不同体积排阻色谱柱性能的比较
体积排阻色谱
一. 分离原理尺寸排阻色谱法：是按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法，也称凝胶色谱法。
排阻色谱的固定相多为凝胶。
凝胶是一种由有机分子制成的分子筛, 其表面惰性, 含有许多不同大小孔穴或立体网状结构。
凝胶的孔穴大小与被分离组分大小相当, 对不同大小的组分分子则可分别渗到凝胶孔内的不同深度。
尺寸大的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内, 但进不了小孔, 甚至于完全被排斥，先流出色谱柱。
尺寸小的组分分子, 大孔小孔都可以渗进去, 最后流出。
因此, 大的组分分子在色谱柱中停留时间较短, 很快被洗出。
小的组分分子在色谱柱中停留时间较长。
经过一定时间后, 各组分按分子大小得到分离。
当组分X进入柱子后,它就要从高浓度的流动相向固定相孔隙内的流动相扩散。
当组分X进入色谱固定相达到扩散平衡时：Xm ⇌ Xn组分的分配系数为：尺寸排阻色谱中任何组分的分配系数应符合：0 ≤ K ≤ 1二. 固定相尺寸排阻色谱常用固定相有无机和有机两大类。
无机凝胶：又称硬质凝胶。
是具有一定孔径范围的多孔性凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃珠等，此类凝胶化学惰性、稳定性及机械强度均好，耐高温，使用寿命长，但装柱时易碎，不易装紧，柱效较低。
有机凝胶：又称半硬质凝胶。
如苯乙烯二乙烯苯交联共聚物凝胶，能耐较高压力，适用于有机溶剂作流动相，有一定可压缩性，可填得紧密，柱效较高。
但在有机溶剂中有轻度膨胀。
新型凝胶色谱填料，克服了传统软填料的一些弱点，粒度细，机械强度高，分离速度快，效果好，特别是无机填料表面键合亲水性单分子层或多层覆盖的单糖或多糖型等填料广泛用于生物大分子的分离。
三. 流动相尺寸排阻色谱流动相：从样品的溶解性考虑，流动相应与凝胶本身有相似性，黏度低，与样品的折光率相差大;能润湿凝胶，防止吸附作用。
常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷(凝胶渗透色谱);水(凝胶过滤色谱)等。
(可用于分离相对分子质量大的分子，如蛋白质、核酸等)。
色谱柱知识讲解
1、反相色谱的流动相不再需要烃类、氯仿这些 更危险的有机溶剂，使用起来更加简单和安全。 2、而极性强的化合物由于分子间作用力更强， 往往沸点不低，不适合用气相分析，更适合用反 相液相色谱分析
1、反相色谱的流动相有更多的参数选择：PH、缓冲盐种类、浓 度等，能更好地调整分离效果，而正相色谱可调整的流动相参数 非常有限
1、当样品流经凝胶色谱柱时，直径较大的化合物，不易进入凝 胶颗粒的微孔中，所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中，并不断的进出和扩散，因此，较晚出峰。
主要内容
正相 色谱 反相 离子对 色谱
色谱ห้องสมุดไป่ตู้
色谱
亲水作 用色谱
凝胶 色谱
正相色谱
固定相极性大于流动相极性 流动相是弱极性：如正己烷、石油醚等 固定相是有极性：布满硅羟基的硅胶
极性大的化合物 极性小的化合物
固定相（极性大） 流动相（极性小）
出峰慢 出峰快
反相色谱
流动相极性大于固定相极性 流动相是强极性：如甲醇、水
离子对色谱
又叫离子交换色谱
适用：化合物极性特别强， 一言不合就电离
原理：可增强离子和固定相 的相互作用，使不同的化合 物得到分离
凝胶色谱
又叫体积排阻色谱
不管是正相、反相还是离子交换色谱，化合物出峰的情况都是和极性相 关的，而凝胶色谱的出峰却只和化合物的大小有关，所以也叫体积排阻 色谱。
1、当样品流经凝胶色谱柱时，直径较大的化合物，不易进入凝 胶颗粒的微孔中，所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中，并不断的进出和扩散，因此，较晚出峰。
体积排阻色谱 (sec)柱用的仪器
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的色谱技术，也称为凝胶过滤色谱，它基于分子在流体中的尺寸和形状的差异，从而实现对分子的分离和分析。
