药敏纸片的制备
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
兽用药敏片的制作和应用
养殖场疾病控制的好坏，直接影响其场经济效益。
疾病控制踪疫苗接种外，药物治疗也十分重要，而做好药敏试验很关键。
市场上购买药敏片不方便，即使购买到药敏片，已用的药品与本场买到药品不是同一厂家生产，疗效也不一致。
我们一般多应用自制的药敏滤纸片，即实用又省钱，经临床实践，效果较好。
现介绍如下：1 制作方法1 穗纸片选用新华t号(或其他质量好的)定性滤纸片，用打孔机打成直径为6 1l"11"]1的小圆纸片，根据需要将数片包成一纸包，或放人带棉塞的小瓶或小平皿内，在160℃干热灭菌1 h或121 ℃灭菌l5 min．置60℃干燥箱内烘干备用。
1．2 药液的配制．1 稀释荆抗生素的稀释剂通常用蒸馏水，但有些抗生素可用其他溶剂作初步溶解。
如：呋喃西林，每片首先用l mo L／I，氢氧化钠1 ml 溶解，再用水稀释到所需浓度。
痢特灵先以二甲基酰胺或丙酮溶解。
1．2 2 药液浓度注射粉荆一般1 g药品加蒸馏水L000 mI稀释；注射针剂，用蒸馏水作100倍稀释。
其他药物按使用说明书上的配料或饮水舍量．换算按1 g需加多少毫升水或配多少毫克料，就相当于配制药液所加蒸馏水毫升数。
如10 g本品可拌50 kg饲料，其换算方法为：1 g本品加5 000 mI 蒸馏水。
1 3 配制方法在无菌条件下，准确称取药量， I g为一个基本单位．为了方便最好将药物先稀释成10 mI ，然后作倍比稀释，如lO0倍稀释药物，在1 g药物中加人l0mI 蒸馏水．然后取l mI 本液加人9 m1 蒸馏水即可。
将无菌滤纸片用无菌镊子摊布于无菌平皿中，每张滤纸片饱和吸水量为0．叭m1，计，每50张滤纸片加人药液0 5 mI ，不时翻动，使滤纸将药液均匀吸净，一般浸泡30 min即可。
然后取出含药纸片置于一纱布中放置37℃孵箱中烘干，烘烤的时间不宜过长．以免某些抗生素失效。
青霉素、金霉素宜在低温真空干燥。
烘干后立即装人无菌的小瓶中加塞置一20℃或家用冰箱中保存，少量供工作用的滤纸片从冰箱中取出后放置室温中1 h，使纸片温度和室温接近。
药敏纸片如何制作
药敏纸片如何制作
更新时间：2009-10-24 19:04:11 浏览次数：519
1、纸片的选择与制作
在医药公司购买新华1号定性滤纸，用打孔器把滤纸打成直径为6毫米的圆形纸片，装入干洁的青霉素小瓶内，每瓶装入5O只，将若干个装有纸片的小瓶放入高压锅内进行高压灭菌121度20分钟，冷却后置4～8℃条件下保存。
2 、药袖浓度的配比
选择现有的抗菌药物，根据药物的说明进行配比浓度，如规格为100克装的抗菌物，包装说明兑水400斤，即用天平称药物1克加50毫升的灭菌注射用水置于灭菌平皿内，充分溶解后吸出1毫升置于另一个灭菌容器中再加入39毫升的灭菌注射用水。
3 、纸片的浸泡与干燥
取配好的药物溶液放入盛有纸片的青霉素小瓶内 (药液的多少以最透纸片为宜)，浸泡24小时后，将多余的药液倒掉，放在无菌条件下晾干或放在37℃的恒温箱内烘干，而后加盖置4～8℃的冰箱中保存备用。
兽医临床中的药敏试验作用和意义
兽医临床中的药敏试验作用和意义目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损失，阻碍了养殖业的快速发展，所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。
但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。
由此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率升高和治疗费用增加。
这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威胁。
因此，临床上应合理应用抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。
一、什么是药敏试验？抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility test，AST），简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药。
药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能，也是使用抗菌药物治疗前必不可少的一道环节。
二、药敏试验的意义1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性，指导临床合理用药。
因为实验是在体外对已经分离的细菌进行药敏，不需要生物载体，不需要实验动物，操作相对简单，成本相对降低。
是一种既经济又有效的方法。
2、可以对流行病学调查进行监控，控制和预防耐药菌株的流行。
因为随着新型致病菌的不断出现，各种致病菌对不同的抗菌药的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也有差异。
