丹参主要居群的遗传关系及药材道地性的初步研究_郭宝林
丹参类中药的品种与鉴定研究概述_苟占平
收稿日期:2008-06-16; 修订日期:2008-09-26基金项目:国家自然科学基金(N o .30672470)作者简介:苟占平(1970-),男(汉族),甘肃临洮人,现任广东医学院药学院副教授,博士学位,主要从事中药的品种品质研究工作.丹参类中药的品种与鉴定研究概述苟占平1,2,吕应年2,龚先玲2,程纪伦1,崔 燎1,2(1.广东医学院药学院,广东东莞 523808;2.广东医学院广东天然药物研究开发重点实验室,广东湛江 524023)摘要:综述了丹参类中药在本草考证、品种调查、伪品品种研究、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定、微形态学研究和分子生物学研究等方面的研究进展,为丹参类中药的资源利用和深入研究提供参考。
关键词:丹参; 品种; 鉴定中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2008)12-2869-03Revie w of Varieties and Identification of Traditional Chinese H erb DanshenGOU Z han -ping1,2,L Y i n g -nian 2,GONG X ian -ling 2,C HENG J -i l u n 1,C U I L iao 1,2(1.College o f Phar macology,Guangdong M ed ical College ,D ongguan 523808,Ch i n a;2.Guangdong K ey La-boratory o f Research and D evelopm ent of NaturalDrug s ,Guangdong m ed ical Co llege ,Zhanjiang 524023,Chi -na)Abst ract :T his paper rev i ewed the research prog ress of he rb D anshen of t he textua l research ,va riety i nvesti ga ti on,counter -fe its var i e t y study ,m acroscop ic i dentifi ca tion ,m icroscop i c i dentifi cation ,phys i ca l and che m i ca l identifi cation ,m icromo rpho l og-ica l st udy and mo lecu l a r b i o l og ical study etc ..T he paper m ay be use f u l for t he resource utility and furt her study of D anshen .K ey w ords :D anshen ; V ariety ; Identificati on丹参为唇型科L ab i a tae 植物丹参Sal v i a m iltiorrhi za Bge .的干燥根及根茎[1],系应用历史悠久的常用中药,属活血调经之要药[2],现代药理实验证明其具有十分广泛的生理活性[3]。
全国丹参生产现状的调查和分析概要
全国丹参生产现状的调查和分析作者：赵魁，郭晓恒，宋杰，王睿婷，杨新杰，林贵兵，严铸云【摘要】目的总结、分析全国丹参的生产现状和存在的问题，以期为体现中药特点的丹参药材规范化生产模式的探索提供参考。
方法采用实地调查采样和访问方式，对全国栽培丹参产量大的山东、四川、河南、河北、山西、陕西、安徽、江苏等8省21个样点进行数据采集，分析。
结果掌握了主要的商品产地，栽培规模和栽培方法以及存在的实际问题。
相同品种丹参不同地域差异较大，因此从栽培和商品量对丹参药材划分5个一级区系。
结论栽种时应因地制宜，在规范化的模式下，就区系栽培带地理标志的商品。
【关键词】丹参；产地生态；栽培区系；规范化生产模式丹参为唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bunge．的根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效，用于治疗心绞痛、冠心病等症［1］，一直为临床常用中药，也是国家药品标准收载的320多个中成药的原料［2］。
目前丹参的商品药材主要分为野生丹参和家种两类［3］。
文献报道丹参药材的来源涉及植物有丹参、甘西鼠尾、滇丹参、南丹参、三叶丹参及其变种或变型等十余种(含变种、变型)［4］。
同时丹参也存在小叶型、大叶型、单叶型、皱叶型和白花丹参等一些种内变异［5，6］。
随着其用量的日益增大，其品质问题也备受关注。
为此，我们近两年来对全国各地丹参的生产情况进行了调查，以供教学、科研、生产参考。
1 调查方法参照有关生态调查方法［7，8］，采用样地调查和访问调查，根据药材收购信息，选择有代表性的地块设立标准，每主产区至少设置两个。
样点全球卫星定位系统（GPS进行现地测定。
同时走访当地中药企事业单位、收购站、农业局和药农，考察丹参的生长环境、生长状况、栽培品种、物候期、栽培技术、栽培面积和产量等。
本次调查的区域和示意图如图1（GPS定位作图）。
2 调查结果从丹参生态环境调查中，大部分的地貌为山地和丘陵，地域性异质程度高，分异程度表现在多样化系数值大，丹参的生态适应性较强。
丹参种质资源研究进展_郭宝林
%
产地
河南1)(野)
河南2)(栽)
山东3)(野)
山东4)(栽)
四川中江(栽) 四川成都(栽) 上海崇明(栽)
陕西西安(栽) 河北 辽宁 江苏(栽) 安徽 湖北 江西 湖南 浙江 山西浦城
第 27 卷第 7 期 2002 年 7 月
中 国
China Journal of
中药杂志
Chinese Materia
Medica
V