而在SEC技术中，柱是至关重要的部分，体积排阻色谱柱是SEC技术中使用的一种特殊类型的柱，下面将详细介绍体积排阻色谱柱用的仪器。
1. 体积排阻色谱柱的特点体积排阻色谱柱是一种工程化的柱，与常规液相色谱柱有所不同。
它具有以下特点：（1）外围设计：体积排阻色谱柱通常采用不锈钢或者玻璃材质制成，外围设计均匀、结构合理，能够有效支持柱内填料，确保填料不会受到外力破坏。
（2）填料选择：体积排阻色谱柱的填料通常是粒径均匀的多孔球形颗粒，具有一定的孔径范围，能够较好地分离分子。
（3）稳定性：体积排阻色谱柱能够在一定的操作条件下保持较好的稳定性，不易受到外界影响而发生变形或损坏。
（4）易于连接：体积排阻色谱柱通常设计成易于连接的结构，可以与其他色谱设备灵活组装，便于操作和维护。
在体积排阻色谱实验中，除了色谱柱外，还需要配备一系列的仪器，以确保实验顺利进行。
主要的仪器包括：（1）色谱系统：用于将样品注入到色谱柱中，并控制流速、温度等操作参数。
色谱系统通常包括进样器、泵、检测器等部件。
（2）检测器：用于监测样品在色谱柱中的运动轨迹并进行信号采集和处理。
常见的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、光散射检测器等。
（3）设备连接：用于连接色谱柱和其他仪器，包括管道、接头、密封件等。
这些连接件需要具有良好的密封性能，以避免样品泄漏。
（4）温控设备：用于控制色谱柱和样品的温度，以确保实验在恒定的温度条件下进行。
在选择和使用体积排阻色谱柱时，需要注意以下几点：（1）填料选择：根据待分离的目标分子的分子量范围，选择合适的填料颗粒大小和孔径范围。
（2）流速控制：流速对于色谱分离效果至关重要，需要根据实验要求合理设置流速。
体积排阻色谱_(sec)柱用的仪器_概述说明以及解释
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器概述说明以及解释1. 引言1.1 概述体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的分离和测定高聚物、生物大分子以及纳米材料的方法。
它基于溶剂流动时样品在柱填充物中的渗透性，通过这种渗透性差异来实现对不同大小分子的分离。
SEC在生命科学、化工、材料科学等领域具有广泛的应用前景。
本文旨在对体积排阻色谱所使用的仪器进行概述说明，并解释其工作原理和关键组件。
同时，我们将介绍体积排阻色谱柱的结构、选择和优化方法，以及对样品准备、流动相选择和优化、参数设置和调整等方面给出操作注意事项。
1.2 文章结构本文包括引言、体积排阻色谱(SEC)柱介绍、体积排阻色谱仪器装置及关键组件说明、体积排阻色谱分析方法和操作注意事项以及结论部分。
在引言中，我们将对文章内容进行概述说明，并明确文章结构。
接下来，我们将详细介绍SEC柱的原理、结构以及选择和优化方法。
然后，我们将对体积排阻色谱仪器装置中的压力控制系统、流速控制系统和柱温控制系统进行说明。
在接下来的部分，我们将介绍体积排阻色谱分析方法所涉及的样品准备与预处理要点、流动相选择和优化方法以及参数设置和调整技巧。
最后，我们通过结论对整篇文章进行总结。
1.3 目的本文的目标是全面介绍体积排阻色谱所使用的仪器，帮助读者了解仪器的工作原理和关键组件，并提供一些操作须知。
通过阅读本文，读者将对体积排阻色谱有更深入的了解，并能够在实验中正确选择和使用相关设备，从而更好地开展SEC 柱分析工作。
2. 体积排阻色谱(SEC)柱介绍:2.1 SEC柱原理:体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，简称SEC）是一种基于分子尺寸差异的色谱技术。
该技术利用特殊设计的SEC柱实现对溶液中分子的分离和纯化。
其原理是根据样品中溶质分子在柱填料孔隙中的扩散速度而进行分离。
大尺寸分子由于无法进入较小的孔隙而沿柱床快速流过，而小尺寸的分子则能进入较小孔隙并在其中被滞留更长时间，因此产生了不同尺寸分子之间的强迫排阻现象。
常见液相色谱柱性能比较