进行有效的药敏试验可以及时掌握各种新型菌种和菌株的耐药性，对流行病学调查建立监控，同时采取相应的措施也就可以控制和预防耐药菌株的流行。
3、为临床用药提供参考依据。
因为一个正确的药敏试验结果，可作为临床兽医和畜禽养殖者选用有效抗菌药的参考。
纸片扩散法资料
抗生素敏感实验——纸片扩散原理：纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。
在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。
不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小原理通俗说法：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。
通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。
并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC愈小，抑菌圈直径愈大。
材料（以大肠杆菌为例）：1.药品及细菌——诺氟沙星、新霉素、硫酸链霉素、氟苯尼考、卡那霉素、泰乐菌素、生理盐水、磷酸盐缓冲液、MH营养肉汤、MH琼脂培养基、大肠杆菌。
2.器材——纸片、试管、移液器、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、1000ml烧杯、PH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器方法1.培养基的制备：2.药敏纸片的制备2.1纸片制备：选择优质新华1号滤纸，用打孔器制成直径6mm的圆形滤纸片。
每200张一管，经120℃2h灭菌后备用2.2药物稀释每张以吸入20μL药液为标准，如纸片薄，药物原液需作调整。
药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法是一种常用的检测细菌对抗生素敏感性的方法，其操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据需要选择合适的培养基，如Mueller-Hinton（MH）琼脂（常用于细菌药敏试验）。
按照制造商的
说明溶解固体培养基，并加入适当量的琼脂（通常为2%），
将其加热溶解，然后用无菌盘口装好。
2. 菌液制备：从培养基上的细菌菌落中接种一根病菌棒，将其浸入含有3-5毫升无菌盐水的试管中。
3. 菌液浓度调整：将试管中的细菌菌液用比例稀释至合适的浓度（通常为0.5麦克百尼尔/毫升）。
4. 纸片扩散：用无菌的棉签将稀释后的菌液均匀地涂抹在一块布拉格琼脂平板上，然后在琼脂上按要求摆放敏感纸片（一般为阿莫西林、头孢菌素等常用抗生素），注意要与纸片相距一定距离。
5. 培养：将布拉格琼脂平板反面朝上，用无菌培养皿盖好，然后放入恒温培养箱中进行孵育。
通常在35-37°C条件下培养
24小时。
6. 结果录入和解读：观察纸片周围的细菌生长情况，通过测量纸片周围形成的抑制圈直径来评估细菌对不同抗生素的敏感性。
根据抑制圈的直径大小，将细菌的敏感性分为敏感、中等和耐
药三个等级。
注意事项：
- 操作过程需要严格无菌，以免细菌的外源污染影响结果。
- 确保培养皿紧闭，避免细菌的空气传播。
- 操作前后要做好清洁，避免微生物交叉感染。
- 移栽过程要注意避光，避免紫外线对细胞的破坏。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告概述：药敏试验是一种用来测试细菌对不同抗生素的敏感性的实验方法。
本实验旨在通过观察不同药物对细菌的杀菌效果，评估药物的抗菌活性。
通过实验结果，可以为临床医生提供选择合适药物治疗感染的依据。
实验步骤：1. 细菌培养：从临床患者的感染部位采集样本，进行无菌处理后，接种于含有丰富营养物质的琼脂培养基上，利用恒温培养箱在37摄氏度下培养。
2. 药物制备：根据实验要求选用常见的抗生素药物，配制合适浓度的药物溶液。
3. 药敏纸片实验：将药敏纸片铺在含有培养菌的琼脂平板上，利用吸管滴取一定量的药物溶液滴在药敏纸片上。
将琼脂平板放置在恒温培养箱中培养。
4. 结果观察：观察培养基上的药物液滴周围是否出现抑菌圈，测量抑菌圈的直径。
根据抑菌圈的大小和药物浓度的对应关系，判断细菌对药物的敏感性。
实验结果：通过对不同抗生素药物的实验观察，我们得到了如下结果：1. 对照组：在没有添加药物的培养基上，细菌在一定时间内呈现正常生长。
2. 敏感性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围出现了抑菌圈。
抑菌圈的直径越大，说明细菌对该药物的敏感性越高。
根据抑菌圈的直径，我们判断药物的敏感性分为不同级别。
3. 抗药性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围未出现抑菌圈，或抑菌圈的直径很小。