ol .27 , N o .7 July ., 2002
·综述·
丹参种质资源研究进展
郭宝林 , 冯毓秀 , 赵杨景
(中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 , 北京 100094)
总丹参酮
6 .0[ 9]
3 .0 [ 9]
2 .39 ～
7 .0 [ 9 ,11] 0 .92 ～
2 .6[ 9, 11]
1 .4[ 9] 1 .4[ 9]
3 .6[ 9]
0 .16[ 8] 0 .06[ 8]
丹参酮 ⅡА 0 .42 ～
隐丹参酮 0 .135 ～
丹参素
0 .09 ～ 0 .15[ 11] 0 .09 ～ 0 9]
0 .035 ～ 0 .22[ 9, 11] 0 .046 ～ 0 .20[ 9, 11]
0 .015[ 9] 0 .049[ 9]
0 .06 ～ 0 .158 ,10]
0 .06 [ 10]
0 .18[ 8]
0 .07[ 8]
0 .10[ 8]
0 .04[ 8]
0 .8 [ 10]
0 .06 [ 10]
0 .116 [ 10, 13]
0 .05 ～ 0 .12[ 10] 0 .07 ～ 0 .19[8 , 10] 0 .097 ～ 0 .13[ 8, 13] 0 .04 ～ 0 .15[8 , 10]
植物生长调节物质对滇丹参种子萌发影响的研究
植物生长调节物质对滇丹参种子萌发影响的研究摘要：以滇丹参成熟种子为材料，采用l9（34）正交试验方法研究了植物生长调节物质赤霉素（ga3）、6-苄基腺嘌呤（6-ba）、吲哚乙酸（iaa）的不同浓度及浸种时间对滇丹参种子萌发的影响。
结果表明，滇丹参种子发芽的最佳处理组合是a1b3c2d2，即ga3 40 mg/l +6-ba 20 mg/l +iaa 5 mg/l+浸种24 h，该处理的滇丹参种子发芽率达90.3%，而且种子发芽较快、发芽持续时间较短，是滇丹参种子发芽的理想处理方法。
方差分析显示，ga3浓度对滇丹参种子发芽率的影响达显著差异水平（p2.2 方差分析对表2的数据进行方差分析，结果见表4。
由表4可知，因素a （ga3）对滇丹参种子发芽率的影响达显著差异水平（p<0.05〉，因素b（6-ba）、因素c（iaa）、因素d（浸种时间）对滇丹参种子发芽率的影响均不显著，4个因素对滇丹参种子发芽率作用的大小排序是ga3浓度、浸种时间、6-ba浓度、iaa浓度。
2.3 滇丹参种子发芽验证试验结果根据ga3浓度、6-ba浓度、iaa浓度及浸种时间4因素、3水平正交试验l9（34）对滇丹参种子发芽情况的影响结果分析，滇丹参种子发芽的最佳处理组合是a1b3c2d2，即ga3 40 mg/l +6-ba 20 mg/l +iaa 5 mg/l+浸种24 h。
用此组合处理滇丹参种子进行种子萌发验证试验，结果种子萌发率达到了90.3%，与理论结果相近，而且种子开始发芽的时间较快，种子发芽的持续时间较短，是比较理想的种子发芽处理组合。
证明了试验所得结果具有正确性、可重复性，可以作为滇丹参种子田间育苗的处理参考，以完善植物生长调节物质对滇丹参种子育苗的系统研究。
3 讨论种子萌发技术是开展滇丹参种子人工育苗、gap规范化种植的关键技术。
目前国内对丹参种子萌发的研究比较深入[6-17，20-22]，对滇丹参种子萌发的研究还末见报道。
丹参综述,
丹参综述摘要：丹参是一种具有广泛的药理活性和应用价值的常用中药材，通过查阅相关文献资料，进行分类总结，本文从丹参的品种考证、种类资源、化学成分、药理作用、丹参制剂及其质量控制、展望等方面对有关丹参的研究进行综述。
关键词：来源资源状况有效成分药效作用中成药制剂丹参是著名的活血化瘀药，现代药理研究表明丹参对心血管系统，血液系统的作用十分显著。
1997年，复方丹参滴丸成为第一个向美国FDA以治疗药身份申报的品种，意味着丹参将成为首例用国际标准进行评价的传统中药。
此后丹参的研究又形成了一个新的热潮。
本文就丹参各方面的研究概况进行综述。
1、丹参道地性、资源状况、产地迁移丹参是唇形科多年生草本植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎[1]，在我国应用历史悠久，始载于《神农本草经》,被列为上品。
但历代本草对其道地产区叙述多有不同。
按郭宝林考证，《名医别录》述：“生桐柏山谷及太山”(今河南和湖北交界及山东泰山一带)；《图经本草》：“今陕西河东州郡及随州皆有之”(今山西、湖北，河东州郡应归为山西而非陕西)；《本草品汇精要》：“道地随州”(今湖北随州)；《药物出产辨》：“产四川龙安府为佳”(今四川平武)。
现代研究表明：丹参在我国分布甚广，南起江西、湖南,北达辽宁，西至四川，广布于海拔120-1300m的山地丘陵。
丹参野生、家种兼有，野生品有效成分高于栽培品,但栽培丹参的种植面积和规模较大,生长条件稳定,产量大,已经成为目前丹参商品的主流。
栽培面积较大的有山东、四川、河南、河北、陕西、安徽等省。
丹参的化学成分在地理空间上没有一定的规律可循，表明在较大尺度上，气候、大的土壤类型等生态因子对丹参次生代谢产物积累的影响不明显。
丹参化学成分在同一个省内的变异可能会大于空间距离更远的不同的省之间，提示遗传背景及小尺度上的生态因子，如区域土壤、小气候及人为影响等，对丹参中化学成分的积累有重要影响。
以中江丹参为例：四川中江丹参大面积人工栽种历史约300年，中江丹参作为我国丹参的主源优质道地药材，以其根粗壮、色泽朱红、药味浓郁、药效高而弛名海内外。
丹参药材道地性探讨_赵宝林
参考文献:
[ 1] [ 2] [ 3] 吴弥漫 . 治 未病 贯 彻 以 人为 本 理念 的中 医防 治疾 病 的思 想 [ J] . 新中医 , 2007 , 39( 5 ): 1 . 李 力 , 薛晓琳 , 徐雯洁 , 等 . 治未病 思想在亚健康防治中的应用 [ J] . 北京中医药 , 2008 , 27 ( 1) : 76 . 华浩明 . 膏方历史源流 及现代进展概要 [ J] . 江苏中医 药 , 2007 , 27 ( 11 ): 1 .
