凝胶过滤色谱柱说明
凝胶过滤色谱实验报告
一、实验目的1. 了解凝胶过滤色谱（Gel filtration chromatography，GFC）的基本原理和操作方法。
2. 掌握凝胶过滤色谱在分离、纯化蛋白质等生物大分子中的应用。
3. 通过实验验证凝胶过滤色谱的分离效果。
二、实验原理凝胶过滤色谱是一种根据分子大小进行分离的技术，其基本原理是利用凝胶的分子筛特性。
凝胶是一种具有多孔结构的物质，孔径大小不一，当混合物通过凝胶时，分子大小不同的物质会被不同程度地阻滞在凝胶孔隙中，从而实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质样品：牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）、酵母提取物（Yeast Extract）- 凝胶色谱柱：Sephadex G-75- 缓冲液：磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 标准分子量蛋白质：分子量分别为6.5×10^4、1.4×10^5、2.0×10^5、4.0×10^5、6.0×10^5的蛋白质混合物2. 实验仪器：- 凝胶色谱仪- 超速离心机- 荧光检测器- 移液器- 离心管- 吸管四、实验步骤1. 准备凝胶色谱柱：将Sephadex G-75凝胶柱安装在凝胶色谱仪上，用磷酸盐缓冲液（pH 7.4）平衡凝胶色谱柱，使其达到稳定状态。
2. 准备样品：将标准分子量蛋白质混合物、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白和酵母提取物分别溶解于磷酸盐缓冲液中，制成蛋白质溶液。
3. 上样：将蛋白质溶液加入凝胶色谱柱，使样品在凝胶色谱柱中均匀分布。
4. 流动：打开凝胶色谱仪，以一定流速（如1 mL/min）进行洗脱，收集洗脱液。
5. 分析：将收集到的洗脱液进行检测，记录蛋白质的洗脱峰，并分析其分子量分布。
6. 离心：将洗脱液中的蛋白质进行离心，分离出蛋白质沉淀。
7. 质量分析：将蛋白质沉淀进行电泳、质谱等分析，验证其纯度和分子量。
五、实验结果与分析1. 凝胶过滤色谱洗脱曲线：通过凝胶色谱仪收集洗脱液，绘制洗脱曲线。
凝胶色谱柱
装柱由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。
凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。
最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。
将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。
柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。
最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、柱均匀性检查凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。
由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有“纹路”或气泡。
也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、上样凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。
凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。
为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。
样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。
当一切都准备好后，这时可打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。
用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中，打开流出口，使样品液渗入凝胶床内。
当样品液面恰与凝胶床表面平时，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。
重复上述操作及此，每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床，又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。
凝胶排阻色谱的原理及应用
凝胶排阻色谱的原理及应用1. 简介凝胶排阻色谱（Gel Permeation Chromatography，简称GPC），也被称为凝胶滤波色谱或者凝胶过滤色谱，是一种基于溶剂流动经过固定的凝胶柱而进行的分离技术。
该技术主要用于分离和测定分子量较小的聚合物、天然产物和有机物等。
通过选择不同粒径的凝胶柱和溶剂体系，可以实现对样品的分子量分布进行精确测定。
本文将详细介绍凝胶排阻色谱的原理及其应用。
2. 原理凝胶排阻色谱的原理基于分子在凝胶柱内的通透性差异。
凝胶柱是由交联聚合物构成的，其具有连续的孔隙结构。
当样品溶液通过凝胶柱时，样品分子会在凝胶柱内部的孔隙中进行扩散和流动。
分子量较小的样品分子可以更快地通过凝胶柱，而分子量较大的样品分子则会受到凝胶柱孔隙的阻滞，流动速度较慢。
根据上述原理，可以得到以下几个关键步骤：2.1 样品加载样品通常是通过溶解在溶剂中得到的溶液加载到凝胶柱中。
为了提高样品的分离效果，通常需要先将样品溶液过滤，去除其中的杂质颗粒。
2.2 柱选取选择合适的凝胶柱是关键的一步。