常见液相色谱柱性能比较一、高性能色谱柱特点：柱效高，价格高，通用性好，使用寿命长，pH范围宽1、Waters公司Xbridge2005年waters公司推出，杂化颗粒柱。
优点：pH 1-12,在高pH状态下，没有能与此色谱柱匹敌的，目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下（9-12）普遍寿命很短，如Gemini，资生堂公司Capcell，YMCPro-C18，包括waters的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长，Zorbax Extend更是不堪。
柱效与一流的硅胶柱相当，甚至有过之无不及，杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效，Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围，但是柱效低的问题无法解决，这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。
在如此宽的pH范围，最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法（pH1-3,pH9-12），这样能得到更稳定更容易重现的方法，对酸性，中性，尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。
注：Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料，只是颗粒度是1.7um，所以不再重复。
缺点：价格高，平均每支￥7000多的，不是大多数中国客户可以接受的。
2、MerckChromolith整体化色谱柱Merck公司2001年推出。
优点：高流速、低压力，可以快速分析样品，因为压力低，所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题，低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在，中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵，在处理比较脏的样品的时候会优势很大（如中药），实际的寿命也因此延长。
这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快，特别适合之前分析时间超长的实验条件，目前很好的例子就是人参的指纹图谱，因为成分复杂，之前出峰要2个小时，现在用整体化色谱柱30min就可以分析完了（已有报导），且不影响柱效，类似于UPLC，但不像UPLC那么容易堵。
缺点：规格单一，单价比较高，单价￥7000左右，所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。
体积排阻色谱 (sec)柱用的仪器
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：体积排阻色谱（size exclusion chromatography，SEC）是一种分离技术，通过固定在柱内的多孔分子筛来分离溶液中的大分子和小分子。
SEC技术在生物化学、药物研究和生物医学领域中得到广泛应用，因此对SEC柱用的仪器也要求越来越高。
SEC柱用的仪器主要包括色谱柱、色谱柱箱、流动相系统、检测器和数据处理系统等部分。
色谱柱是SEC技术的核心组成部分，它通过分子筛效应来分离目标分子。
色谱柱的选型会直接影响到分离效率和分辨率，因此选择合适的色谱柱对于SEC柱用的仪器至关重要。
常见的色谱柱材质有硅胶、聚碳酸酯、聚乙烯醇等，不同的材质适用于不同的分析范围和分子量范围。
色谱柱箱是SEC柱用的仪器中的另一个重要组成部分，它负责将溶液以流动相的形式送入色谱柱，并确保色谱柱稳定地运行。
色谱柱箱通常需要具备一定的自动化功能，如流速控制、温度控制和压力控制等，以确保分析的精确度和重复性。
一些先进的色谱柱箱还具备多柱并联的功能，可以同时进行多种样品的分析，提高实验效率。
流动相系统是SEC柱用的仪器中的另一个关键部分，它负责将溶液从样品进样口送入色谱柱中，以进行分析。