3101
时珍国 医国药 2009 年第 20 卷第 12 期
LISH IZHEN M ED IC I NE AN D MA TER I A M ED I CA RESEAR CH 2009VO L. 20 NO. 12
从本草考证看来 , 丹参主产区和道地产区出现较大变迁。丹 参主要产地 或 道地 产 区先 后有 : 河南、 山 东、 陕 西 ( 或 山西 ) 、 湖 北、 安徽、 四川等地。胡世林的 中国道地 药材 将丹参列 为川产 道地 药材。在常用 中药中 , 道地产区 变迁十分 普遍 , 产生变迁的 原因除了自然环境、 经济原因之外 , 与人 文背景关系也相当密切 , 因此对一些产地比较 广泛、 道 地记述 变迁较 大的中 药材 , 其道地
秋冬养 阴 的原则 , 针对 机体 阳气四 时各 有不 同特 点 , 结 合某 些 疾病的规律 , 产生了 冬病夏治 和 夏病冬治 的特色疗法。 冬 病夏治 针对冬天阳 气不 足 , 寒从内 生的 时令 特点 , 一些 旧疾 如 哮证、 喘证、 痹证等 易复发 , 这时就 需要在夏季 阳气充盛 时 , 予 以 质重味厚之辈制 以膏方 , 使机体阴阳平衡 , 气血调和 , 脏腑功能 健 旺 , 以治疗疾病 , 减轻病 情发作 ; 夏 病冬治 是 针对冬 季阳气 在 内 , 阴气在外 , 一些湿热型 的脾胃病相应减少 , 可予以益气温阳 健 脾的 药物制以 膏方 , 以厚脾胃 , 以达治 疗目的。瘥后 防复这一 阶 段使 用的膏方是 综合处方 , 防治 结合 , 寓治于防 , 在缓解 期服用 , 有效缓 、 稳定、 持 久的特点 , 达到扶正固本 , 增强抗病能力的目的。 不仅能 减少急性发作 , 还可使疾病向痊愈方向发展。 3 展望 在 当今社会 , 人们的生 活水平 不断提高 , 对 健康要求 越来 越 高 , 祖国传统医 学中 治未 病 的思想 越显 突出。膏 方作 为祖 国 医学传统制剂之 一 , 根据患者不同体质特点和不同症状、 体征 , 通 过辨证 论治而组 方 , 用 于临床兼顾 面广 , 口感好 , 不伤脾 胃 , 适 宜 久服 , 简单方便 , 是临床的一 种个性 化的 防治 疾病的 手段 , 能 很 好地体 现 治未 病 的思想。 因此 , 膏方 的深入 研究 与开 发对 构 建 治未病 特色预防保健治疗服务体系 有着重要的意义。
丹参营养器官的结构及药用成分含量分析的开题报告
丹参营养器官的结构及药用成分含量分析的开题报告一、选题背景丹参是一种常见的中药材，其所含有的营养成分及药用效果备受关注。
丹参是丹参科植物丹参的根及根状茎，其主要功效是活血化瘀，舒筋活络，降低血脂、抗凝血等，临床常用于心脑血管疾病、胃肠道疾病以及妇科疾病等的治疗。
二、研究内容1. 丹参的营养器官结构：研究丹参的根及根状茎的结构、形态、组织学和生理学特征等方面；2. 丹参的药用成分含量分析：通过对丹参进行色谱质谱等技术的分析，研究其有效成分及含量，包括丹参素、丹酚酸B、丹酚酸A等成分。
三、研究意义1. 丰富了对丹参的认识及使用：通过对丹参的结构和成分等方面的分析，可以更好地了解丹参的作用及机理，为其合理的应用提供科学依据。
2. 为丹参的开发利用提供基础：丹参作为中药材具有广泛的用途和应用前景，深入研究其营养器官的结构及药用成分含量分析，可以为丹参的深度开发利用提供基础。
四、研究方法1. 形态学和组织学分析：对丹参的根及根状茎进行标本制片，通过显微镜观察并拍摄相应的形态学和组织学照片，分析其结构特点、形态特征等；2. 色谱质谱分析：通过色谱质谱等技术对丹参进行分析，建立成分分析方法，分析其有效成分及含量，评价其药用价值。
五、预期结果1. 建立丹参营养器官的结构分析方法；2. 建立丹参有效成分的分析方法，分析丹参营养器官中有效成分的含量及比例；3. 对丹参的药用价值做出较为全面的评价和分析。
六、研究计划1. 论文写作及撰写：在对丹参进行深入研究后，进行论文写作，包括开题报告、中期答辩、毕业论文等环节；2. 数据采集与分析：严格按照研究计划，对丹参进行采集、加工、分离、检测及数据的整理、归纳、分析；3. 论文完成及答辩：完成毕业论文，进行论文答辩，并进行相关任务的总结和归纳。
药用植物道地性的研究进展
药用植物道地性的研究进展摘要：随着现代中医药的不断发展以及中药材GAP的全面实施，人们对中药材的质量问题越来越重视，通过掌握药用植物的道地性的研究进展，了解道地性诸多丰富而深刻的内涵，揭示影响道地性的因素，对实现中药材GAP、SOP，保护和有效利用地道药材有重要的理论和实际意义。
关键词：药用植物道地性道地药材是我国传统药物学的一大特色，是我国历代医学家在长期医疗实践中经过反复对比总结出来的，它不仅是人们防病治病的有力武器，而且也是中国特有的中药材品质评价的综合标准。
自1986年国家中医药管理局首次确立了“中药道地药材研究”课题，近20年来，我国先后对常用道地中药的品种与质量开展了较为深入系统的研究，分别对大约300种中药材进行了包括品种考证、生态、性状、显微特征、理化特性、化学成分、药理、质量控制等方面的系统研究。
尤其是“九五”、“十五”期间，国家通过“973”计划、“863”计划、国家攻关计划、公益性研究专项、科技资源平台建设专项、自然科学基金等计划，支持了部分道地中药材的研究与创新，对道地中药材品种规范化种植关键技术、中药材现代质量标准、中药化学对照品、中药材和中药饮片等有害物质限量标准进行了研究，涉及了中药材的种质、生态、环境、生理、栽培、加工，以及化学、药理、质控等方面的内容。
这些研究为揭示中药道地性的科学内涵奠定了工作基础，但对中药道地性科学内涵尚未形成统一的认识。
[1]道地药材及其形成因素道地药材是历代医家保证药材质量的成功经验，也是我国传统药物学的一大特色。
道地药材的概念古已有之，唐《新修本草》序云：“动植形生，因方舛性，春秋节变，干气殊工。
离其本土，则质同而效异。
”“道地”思想是中华民族在天然药物质量控制方面对于世界文明的一大贡献，值得发扬光大。
那么什么是“道地药材”呢？由于天时、地利的生长条件和多年来劳动人民精心培植和加工，逐渐形成了历史悠久、品种优良、生产及加工技术成熟、稳定、临床常用的著名药材，这些药材在中药行业被称为“道地药材”。
丹参种质资源的数量分类研究_郭林林
（ 1． College of Agronomy，Shandong Agricultural University，Taian 271018，China； 2． Taian Academy of Agricultural Sciences，Taian 271000，China）