这说明细菌对该药物的敏感性较低，甚至产生了抗药性。
讨论和分析：通过药敏试验的结果，我们可以根据细菌对不同药物的敏感性来选择合适的抗生素治疗感染。
药敏试验是临床医生进行抗生素选择的重要依据之一。
根据不同细菌的敏感性结果，医生可以根据药物的目标细菌的敏感性，选择合适的药物和剂量进行治疗。
同时，药敏试验也可以帮助医生监测和了解细菌对药物的抗药性情况。
随着抗生素的广泛使用，一些细菌逐渐产生了对药物的抗药性。
通过药敏试验，可以及早发现和监测细菌的抗药性情况，为防控细菌抗药性提供依据。
然而，药敏试验也存在一些限制。
首先，该试验只能测试抗生素对细菌的杀菌效果，不能完全模拟临床环境中抗生素的药效。
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前，需要准备以下物品：1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基（如MH琼脂）。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株，轻轻涂布在MH琼脂表面，确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书，配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器，将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片，根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中，每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管，将菌株涂布在药敏试验培养基上，确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片，轻轻贴在培养基表面，每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小，参照抗菌药物的敏感度判定标准，判断菌株对药物的敏感度（如敏感、中介或耐药）。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果，给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中，以便后续分析和报告编写。
记录内容包括：菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果，临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性，从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据，有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时，实验室可以通过药敏试验结果的统计分析，了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况，为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
作业指导书-K-B纸片琼脂扩散法药敏试验操作
操作顺序
检查要点
使用材料
1、试验操作前，提前把单人净化工作台的紫外灯打开，杀菌一个小时；
2、配制MH（A）培养基，121℃高压灭菌15min，取出后在净化工作台中倒入无菌平皿中，每个平皿倒入20ml左右，使培养基厚度约4mm左右；晾干后备用；
3、在净化工作台中进行试验操作，用移液枪取校正好的菌液100μl注入已制备好的MH培养基上，用玻璃涂棒涂抹均匀；
检查要点
使用材料
1）取定性滤纸，用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，经121℃高压灭菌30min后，放在60℃的烘箱中烘干备用；
2）试验操作前，提前把单人净化工作台的紫外灯打开，杀菌一个小时；药液配制方法参照CLSI抗微生物药物敏感性试验执行标准（2010版）中规定的配制；药液配制在净化工作台中进行；
操作安全
1.高压锅使用时禁止脱水操作、排气未尽时不要打开高压锅；2.所有带菌实验用品，须经有效的消毒灭菌处理后再洗刷。严禁污染下水道。
环境要求
外围：一般பைடு நூலகம்境
无菌操作：万级局部百级洁净
异常处理
1.操作过程中断电，已打开的物品应重新灭菌，以防污染；2.发现污染及时处理；3.操作仪器有异常，及时汇报并报修。
3.纸片在使用前1～2h从冰箱取出，暖至室温再打开，以避免出现冷凝水。纸片启封后应放入可密封的有干燥剂的容器中，纸片只能在有效期内使用，过期应弃去。
1.打孔机、手提式高压蒸汽灭菌锅、恒温干燥箱、电子天平；
2.无菌水、磷酸缓冲盐溶液等溶剂
3.新华定性滤纸
材料处理
1.将材料2及圆纸片放入高压锅，按高压蒸汽灭菌锅操作规程操作，灭菌121℃、30分钟；