流动相系统通常需要具备高精度的流速控制功能，以确保色谱柱内的流速稳定，并通过机械泵、梯度泵等方式来实现不同流速的控制。
一些先进的流动相系统还具备多通道进样功能，可以同时进行多个样品的分析，提高实验的效率。
检测器是SEC柱用的仪器中的另一个重要组成部分，它负责检测色谱柱中流出的溶液成分，并将检测到的信号转化为电信号输出。
常见的检测器有紫外检测器、荧光检测器、光散射检测器等，不同的检测器适用于不同的分析目标。
在SEC技术中，光散射检测器特别适用于大分子的分析，因为它可以直接测定分子的分子量分布和聚集度等参数。
数据处理系统是SEC柱用的仪器中的最后一个重要组成部分，它负责对检测器输出的信号进行数据处理和分析，并对结果进行显示和记录。
8-4 液相色谱之体积排阻色谱
体积排阻色谱法
体积排阻色谱法的分离原理
SEC分离机理
SEC原理
SEC分离机理
固定相
无机填料（多孔硅胶或多孔玻璃）
优点：可以耐高温；机械性能稳定
缺点：表面具有吸附性，干扰SEC分离机理(硅烷化)有机填料（交联聚苯乙烯凝胶）【广泛使用】
优点：渗透性能好；柱效高
缺点：不宜长期高温条件使用
流动相
流动相的要求
•能完全溶解试样；但不与试样反应；
•不与填料有任何相互作用；
•黏度低；沸点比柱温高20-50摄氏度
•与检测器匹配，提高灵敏度。
SEC方法特点
•保留时间是分子尺寸的函数
•保留时间短，谱峰窄，容易检测
•柱子使用寿命长（固定相与组分作用力弱）
•不能分辨分子大小相近的化合物（相差10%以上）。
TSKgelSW系列体积排阻色谱柱的介绍
TSKgel G4000SWxl :
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
125 Å 孔径尺寸适用于蛋白和多肽分析 250 Å 孔径尺寸适用于大多数蛋白分析 450 Å 孔径尺寸适用于超大型蛋白和核酸
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
TSK gel SW系列的分类：
SW: 10-13 微米
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
TSKgel G2000SW :
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
TSKgel G3000SWxl :
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
Aplication:
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
TSKgel G2000SWxl :
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
色谱柱键合相种类
色谱柱键合相种类一、正相键合相正相键合相采用能与组分发生化学吸附或正相萃取作用的官能团，如胺基、氰基、环糊精等。
正相色谱适用于分离酸性和中性物质，效果非常好。
二、反相键合相反相键合相是应用最广泛的色谱柱类型，通常采用C18、C8等非极性烷基键合相。
反相色谱适用于分离非极性和中等极性的物质，是应用最广泛的分离模式之一。
三、离子交换键合相离子交换色谱采用离子交换剂作为固定相，根据物质电荷性质的差异实现分离。
离子交换色谱适用于分离离子或可离解的化合物。
四、体积排阻键合相体积排阻色谱也称为凝胶色谱，采用凝胶作为固定相，根据物质分子大小进行分离。
体积排阻色谱适用于分离大分子物质，如蛋白质、多肽等。
五、亲水性相互作用键合相亲水性相互作用色谱采用具有亲水作用的官能团，如磺酸基、羧酸基等。
这种色谱柱利用组分与固定相之间的水合作用实现分离。
亲水性相互作用色谱适用于分离亲水性的化合物。
六、极性相互作用键合相极性相互作用色谱采用极性键合相，如氨基、二醇基等。
这种色谱柱利用组分与固定相之间的极性相互作用实现分离。
极性相互作用色谱适用于分离极性物质。
七、手性键合相手性色谱采用手性键合相，如氨基丙胺基苯基等，可拆分具有对映异构体的物质。
手性色谱是拆分对映异构体的关键技术之一。