凝胶柱的孔隙大小直接影响到样品分子的通过速率。
通常情况下，需要通过试验和对比来选择合适的凝胶柱。
2.3 流动程式样品溶液通过凝胶柱的流动程式也会影响到分离效果。
通常采用定压和定流速两种方式进行分析。
2.4 分析检测样品溶液通过凝胶柱后，收集到的溶液可以使用不同的检测方法进行分析。
常用的检测方法包括紫外吸收检测、荧光检测和折射率检测等。
3. 应用凝胶排阻色谱技术在许多领域都有重要的应用，主要包括以下几个方面：3.1 聚合物分析凝胶排阻色谱常被用来测定聚合物的分子量分布。
聚合物溶液经过凝胶柱时，分子量较小的聚合物可以快速通过，而分子量较大的聚合物则会受到凝胶柱孔隙的阻滞。
通过测定各个组分的保留时间，结合标准品曲线，可以得到准确的分子量分布。
3.2 天然产物分析凝胶排阻色谱也被广泛应用于天然产物的分析。
例如，对于测定蛋白质的相对分子质量，凝胶排阻色谱是一种较为常用的分析方法。
凝胶色谱柱的基本介绍
凝胶色谱柱的基本介绍凝胶色谱柱是一种广泛应用于生物化学和生物分析领域的柱层析技术。
它通过利用物质在固定在凝胶柱上的多孔材料中的分配和排除效应来实现对样品分离和纯化的目的。
凝胶柱的填料通常由交联聚合物或生物高分子构成，如琼脂糖、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等。
凝胶色谱通过控制样品溶液中的分子在柱体高度约束的情况下，根据分子大小、形状、电荷等性质的差异进行分离。
下面将对凝胶色谱柱的原理、种类和应用进行详细介绍。
凝胶色谱柱的原理基于分子在凝胶填料中的扩散速率的不同。
凝胶填料的多孔结构提供了大量的吸附位点，使得分子可以在填料内部进行扩散。
分子越大，扩散速率越慢，因此会在柱层析过程中停留更长的时间，从而迟滞分离。
与此同时，分子的外部特性也会影响到在凝胶填料中的分配。
例如，根据一个分子的电荷状态（阳离子或阴离子）以及其与填料表面之间的相互作用，分子可能会快速进入或迅速排除凝胶材料中。
根据凝胶色谱柱的填料材料的不同，凝胶色谱柱可以分为凝胶滤析柱和凝胶排阻柱两种主要类型。
凝胶滤析柱是利用分子的大小差异进行分离的。
其中，琼脂糖滤析柱是最常见的滤析柱之一、琼脂糖是一种天然生物高分子，具有多孔结构。
样品溶液在柱体中通过扩散和龋流，大分子会被限制在空隙较小的凝胶颗粒中间，分子量较小的则会通过凝胶颗粒的孔隙流出柱底。
由于分子重量的差异，样品中的分子将根据其大小被分离。
凝胶排阻柱是利用分子的大小和形状差异进行分离的。
其中最常见的是聚丙烯酰胺凝胶排阻柱。
这种柱材具有均匀的孔隙结构，使得分子可以自由扩散。
大分子由于体积大、形状复杂，会更慢地扩散，而小分子由于体积小、形状简单，会更快地穿过凝胶孔隙，从而实现了分离纯化目标。
凝胶色谱柱具有以下几个优点。
首先，它可以在温和的条件下进行分离，无需高压条件，从而保持样品的完整性。
其次，凝胶色谱柱可用于分离和纯化广泛的生物分子，如蛋白质、多肽、核酸等。
此外，凝胶色谱技术简单易行，操作方便，成本相对较低。
凝胶过滤色谱名词解释
凝胶过滤色谱名词解释凝胶过滤色谱(gelselution column chromatographic technique)，是一种新型分离技术。
凝胶色谱柱以亲水性高分子凝胶为固定相，利用凝胶良好的吸附、分子筛特性及表面活性等特点将待分离组分吸附在固定相表面上。
凝胶可分为亲水性高分子凝胶与疏水性高分子凝胶，前者为大孔、多孔网状凝胶，后者为微孔、无定形网状凝胶，由于孔径不同，对流动相中不同极性物质有不同选择吸附力，可使极性或非极性物质实现分离。
当样品中混杂的组分经柱子传输至检测器时，样品中组分首先被凝胶中的疏水性成分所吸附，凝胶中的亲水性成分随后被流动相中的流动相携带通过凝胶颗粒间隙向检测器移动，并将其分离。
分析时将被测组分和内标一起加入到样品溶液中，样品中的待测组分会被凝胶中的亲水性成分所吸附，然后样品中被吸附的组分随着流动相向检测器移动，被内标识别并解吸下来，从而得到待测组分的含量。
凝胶过滤色谱的分离机理主要包括吸附和洗脱两个阶段。
吸附过程是在固定相表面发生的。
在这个过程中，柱中的溶剂可能会进入凝胶中，因此样品中的组分被吸附到凝胶颗粒的表面上。
这些固定相颗粒都有各自的孔隙结构，它们的表面积比较大，有利于吸附。
在凝胶吸附过程中，除了样品溶液本身的极性外，溶剂的极性也是吸附过程发生的必要条件。
同时，由于凝胶是高分子材料，因此在受到搅拌作用时，凝胶中会形成较大的内部和外部剪切应力场，这就有利于保证吸附过程的正常进行。
洗脱过程是当样品溶液通过凝胶柱后，由于凝胶的吸附作用，样品溶液中某些组分可能会留在凝胶上，从而影响了后续流动相的吸收，导致浓度信号减弱或消失，这就需要在适当的位置加入流动相把这些“逃逸”的组分重新吸引到柱子上来。
如果不考虑流动相的洗脱能力，则要求样品溶液中被吸附的组分具有较强的洗脱能力。
实际工作中，加入足够量的流动相将样品溶液洗脱下来，是保证仪器稳定运行的关键步骤之一。
所以，要达到好的分离效果，就要选择适合的流动相，且适宜的洗脱条件，但这还远远不够，还需要有好的柱设计，即凝胶色谱柱的理论模型。
凝胶渗透色谱
凝胶渗透色谱目录一、基本原理 (2)1.1 凝胶的特性 (2)1.2 色谱的分离原理 (3)1.3 凝胶渗透色谱在分离技术中的应用 (5)二、仪器设备 (6)2.1 凝胶渗透色谱仪的主要组成部分 (7)2.2 主要性能指标及选择 (9)2.3 仪器设备的清洁与维护 (9)三、样品前处理 (11)3.1 样品的选择与制备 (11)3.2 样品浓缩与净化 (12)3.3 样品检测方法的建立 (13)四、实验操作流程 (14)4.1 样品进样 (16)4.2 柱塞泵的设置与调节 (17)4.3 检测器的选择与校准 (18)4.4 数据处理与结果分析 (19)五、理论基础与数学模型 (20)5.1 凝胶渗透色谱的理论基础 (22)5.2 数学模型在凝胶渗透色谱中的应用 (23)5.3 实验数据的解释与处理 (24)六、应用领域 (26)6.1 在化学领域中的应用 (28)6.2 在生物医学领域中的应用 (29)6.3 在环境科学领域中的应用 (30)七、常见问题与解决方案 (31)7.1 常见问题及原因分析 (32)7.2 预防措施与解决策略 (33)八、实验安全与防护 (34)8.1 实验室安全规程 (36)8.2 个人防护装备的使用 (37)8.3 应急处理措施 (38)九、最新研究进展 (39)9.1 新型凝胶材料的研究与应用 (40)9.2 色谱技术的创新与发展 (41)9.3 聚合物凝胶渗透色谱法的探索 (43)一、基本原理它的基本原理是利用具有不同孔径大小的多孔凝胶颗粒作为固定相，将待分离的混合物通过凝胶柱进行分离。