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
自家药敏纸片制备方法的建立及应用效果观察
表 １ 不 同方 法制 备 药 敏 纸 片 的抑 菌 效 果 表
其 它 治 疗 量 的 试 验 药 物 的 抑 菌 效 果 具 有 不 同 的 针 对 性 ， 可 应 用 于 临 床 用 药 参考。
３ 讨 论
治 疗 量
２７
２ ５
３Ｏ
２馈 治疗薰
４倍 治疗 量
３ ０ ３ １
∞
喘 速 治
∞ ｍ
勰
＂ ｏ ｏ ＂ Ｈ Ｏ 拍
加
（ ）利 用 兽 医 临 床 常 用 抗 菌 药 物 ３
所 制 作 的 药 敏 纸 片 ．能 解 决 人 用 抗 菌 Ｈ 佗 ＂ 药 物 标 准 药 敏 纸 片 的 药 敏 试 验 的 结 果
对 兽医ｌ 临床 的 指 导 性 不 强 的 难 题 ．方
生 较 理 想 的 抑 菌 效 果 ， 与 喘 速 治 成 份
为 复 方 北 里 霉 素 可 溶 性 粉 的 抗 菌 特 性
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有 关 【。本 研 究 应 用 两 种 不 同 的 培 养 ９ ＝ Ｉ 】 ｏ
庆 大 霉 素
４ ２ ｌ ４ ２ １ ４ ２ １ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ ４ ２ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ
抑 菌效 果 上 升 而 引 起试 验误 差 。
× × × × × × × ×
垫 底 的 平 皿 中烘 干 ，密 封 备 用 。 （ ） 细 菌 学 检 查 ： 在 无 菌 条 件 下 ３ 取 烘 干 后 的 药 敏 纸 片加 人 到 灭 菌 的 肉
纸片扩散法资料
抗生素敏感实验——纸片扩散原理：纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。
在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。
不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小原理通俗说法：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。
通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。
并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC愈小，抑菌圈直径愈大。
材料（以大肠杆菌为例）：1.药品及细菌——诺氟沙星、新霉素、硫酸链霉素、氟苯尼考、卡那霉素、泰乐菌素、生理盐水、磷酸盐缓冲液、MH营养肉汤、MH琼脂培养基、大肠杆菌。
2.器材——纸片、试管、移液器、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、1000ml烧杯、PH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器方法1.培养基的制备：2.药敏纸片的制备2.1纸片制备：选择优质新华1号滤纸，用打孔器制成直径6mm的圆形滤纸片。
每200张一管，经120℃2h灭菌后备用2.2药物稀释每张以吸入20μL药液为标准，如纸片薄，药物原液需作调整。
药敏实验器材及操作步骤
药敏实验器材及操作步骤
操作步骤：
一、药敏试纸片的制备:
1. 取定性滤纸,用打孔机打成直径6毫米的圆形小纸片.
2. 取圆纸片50片防入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒后,
3. 放在37度恒温箱中数天,使其完全干燥.
二、药敏片的制备(商品药):
1. 按商品药的使用治疗量的比例配制药液.
2. 在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂.同时在瓶口或瓶身记录药物名称,放37度温箱内过夜,干燥后即密盖。
3. 如有条件可真空干燥.切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月.
三、培养基的制备：
1. 取16.5g营养琼脂至500ML三角烧瓶中，加蒸馏水至485ML于三角烧瓶。
放置电子万用火炉上，不断搅拌至营养琼脂完全融化。
2. 瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒,同时把清洗洁净的培养皿一起高压消毒。
3. 然后，每个培养皿中灌入18-20ML，室温凝固保鲜备用。
四、药敏操作：
1. 在净化工作台上，用动物肝脏或心脏的横断面置于培养基上均匀涂布。
2. 然后把七个不同的药敏片均匀分布在培养基上。
3. 置于恒温培养箱中37℃培养24H，然后观察结果。
药物敏感判定标准:
20以上极敏,15-20高敏,10-14中敏,10以下低敏,0不敏.