Key words Salvia miltiorrhiza； Numerical taxonomy； Principal component analysis
丹参（ Salvia miltiorrhiza Bge． ） 为唇形科鼠尾 草属多年生草本植物，以根及根茎入药。丹参作 为治 疗 心、脑 血 管 病 常 用 的 重 要 原 料，药 用 量 巨 大，是我国重要的大宗药材之一。在多年的丹参 栽培和种植过程中发现丹参种质资源丰富，具有 在生物学性状、农艺性状、根系性状等方面各具特 点的丹参栽培类型，除中国植物志［1］报道的丹参 有两个变种一个变型，即原变种丹参（ S． miltiorrhiza var． miltiorrhiza） 、单 叶 丹 参 （ S． miltiorrhiza var． charbommellii） 和白花丹参 （ S． miltiorrhiza f．
在欧氏距离 8． 29 处，性状可被分为两大类， 第一类包括叶长、叶柄长、花序长、叶宽以及复叶 数等数量性状，另一大类包括花部特征如花色、花 器官各部分长度和叶面、叶色、叶形指数等特征以 及分枝数。将欧氏距离定位在 7． 6 左右时，可将 性状分成 8 组，第 1 组包括复叶数、茎生叶叶缘、 株高等性状； 第 2 组主要包括反映叶片大小的性 状，如叶柄长、叶长、叶宽以及叶缘，另外还包括花 部特征花序长、花轮数、雄蕊长 3 个性状； 花部性 状主要集中在第 3 组，包括花色、花径、花长、花梗 长、花药长等； 第 4 组反映了叶片特征中的叶形指 数性状； 第 5 组包括花形指数和茎生叶叶色； 第 6 组包括茎基部颜色、耐涝性以及雌蕊长； 第 7 组包 括下唇裂片深浅及其边缘颜色和冠幅； 第 8 组包 括了茎生叶和基生叶的叶面特征和叶柄颜色，还 包括了基生叶叶色、茎色，以及一级分枝数和二级 分枝数。
中药牡丹皮原植物及药材的质量研究_郭宝林
#研究论文#中药牡丹皮原植物及药材的质量研究郭宝林1,巴桑德吉3,肖培根1,洪德元2(1.中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京100094;2.中国科学院植物研究所,北京100093;3.西藏自治区藏医院藏医药研究所,西藏拉萨850000)[摘要]目的:最近的植物学研究表明,道地药材凤丹皮的原植物凤丹(杨山牡丹)与牡丹是两个不同的植物学种。
本文从药学的角度研究来源于两种不同植物的药材在质量上的差别。
方法:用HPLC法对同一时间和地域采集的凤丹5个样品(包括野生和栽培)、牡丹4个样品以及6个购买的商品药材进行了芍药苷和丹皮酚的含量测定,并考察了其中所含的芍药苷类和丹皮酚类主要成分的情况。
结果与结论:¹凤丹和牡丹在有效成分含量和各种成分构成上无明显差异,但考虑到二者的形态差别,建议药典将牡丹皮的来源确定为凤丹Paeonia os tii T.Hong et J.X.Zhang和牡丹P.suf f ruticosa Andrews;º在药材的采收加工和储藏的过程中,有丹皮酚苷类向丹皮酚转化的趋势,因而在以丹皮酚的含量评价药材或成药的质量时应予注意。
[关键词]牡丹皮;凤丹;牡丹;质量[中图分类号]R282[文献标识码]B[文章编号]1001-5302(2002)09-0654-04中药牡丹皮的原植物一直被认为是栽培牡丹Paeonia suff ruticosa Andrew s,以单瓣者为佳,如5本草纲目6中述:/牡丹唯取红、白单瓣者入药,其千叶异品,皆人巧所致,气味不纯,不可用0。
安徽铜陵等地自明朝以来,栽培的/凤丹0因质地优良,逐渐成为传统的道地药材,其根皮称/凤丹皮0,植物形态上,以花单瓣、白色区别于牡丹的其他品种。
凤丹目前已在全国范围内广泛引种,成为药材牡丹皮的主流品种。
洪涛等[1]在研究野生牡丹时,发表一新种)))杨山牡丹P.ostii T.Hong et J.X.Zhang,引证的野生居群产于河南嵩县杨山,其余为栽培居群。
道地药材“道地性”与其活性成分关系
道地药材“道地性”与其活性成分关系
柳先平;黎先春;李磊
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2004(018)B12
【摘要】“道地药材”或称“地道药材”，是具有中国特色的、对特定产区的名
优正品药材的特称。
它们在保证医药质量，保障药材供给方面具有不可低估的作用。
不同产地的同种药材，其活性成分的种类及含量均有所不同，从而导致其药效的差异。
本文列举并分析了几个对不同产地同种药材的活性成分的研究结果，充分展示了道地药材与其活性成分间的密切关系，部分地揭示了道地药材的内涵。
【总页数】6页(P24-29)
【作者】柳先平;黎先春;李磊
【作者单位】国家海洋局第一海洋研究所，山东青岛266061
【正文语种】中文
【中图分类】R282
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5.丹参主要居群的遗传关系及药材道地性的初步研究 [J], 郭宝林;林生;冯毓秀;赵杨景
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道地药材的科学概念及评价方法探讨
道地药材的科学概念及评价方法探讨
郭宝林
【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》
【年(卷),期】2005(007)002
【摘要】道地药材通常指来自特定产区、生产历史悠久、栽培加工技术精细、质量优良、疗效显著的药材,一般被用作优质药材的代名词.作者提出:1)局限于特定产区和(或)具有特殊的栽培加工技术的道地药材属于"原产地药材",值得重视和保护;2)道地药材通常都是主产药材,但主产药材不等同于道地药材;3)主产区及道地产区的形成和变化有许多人为和主观的因素,新近形成的道地药材需要慎重对待;4)具有优质含义的道地药材十分有限.作者认为,当今由于药材质量评价的困难,一般难以用一个或少数几个化合物的含量来评判药材优劣,"道地"被作为经过历史检验的综合的质量评价称谓,使得"道地药材"被赋予了过高的科学含义,成为优质药材的代名词,这是很危险的事情.道地药材"名称不可滥用,对道地药材需进行多角度的深入研究和科学评价.