八、氧化还原键合相氧化还原色谱采用具有氧化还原性质的官能团，如酚羟基、硝基等。
这种色谱柱利用组分与固定相之间的氧化还原反应实现分离。
氧化还原色谱适用于分离具有氧化还原性质的物质。
九、紫外光吸收键合相紫外光吸收色谱采用具有紫外光吸收官能团的固定相，如苯基等。
这种色谱柱利用组分对紫外光的吸收实现分离。
紫外光吸收色谱适用于分离具有紫外光吸收的物质。
十、杂化键合相杂化色谱采用介于极性与非极性之间的官能团，如氰基甲基硅烷基等。
这种色谱柱结合了反相和正相的分离机制，具有更好的分离效果和适应性。
杂化键合相适用于分离不同性质的化合物。
赛分科技-SRT体积排阻色谱柱
体积排阻色谱柱体积排阻色谱柱体积排阻色谱柱—水溶性体积排阻色谱柱水溶性体积排阻色谱柱概述SRT 、Zenix 、SRT-C 和Zenix-C 系列体积排阻色谱柱均采用经特殊表面修饰的高纯硅胶作为填料，其修饰方式为在硅胶表面化学键合一层均一、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜。
SRT 、Zenix 和SRT-C 、Zenix-C 键合方式的不同之处在于：前两者固定相表面键合的是一层“站立”着的单分子层，而后两者则是一层“平躺”着的单分子层。
同时Zenix 和Zenix-C 为3 um 粒径，SRT 和SRT-C 为5 um 粒径，这四款体积排阻柱相互配合，可满足客户对分辨率及柱效的不同要求。
赛分科技完整的产品线为生物分子体积排阻分离提供了稳定、重现和最高分辨率的最优选择。
固定相的差异图1. 固定相修饰的差异：SRT 和Zenix 在硅胶表面修饰了一层“站立”着的亲水中性单分子层，SRT-C 和Zenix-C 在硅胶表面修饰了一层“平躺”的亲水中性单分子层。
粒径差异图2. Zenix 和Zenix-C 以3 µm 多孔硅胶为基质； SRT 和 SRT-C 以5 µm多孔硅胶为基质Zenix 和Zenix-C 的独特优点Zenix 和Zenix-C 色谱柱采用3 µm 粒径的填料，为生物分子的分离提供最高的柱效。
表1. Sepax SEC 色谱柱的主要特点SRT体积排阻色谱柱SRT SEC键合固定相采用专利的表面修饰技术，通过在高纯度具有良好机械稳定性的硅胶基质上，键合一层均匀的纳米厚度中性亲水薄膜而制备得到。
工艺采用可控的化学修饰技术，因此能确保柱与柱之间有着可靠的重现性。
SEC填料采用化学键合技术，表面亲水涂层覆盖完全，因此不仅具有优异的稳定性，而且对蛋白等生物样品的非特异性吸附作用也非常小。
精心设计的大孔体积可保证高的分离容量以及优异的分辨率。
广泛应用于生物分子及水溶性聚合物的分离和检测。
体积排阻色谱 孔径
体积排阻色谱孔径
体积排阻色谱的孔径是指用于分离样品的色谱柱的孔径大小。
体积排阻色谱是基于样品分子在填充有固定相的色谱柱中流动的速度差异来进行分离的。
色谱柱的孔径大小会直接影响分离效果和分离时间。
孔径较大的色谱柱会有更高的通透性和较快的流速，分离效果会更好，但可能会出现分辨率较低的情况。
孔径较小的色谱柱会有较慢的流速和较高的分辨率，但可能会导致分离时间较长。
常见的体积排阻色谱柱的孔径范围一般为1.8 μm至10 μm，
常用的孔径包括2 μm、3 μm、5 μm和10 μm。
选择合适的孔
径大小需要考虑到分离目标、样品特性和分析要求等因素。
液相色谱柱规格与进样体积的关系
液相色谱柱规格与进样体积的关系
液相色谱柱的规格与进样体积存在一定的关系。
一般来说，进样体积应该尽量小，以避免柱内液相的负载过大，引起色谱峰形状的扩宽或分离效果的减弱。
同时，进样体积也会影响色谱系统的灵敏度和线性范围。
在选择液相色谱柱规格时，通常需要考虑进样体积的大小。
较小的进样体积可以使用较短的柱子，从而提高分离速度。
对于较大的进样体积，需要选择较长的柱子，以保证足够的分离效果。
总之，液相色谱柱的规格和进样体积之间不存在固定的关系，具体选择应根据实验需求和分离效果来确定。
1.干货 解析药品研究中药物分析C18 色谱柱的差异与选择
本文转自：北京药研汇高效液相色谱（HPLC）法选择性高、灵敏度高、分析速度快，而且大部分可以溶解的药物能用该法分析，所以该技术已经成为药物分析的首选。