在色谱过程中，待分离的混合物会与凝胶颗粒发生相互作用，从而导致不同成分在凝胶颗粒之间的分配系数和扩散速率的差异。
根据这些差异，混合物中的各个成分可以通过不同的时间顺序依次通过凝胶柱，从而实现对混合物中各组分的高效分离。
GPC的关键参数包括：凝胶颗粒的大小和形状；溶液流速；压力；洗脱剂的选择和浓度。
蛋白纯化方法—凝胶过滤色谱
活性蛋白整体方案凝胶过滤色谱摘要：本文主要讲解了凝胶过滤色谱法（分子筛）在蛋白纯化实验中的应用，包括纯化原理、实验方案设计、技术操作以及相关案例介绍和问题分析。
基本原理凝胶过滤色谱蛋白纯化法，又称为空间排阻色谱，分子筛等。
其原理是应用蛋白质分子量或分子形状的差异来分离。
当样品从色谱柱的顶端向下运动时，大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒从而被迅速洗脱；而较小的蛋白质分子能够进入凝胶颗粒中，且进入凝胶的蛋白在凝胶中保留时间也不同，分子量越大，流出时间就越早，最终分离分子大小不同的蛋白质。
凝胶过滤色谱原理通常，多数凝胶基质是化学交联的聚合物分子制备的，交联程度决定凝胶颗粒的孔径。
常用的色谱基质有：葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、聚丙烯酰氨凝胶（Bio-Gel P）等。
高度交联的基质可用来分离蛋白质和其他分子量更小的分子，或是除去低分子量缓冲液成分和盐，而较大孔径的凝胶可用于蛋白质分子之间的分离。
选用合适孔径的凝胶很大程度取决于目标蛋白的分子量和杂蛋白的分子量。
实验方案设计1.凝胶介质的选择凝胶介质的选择主要是根据待分离的蛋白和杂蛋白的分子量选择具有相应分离范围的凝胶，同时还需要考虑到分辨率和稳定性的因素。
比如，如果是要将目的蛋白和小分子物质分开，可以根据他们分配系数的差异，选用Sephadex G-25和G-50；对于小肽和低分子量物质的脱盐，则可以选用Sephadex G-10、G-15以及Bio-Gel P-2或P-4；如果活性蛋白整体方案是分子量相近的蛋白质，一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。
具体凝胶过滤色谱介质应用如下：常用凝胶过滤色谱介质的分离范围凝胶介质蛋白质的分离范围/103凝胶介质蛋白质的分离范围/103Sephadex G25 Sephadex G50 Sephadex G100 Sephadex G200 Sepharose6B Sepharose4B1~51.5~304~1505~60010~400060~20000Sepharose2BBio-Gel P-4Bio-Gel P-10Bio-Gel P-60Bio-Gel P-150Bio-Gel P-30070~400000.5~45~1730~7050~150100~4002.凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀（胶：水=1：10），自然溶胀的耗时较长，可采用加热的方法使溶胀加速，即在沸水浴中将凝胶升温至沸，1~2h即可达到溶胀。
TSKgel PW系列水相分子尺寸排阻色谱柱使用说明书
水相分子尺寸排阻色谱柱TSKgel PW系列使用说明书东曹株式会社安全注意事项［注意标签］■远离火源使用易燃溶剂时，请务必小心。
否则可能会导致火灾、爆炸或中毒。
■使用环境必须通风良好如果通风不良，易燃或有毒溶剂可能会导致火灾、爆炸或中毒。
■请勿喷洒溶剂溶剂发生喷洒或泄露可能会导致火灾、触电、中毒、受伤以及腐蚀。
清除漏出的溶剂时，请佩戴合适的护具。
■请佩戴护目镜和防护手套有机溶剂和酸属于有害物质，切勿直接接触皮肤。
■请小心处理包装处理不当可能会导致产品破裂或溶剂飞溅。
■请勿将本产品用于其他目的本产品仅可用于分离和提纯，请勿用于其他用途。
■请确认化合物的安全性请确认分离和提纯后的化合物和溶剂安全可靠。
■正确废弃请根据当地法律法规正确废弃。
注请将本说明书保存在本产品附近，以便日后参阅。
目录1. 简介 (1)2. 打开包装 (1)3. 色谱柱部件 (2)4. 安装 (2)5. 维护 (3)6. 溶剂 (4)7. 流速 (6)8. 温度 (8)9. 准备样品 (8)10. 理论塔板数和不对称因子的计算方法 (9)11. 保护柱 (10)12. 故障排除 (11)13. 质量标准和质量保证 (13)1. 简介TSKgel PW系列色谱柱是东曹株式会社开发的高效液相色谱柱，主要用于水相高效凝胶过滤色谱（GFC），适用于各类水溶性物质。
该类色谱柱适用于水溶性合成聚合物、低聚物以及生物物质，如多糖、核酸、蛋白质、肽等的分析或制备。
请仔细阅读本使用说明书，确保正确、有效地使用该类色谱柱。
表1应用领域应用领域适用的色谱柱水溶性合成聚合物水溶性生物聚合物多糖G4000PW(XL)，G5000PW(XL)，G6000PW(XL)，GMPW(XL)水溶性低聚物肽G2500PW(XL)，G3000PW(XL)非离子低聚物（低聚糖）G-Oligo-PW，G2000PW核酸G-DNA-PW注：TSKgel G-Oligo-PW和G2000PW可以在较宽的pH值范围内吸附离子型样品。
PLgel凝胶色谱柱使用指南.
