习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞R显带法染色体核型分析

习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞R显带法染色体核型分析
巫梅
（安徽医科大学第一附属医院血液内科实验室，安徽合肥230022）
摘要：目的探讨习惯性流产与染色体异常的关系。

方法用RPMI1640培养基，采用微量全血培养法，对129对习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞染色体进行了分析。

结果258例习惯性流产中，检出异常核型12例，占受检人数的4．6%，其中男性5例，女性7例，这些异常核型中，7例为染色体平衡易位，2例为超二倍体（47，XYY1例；47，XXX1例），3例为变异核型（1例Yp+，1例Yq-和1例2q+）。

结论习惯性流产与染色体异常有关。

习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞染色体异常率为4．6%，其中平衡异位是引起习惯性流产的主要染色体核型。

关键词：习惯性流产；遗传学；染色体异常
Chromosomal karyotype analysis of peripheral blood lymphocyte using R-band method in couples with spontaneous abortion
WU Mei
（Blood Laboratory，Department of Haematology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei230022，China）Abstract：Aim To explore the relationship between spontaneous abortion and chromosomal abnormalities．Method Using the method of small volume blood culture in RPMI1640，the chromosome of circular lymphocytes in129couples with spontaneous abortion was de-tected．Results12cases with abnormal chromosome were found among258cases，accounted4．6%，of all，females were7cases and males were5cases．Among these chromosomal abnormalities，7cases belonged to the balanced translocation of chromosome and2cases were hyperdiploid（1case，47，XYY；1case，47，XXX），3cases heterokaryotype included Yp+，Yq-and2q+1．Conclusions The spontaneous abortion is associated with chromosomal abnormalities．The rate of the abnormalities chromosome of circular lymphocytes in the couples with spontaneous abortion were4．6%．Balance translocation is a common chromosomal karyotype in spontaneous abortion couples．
Key words：spontaneous abortion/genetics；chromosomal abnormalities
习惯性流产（Spontaneous abortion）是妇产科常见疾病，是指两次或两次以上反复流产。

是一种多因素引起的疾病，其原因较为复杂，如遗传因素、免疫失调、内分泌紊乱、生殖道感染或异常等，而染色体异常也是引起流产的重要原因之一。

大约15% 20%临床确诊的妊娠以自然流产而告终，大多数处于胚胎发育早期，其染色体异常率高达30% 50%。

染色体检查是在细胞水平对其进行诊断。

近年研究表明，流产除与配子形成期或胚胎期染色体畸变有关外，与流产夫妇染色体也有关。

1资料与方法
1．1一般资料自2002年7月 2007年12月，对129对自发流产2 8次夫妇进行相关检查，确诊无功能性病变及其它相关性病变，排除接触各种射线及有毒物质接触史，再进行外周血染色体分析。

1．2方法
1．2．1外周血染色体制备用12500单位的肝素钠湿润针头，抽取外周血0．5ml置于5ml+PHA含20%小牛血清的RPMI1640培养液中，在37ħ温箱中培养72h，期间注意摇匀细胞液2 3次，收获细胞前4h加入浓度为50mg·L－1的秋水仙素50μl，然后以1000rpm，10min左右离心细胞液，去掉上清液，加入预温至37ħ，0．075mol·L－1KCl低渗液8 ml，置37ħ水浴30min，再加入1ml甲醇ʒ冰醋酸（比例为3ʒ1）的固定液进行预固定，充分打匀2 3次，1000rpm，10min 离心，弃上清液，加入上述固定液10ml，再离心。

进行3次固定，最后剩固定液0．5 1ml，用吸管打匀，滴到清洗干净，浸泡在20%酒精溶液的载玻片上，气干法滴片，每片滴3滴，待干后置87．5ħ的水浴箱中80 90min，再冷水浸泡一下，进行姬氏染色。

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（收稿日期：2011－02－21）
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安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal2011Dec；15（12）
1．2．2姬氏染色染色方法采用热变性姬姆萨显带法，操作如下：（1）取50ml立式染缸数只，分别装pH为6．2 6．5的Earle液，加盖后置水浴箱内，即开机加热；（2）细胞悬液（置4ħ1d以上）气干法滴片，平置于滤纸上待干；（3）1h后将染色体制片分别投入温度以达87．5ħ的Earle液中孵育；（4）标本处理80 90min；（5）立即取出玻片，放入冷水中漂洗；（6）染色，将标本浸入Giemsa染液（1ʒ10的Giemsa原液和pH为6．8的磷酸缓冲液）中染色10min左右；（7）自来水冲洗（用细水小心冲洗）、晾干；（8）镜检显带效果。