培养基:应根据实验菌的营养需要进行配制,倾注平板时,厚度合适,约5-6毫米,不可太薄,一般90毫米直径的培养皿,倾注培养基18-20毫升.。
药敏纸片制备方法
药敏纸片制备方法嘿，咱今儿就来唠唠药敏纸片的制备方法，这可真是个有意思的事儿呢！药敏纸片，就像是医生手里的秘密武器，能帮咱找到对付细菌的最佳办法。
那怎么制备呢？首先，咱得有优质的药敏纸片原材料，这就好比做饭得有好食材一样。
然后就是调配，这可不能马虎，得精确再精确，就跟调鸡尾酒似的，比例不对可不行。
把药液均匀地涂在纸片上，这可不是随便涂涂就行的，得有耐心，得细致，不然这药敏纸片可就不灵光啦。
想象一下，要是涂得不均匀，那结果能准吗？那肯定不行呀！接着呢，得让这些涂好药液的纸片好好地干燥一下。
这就像是让它们去晒晒太阳，把水分都赶跑。
但可别晒过头了，不然它们可能就变得脆脆的，一碰就碎了。
等干燥好了，还得把它们好好保存起来。
这保存也有讲究呢，得放在合适的环境里，不能太潮湿，也不能太干燥，就像咱人得待在舒服的环境里一样。
不然，这些药敏纸片可能就失效啦。
你说这药敏纸片制备是不是挺有意思的？就好像在打造一件件小小的艺术品。
咱得用心，得认真，才能做出好用的药敏纸片来。
这可不是随便搞搞就能行的事儿呀！在这个过程中，每一步都很关键呢。
从选择材料到最后的保存，哪一个环节出了问题，都可能让药敏纸片失去作用。
这就跟盖房子一样，一块砖没砌好，可能整座房子都不牢固。
咱做药敏纸片制备的时候，可不能偷懒，不能敷衍。
这可是关系到能不能准确找到对抗细菌的方法呢！要是因为咱没做好，导致结果不准确，那可就麻烦啦。
所以啊，大家一定要认真对待药敏纸片制备这个事儿。
这不仅是一项技术活，更是一份责任呢！咱要为了能更好地对抗细菌，为了大家的健康，把药敏纸片制备得妥妥当当的。
总之呢，药敏纸片制备方法虽然听起来有点复杂，但只要咱用心去做，就一定能做好。
这就像生活中的很多事情一样，只要我们有决心，有耐心，就没有做不到的。
大家加油吧！让我们一起把药敏纸片制备这件事儿做得漂漂亮亮的！。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏试验的步骤
药敏试验的步骤药敏试验药敏纸片法药敏纸片法是最常用的一种试验方法,能直接体现出抗菌药物的抗菌效用,其优点是：直观明显,对比鲜明，有一定的实验依据。
缺点是：仅表现体外抗菌效果,由于抗菌药物在体内受体液环境,代谢分布,组织扩散浓度,半衰期等因素的影响,个别药物并不能真实反应出实际的抗菌疗效。
下面介绍抗菌药物的药敏纸片法。
试验材料经分离和鉴定后的纯培养菌株(例如大肠杆菌、链球菌等),营养肉汤,琼脂平皿,棉拭子,镊子,酒精灯, 药敏纸片若干。
1.1药敏纸片的制作方法将要试验的抗菌药物按其有效浓度稀释成1mL备用，脂溶性的抗菌药物使用乙醇或丙酮溶解。
用打孔器将滤纸打成6mm直径的圆片100张高压灭菌，加入到抗菌药物有效浓度1mL稀释液中充分混合，阴凉处干燥备用。
多种联合的抗菌药物制剂以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。
抗菌中草药药敏纸片的制作：取中草药粉剂1g加适量的水充分浸泡煮沸，滤液浓缩成1mL，也加入100张纸片干燥备用。
1.2药敏试验的操作步骤1.2.1 取自然发病动物的病料心血、脾、肝脏、淋巴结或病变明显的组织无菌操作接种鉴别培养基37℃分离培养24h，选典型菌落备用。
1.2.2 将病料中分离出的病原菌用密集划线法或涂布法接种至专用琼脂平板培养基上，均匀的粘贴各药敏纸片，并记录每种抗菌药物药敏纸片的位置。
1.2.3 37℃培养12～18h，取出观察结果。
1.3判定结果1.3.1 量取各药敏纸片抑菌直径大小，并仔细观察抑菌圈的清晰度,通常直径小于10mm的判为该抗菌药物为低度敏感,10～15mm之间为中度敏感，15～25mm为高度敏感，25mm以上为极度敏感。