PLgel凝胶色谱柱使用指南为了尽可能延长一根凝胶色谱柱的寿命，请在使用前仔细阅读本说明。
本说明仅针对PL公司的PLGel凝胶色谱柱，如果您使用的是其它类型或其它公司的凝胶色谱柱，请注意并不是所有内容均适用。
柱子安装一般使用1/16”不锈钢管来连接柱子，0.010”内径适用于分析柱，0.020”内径适用于制备，连接管线应该尽量短来避免死体积，会造成系统性能下降。
柱连接接头应使用与Parker 兼容的1/16”锥箍和螺母，详见图1，请按照GPC柱的使用方向来连接，螺母应当在手拧紧后用扳手再拧1/4圈就足够了，过分拧紧并不会改善密封，反而会损坏螺纹造成泄漏。
图 1Compatible Connectors在图1中的X＝0.090”，约等于2.28毫米，螺母的最小长度应为0.210”，约为5.33毫米，请不要使用Waters和Rheodyne公司的产品，他们与PL的柱子并不兼容。
图 2在安装柱子时，请不要将扳手放在图2所示X处，应当放在柱未端六角处。
在与其它的柱子相连之前，建议将柱子与泵相连，用少量流动相清洗一下连接管内部和接头。
流速对于传统的7.5毫米内径的GPC柱子，1.0ml/min是一个最优化的流速，当柱子的内径增加或减少时，应当适当调整体积流速来保证等效的线速度。
表1给了大家一个推荐的流速，然而对于一些高粘度的流动相，应当适当减小或升高温度，如果要更换溶剂，流速要逐渐升高，无论如何，都不要在超过柱子的最大压力下使用柱子（详见表3）。
表 1柱型 适用流速 (ml/min) 建议流速 (ml/min)PLgel 7.5mm ID PLgel MiniMIX 4.6mm ID PLgel Prep 25mm ID 0.5 – 1.50.2 – 0.55.0 – 20.01.00.310.0样品制备及进样根据样品的分子量来优化样品浓度毫无疑问是最好的方式。
宽分布样品通常可以比窄分布样品使用更大的浓度。
凝胶色谱柱的使用
凝胶色谱柱的使用凝胶色谱柱（Gel chromatography column），又称为凝胶过滤色谱柱，是一种常用于蛋白质和多肽分离纯化的柱层析技术。
它是根据溶质在凝胶颗粒孔隙和凝胶颗粒表面之间的扩散速率不同来实现分离的。
凝胶色谱柱由内核和包覆层构成。
内核是由纤维素、琼脂糖、琼脂和聚丙烯酰胺等材料制成的颗粒，颗粒大小一般在10-300微米之间。
内核是柱层析的主要分离介质，具有一定的孔隙结构，可以根据溶质的分子量来选择孔径大小。
包覆层是一层较细的凝胶层，在内核表面涂覆各种高分子材料，通过改变包覆层的化学性质，可以调控分离过程中的选择性和分离效果。
1.样品制备：准备待分离的样品溶液，通常需要用缓冲液进行稀释和调整pH值。
如果样品中含有高浓度的盐类或有机溶剂等，需要进行脱盐或柱外固相萃取处理。
2.样品加载：将样品溶液加载到凝胶色谱柱上，可以通过重力流动或使用泵进行加样。
3.柱洗脱：用缓冲液进行柱洗脱，一般要满足样品的最佳分离条件。
可以使用单一缓冲液或梯度洗脱，根据需要选择合适的洗脱方式。
4.收集分离物：根据需要，收集分离物进行后续分析或纯化。
1.蛋白质纯化：凝胶色谱柱可以根据蛋白质的分子量进行分离，常用于蛋白质的粗提和富集。
2.多肽纯化：凝胶色谱柱可以根据多肽的大小和亲水性进行分离，常用于多肽的富集和纯化。
3.药物研发：凝胶色谱柱可以用于药物分子的纯化和分析，有助于药物研发过程中的药物筛选和性质表征。
4.生物分析：凝胶色谱柱可以用于生物样品中复杂成分的富集和纯化，有助于生物样品的分析和研究。
1.分离效果好：凝胶色谱柱可以通过调控柱层析介质的孔隙大小和分离效果，达到较好的分离效果。
2.操作简单：凝胶色谱柱的操作相对简单，不需要复杂的设备和操作流程。
3.适用范围广：凝胶色谱柱适用于不同分子量和化学性质的样品，可以满足不同的纯化需求。
1.分离速度慢：由于样品分子需要通过凝胶层的扩散来实现分离，凝胶色谱柱的分离速度较慢。
分子排阻色谱柱类型
分子排阻色谱柱类型
分子排阻色谱是一种常用的色谱技术，用于分离和分析生物大
分子，例如蛋白质、多肽和核酸。
在分子排阻色谱中，色谱柱的选
择至关重要，不同类型的色谱柱适用于不同的分子分离和分析需求。
1. 凝胶过滤色谱柱。
凝胶过滤色谱柱是一种常见的分子排阻色谱柱类型，通常用于
分离蛋白质和多肽。
这种色谱柱由多孔的凝胶材料构成，大分子可
以通过凝胶孔隙，而小分子则无法进入孔隙，因此实现了大分子和
小分子的分离。
凝胶过滤色谱柱适用于分子量在10 kDa以上的生物
大分子的分离。
2. 超高效液相色谱柱（UHPLC）。
UHPLC色谱柱是一种高效的分子排阻色谱柱类型，适用于分离
小分子有机化合物和生物大分子。
UHPLC色谱柱具有更小的颗粒大
小和更高的压力耐受能力，因此能够提供更高的分离效率和分辨率。
对于分析复杂样品和需要高灵敏度的分析，UHPLC色谱柱是一个理
想的选择。
3. 反相色谱柱。
虽然反相色谱主要用于亲脂性化合物的分离，但也可以用于一