1．2．3染色体R带观察与分析在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相转换油镜观察与分析。

若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体带纹深浅不明显为显带过头，此时应根据具体情况增减热变性时间，重新处理一张标本，每例随机分析20 50个分散良好的染色体中期分裂象。

2结果
258例被检者中检出异常核型12例，占受检人数的4．6%，其中8例为染色体平衡易位，占受检人的3．1%。

2例超二倍体（1例47，XYY；1例47，XXX），2例变异核型［即1例Yp+，1例2q+］，见表1。

表1129对习惯性流产夫妇染色体核型分析结果
编号核型
146，XY，t（6；11）（q22；q25）
246，XX，t（10；13）（p11；q12）
346，XY，t（11；22）（q23；q11）
445，XX，t（13q；14q）
545，XY，t（13q；14q）
645，XY，t（15q；21q）
746，XX，t（15；22）（q22；q12）
846，XX，t（15q；15q）
946，XY，Yp+
1047，XXX
1147，XYY
1246，XX，2q+
3讨论
本文研究结果显示在习惯性流产夫妇染色体异常中，有8例平衡易位携带者，占所有异常核型的66．7%（8/12），占受检人数的3．1%，这与李凡等［1］报道的结果一致，表明平衡易位是引起习惯性流产最常见的染色体异常类型，在习惯性流产夫妇染色体异常中处于首位。

多数学者认为平衡易位携带者除了在减数分裂的过程中产生异常配子引起流产外，还可能有其它有害的遗传效应，如染色体断裂处微小的缺失与重复，染色体断裂处的基因突变与基因位置重排的位置效应，这些因素对平衡易位的携带者并无明显影响，但可能会影响胚胎的发育而造成胎儿的宫内死亡或新生儿的死亡。

由此可见习惯性流产与染色体异常，特别是平衡易位有直接的因果关系。

本文8例平衡易位携带者，均引起胎儿流产或畸形。

平衡易位包括平衡相互易位和罗伯逊易位，是导致习惯性流产的主要因素之一，也是染色体结构畸变最常见的一种形式，它有比较严重的遗传效应。

所以这种平衡易位携带者表型虽然正常，但是子代发生染色体异常的危险则明显增加。

许多研究已证明，两次以上自然流产史的夫妇中，染色体异常患者可达3% 10%［2 4］，而一般人群中染色体异常在0．25% 0．47%［5］。

而在这8例平衡易位中罗伯逊易位就有5例，占总异常核型的41．7%（5/12），这与慕明涛等［6］报道的结果一致。

罗伯逊易位是两条D组及G组的近端着丝粒的染色体之间整臂的相互易位，先在长臂近着丝粒附近断裂，然后两条染色体再重新形成一条衍生染色体，罗伯逊易位的携带者表型均正常，临床表现为畸胎，三体和2次以上的流产。

夫妇一方是非同源染色体的相互易位携带者，其配子在减数分裂中理论上可以形成18种类型配子，与正常配子结合后可形成18种类型的合子，一种为正常一种为携带者，其余16种均为异常合子，这些异常合子是造成流产死胎畸形儿的重要原因。

如果夫妇双方中有一方是同源染色体罗伯逊易位的携带者就不可能形成正常配子，受精后将形成染色体为三体或单体的合子，结果将是流产或畸形儿，因此同源染色体易位的携带者，因劝阻不必妊娠，非同源染色体易位的携带者，妊娠后可行胎儿染色体的产前诊断，如有异常可终止妊娠。

本组资料染色体异常率为4．6%，与张丽雯等［7］报道一致。

但低于国内章涛等［8，9］报道结果，可能与地域环境等因素有。

多数学者认为平衡易位携带者除了在减数分裂的过程中产生异常配子引起流产外，还可能有其它有害的遗传效应，如染色体断裂处微小的缺失与重复，染色体断裂处的基因突变与基因位置重排的位置效应，这些因素对平衡易位的携带者并无明显影响，但可能会影响胚胎的发育而造成胎儿的宫内死亡或新生儿的死亡。

由此可见习惯性流产与染色体异常，特别是平衡易位有直接的因果关系。

另外，有学者认为男性正常的精子比异常精子优先受精，而女性的卵子则没有任何选择的机会，因而染色体异常发生在女性的机率多于男性。

而在本研究资料中，染色体异常的12例，男5例，占被检人数的1．9%，女性比例为2．7%。

经统计学处理差异无显著性。

因此，临床上不明原因的自然流产夫妇，在进行产前诊断的同时，应做染色体检查，其意义不仅是病因学的诊断，更重要的是检出携带者，指导他们的婚姻和生育，避免染色体异常胎儿的出生，从而提高人群中的遗传素质，实现优生优育。

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（收稿日期：2011－05－11）
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·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal2011Dec；15（12）。