动物细胞传代培养试验报告
动物细胞传代培养
动物细胞传代培养一、【实验目的】1、掌握消化法细胞传代培养的原理2、了解细胞传代培养所需专用设备、试剂3、学习细胞传代培养操作二、【实验原理】动物细胞原代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，会进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不足或密度过大，发生接触抑制，并引起营养物质枯竭和代谢产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。
这时需要进行分离培养，细胞由原培养瓶按1：2或1：3稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代。
80%汇合或刚汇合细胞是理想的传代阶段。
消化法细胞传代培养，是用一定含量的胰蛋白酶来进行消化，使贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细胞悬液，然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。
三、【实验仪器及试剂】仪器：改良吸管、加样器、培养瓶（玻璃、塑料）、抽滤装置、超纯水器、倒置显微镜、二氧化碳培养箱试剂：PE液、0.25%胰蛋白酶液、MEM+10%小牛血清液其中，二氧化碳培养箱用于开放或半开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出至培养箱中，再通过稳定调节箱中5%的CO2，与培养基中的NaHCO3处于动态平衡状态，使PH保持稳定。
四、【实验内容及步骤】（1）内容成纤维细胞传代培养6天，细胞汇合长满培养瓶底，刚传代好的细胞，圆球型亮圈，呈流动状态，传代培养1天，细胞贴壁，数量还不太多，上皮细胞培养至细胞汇合长满培养瓶底。
1、用酒精棉球擦拭培养用液瓶盖，打开瓶盖在酒精灯火焰上一过，盖上瓶盖，但不必拧紧2、将培养瓶内的旧培养液倒入烧杯中（注意瓶盖在酒精灯火焰附近），旧培养液倒掉后，镜下观察细胞十分干净、清晰3、从布袋中取出已消毒的吸管，插入加样器，注意吸管的刻度面向上，加样器的柄面偏左侧，以便于操作时观察。
4、将吸管过火焰（竖向横向各过一到两次），吸取PE液5ml从侧面加入瓶内，平放轻摇40下，放置2~5分钟将PE液倒出PE液的作用：络合、吸收、去除维持组织完整性的钙、镁离子，促进细胞分离，钙、镁离子有抑制胰酶的消化作用，因此用PE液去除，将残余未倒尽的血清除尽，因为血清也会抑制胰酶的消化作用；洗去未倒尽的死细胞。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞传代培养分析
动物细胞传代培养分析动物细胞的传代培养是用来研究和繁育动物细胞的技术，对于生物科学和医学研究具有重要意义。
传代培养可以使动物细胞在无限期内继续增殖，为各种研究提供了充足的细胞资源。
本文将介绍动物细胞传代培养的原理、方法和应用。
一、传代培养的原理动物细胞的传代培养是通过将初始细胞（初代细胞）在一定培养条件下生长和分裂，定期收获一部分细胞进行继代，从而使细胞持续增殖。
动物细胞的传代培养基于以下原理：1.细胞增殖：传代培养的基本原理是细胞自身的生长和分裂能力。
在适当的生长条件下，细胞会进入细胞周期，经过细胞分裂产生新的细胞。
2.分离和分散：细胞传代过程中需要经常将细胞进行分离和分散，避免细胞过度密集或形成细胞聚集。
细胞分散是为了保证细胞的生长和增殖。
3.培养基的调配：细胞传代需要提供适宜的培养基满足细胞增殖的需求。
培养基的配方要包含必需的营养物质、生长因子和维生素等。
二、传代培养的方法传代培养主要有以下几个步骤：1.准备培养基：根据需要的传代次数，准备足够的培养基。
培养基的配方可以根据具体的细胞类型和研究需要进行调整。
2.细胞解离：将细胞从培养皿或瓶子中收集，用细胞解离液将细胞分散为单细胞悬浮状态。
细胞解离的方法主要有酶消化法和机械分散法。
3.计数和接种：用细胞计数仪进行细胞数目计数，然后计算出相应的接种细胞数目。
将细胞接种到新的培养皿或瓶子中，使其适当分散。
4.培养和观察：将接种好的细胞置于恒温培养箱中，提供适宜的培养条件（温度、湿度、CO2浓度等）。
定期观察细胞的生长状态和形态特征。
5.细胞收获：根据细胞传代的周期和细胞增殖速率，定期收获适量的细胞用于下一次传代或其他实验。
三、传代培养的应用1.基因表达研究：传代培养可以用来研究细胞的基因表达和细胞信号通路。
通过诱导细胞分化、抗体染色和PCR等方法，可以分析细胞的转录水平和蛋白质表达。
2.细胞毒性和药物筛选：传代培养可以用于药物毒性评价和新药筛选。
1、动物细胞传代培养与观察实验报告
1、动物细胞传代培养与观察实验报告动物细胞传代培养与观察实验实验目的了解动物细胞传代培养的基本原理，熟练掌握动物细胞传代培养的基本操作。
实验原理传代培养是组织培养常规保种方法之一。
贴壁细胞生长增殖形成单层细胞后，会进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不足或密度过大，发生接触抑制，并引起营养物质枯竭和代谢产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。
这时需要进行分离培养，细胞由原培养瓶按一定比例稀释后，分种到新的培养瓶中继续培养，这一过程就叫细胞传代。
胰酶是一种蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，将细胞膜和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离，贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细胞悬液，然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。
传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