1.3.2 抑菌圈边缘分界清晰，内部洁净透明,说明该抗菌药物作用迅速，多半为杀菌剂；边缘十分清晰，内部朦胧说明该抗菌药物可能是慢效抑菌剂或有耐药的产生，或分解较快维持抗菌时间短。
1.3.3 抑菌圈中分层次形成同心年轮样，说明可能是联合使用抗菌药物或该抗菌药物失效过快或细菌产生了耐药性。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏片实训报告
一、引言药敏片是一种用于检测细菌对药物敏感性的药物，是临床用药的重要依据。
为了更好地了解药敏片的应用和检测方法，提高我们的实践能力，我们参加了药敏片实训。
以下是本次实训的详细报告。
二、实训目的1. 掌握药敏片的制作方法；2. 熟悉药敏片的检测原理；3. 了解药敏片在临床用药中的应用；4. 提高我们的实践操作能力。
三、实训内容1. 药敏片的制作（1）材料：药敏纸片、无菌生理盐水、无菌棉签、细菌培养皿、细菌接种环等。
（2）方法：①将药敏纸片放入无菌生理盐水中浸泡30分钟；②用无菌棉签蘸取细菌培养皿中的菌液，均匀涂布在药敏纸片上；③将药敏纸片放置在37℃恒温培养箱中培养24小时；④观察药敏纸片上的抑菌圈大小，判断细菌对药物的敏感性。
2. 药敏片的检测原理药敏片检测原理基于纸片扩散法。
当细菌与药物接触时，药物在纸片上扩散，抑制细菌的生长。
抑菌圈的大小反映了细菌对药物的敏感性。
3. 药敏片在临床用药中的应用药敏片检测结果可指导临床医生选择合适的抗生素进行治疗，避免抗生素滥用和细菌耐药性的产生。
四、实训过程1. 实训前，我们了解了药敏片的制作方法和检测原理，并熟悉了实训所需的材料。
2. 实训过程中，我们严格按照操作规程进行药敏片的制作和检测。
首先，将药敏纸片浸泡在无菌生理盐水中，然后涂布菌液。
接着，将药敏纸片放置在恒温培养箱中培养24小时。
最后，观察药敏纸片上的抑菌圈大小，判断细菌对药物的敏感性。
3. 在实训过程中，我们遇到了一些问题，如菌液涂布不均匀、药敏纸片放置不稳定等。
通过查阅资料和请教老师，我们解决了这些问题。
五、实训结果与分析1. 通过本次实训，我们掌握了药敏片的制作方法，熟悉了药敏片的检测原理。
2. 实训过程中，我们观察到抑菌圈大小与细菌对药物的敏感性呈正相关。
抑菌圈越大，表明细菌对药物的敏感性越高。
3. 实训结果还显示，部分细菌对常用抗生素表现出耐药性。
这提示我们在临床用药中，应合理选择抗生素，避免滥用。
药敏试验操作
药敏试验操作实验步骤一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1药敏片的准备：购买或自制2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1药敏片法3.1.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
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药敏纸片的制备及药敏试验方法
抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备
1.材料
抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等
2．方法
PBS的配制
A.制备L储备液
LNa2HPO4 ： +1000 mL蒸馏水
或 +1000 mL蒸馏水
L NaH2PO4 : +1000 mL蒸馏水
或 +1000 mL蒸馏水
B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用