【总页数】5页(P57-61)
【作者】郭宝林
【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学,药用植物研究所,北京,100094【正文语种】中文
【中图分类】R282
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3个道地产区丹参混合提取物对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响
3个道地产区丹参混合提取物对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响李红刚;王红鸽;聂晓枫;孙（龑）（龑）;陈卫银【摘要】目的通过观察山东、河南、四川3个道地产区丹参混合提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织B细胞淋巴瘤-2基因(Bc1-2)、肿瘤抑制基因p53的影响,探讨3个道地产区丹参对神经细胞凋亡的影响.方法将60只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、山东丹参组、河南丹参组、四川丹参组,每组10只.用线栓法阻断大脑中动脉,建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,用苏木精-伊红(HE)染色法观察缺血脑组织的病理学变化,采用免疫组化法检测再灌注24h后各组Bc1-2和p53蛋白的表达.结果正常组和假手术组细胞与间质之间界限清楚,细胞核完整,核仁清晰;模型组细胞与间质之间界限不清楚,大部分组织细胞坏死,多数细胞溶解呈空泡状,可见核固缩和核碎裂;3个道地产区丹参组脑组织细胞坏死程度均较模型组轻,可见少量细胞核固缩及溶解,部分胞质液化.正常组、假手术组Bcl-2的积分光密度值(IOD)较少,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组Bcl-2的IOD 值较正常组、假手术组增加(P＜0.05);与模型组比较,3个道地产区丹参组均能上调Bcl-2的IOD值(P＜0.05);与河南、四川丹参组比较,山东丹参组上调Bcl-2的IOD 值的幅度最大(P＜0.05).正常组、假手术组p53的IOD值较少,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组p53的IOD值较正常组、假手术组增加(P＜0.05);与模型组比较,3个道地产区丹参组均能降低p53的IOD值(P＜0.01);与河南丹参组比较,山东、四川丹参组降低p53的IOD值的幅度最大(P＜0.05).结论 3个道地产区丹参混合提取物均能通过上调Bcl-2表达、降低p53表达,从而抑制神经细胞凋亡,发挥脑保护作用.不同产区丹参混合提取物对各指标表达影响不同,其原因可能与不同产区丹参混合提取物所含活性成分的含量不同,作用靶点不一致有关.【期刊名称】《河北中医》【年(卷),期】2016(038)010【总页数】5页(P1515-1519)【关键词】疾病模型,动物;脑缺血;神经元,细胞学;细胞凋亡;再灌注损伤;丹参【作者】李红刚;王红鸽;聂晓枫;孙（龑）（龑）;陈卫银【作者单位】陕西省渭南职业技术学院医学院临床教研室,陕西渭南714000;陕西省渭南职业技术学院医学院临床教研室,陕西渭南714000;陕西省渭南职业技术学院医学院临床教研室,陕西渭南714000;陕西省渭南职业技术学院医学院临床教研室,陕西渭南714000;成都中医药大学附属医院神经内科,四川成都610072【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.8;R329.25;R341;R743.31丹参是常用活血化瘀药之一，其对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型的影响报道较多，其单体成分通过不同途径对脑缺血再灌注损伤起到保护作用，但未见不同产地丹参对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型影响的报道。
丹参种质资源的遗传多样性研究
丹参种质资源的遗传多样性研究丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)是我国常用大宗药材,具有广泛的药理作用,药材使用量逐年增加。
随着丹参野生资源的数量逐年减少,栽培面积逐年增大,但是栽培丹参存在严重混杂现象。
目前丹参的种植主要集中于四川的中江、陕西、山东、河南、河北等地。
对各产地丹参种源进行遗传多样性和群体遗传结构分析,明确各产地丹参资源的遗传基础和亲缘关系,可为丹参资源的收集保存、分类鉴定、合理开发利用奠定基础,对解决当前丹参种质资源混杂和指导丹参品种选育具有重要的意义。
本研究以来自山东省内外的9个丹参居群为材料,从形态学、细胞学、分子生物学等方面对其形态性状、开花生物学及繁殖特点进行了鉴定和观测,对供试丹参资源各居群的遗传多样性及亲缘关系进行了分析,对11个丹参分离类型进行了产量和品质性状的评价,从中筛选出适于泰安种植的优良栽培类型。
获得的主要研究结果如下:1.通过对9个居群的丹参种质资源地上部性状分析证明,42个性状中叶柄颜色、叶柄长、叶长、叶宽、叶形指数等叶片性状、花色、花萼颜色、株高、冠幅、分枝数等在丹参种质资源中的多样性较大;其遗传多样性存在于居群内和居群间且两者变异程度相近。
通过各居群的遗传多样性比较发现,泰安地区的丹参居群多样性程度最高,菏泽和四川中江的丹参居群较低,其它居群的多样性指数比较接近;省间材料聚类分析结果表明,河南内乡与河南卢氏丹参居群的亲缘关系最近,山东泰安与其它居群的亲缘关系最远;山东省内潍坊与临沂居群的亲缘关系最近,菏泽与其它居群的距离最远。
42个性状聚类可分成6组,综合为7个主成分,其累积贡献率达70.17%;根据主成分分析的结果与性状间的相关性,选出影响力较大的16个性状,包括花部因子、茎部因子、叶部因子等地上部性状,可较好的代替42个性状用于种质聚类分析。
利用欧式遗传距离进行UPGMA聚类可将90个材料分为6个类群;根据主成分分析结果和各类群特点,提出了丹参的分类标准,该标准对今后丹参种质的评价具有一定的指导意义。
丹参的生物技术
丹参的生物技术摘要：现代生物工程技术是进行中药材品质改良的可行途径之一。
本文对丹参的组织培养、毛状根诱导培养及基因工程等方面的研究进展与具体方法以及目前存在的问题做一综述。
关键词：丹参生物技术细胞与组织培养基因工程毛壮根培养一、概述中药丹参是唇形科鼠尾草属的多年生草本植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge) 的干燥根及根茎 , 因其色红且形状似参而得名“丹参”,又称血参、紫丹参、红丹参等。
丹参作为一传统中药在我国沿用已久 ,始载于《神农本草经》,被列为上品。
《本草经疏》《、本草纲目》中都有记载。