实验材料与用品1、材料：培养皿，移液枪，枪头，移液管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯，酒精喷壶，HELA细胞。
2、药品：培养基(DMEM含10%胎牛血清），0.25％胰蛋白酶。
3、仪器：二氧化碳培养箱（37℃，5%C02），倒置显微镜，超净工作台。
实验步骤1、进入无菌室前准备：在进入无菌室之前穿好实验服，用肥皂洗手，75％酒精擦拭消毒双手，进入无菌室之后双手带上乳胶手套，用酒精消毒。
2、观察细胞状态：于倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
3、预热培养基：将培养基和胰蛋白酶置37℃水浴锅内提前预热。
4、超净台紫外消毒：超净台台面应整洁，打开超净台的紫外灯照射台面20 min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧，点燃酒精灯。
5、消化前准备：将预热的培养基和胰酶外表用酒精消毒后放入超净工作台内；将培养皿从二氧化碳培养箱中取出后放入超净工作台内。
6、细胞消化：用移液枪吸出培养细胞的旧培养基，将胰蛋白酶瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后开盖置于酒精灯旁，每个培养皿加入1 mL胰蛋白酶，小皿用量酌减。
1、动物细胞传代培养与观察实验报告
动物细胞传代培养与观察实验实验目的了解动物细胞传代培养的基本原理，熟练掌握动物细胞传代培养的基本操作。
实验原理传代培养是组织培养常规保种方法之一。
贴壁细胞生长增殖形成单层细胞后，会进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不足或密度过大，发生接触抑制，并引起营养物质枯竭和代谢产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。
这时需要进行分离培养，细胞由原培养瓶按一定比例稀释后，分种到新的培养瓶中继续培养，这一过程就叫细胞传代。
胰酶是一种蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，将细胞膜和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离，贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细胞悬液，然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。
传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
实验材料与用品1、材料：培养皿，移液枪，枪头，移液管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯，酒精喷壶，HELA细胞。
2、药品：培养基(DMEM含10%胎牛血清），0.25％胰蛋白酶。
3、仪器：二氧化碳培养箱（37℃，5%C02），倒置显微镜，超净工作台。
实验步骤1、进入无菌室前准备：在进入无菌室之前穿好实验服，用肥皂洗手，75％酒精擦拭消毒双手，进入无菌室之后双手带上乳胶手套，用酒精消毒。
2、观察细胞状态：于倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
3、预热培养基：将培养基和胰蛋白酶置37℃水浴锅内提前预热。
4、超净台紫外消毒：超净台台面应整洁，打开超净台的紫外灯照射台面20 min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧，点燃酒精灯。
5、消化前准备：将预热的培养基和胰酶外表用酒精消毒后放入超净工作台内；将培养皿从二氧化碳培养箱中取出后放入超净工作台内。
6、细胞消化：用移液枪吸出培养细胞的旧培养基，将胰蛋白酶瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后开盖置于酒精灯旁，每个培养皿加入1 mL胰蛋白酶，小皿用量酌减。
轻晃。
动物科学细胞实验报告
实验名称：动物细胞培养与传代一、实验目的1. 熟悉动物细胞培养的基本操作流程；2. 掌握动物细胞传代技术；3. 学习观察细胞形态变化，了解细胞增殖、衰老等生命现象。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或细胞分离出来，在体外培养条件下使其生长、繁殖的一种技术。
通过动物细胞培养，可以研究细胞的生物学特性、细胞增殖、分化等生命现象，为生物医学研究提供重要手段。
动物细胞传代是指在细胞培养过程中，将细胞从培养瓶中取出，加入新鲜培养液，使细胞继续生长、繁殖的过程。
传代次数越多，细胞生长速度越慢，衰老现象越明显。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠胚胎成纤维细胞；2. 培养基：DMEM高糖培养基；3. 细胞消化剂：胰蛋白酶；4. 细胞培养瓶、培养皿、移液器、显微镜等。
四、实验步骤1. 预处理（1）将小鼠胚胎成纤维细胞从冻存管中取出，37℃水浴箱中解冻；（2）加入适量DMEM高糖培养基，轻轻吹打，使细胞分散均匀；（3）将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）观察细胞生长状态，待细胞密度达到80%时，进行传代；（2）用胰蛋白酶消化细胞，吹打均匀；（3）将消化后的细胞悬液转移至培养皿中，加入适量DMEM高糖培养基，终止消化；（4）收集细胞，用移液器将细胞悬液转移至新的培养瓶中；（5）将细胞悬液在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 观察细胞形态变化（1）每隔一定时间，观察细胞形态变化，记录细胞增殖、衰老等现象；（2）用显微镜观察细胞形态，拍照记录。
五、实验结果与分析1. 细胞生长状态在培养过程中，细胞生长状态良好，细胞密度逐渐增加，细胞形态呈扁平状，细胞间连接紧密。
2. 细胞形态变化随着传代次数的增加，细胞生长速度逐渐减慢，细胞衰老现象逐渐明显。