些生物大分子的分离，例如脂质类分子和蛋白质。
反相色谱柱对于
一些疏水性的生物大分子具有一定的排阻效果，因此在特定情况下
也可以作为分子排阻色谱柱来使用。
总之，选择合适的分子排阻色谱柱类型对于分子的分离和分析
至关重要。
不同类型的色谱柱都有其特定的应用领域和优势，科学
家们需要根据具体分析需求来选择合适的色谱柱类型，以获得准确、可靠的分析结果。
凝胶过滤色谱法
凝胶过滤色谱法
凝胶过滤色谱法（Gel Filtration Chromatography），也被称为分子筛色谱或凝胶渗透色谱，是一种常用的生物分离和纯化技术。
它基于样品分子在凝胶填料中的分子尺寸差异来实现分离。
工作原理是通过在色谱柱中填充具有特定孔径大小的凝胶填料，较大的分子在凝胶中较快通过孔隙，而较小的分子由于进入填料内部的孔隙较多而较慢通过。
因此，分子的分离程度取决于其尺寸，大分子被排除在凝胶颗粒外部，较小分子则更容易渗透到凝胶颗粒内部。
凝胶过滤色谱法通常用于分离和纯化蛋白质、多肽、核酸等生物大分子。
它可以去除小分子杂质，同时可以根据分子大小分离具有不同尺寸的目标分子。
该方法操作简单，无需特殊的溶剂，对生物大分子具有较好的保护性，不会对其结构和活性产生显著影响。
在凝胶过滤色谱法中，填料的孔径大小是一个重要的参数，需要根据目标分子的分子量范围选择适当的凝胶填料。
常用的填料包括琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等，它们具有不同的孔径范围，可满足不同分子大小的分离需求。
PW系列色谱柱使用说明书
1. 简介 TSKgel PW 系列色谱柱是东曹株式会社开发的高效液相色谱柱，主要用于水相高效凝胶过滤色谱
（GFC），适用于各类水溶性物质。该类色谱柱适用于水溶性合成聚合物、低聚物以及生物物质，如多 糖、核酸、蛋白质、肽等的分析或制备。
请仔细阅读本使用说明书，确保正确、有效地使用该类色谱柱。
表 1 应用领域
注意
■ 使用环境必须通风良好 如果通风不良，易燃或有毒溶剂可能会导致火灾、爆炸或中毒。
■ 请勿喷洒溶剂 溶剂发生喷洒或泄露可能会导致火灾、触电、中毒、受伤以及腐蚀。 清除漏出的溶剂时，请佩戴合适的护具。
■ 请佩戴护目镜和防护手套 有机溶剂和酸属于有害物质，切勿直接接触皮肤。
■ 请小心处理包装 处理不当可能会导致产品破裂或溶剂飞溅。
冲液，醋酸盐缓冲液。 水溶液的盐浓度一般应该保持在 0.5 M 以下，防止粘度上升（盐增多引起）和沉淀（温度变化引
5
起）。另外，使用不锈钢色谱柱时，为了延长色谱柱的寿命，应尽量避免接触卤离子。如果使用了此类 盐溶液进行了测量，请在测量后，按照 5-3 项的内容清洗色谱柱。
6-2-3 有机溶剂 PW 系列色谱柱可以使用水溶性有机溶剂的水溶液，如甲醇、乙醇和乙腈。PW 系列凝胶在通常的
4-2 进液方向 请按图 2 上标签所示的箭头方向使用色谱柱。长时间反向使用色谱柱会降低色谱柱的性能。
4-3 防止气泡进入色谱柱 在设备上安装或取下色谱柱时，注意不要在色谱柱内混入气泡。安装色谱柱之前，请务必清除所
有管路中的气泡。如果在色谱柱中混入了气泡，则会形成沟槽而降低色谱柱的性能。
4-4 安装 取下色谱柱进口侧的保护塞后，如果末端接头处发生溶剂漏出，请按以上方法将色谱柱小心地连
4-5 串联色谱柱 串联多根色谱柱时，请按上述方法根据孔径由大到小的顺序进行连接，这样可以首先分离出分子
凝胶色谱gpc
凝胶色谱gpc凝胶色谱（GPC）是一种分离技术，其特点是使用凝胶作为分离介质，因此得名。
GPC是一种广泛应用于聚合物分子量分析的方法。
它具有许多优点，如高分辨率、简单易行、准确性高等特点。
本文将从定义、原理、应用等方面详细介绍GPC技术。
一、定义凝胶色谱（GPC），又称凝胶过滤色谱（GFC），是一种以聚合物溶液中分子量大小分离为目的的色谱技术，通过使用一种凝胶化合物作为固定相来实现。
异构体、聚合物和其他高分子物质可以被凝胶过滤器赶出溶液，从而有效进行分析。
二、原理 GPC的原理是将待测样品注入溶剂中，并通过进样系统将样品引入色谱柱中。
色谱柱由一束微粒、凝胶或涂层柱组成，包括高分子树脂、泡沫塑料或其他亲水性材料。
样品通过色谱柱流动时，大分子会因分子量大而与凝胶颗粒反复碰撞，并逐渐逐出柱外。
相反，小分子则更容易穿过凝胶颗粒，达到提取分子的目的。
由于某些原因，大分子的分离能力非常重要。
其中最重要的条件是使用疏水性溶液，这有助于分子与凝胶颗粒产生亲水作用，并排出大分子分子，以谷物的形式进行检测和分离。
其次，为了获得最好的分离效果，GPC操作需要优化。
包括确定外径，内径，粒径，压强，长度和运行时间等参数。
三、应用 GPC技术广泛应用于聚合物分子量分析、生物大分子的纯化和组分分离，其中聚合物分子量分析是GPC 的主要应用之一，把聚合物以及其他宏大分子按照其不同的分子量分离出来，并对其分子量进行测定。
GPC广泛用于各种行业，尤其是化学、医药、材料科学等领域。