L磷酸缓冲液的配制
抗菌药物原液的配制和保存期限
抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）－20℃4℃
青霉素 PBS 1280 3个月1周
半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周
头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周
氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周
四环素类 PBS 12803个月1周
多粘菌素B硫酸盐 PBS 12803个月2周
林可或氯林可霉素 PBS 12803个月2周
12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用
PBS
1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用
PBS
利福平先用甲醇溶解，再用 PBS 12803个月1周
万古霉素蒸馏水12803个月2周
两性霉素B 蒸馏水12803个月1周
12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶
解，再用蒸馏水
1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水
稀释
2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀
释
配制方法
A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终
体积。
例：要配制１２８０?g/mL 的庆大霉素５０毫升，所需要的纯抗菌药物质量为１２８０×５
０＝６４０００ ?g
B.根据纯抗菌药物的重量和抗菌药物原粉的百分比计算出所需抗菌药物原粉的重量，方法是：纯抗菌药物的质量÷抗菌药物原粉的百分含量。
如:某庆大霉素原粉的含水量为％，则需要庆大霉素原粉的质量为64000÷（1－％）＝×104 ?g==
C.各种抗菌药物按上述表进行溶解后定容。
D.无菌条件下过滤，4℃保存备用。
药敏纸片的制备
用打孔机将制作直径为6毫米左右的圆形滤纸，按50张一份，将制作好的滤纸分装到小西林瓶里，用牛皮纸封瓶口进行高压（121℃，15min）,烘干备用。
抗菌药纸片的制备
不同细菌对不同抗菌药纸片的药物含量要求标准
菌种抗微生物药纸片含药量（?g）肠杆菌科氨苄西林10
美洛西林75
哌拉西林100
替卡西林75
头孢唑啉30
头孢噻吩30
庆大霉素10
阿米卡星30
卡那霉素30
奈替米星30
链霉素10
四环素30
多西环素30
米诺环素30
环丙沙星或左氧氟沙星 5
吉米沙星 5
诺氟沙星10
氧氟沙星 5
西诺沙星100
奈啶酸30
磺胺药250或300
甲氧苄啶 5
A.根据不同药物药敏纸片的药物含量要求，计算出50片药敏纸片需要的药物总含量，方法是：５０×每张药敏纸片的含药量。
如：制备一份（５０片）含药量为１０?g的庆大霉素，所需的抗菌药物总质量为５０×１０＝5００ ?g
B.药物总含量除以抗菌药物原液的浓度，得出50片药敏纸片需要的抗菌药物原液的总体积，抗菌药物总质量÷抗菌药物原液浓度。
如：制备一份庆大霉素药敏纸片所需的抗菌药物原液的体积是5００÷１２８０＝０．390625mＬ即?Ｌ
C.在无菌条件下，将各抗菌原液加入装有纸片的小西林瓶中，用纸密封瓶口。
D.置西林瓶37℃烘箱，将含药物的纸片烘干。
E.在无菌条件下，取一片烘干后的药敏纸片加入到灭菌的肉汤中，检查是否有细菌污染，并用西林瓶盖将西林瓶密封，并置4℃保存。