色谱柱是高效液相分离系统的中最重要的环节，业内常把色谱柱比喻为液相色谱的心脏，因为色谱柱的类型决定了色谱系统的性质，色谱柱的粒径和长度影响了分析时间和分析效率。
氨基柱、苯基柱、氰基柱等正相色谱柱和C18、C8等反相色谱柱是药物分析与评价工作中最常见的两类色谱柱。
以碳十八硅烷化学键合硅胶固定相（C18 或ODS）的反相色谱出色地完成了液相色谱分析任务，而且与其他色谱相比，C18反相色谱有明显的优势，它可直接进样分析水溶性样品，因而适用范围广，被誉为“标准固定相分离模式。
各国药典涉及使用液相色谱法进行检测的品种当中，C18色谱柱作为固定相应用最为广泛。
目前市场上有600多种C18色谱柱，且不断有新的色谱柱出现。
采用不同的C18色谱柱分析具体样品时，保留时间、溶质之间的分离情况、出峰顺序等色谱柱的保留行为都可能出现较大的差异。
《美国药典》（USP）、《欧洲药典》和《日本药局方》对色谱柱的规定比较详细，除注明填料所属的大类别外，通常还给出色谱柱的内径、长度、粒径、比表面积等信息，有些品种还会直接注明色谱柱的厂家。
在美国药典委员会网站可查询到USP 推荐的色谱柱品牌与型号。
而《中国药典》仅指明色谱柱的填料大类，如十八烷基硅烷键合硅胶。
由于《中国药典》缺少选择色谱柱方面的详细指导，使得药典推荐方法的执行遇到困难。
在参考文献执行某一HPLC方法时，当无法获得文献中所用色谱柱时，需要寻求选择性相似的色谱柱代替。
1 C18 色谱柱的差异十八烷基硅烷（常被称为ODS 或C18）是最早的键合固定相之一，C18是具有烷基链的硅烷化剂与硅胶表面的硅醇基反应制得的键合相。
因为使用了共价键和的方式将烷基链紧紧固定在硅胶表面，所以烷基链不会被流动相冲洗掉，作为色谱固定相稳定发挥作用。
气相色谱柱分类和比较
⽓相⾊谱柱分类和⽐较A gilentGC⾊谱柱应⽤范围及与其他公司GC⾊谱柱对照表HP-1－⼆甲基聚硅氧烷柱说明：这是最常⽤的⾮极性键合固定相，HP-1（⼆甲基聚硅氧烷），具有极好的热稳定性并且在⾼温下流失很⼩，具有低的检测限相似的固定相：DB-1,Rtx-1,SPB-1,CP Sil 5CB,MDN-1,DB-1h.t.,AT-1 007-1恒温/程序升温温度范围：-60⾄325/350℃,-60⾄300/320℃0.53内径，-60⾄260/280℃>2.0mm液膜应⽤：胺类、烃类、农药、多氯联苯、酚类、含硫化合物HP-1 25m, 0.20mm, 0.33um HP-1 30m, 0.32mm, 0.25umHP-1 15m, 0.25mm, 0.25um HP-1 30m, 0.32mm, 1.0umHP-1 30m, 0.25mm, 0.25um HP-1 60m, 0.32mm, 0.25umHP-1 60m, 0.25mm, 0.25um HP-1 15m, 0.53mm, 1.5umHP-1 30m, 0.53mm, 2.65umHP-35-⼆苯基-65%-⼆甲基硅氧烷共聚物说明：HP-35柱是⽤苯基取代甲基的聚硅氧烷固定相柱。
EPA（美国环保暑）⽅法8081和UPS（美国药典）G-42中已经指定⽤此固定相。
HP-3 5的中极性使其成为分析杀⾍剂、除草剂、药物和胺的良好选择。
相似的固定相：DB-35,Rtx-35,SPB-35,AT-35,Sup-herb等温/程序升温温度范围：-40⾄300/320℃40⾄280/300℃应⽤：芳氯物(Aroclors)、胺类、杀⾍剂、药品HP-35 15m, 0.25mm, 0.25um HP-35 30m, 0.32mm, 0.15umHP-35 30m, 0.25mm, 0.25um HP-35 30m, 0.32mm, 0.25umHP-35, 60 meter, 0.25mm, 0.25um HP-35 30m, 0.32mm, 0.5umHP-FFAP(键合和改性的交联聚⼄⼆醇)说明：HP-FFAP柱主要特点是能够分析有机酸、游离脂肪酸或⽤于⼀些需要定量分析微量酸样品。
体积排阻色谱 叠氮化钠
体积排阻色谱（SEC）是一种常用于分离和纯化多聚物的技术。
在SEC色谱
中，叠氮化钠通常被用作添加剂，以预防细菌等微生物的生长。
然而，叠氮化钠无法有效地除去已存在的微生物污染。
在SEC色谱中，如果系统被微生物污染，需要先用水冲洗以除去色谱柱中的缓冲盐，再用有较高有机物含量的混合液（如50：50的乙腈/水）冲洗整个系统。
