精密度方法精密度precision

生 湿法破坏
物
样 常用试剂：硝酸或硝酸-高氯酸.
品 的
特点：破坏能力强、反应激烈，无机
处
金属离子为高价态.
理 应用：适用于血、尿、组织等生物样
方 法
品的破坏.
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物
干法破坏
样
品 高温炉高温破坏
的 处
应用——适合人发样品的破坏
理
方
法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
分(分离)的能力 特异性——涵盖二者，以验证所测定的物质与待测药物的同一性
考察一个分析方法是否具有特异性。
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第五章 药物定量分析与分析方法验证
二、标准曲线与线性范围
标准曲线（standard curve）—— calibration curve or working curve ——生物样品中所测定药物浓度与响应的相关性（比例的程度） ——通常用回归分析方法所得的回归方程来评价 ——除少数方法（免疫分析法）外，标准曲线通常为线性模式 ——回归分析法为最小二乘法（least squares） 或加权最小二乘法（weighted least squares）
生 氧瓶燃烧法
物 样
应用——血浆、人发中卤素、硫、硒等
品 血浆：血浆1ml分次点于无灰滤纸上60℃
的 处 理
烘干,按规定折叠后固定. 人发：洗净、干燥（60℃ ~ 80℃）剪碎,
方
称取0.1 ~ 0.3g置无灰滤纸,按规定
法
折叠固定.
第五章 药物定量分析与分析方法验证
生物样品定量分析方法验证内容与基本要求
生 物
但生物样品宜在碱性或近中性提取 ——生物基质中内源性物质多为酸性，
样 在碱性下不易萃取
品
的 处 理 方
空白血清在pH2、pH7和pH13缓冲液中乙 醚提取，提取液用RP-HPLC(UV)测定，碱 性(pH13)下提取液的杂质峰最少
法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
空白血清乙醚提取物的HPLC色谱图 生 物 样 品 的 处 理 方 法
样 ②加中性盐—蛋白质脱水. (饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、
品
磷酸盐及枸橼酸盐等)
的 ③加强酸—与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀
处
( 10%三氯醋酸、6%高氯酸、5%偏磷酸等)
理 方
④加含锌盐及铜盐的沉淀剂—与蛋白质阴离
法
子形成不溶性盐沉淀. (CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH)
⑤酶解法—枯草菌溶素.适用于酸不稳定及蛋白
线性范围（linear rang）——标准曲线的最高与最低浓度的区间 ——模拟生物样品的测定结果应达到试验要求的精密度和准确度
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第五章 药物定量分析与分析方法验证
2．样品量少、不能重复取样——生物样品多数在特定条件下采
集，无法再次取样
3．被测成分浓度低——对分析方法的灵敏度及专属性要求较高
第五章 药物定量分析与分析方法验证
体内分析方法要求
1. 检测方法的高灵敏度—最低检测量10-9~10-7g或10-15~10-12g 2. 分离方法的高选择性、高专属性
为满足各项要求，最常用的分析方法有 1 ） 色 谱 法 ——GC 、 HPLC 、 HPCE （ high-
结合牢固药物.
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 （2）缀合物的水解(尿样)
物
样 含羟基、羧基、氨基和巯基药物
品
的
+ 葡萄糖醛酸→葡萄糖醛酸苷缀合物
处 理
含酚羟基、芳胺和醇类药物
方 法
+ 硫酸→ 硫酸酯缀合物
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物
常用方法:
样
酸水解:盐酸
1．特异性——避免干扰 2．标准曲线与线性范围——覆盖所有浓度范围 3．准确度——与实际状况相符 4．精密度——结果可重现 5．定量限——达到峰浓度的1/10～1/20 6．稳定性——确保所有样品准确测定 7．提取回收率——确保准确度
第五章 药物定量分析与分析方法验证
一、方法特异性
方法的特异性(specificity) ——又称专属性或专一性，通常与选择性(selectivity)互用 ——系指当有内源性物质存在时，方法准确测定待测物质的能力 专属性——表示所检测的信号(响应)系属于待测药物所特有的 选择性——系指将待测物质与其代谢物及同服的其它药物加以区
品
的
酶水解: 葡萄糖醛酸苷酶
处 理
硫酸酯酶
方 法
葡萄糖醛酸苷酶-硫酸酯酶
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
（3）分离纯化与富集
生
物 样
Baidu Nhomakorabea
①液-液萃取法
品 的
水相pH值是萃取成功的关键
处 水相最佳pH值
理
方
碱性药物：高于pKa值12个pH单位
法
酸性药物：低于pKa值12个pH单位
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
第五章 药物定量分析与分析方法验证
第一节 定量分析样品的前处理方法 第二节 定量分析方法的特点 第三节 药品分析方法的验证 第四节 生物样品分析方法的基本要求
第五章 药物定量分析与分析方法验证
生物样品分析的特点
1．干扰物质多——生物样品中含有大量的内源性物，如质蛋白
质、脂肪等，以及代谢物、结合物等干扰分析 ——样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析
生 (4)化学衍生化
物 样
化学衍生化目的
品 ①使药物变成具有能被分离的特性
的 ②提高对样品的检则灵敏度
处 理 方
③增加药物的稳定性 ④提高对光学异构体的分离能力
法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生
（5）有机破坏
物
样 品
方法：湿法破坏
的
干法破坏
处 理
氧瓶燃烧法
方
法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
performance capillary electrophoresis） 2）免疫分析法——RIA、EIA 3）联用技术——GC-MS、LC-MS
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
（1）去除蛋白质(血样)
生 ①加与水混溶的有机溶剂—蛋白质分子内和分
物
子间氢键发生改变. (乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃)
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
②液-固提取法（固相萃取法）
生 物
原理：
样 将不同填料作为固定相装入微型小柱，
品 当含有药物的生物样品溶液通过时，由
的 处 理
于受到吸附、分配、离子交换或其它亲 和力作用，药物或杂质被保留在固定相
方 上，用适当溶剂清洗杂质，再用适当溶
法 剂洗脱药物。
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理