小时后观察是否有细菌污染，将有污染的药敏纸片剔除，并重新再做；无污染的可用作纸片扩散法。
3.注意事项
⑴配抗菌药物原液前要清楚抗菌药物原粉的百分含量、批号和生产厂家。
⑵配制抗菌药物原液时，可能会遇到抗菌药物难溶的现象，这就要求用相应的助溶剂溶解。
⑶抗菌药物原液的终体积要用容量瓶定容。
⑷单位的换算（如强力霉素，含量887IU/mg，计算配制１２８０?g/mL 的强力霉素５０毫升，需要多少克强力霉素原粉？）
抗生素的效价通常以重量或国际单位（IU)来表示。
青霉钠1mg=1667 IU或1 IU＝ ?g
青霉素钾1mg=1559 IU或1 IU＝ ?g
制霉菌素1mg=3700 IU
其他抗生素多以重量为单位或1mg=1000 IU
⑸抗菌药物原液的终浓度可增大到5120?g/mL，这可缩减加入纸片中的抗菌药物原液的体积。
⑹根据标准，有时要求纸片的抗菌药物含量较低，加入的抗菌药物原液的量过少，不足以将50片纸片全部润湿时，应将抗菌药物原液用相应的灭菌PBS稀释到，混匀后再加入西林瓶内。
⑺制作纸片时，要多做几份进行高压，以备试验失败重做时，节约时间。
⑻药敏纸片在37℃烘干，可能需要一到两天的时间，切勿将纸片放入高温中烘干，以防药物失效。
⑼密封纸片后，可放入4冰箱保存或置阴暗干燥处保存，切勿受潮。
二. 药敏试验方法
常用的药物敏感试验有纸片法，试管法、挖洞法、挖沟法、琼脂稀释法和泡沫塑料片法，纸片法是生产中常用的药敏试验方法，具有简便、易行、出结果快的特点，适合于基层实验室开展。
1材料
普通琼脂、营养肉汤、药敏纸片（自制）、灭菌试管、灭菌棉拭和镊子、被试细菌、灭菌生理盐水
2 方法
A.挑取单菌落接种于3mL营养肉汤中，37℃培养16小时。
B.用无菌生理盐水将培养好的菌液做1:20稀释。
C.用无菌棉拭蘸取稀释过的菌液，在试管壁上挤去多余液体，涂于营养琼脂表面，每次旋转平板60度，共涂3次，使整个平板涂布均匀，分别涂布两块平板。
D.平板放置3～5分钟后，用无菌镊子取药敏纸片，贴于一平板表面，并轻压一下纸片，使其贴平，纸片间相距3mm左右。
E.于另一平板上，平均划分为6个区域，并在每个区域中贴同样的药敏纸片。
培养16～18小时，用尺子量取抑菌圈的直径3次，计算其平均值即为试验结果。
另一方面，量取贴有同样纸片的平板上的抑菌圈的直径，看直径大小是否一致，检查所做的药敏纸片的含药量是否一致。
3 结果判断
结果判定可参照以下标准
抗微生物药抑菌圈直径（mm）
耐药中介敏感
氨苄西林≤13 14-16 ≥17
美洛西林≤17 18-20 ≥21
哌拉西林≤17 18-20 ≥21
替卡西林≤14 15-19 ≥20
头孢唑啉≤14 15-17 ≥18
头孢噻吩≤14 15-17 ≥18
庆大霉素≤12 13-14 ≥15
阿米卡星≤14 15-16 ≥17
卡那霉素≤13 14-17 ≥18
奈替米星≤12 13-14 ≥15
链霉素≤11 12-14 ≥15
四环素≤14 15-18 ≥19
多西环素≤12 13-15 ≥16
米诺环素≤14 15-18 ≥19
左氧氟沙星≤13 14-16 ≥17
环丙沙星≤15 16-20 ≥21
吉米沙星≤15 16-19 ≥20
诺氟沙星≤12 13-16 ≥17
氧氟沙星≤12 13-15 ≥16
西诺沙星≤14 15-18 ≥19
奈啶酸≤13 14-18 ≥19
磺胺药≤12 13-16 ≥17
甲氧苄啶≤10 11-15 ≥16
4.注意事项
⑴严格控制细菌培养的时间，以防过多的细菌而影响试验结果的可靠性。
⑵涂布已稀释的菌液时，切勿将棉拭挤压过干，要保证有足够的菌量。
⑶涂布前，可用记号笔将平板平分为六个区域，以便进行涂布。
⑷涂布时，注意用力不能太大，切勿将琼脂破坏。
⑸把纸片平贴于培养基后，应将平板倒置放入培养箱中培养。