此外，保护柱或在线过滤器也很有可能被堵塞，需进行清洁或更换。
对于体积排阻色谱，进样量不能超过柱体积的5%。
一根300 x 7.8mm 规格的色谱柱的柱体积约为14mL，因此进样量不能超过700 uL。
此外，尽量保证样品的粘度和含盐浓度与流动相一致。
如果样品溶剂的粘度大于流动相，粘度差异同样会引发“指形效应”。
样品浓度在体积排阻色谱中也非常重要。
样品/蛋白浓度越高，样品粘度越大。
以上信息仅供参考，如有需要，建议咨询专业人士。
第二期各种不同色谱柱在填料上的化学差别
第二期各种不同色谱柱在填料上的化学差别
2014-02-17蒋竞波谱分析
色谱柱是什么
1）反相色谱柱C8，C18，phenyl，氰基柱，这些反相色谱柱都是硅胶基质，然后利用硅胶上面的硅羟基，连接不同的键合相，从而得到不同类型的的色谱柱。
下面这张图是色谱柱里面硅胶的围观结构
2）键合相是通过什么样的办法连接上硅胶的呢？它们是通过氯硅烷与硅羟基反应脱去一份子HCl完成键合和连接的，下图中R的种类决定了柱子的型号，如果R是C8则这个柱子是C8柱，如果R是C18则这个柱子就是C18柱子。
3）为什么不同的色谱柱会产生不同的分离效果呢？这主要是由不同的R基团与样品的相互作用的差异造成的，比如C8 和C18的柱子的差别在疏水性，phenyl柱如果遇到含有苯环的化合物除了有疏水作用还会产生苯环与苯环两个平面的相互作用，下面是一组化合物在
不同的填料上的出峰情况，
4）什么是色谱柱的封端，色谱柱为何要封端？
色谱柱封端指的是用四甲基硅氯封住硅胶表面裸露的羟基，有与TMSCl比键合相分子要小很多，所以它有机会与更多的羟基反应，实现封端，封端的目的主要是为了减少硅胶上的OH与急性样品形成比较强的氢键左右而形成拖尾。
下面就是柱子封端示意图。
5）那么应该如何根据结构来选择色谱柱呢？请看下回分解
上一期主题是：HPLC方法开发如何选择流动相pH, 在对话框中直接回复pH即可收到相关主题，
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蒋竞 17-Feb-2014。
常用C18柱不同性能介绍
大家好。
我是资生堂先端科学事业推进部的城田•修。
今天为大家讲解的第一个主题是“常用C18色谱柱不同特性及聚合物包被型色谱柱的介绍”。
因为只要是能够溶解在溶剂中的物质都可以成为分析对象，所以液相色谱可以广泛应用在各个领域。
液相色谱中使用C18柱的反相色谱法以生物体相关物质为分析对象，能够满足主要研究领域的需要，使用最为广泛。
现在，市场上出售的C18柱品牌繁多，约有数百种。
在此，向大家介绍多种C 18柱共存的原因以及从中选择符合分析目的商品的一些技巧。
此主题相关图片如下1-2.jpg：C18填料制法如下。
将具有烷基链的硅烷化剂与硅胶表面的硅醇基反应。
因为使用了共价键和的方式将烷基链紧紧固定在硅胶表面，所以烷基链不会被流动相冲洗掉，作为色谱固定相稳定发挥着作用。
这张图描述的C18填料的合成过程看似简单，但实际上固相与液相之间的反应比液相之间的反应更难控制。
与一般化学品相比，对色谱填料再现性的要求也会高很多。
如果实际使用的原料和反应条件稍有差别，最终产品的分离特性将会有很大改变。
这种变化，随目的不同或者成为缺点，或者也可能成为优点。
但是，如果不具有良好再现性，在实际应用中就不能被采用。
这样，在市场上就出现了数百种具有不同分离选择特性的C18色谱柱。
此主题相关图片如下1-3.jpg：关于填料的合成进一步详细说明。
市场上的商品大多分为两个步骤进行合成。
首先，如刚才介绍的，将C18基团导入到硅胶表面。
接下来进行第二步反应，将小分子试剂导入到第一步残留的硅醇基上，此过程被称为封尾。
通过封尾，尽可能地减少原料硅胶的影响，确保与硅胶表面有较强相互作用的化合物的分离效果。
另外，通过此步骤，能够比较容易的确保产品性能的再现性。
不受原料硅胶自身特性影响，提供性能稳定的商品是厂家永恒的课题。
另外，最近作为硅胶的替代物，含有机物的原料也在商品化并在出售，但是，这样的原料还没有超过硅胶，大半的商品仍然是以硅胶为原料。
此主题相关图片如下1-4.jpg：C18键合型填料差别化的主要原因如下。