丹参具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效 , 主治冠心病、心绞痛、心烦不眠、月经不调、经闭痛经等症。
近年来研究发现用来治疗心血管疾病 ,疗效显著。
丹参属于用量较大的常用药材。
丹参商品野生、家种均有(50年代以前野生为药用主要来源，仅有四川一地有家种产品，60年代后全国各地均有引种)。
野生资源主要分布于河北、北京、山西、山东、湖北，湖南、辽宁、江苏、江西、云南、贵州、甘肃、陕西；家种则主要分布于河北、天津，江苏、上海、浙江、安徽、河南、山东、四川等省。
当中，以四川中江等地栽培品为最佳。
二、国内外研究现状及研究所取得的成果现代生物技术是以基因工程、细胞工程、发酵工业、酶工程、生化工程以及后来衍生出来的第二代、第三代的蛋白质工程、抗体工程和糖链工程等为主体的高新技术,它被看作是 21世纪科学技术的核心。
纵观这一领域,生物技术的产业化首先是从医药领域开始的,现代生物技术的发展使医药产业发生了革命性的变化。
近 10多年来,从天然产物中寻找新的生理活性成分或先导化合物以开发新药已成为全球关注和研究的热点。
由于野生药材资源日益枯竭,人工栽培品种品质不稳定,生物技术的兴起对传统药材的生产展示了广泛的应用前景。
为了提高品质 ,满足市场需求 ,近年来利用细胞工程、基因工程等现代生物工程技术对丹参作了深入的应用性研究。
药用植物资源学各论
丹参丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge.）为唇形科鼠尾草属多年生草本植物，主要以其干燥根及根茎入药，因其色红且形状似参而得名“丹参”，是一种主治心血管系统疾病的常用中药。
生药称丹参，别名血参、紫丹参、赤参、红根等。
丹参味苦，性微寒，归心、肝二经。
具有活血祛痰、养血安神、消肿止痛、凉血消痈等功能。
丹参的主要活性成分可分为两类，即脂溶性丹参酮类（脂溶性二萜醌类）和水溶性酚酸成分。
现代药理研究表明前者有抗菌、抗炎、治疗冠心病等疗效；后者有改善微循环、抑制血小板凝聚、减少心肌损伤和抗氧化等作用。
脂溶性成分包括：丹参酮（tanshinone）Ⅰ、ⅡA、Ⅱb、Ⅴ、Ⅵ，隐丹参酮（cryptotanshinone）、异丹参酮（isotanshinone）Ⅰ、Ⅱ、Ⅱb，异隐丹参酮（lsocryptotanshinone）等。
水溶性酚酸类有丹酚酸（salvianolic acid）A、B、C、D、E、F、G，迷迭香酸（rosmarinic acid）、紫草酸B（lithospermic acid B）、原儿茶酸（protocatechuic acid）、原儿茶醛（protocatechualdenyde）、咖啡酸（caffeic acid）等。
此外，还含黄酮类、三萜类和甾醇等成分。
主治冠心病、心肌梗死、心绞痛、月经不调、产后瘀阻、瘀血疼痛、痈肿疮毒、心烦失眠等症。
由于丹参疗效显著，用量不断增大，成为药材市场供销两旺商品。
全国大部分省区均有栽培。
主产安徽、江苏、山东、河北、陕西、四川、山西等省。
资源评价（一）品质评价2005版《中国药典》对丹参药材的质量标准除了常规的性状鉴别外，明确列出了丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量测定，一起作为丹参药材的内在质量控制指标，具体要求为按干燥品计算分别不得少于0.2%和3.0%。
同时对丹参药材中的重金属及有害元素的安全限量也作出明确要求。
因此有关丹参研究和生产均应在遵循这些标准和要求的基础上开展。
丹参药理作用及临床研究进展
丹参药理作用及临床研究进展蔡琳;彭鹏;郭甜【期刊名称】《山东化工》【年(卷),期】2016(045)017【摘要】Salvia miltiorrhiza contain two kinds of compound,they are tanshinone and dan phenolic acids. It has antitumor, antibacterial anti - inflammatory,anti - allergic,adjust the tissue repair andregeneration,resisting lipid peroxidation and scavenging free radicals and other pharmacological activities.Salvia miltiorrhiza has many kinds of chemical composition has wide application in pharmacological research.%丹参中主要含有两大类化合物，分别是丹参酮和丹酚酸。
它具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗过敏、调节组织修复与再生、抗脂质过氧化和清除自由基等多种药理活性。
丹参具有的多种化学成分在药理研究方面具有广泛的应用。
【总页数】2页(P51-52)【作者】蔡琳;彭鹏;郭甜【作者单位】徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州 221000;徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州 221000;徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州 221000【正文语种】中文【中图分类】TQ461【相关文献】1.丹参化学成分、药理作用及临床应用的研究进展 [J], 王涵;杨娜;谭静;林红强;董庆海;李平亚;刘金平2.复方丹参滴丸药理作用及临床应用的研究进展 [J], 肖铃3.浅谈中药丹参中丹参酮的药理作用及临床应用研究进展 [J], 徐艳萍4.丹参多酚酸盐的药理作用机制及临床应用研究进展 [J], 赵彩霞;靳会欣5.复方丹参滴丸治疗冠心病的药理作用与临床研究进展 [J], 张蓓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丹参调研报告
丹参调研报告丹参调研报告一、引言丹参是中药材中的常见品种，常见于东亚地区，尤以中国和日本的丹参最为著名。
丹参具有抗凝血、抗炎、抗氧化等多种药理特性，因此在临床上被广泛应用于心血管疾病的治疗。
本次调研旨在了解丹参的种植情况、市场需求以及潜在发展前景。
二、调研内容及方法本次调研主要从以下几个方面展开：丹参的种植情况、市场需求、产业链发展、科研创新和标准规范等。
调研方法主要包括实地访谈、问卷调查、数据分析等。
三、种植情况根据实地调研结果，丹参适宜生长在温暖湿润的环境中，海拔在800米至1500米的山区最为适宜。
我国主要的丹参产区有四川、云南、湖北等地。
丹参的种植面积较大，但由于丹参的生长周期较长，因此产量相对较低。
四、市场需求丹参具有一定的市场需求，尤其是在心血管药物领域。
随着人民生活水平的提高，对健康的关注度逐渐增加，人们对心血管疾病的认知和治疗需求也在增加。
丹参作为传统中药，被广泛运用于心血管疾病的治疗中。
此外，丹参还有一定的国际市场需求，尤其是在东亚国家。
