaH 2PO 4缓冲溶液（pH=11.21）1 mL 用二次水定容于10 mL 容量瓶中，以超微铂电极（Ф=10 μm）为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极（SCE）电极为参比电极，上述溶液为电解溶液，在0.9~1.4 V 间进行方波伏安法实验，扫描频率为1 000 Hz，在1.214 V 处获得丹皮酚稳定的氧化峰，该峰电流与丹皮酚的浓度在1×10-3~5×10-7mol/L 范围内成呈良好的线性关系，线性回归方程为：I = 4第40卷第8期 张 叶，等：超微电极快速扫描法检测六味地黄丸中的丹皮酚 885012.12×C +0.002（r =0.999 3），检出限为1×10-7mol/L （图1）。

图1 丹皮酚的方波伏安法实验1.2.2 六味地黄丸中丹皮酚含量检测取10丸六味地黄丸，切碎，取1 g，准确称量置具塞锥形瓶中，精密加入50%的乙腈50 mL，密塞、摇匀，称定质量，超声处理30 min，放冷，再次称定质量，用50%的乙腈补足损失，摇匀，过滤。

准确移取1 mL 的滤液放置在10 mL 的比色管中，加入pH=11.21的NaOH-NaH 2PO 4溶液1 mL，用二次水定容，作为样品溶液，摇匀进行电化学实验。

按文献[1]进行高效液相色谱方法进行检测加以比较。

2 方法与结果2.1 提取液选择分别采用甲醇、0.01 mol/L NaOH 溶液、50%乙腈为提取液进行提取实验；甲醇可以比较完全的提取丹皮酚但是由于甲醇本身在电极表面有电化学反应且干扰丹皮酚的电化学响应故此不适用于本方法；0.01 mol/L NaOH 溶液也可以提取完全但由于其能够导致丹皮酚原苷的水解故此实验结果偏高；50%乙腈对丹皮酚的溶解性能良好、可以提取完全且乙腈电化学性质稳定并能够溶解丹皮酚电解后在电极表面形成的不导电的膜，结合快速扫描方法可以获得重现性良好的峰故此选用50%乙腈为提取液。

2.2 重现性实验取相同浓度的丹皮酚标准溶液5组，采用上述方法进行实验，结果见表1，获得的峰电流大小的RSD 为0.31%（N =5）重现性很好。

2.3 稳定性实验实验表明，丹皮酚的NaOH-NaH 2PO 4溶液（有少量乙腈）在通氮除氧的情况下，在12 h 内测得的峰电流及峰位置无明显差异，稳定性很好，这是因为在该体系中丹皮酚是以丹皮酚苯氧负离子的钠盐的形式存在的故此不会发生挥发的情况。

表1 重现性实验丹皮酚溶液浓度/（mol ·L -1）峰电流 大小/μA 平均峰电流 大小/μARSD （N =5）0.042 79 0.042 870.042 64 0.042 93 1×10-50.042 980.042 840.312.4 加样回收率实验在已知含量的六味地黄丸样品中，加入一定量的丹皮酚标准品，采用上述方法进行含量测定。

结果见表2。

表2 加样回收率实验加入量/mg 测得量/mg 回收率,% 平均回收率,%RSD,%10.5 10.3 101.9 15.2 14.9 102.0 20.4 20.2 99.0 100.7 2.2 25.1 24.4 102.9 30.129.897.72.5 样品含量检测按照上述方法进行六味地黄丸的含量检测，获得的样品含量为0.321%，RSD 为1.28%（N =5），采用文献[1]方检测结果为0.285%，RSD 为0.78%（N =5），电化学方法与药典结果相近，可以作为药典的必要补充应用在六味地黄丸的质量控制当中。

3 结 语在中药现代化的大趋势下，对中药有效成分的含量检测成为中药标准化的重要组成。

标准化的种植、销售与生产等环节中需要有快速并且最好是现场的检测手段对中药、中成药中各成分的含量进行监控。

我们利用现代电分析化学技术，建立的丹皮酚的超微电极快速扫描检测方法具有检测时间短、仪器价格便宜、携带方便等特点，故此可方便的应用于六味地黄丸生产时的质量控制中作为药典方法的有益补充。

参考文献：[1] 国家药典委员会.中国药典［S］. 2010.[2] He Q, Guo G H, Guo Y, et al. Studies on extraction process for preparationof Eczema Spray ［J］. Chin Tradit Herb Drugs, 2001, 32（6）: 503-506. [3] Song Lili, Xu Xiaojie,. et al.Determination of paeonol in LiuweidihuangCapsule by Near Infrared［J］.Chin Tradit Herb Drugs，2002，33（2）：104-106.[4] Yu Naijia，Yu Yong，Hu Jingbo，Li Qilong. Studies on VoltammetricBehavior of Paeonol of Paeonol and its Application ［J］. Journal of Beijing886 辽 宁 化 工 2011年8月Normal University （Natural Science），2008，36（8）：1174-1177.[5] Wightman R. M., Microvoltammetric Electrodes［J］.Anal. Chem., 1981，53,1125A.[6] Pon, S., Fleischmann, M., The Behavior of Microelectrodes［J］. Anal.Chem., 1987，59：1391A.[7] Wang Ye，Wu Jian. Electrochemical Oxidation of Paeonol and Its ReactionMechanism［J］.Chinese Journal of Analytical Chemistry,2006,34（9）:1331-1334.Determination of Paeonol in Liuwei Dihuang Pill byQuick Scan on the UltramicroelectrodeZHANG Ye, WU Jian, LI Duan, ZHAO Bo（Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Anhui Wuhu 241000，China）Abstract: A new fleetness and accurate method to measure paeonol had been established by the electrochemical behaviours of paeonol on ultramicroelectrode. The ultramicroelectrode and SWV technique were used to determine paeonol in the NaOH-NaH2PO4 buffer solution （pH=11.21）. A sensitive oxidization peak of paeonol was obtained in this buffer solution. The peak current was directly proportional to concentration of paeonol in the range of 1.0×10-3～5.0×10-7 mol/L with the detection limit of 1×10-7 mol/L. The new method is accurate and dependable, operating simple, fleetness, easily reappear, and it has been applied to determine paeonol in Liuwei Dihuang Pill with satisfactory results.Key words: Liuwei Dihuang Pill； Paeonol； Ultramicroelectrode（上接第881页）2.7 冷凝液腐蚀对于含水蒸气的热腐蚀性管道，在保温层终止处或破损处的内壁，由于温度局部降至露点以下，发生冷凝现象，从而造成冷凝液腐蚀。