GPC技术因其简单易实施，又不需高百科技含量，被广泛用于聚合物领域中分子量的分析。
聚合物的分子量和分子分布是对其性质、应用和储存特性影响较大的一个参数，因此GPC技术已经成为聚合物科研和实际应用领域的日常工具。
（一）在功能材料领域中GPC的应用：用于纤维素的结构性能研究；碳纤维复合材料中的聚合物基质性能的研究；用于电池电极材料的研究。
（二）在生命科学领域中GPC的应用：GFC已经成为蛋白质化合物的一种得到纯化的方法；纯化或高净度生物材料的时序性分析；用于多肽或蛋白质的计量。
SB-804 HQ色谱柱使用说明书
注意：①流动相的盐浓度要低于 0.5M。（适合 0.05～0.5M） 盐浓度在 0.2M 以下时，置换流量 0.5mL/min。
盐浓度在 0.2～0.5M 时，置换流量 0.3 mL/min。 ②流动相 PH3～10
③流动相含有氯离子的情况下 PH 要大于 6。 2） 非离子疏水性样品及离子疏水性样品
◎如果使用时超过了规定压力、规定流量，致使色谱柱性能降低，这是无法复原的，对 此请特别注意。
3 色谱柱性能的测试方法
按照下面的条件，对色谱柱进行性能测试（详情请参考色谱柱附带的出厂检查报告 COA）
色谱柱
流动相
流量
色谱柱温度
样品
注入量
SB-804HQ
H2O
理论塔板数的计算公式
1.0mL/min 室温约 25℃ 0.5%乙二醇水溶液 15μL
色谱柱使用说明书(节选)
OHpak 系列：SB-804 HQ
1 色谱柱规格
产品名称 SB-804HQ
理论塔板数
基质
分离模式
聚羟基甲基丙
16000 以上
烯酸酯
尺寸排阻
排阻限 普鲁兰
1×106
粒径
尺寸
（μm） I.D.×L(mm)
10
8.0×300
产品名称 SB-804HQ
最大耐压 (MPa)
5.0
最大使用流量 （吸附，流动相中添加极性有机溶剂。
离子性样品中仍需要加盐。
置换含有极性有机溶剂的流动相时，流量设定为 0.5 mL/min。
3） 蛋白质样品 作为蛋白质改性剂的尿素或盐酸胍水溶液可以用作流动相。对于膜蛋白质等通常水
溶液中溶解性差的样品，可以添加 SDS 或者 Brij-35 等界面活性剂于流动相中。
凝胶过滤色谱柱 色谱柱操作规程
凝胶过滤色谱柱色谱柱操作规程凝胶过滤色谱柱用于体积排阻层析体积排阻，也叫凝胶过滤,依据物质尺寸大小的不同分别。
假如分子的尺寸大于树脂的最大孔径，这种分子就不能进入树脂颗粒内部，它所经过的有效体积最小，最早从洗脱液中流出。
凝胶过滤色谱柱用于体积排阻层析体积排阻，也叫凝胶过滤,依据物质尺寸大小的不同分别。
假如分子的尺寸大于树脂的最大孔径，这种分子就不能进入树脂颗粒内部，它所经过的有效体积最小，最早从洗脱液中流出。
而小分子能够进入树脂的孔道中，经过的有效体积比较大，从洗脱液中流出较晚，分子量越小，流出越晚。
体积排阻层析可以用于纯化的第一步，按分子量大小将产品粗分；也可以用作纯化的中心步骤来改换缓冲液或脱盐，或用于纯化的最后一步来去除杂质，精制产品。
体积排阻层析树脂有预先设定的排阻极限，排阻极限由树脂本身的最大孔径和孔径分布范围决议。
MKF有机凝胶型大孔填料规格有：7—10μm超细颗粒，具有很高的辨别率；20μm，40μm中等颗粒，用于制备型的纯化步骤；60—80μm较粗颗粒，用于经济型制备的纯化步骤；100—150μm粗颗粒，用于产物的大规模捕获。
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当色谱柱使用一段时间以后，柱内由于各种原因，滞留了一些高沸点组分或氧化物等，除柱效有所下降外，还可能显现基线波动或“鬼峰”。
为了去除污染物，使柱效和基线恢复到原来的状态，称为色谱柱的再生。
色谱柱的再生和柱老化有确定区分和不同，它是柱在使用一段时间柱性能下降，经处理后尽量恢复到原来性能的过程。
A、色谱柱在以下几种情况必需再生处理a.使一段时间，柱效明显下降；b.柱被污染，特别是在程序升温时，基线漂移和噪声超过容忍程度或显现“鬼峰”；c.柱头塌陷，柱床短路或断位（在玻璃柱中简单发觉），而显现尖峰或双重峰；d.峰形展宽，保留时间明显变化；e.待分别组分和固定相表面非特异性相互作用，引起保留时间较短的峰拖尾或显现双峰；B、毛细管柱再生的几种方法a.用载气将色谱柱污染物冲洗出来；b.将柱头截去100mm 或更长一些；c.若使用交联的色谱柱，可在仪器上反复注射溶剂进行冲洗。
凝胶色谱柱知识点总结
凝胶色谱柱知识点总结凝胶色谱柱的分类凝胶色谱柱主要有两种类型，即大小分离色谱和亲和色谱。
1. 大小分离色谱大小分离色谱是根据生物大分子在凝胶中的大小差异进行分离的，通常用来分离蛋白质、核酸和多肽等大分子生物大分子。
根据凝胶的孔径大小，可以将大分子生物大分子从小分子生物大分子中分离出来。
2. 亲和色谱亲和色谱是利用生物大分子与特定配体之间的亲和作用来进行分离和纯化的方法。
通常在凝胶上固定一定的亲和剂，通过生物分子与亲和剂之间的特定相互作用来实现生物分子的选择性吸附和洗脱。