五、产业链发展丹参的种植和加工环节构成了丹参产业链。
目前，丹参的种植主要是由农民进行，加工主要是由企业完成。
然而，由于丹参的生长周期较长，且采制工艺复杂，导致供应链的不稳定。
此外，丹参的加工技术和设备相对滞后，限制了产业的发展。
六、科研创新科研创新是丹参产业发展的关键。
目前，科研机构和企业正在加强对丹参的研究，主要集中在种植技术、制剂研发、提取技术等方面。
科研创新有助于提高丹参的产量和品质，推动丹参产业的健康发展。
七、标准规范丹参的标准规范对丹参产业的发展起到了重要作用。
制定和执行一系列的质量、安全和生产标准，有助于提高丹参的市场竞争力，推动丹参行业健康发展。
八、潜在发展前景在调研中，发现丹参具有潜在的发展前景。
随着人们对健康的关注度增加，心血管疾病的发病率呈上升趋势，对丹参的市场需求将会增加。
同时，科研创新和标准规范的不断完善，有助于提高丹参的产量和质量，推动丹参产业健康发展。
常用中药品种论述之活血通经清心论丹参
常用中药品种论述之活血通经清心论丹参丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎。
又名：红根、赤参、样乳、大红袍、血参根、红丹参、活血根、紫丹参、蜜罐头、靠山红、山红萝卜、山苏子根、朵朵花根、野苏子根。
原植物丹参野生或栽培，分布于华北、华东、中南及辽宁、陕西、甘肃、宁夏、新疆、四川、贵州，主产于四川、山西、河北、江苏、安徽。
本品药材性状：根茎短粗，顶端有时残留茎基。
根数条，长圆柱形，略弯曲，有的分枝并具须状细根，长10~20cm，直径0.3~1cm。
表面棕红色或暗棕红色，粗糙，具纵皱纹。
老根外皮疏松，多显紫棕色，常呈鳞片状剥落。
质硬而脆，断面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕红色，木部灰黄色或紫褐色，导管束黄白色，呈放射状排列。
气微，味微苦涩。
栽培品较粗壮，直径0.5~1.5cm。
表面红棕色，具纵皱纹，外皮紧贴不易剥落。
质坚实，断面较平整，略呈角质样。
本品味苦，性微寒；归心、肝经。
功能：活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈。
中医临床用于胸痹心痛，脘腹胁痛，癥瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛。
现代药理研究表明：本品对心脏收缩功能、对冠脉收缩和流量、对血压、对血液流变学、对血脂和动脉粥样硬化、对血小板功能和血栓形成、对肿瘤有影响，可抗心肌缺血和心肌梗死，抗肝纤维化，抗肺纤维化，抗病原微生物，抗炎及有免疫抑制作用，抗雄激素活性，抗放射损伤，抗氧化，抗衰老，并有改善微循环，扩张血管，耐缺氧，抑制凝血，激活纤溶，稳定红细胞膜，保护失血性休克晚期组织细胞的功能，保肝及促进肝细胞再生，平喘，改善肾功能，保护胃黏膜及抗溃疡，镇静催眠及抗惊厥，促进创伤愈合，提高免疫功能，抑制白内障形成及雌激素样作用，对脑缺血有保护作用等。
丹参为常用中药，始载于《神农本草经》，列为上品。
谓“味苦，微寒。
主心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚，破症除瘕，止烦满，益气，一名郄蝉草。
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·药材·丹参主要居群的遗传关系及药材道地性的初步研究郭宝林1,2,林 生2,冯毓秀1,赵杨景1(1.中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京 100094; 2.北京中医药大学,北京 100029)摘 要:目的 研究丹参主要居群的遗传关系及药材的道地性问题。
方法 选择丹参主要产地样本44个(包括9个居群样本),进行R APD分析,得到的扩增条带用N T SY S-pc和AM OV A软件进行数据处理。
结果 (1)从100多个引物中选择出11个多态性强和重复性好的引物,扩增得到129条带;(2)不同居群内多态位点比率为20.9%～55.0%;(3)用U P GM A法得到所有样本的聚类图,可分为6个主要分支组和3个组外个体,其中四川中江居群的5个样本聚为一组,并与其他样本遗传距离较大;(4)按产地分组,遗传差异的80.44%存在于居群内,8.29%来自于组内居群间,11.27%的遗传差异来自于组间。
结论 (1)丹参居群内遗传多样性十分丰富;(2)山东和河南的栽培居群栽培种源来自于当地野生居群,尚没有进行人工选择,丹参酮ⅡA等成分的减少的原因主要是栽培条件不理想;(3)地区间居群的遗传分化不均衡,四川中江和河北承德居群与其他居群距离较远;(4)丹参的道地性的确定应当依据现代的优质药材评价系统,山东和河南产的丹参也可认为是丹参的道地药材。
关键词:丹参;RA PD;居群遗传关系;丹参药材道地性中图分类号:R282.21 文献标识码:A 文章编号:02532670(2002)12111304Primary research on genetic relationship among main populationsof Salvia miltiorrhiza and genuineness of herbGUO Bao-lin1,2,LIN Sheng2,FENG Yu-xiu1,ZHAO Yang-jing1(1.Institute o f M edicinal Plant,Chinese Academy o f M edical Sciences and Peking U nio n of M edical Colleg e,Beijing100094,China;2.Beijing U niv er sity o f T CM,Beijing100029,China) Abstract:Object To resea rch o n genetic rela tio nship amo ng the main popula tio ns of Salvia miltior-rhiza B g e.and the g enuineness of the herb.Methods Fro m main distributed places,44samples(includ-ing nine popula tions)w ere analy zed by RAPD.The data of amplified bands w ere analy zed by the so ftw are N TSYS-pc and AM OV A.Results (1)Fro m mo re than100primers,11primers producing polymo rphism and reproduceable bands w ere selected,129bands w ere amplified.(2)The percentage o f po lymo rphic bands within different popula tions w ere20.9%-55.0%.