凝胶色谱柱的原理凝胶色谱柱的分离原理是利用凝胶材料固定在色谱柱中，通过色谱柱中的孔隙结构来实现生物大分子的分离。
凝胶色谱柱根据其孔隙大小可分为两种类型，包括凝胶过滤柱和凝胶渗透柱。
1. 凝胶过滤柱凝胶过滤柱利用凝胶中的孔隙大小来分离生物大分子。
当生物大分子通过色谱柱时，较大的生物大分子会被凝胶阻挡，而较小的生物大分子可以通过凝胶的孔隙，从而实现生物大分子的分离。
2. 凝胶渗透柱凝胶渗透柱通过凝胶中的孔隙大小来实现生物分子的分离。
通常，生物大分子会根据其大小在凝胶柱中进行渗透，从而实现生物大分子的分离和纯化。
凝胶色谱柱的应用凝胶色谱柱在生物分离和纯化中有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质分离与纯化凝胶色谱柱可用于蛋白质的分离与纯化，对于分离蛋白质复合物、纯化功能蛋白等方面具有重要作用。
2. 核酸分离与纯化凝胶色谱柱可以用于核酸的分离与纯化，对于分离DNA、RNA等核酸样品具有重要作用。
3. 多肽分离与纯化凝胶色谱柱也可用于多肽的分离与纯化，对于分离多肽混合物、纯化特定多肽等方面具有重要作用。
4. 膜蛋白分离与纯化对于膜蛋白的分离与纯化，凝胶色谱柱也有着重要的应用价值。
凝胶色谱柱的优缺点凝胶色谱柱具有一些优点和缺点，以下分别进行介绍：1. 优点（1）分离效果好：凝胶色谱柱能够实现对生物大分子的高效分离与纯化，分离效果好；（2）操作简便：凝胶色谱柱的操作相对简单，不需要复杂的设备和技术，易于掌握；（3）适用范围广：凝胶色谱柱适用于多种生物大分子的分离与纯化，具有较广的应用范围。
SB-806M HQ色谱柱使用说明书
OHpak 系列：SB-806M HQ
1 色谱柱规格
产品名称 SB-806M HQ
理论塔板数 12000 以上
基质
聚羟基甲基 丙烯酸酯
分离模式
排阻限 普鲁兰
粒径
尺寸
（μm） I.D.×L(mm)
尺寸排阻 （2×107） 13
8.0×300
产品名称 SB-806M HQ
最大耐压 (MPa)
3.0
最大使用流量 （mL/min）
1.2
使用温度 范围 (℃) 4～70
使用 PH 范围 出厂时溶剂
3～10
0.02% NaN3 aq.
极性有机溶剂允许添加量
产品名称
甲醇
乙腈
SB-806M HQ
75%
75%
通常使用流量：0.5～1.0 mL/min；溶剂置换时流量：<0.5 mL/min
DMF 100%Βιβλιοθήκη ◎如果使用时超过了规定压力、规定流量，致使色谱柱性能降低，这是无法复原的，对 此请特别注意。
3 色谱柱性能的测试方法
按照下面的条件，对色谱柱进行性能测试（详情请参考色谱柱附带的出厂检查报告 COA）
色谱柱
流动相
流量
色谱柱温度
样品
注入量
SB-806M HQ
H2O
理论塔板数的计算公式
1.0mL/min 室温约 25℃ 0.5%乙二醇水溶液 15μL
Ⅱ 注意事项 1) 色谱柱安装前，使用流动相对流路进行完全置换。 2）色谱柱在高温下使用，分析结束后首先将泵的流量设为 0.5mL/min，关闭色谱柱 加热开关，持续送液直至色谱柱降至室温。 在色谱柱冷却到室温前从装置中取出，色谱柱会吸入空气导致性能降低。 3）流动相使用了含有盐的水溶液，或者三天以上不使用的情况下，流路及色谱柱要 置换成离子交换水。流量要求 0.5mL/min 以下。 4）保护柱不仅是除去样品中的污染物来保护分析柱的，对于泵的脉动或压力变化也 有一定程度的保护作用。因此尽量使用保护柱。
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rat liver microsome
Elution : (0.2mol/l sodium chloride +20%glycerol +
octaethyleneglycol dodecylether) in 50mmol/l
phosphate buffer,ph 7.0. Note : concentration
2008 -12 volume 15
Applications of TSK-GEL SW-type Gel Filtration columns
Higher resolution with 5um TSK-GEL SWXL compared with 10um TSK-GEL SW columns
Separation of membrane protein by SEC with different surfactant concentration in the eluent
Column : TSKgel G3000SW ,7.5mm ID*60cm
Sample : Membrane protein from a crude extract from
Separation of crude protein samples on TSKgel G3000SWxl.