(3)The cluster map including all samples w ere o btained by U PGM A.In the ma p,there w ere six cluster g roups and three individuals outside the g ro ups. The bra nch w ith five sam ples of Zho ng jia ng Sichuan popula tion w ere far from other samples in g enetic dis-tance.(4)Acco rding to the distribution provinces five g roups were divided in g enetic v ariance analy sis. Genetic v ariance80.44%existing within population,8.29%among populations and11.27%amo ng g roups.C onclusion (1)The g enetic div ersity within popula tio n o f tiorrhiz a is plentiful.(2)The seeds of the cultiv ated popula tion in Shando ng and Henan Provinces come from the wild ones o f sam e places.The cultiva ted plants lack artificial selection.The decrease of chemical compound is mainly due to the undesired co nditio n of cultiv ating.(3)The genetic differentia tion among the populations from different provinces is unbalance.Tw o popula tion from Zho ng jiang Sichuan a nd Cheng de Hebei are far from the oth-er popula tion.(4)The g enuineness o f Radix Salv iae Miltiorrhizae sho uld be decided according to modern evaluatio n sy stem.The herbs from so me places of Sha ndo ng and Henan should be genuine ones.Key words:Salvia m iltiorrhiza Bg e.;RAPD;genetic rela tionship of popula tion;g enuineness of Radix Salviae Miltiorrhizae 丹参是著名活血化瘀药,现代药理研究表明丹参对心血管系统作用十分显著,已成为治疗冠心病最常用的中药之一。
《中华人民共和国药典》(2000年版)规定,丹参为唇形科植物丹参Salv ia miltior-收稿日期:2002-02-14基金项目:国家自然科学基金重点资助课题(39730500)rhiza Bg e.干燥根及根茎。
丹参的生态适应强,在我国广泛分布于华北、华东、中南,西北、西南部分省区也有分布。
随着野生资源的减少,20世纪70年代中期丹参已经供不应求,在全国许多地区都开始栽培,目前栽培品已成为丹参主要来源,全国丹参产量大的有河南、山东、四川、山西、陕西、湖北、安徽等省。
历代本草对丹参产地和道地产区叙述有所不同。
如《名医别录》(东汉)述:“生桐柏山谷及太山”(今河南和湖北交界及山东泰山一带);《图经本草》(宋朝):“今陕西河东州郡及随州皆有之”(今山西、湖北,河东州郡应归为山西而非陕西);《本草品汇精要》(明朝):“道地随州”(今湖北随州);《药物出产辨》(1930年):“产四川龙安府为佳”(今四川平武)。
总结起来,在历史上湖北、河南、山东和山西等几个省曾是丹参的主要产地或道地产区。
只是在近代才被认为川产丹参为佳品,但在《中国道地药材》中,丹参被列为川产道地药材[1],科技部在四川省中江建立了丹参的GAP种植基地,研究丹参的道地性,确立最佳生产地区对于优质药材的评价是十分有意义的。
本文通过对四川、河南、山东、山西、河北等丹参主要居群(包括野生和栽培)材料RAPD分析,研究类群间遗传关系,并就丹参的道地性问题进行一些探讨。
1 材料和方法1.1 材料:为1999年至2000年在丹参的主要产区采集的叶片,自然晒干或晾干,其中四川的样品为嫩叶经硅胶快速干燥。
另测定同一样本的根中丹参酮ⅡA含量[2](表1)。
每个居群取样3～5个(居群a～i),并提供该居群样本的成分含量情况[2],对丹参的主要分布区(河南和山东)的居群,补充了邻近居群的个体(16～21, 36,37),湖北样本为单一个体(44)。
1.2 仪器和试剂:离心机为Heraeus公司生产的表1 丹参材料来源和有效成分含量情况序号居群编号种源丹参酮ⅡA(%)序号居群编号种源丹参酮ⅡA(%) 1～5a四川中江(栽)0.440222～25d山东沂南(栽)0.7219 6～10b河南卢氏(栽)0.579726～29e山东沂南(野)0.6928 11～15c河南卢氏(野)0.964930～32f山东沂水(栽)0.369016河南灵宝(栽)33～35g山东沂水(野)0.806917河南灵宝(野)36山东莱芜(栽)18河南洛宁(栽)37山东莱芜(野)19河南洛宁(野)38～40h河北承德(栽)0.058520河南嵩县(栽)41～43i山西垣曲(栽)0.149521河南嵩县(野)44湖北武当山(野)0.1266B iofug e Stra tos,PCR仪为PERKIN ELM ER公司生产的Gene Am p PC R System9600,电泳仪为BIO-RAD公司生产POW ER PAC300。
Taq酶、DN A ladder(华美公司),dN TP、随机引物(上海Sango n),EB(SIGM A),β-巯基乙醇(M ERCK), Tris碱(GIBCO),EDT A(AM RESCO),琼脂糖凝胶(Spanish),其他溶剂为分析纯。
1.3 DN A提取方法:将丹参叶片约0.4～0.5g置于乳钵中,加入约40mg(重量约占叶片10%)PV P-40T(聚乙烯吡咯烷酮),在液氮环境下研磨成细粉状,装入离心管,加入4℃的提取液Ⅰ(0.25m ol/L Na Cl,0.25mo l/L Tris-HCl,50mm ol/L EDT A, pH=8.0),冰置10min4℃,7000r/min离心10 min,弃去上清液,加入65℃已预热的提取液Ⅱ(即2×CT AB)3.5m L(其中已加Vc0.4g,并调p H为6.0～ 6.5),再加2%的β-巯基乙醇约70μL,轻微振摇后放进水浴锅内65℃恒温1h,期间不断振摇。