Column : Sample:
Elution : Flow Rate ; Detection : Recovery :
TSK gel G3000SWXL,5um,7.8mm ID *30cm A. crude peroxidase from Japanese radish, 0.15mg in 0.1ml B. crude glutathione S-transferase from guinea pig liver extract ,0.7mg in 0.1ml 0.3mol/l NaCL in 0.05mol/l phosphate buffer ,ph 7 1.0ml/min
＊去处气泡＊
从仪器上安装和拆卸色谱柱时一定要注意不要让气泡进入，安装时要去除管路中的气泡。
＊安装＊
当进样端螺母拧下，有溶剂从接口溢出，可将色谱柱小心的与仪器连接，这样做可以保证没有气泡进入柱
子。如果没有党课从接处流出，将柱子反接，用低于 0.5ml/min 的低流速走柱，赶走气体。确定当脱气的 溶剂从色谱柱进样口流出后，按流向箭头所示接柱。
UV @220nm
Temp: 25℃
2008 -12 volume 15 Comparison of TSKgel SuperSW2000 and TSKgel G2000SWXL for the separation of proteins
Column : Sample :
Inj. Volume : Elution: Flow Rate : Detection :
柱中的一款使用。 单克隆抗体 z TSKgel G3000SWXL通常用于质量控制。 z 样品量有限或者低浓度时，可以使用 TSK gel SuperSW 3000。 多肽 z TSKgel G2000SWXL是多肽分析的首选。 z 样品量有限或者低浓度时，可以使用 TSK gel SuperSW 2000。
of surfactant : (1) 0.005%,(2) 0.01%,(3) 0.025%,
(4) 0.05%
Flow Rate : 1.0ml/min
Detection : UV@280nm
2008 -12 volume 15 The separation of monoclonal antibody (lgG1) from mouse ascites fluid
08540 05789
30cm*7.8mmID,5u,125A 30cm*7.5mmID,10u,250A
5,000-100,000 10,000-500,000
1,000-30,000 2,000-70,000
500-15,000 1,000-35,000
05103
60cm*7.5mmID,10u,250A
常用 TSK-GEL SW 型色谱柱性能和分离范围
填料
部件号
描述
可分析样品的分子量
球蛋白
葡萄糖
聚乙二醇
G2000SW
05788
30cm*7.5mmID,10u,125A
5,000-100,000
1,000-30,000
500-15,000
05102
60cm*7.5mmID,10u,125A
G2000SWXL G3000SW
G3000SWXL G4000SW
05841 05790
30cm*7.8mmID,5u, 250A 30cm*7.5mmID,13u,450A
10,000-500,000 20,000-700,000
2,000-70,000 4,000-500,000
1,000-35,000 2,000-250,000
A.TSKgel G2000SWXL,7.8mmID*30cm B.TSKgel SuperSW2000,4.6mmID*30cm 1. thyroglobulin(0.2mg/ml); 2. albumin(1.0mg/ml); 3. ribonuclease A (1.0mg/mL); 4. p-aminobenzoic acid (0.01mg/mL) 5Ul 0.1mol/L phosphate buffer + 0.1mol/L Na2SO4+0.05%NaN3(ph6.7) 0.35ml/min for SuperSW2000 ; 1.0ml/min for G2000SWXL. UV @ 280nm Temp: 25℃
TSK-GEL SW 系列色谱柱的选择指南
未知分子量的样品
z TSKgel G3000SWXL是理想的摸索条件的色谱柱。 z 如果感兴趣的蛋白质的洗脱接近排除体积，下一步应该尝试使用G4000SWXL。相反，如果感兴趣的
蛋白质洗脱接近色谱末端，尝试使用G2000SWXL。 蛋白质(一般情况) z 通过校正曲线或者评估蛋白质的分子量选择恰当的孔尺寸，继而可以选择出 TSK-GEL SWxl 系列色谱
2,000-250,000 500-15,000
SuperSW3000 18675
30cm*4.6mmID,4u,250A
10,000-500,000
2,000-70,000
1,000-35,000
＊欢迎来电咨询 SW 色谱家族其他款色谱柱信息及技术参数.
＊TSK-GEL G2000SWxL 色谱柱为分离胸腺肽素专用色谱柱，请在订购时说明，以便提供专用批次型号色谱柱.
Column : Sample :
Elution : Flow Rate :
Left : TSK-GEL SW, two 10um, 7.5mm ID *30cm columns in series Right: TSK-GEL SWXL ,one 5um, 7.8mm ID * 30cm column 1. glutamate dehydrogenase (55,000Da) 2. lactate dehydrogenase (36,500Da) 3. enolase (67,000Da) 4. adenylate kinase (6,000Da) 5. cytochrome C (12,400Da) 0.3mol/L NaCL in 0.05mol/L phosphate buffer ,ph 6.9 1.0 ml/min Detection : UV220nm
5. p-aminobenzoic acid,0.01mg/ml (137Da)
0.1mol/L NaSO4 in 0.1mol/L in phosphate
bufferwith 0.05% NaN3, pH6.7 1.0ml/min for G3000SWXL;
0.35ml/min for SuperSW3000
TSK 凝胶柱广泛应用于制药和生物工程中蛋白质，多肽，多 糖，寡糖，DNA，RNA 等生物高聚物的分离，纯化或分子量 的测定。
TSK-GEL SEC 分析柱的分类
分析柱 类型
SW 型
PW 型
Alpha SuperAW 型
H型
柱内填 料种类
硅胶
分析样品类型
生物大分子 (蛋白质,DNA)
亲水型 聚合物
亲水性 聚合物
水溶性合成高分 子.多糖,生物大 分子(蛋白 质,DNA)
笨乙烯类 溶于有机溶剂的 聚合物 合成高分子
产品系列
产品特征
SW SWXL SuperSW PW PWXL PWxl-CP
最适合亲水性高的蛋白质分离 分离度高 分离度高,省溶剂(半微量 SEC 分析柱) 适用于亲水性合成高分子的测定 使用于亲水性合成高分子的测定,分离度高 适用于阳离子型聚合物的测定
注：本期详细介绍 TOSOH TSK-GEL SW 型凝胶色谱柱, 以后各期将陆续介绍 TOSOH 公司其他款凝胶 柱。更多精彩内容不容错过哦！
2008--12 volume 15
TSK-GEL SW 系列色谱柱
TSK-GEL SW 系列色谱柱的填料以刚性的球型硅胶为基质，在其表面通过共价键化学键合亲水基团而成。 其 pH 适用范围为 2.5-7.5，可以使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。适合分析 分离蛋白质和多肽类样品。
2008--12 volume 15
TOSOH TSK-GEL 凝胶色谱柱
凝胶过滤色谱，又称凝胶渗透色谱。 一般来说，在生物化学 界中常用的名称是凝胶过滤色谱（GFC)，在高分子化学界中 常用的名称是凝胶渗透色谱(简称 GPC)。
TOSOH 公司始建于 1935 年，原名东洋曹达工业株式会社 (TOYO SODA)，其产品优异的产品性能，在生物制药，生物 技术等领域享有盛誉。