在显微镜下观察，可见细胞出现皱缩、核仁缩小、细胞膜皱褶等衰老现象。
六、实验结论1. 动物细胞培养是一种重要的实验技术，可以研究细胞的生物学特性、细胞增殖、分化等生命现象；2. 动物细胞传代技术是细胞培养过程中的重要环节，有助于维持细胞的生长、繁殖；3. 细胞培养过程中，细胞形态变化反映了细胞的增殖、衰老等生命现象。
动物细胞培养实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。
3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。
动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。
三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。
2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。
4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。
五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。
2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。
细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。
3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。
4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。
如神经细胞、肌肉细胞等。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。
实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。
2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。
操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。
3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。
细胞培养小实验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作流程，包括原代培养和传代培养。
2. 了解细胞培养过程中的无菌操作规范。
3. 观察细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
二、实验原理细胞培养是从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。
三、实验用品1. 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、移液枪、培养皿、无菌操作台、无菌操作箱、细胞培养箱、CO2培养箱、细胞计数器等。
2. 试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、抗生素、无菌水等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，剪碎后用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液加入培养皿，置于CO2培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
2. 传代培养（1）当细胞达到一定密度时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液按1：2的比例传代到新的培养皿中。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
3. 细胞计数（1）取适量细胞悬液，加入细胞计数器。
（2）计数细胞数量，计算细胞密度。
4. 细胞形态观察（1）取细胞培养皿，用盖玻片覆盖。
（2）置于显微镜下观察细胞形态、生长情况。
五、实验结果1. 细胞生长情况：原代细胞在培养皿中生长良好，细胞密度逐渐增加。
传代培养后，细胞生长速度略有下降，但总体状况良好。
2. 细胞形态：细胞呈多边形，细胞核清晰可见，细胞间连接紧密。
3. 细胞计数：细胞密度为1×10^6个/mL。
六、实验结论1. 成功进行了原代细胞培养和传代培养。
2. 细胞在体外培养过程中生长良好，细胞形态正常。
3. 细胞培养技术为生物学研究提供了有力工具。
七、实验总结本次实验成功掌握了细胞培养的基本操作流程，了解了无菌操作规范，并观察了细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告动物细胞培养实验报告引言：动物细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。
本实验旨在通过培养动物细胞，观察细胞的生长、分裂和功能表达，以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。
材料与方法：1. 细胞培养基：选择适合培养动物细胞的培养基，如DMEM或MEM等。
2. 细胞培养器具：细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。
3. 细胞株：选择合适的细胞株，如人类肺癌细胞株A549。
4. 细胞培养条件：温度、湿度、CO2浓度等。
5. 细胞培养试剂：胎牛血清、抗生素等。
实验步骤：1. 细胞传代：将细胞株从冻存管中取出，加入培养基中，将细胞传代至合适的密度。
2. 细胞培养：将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中，放入培养箱中培养。
3. 细胞观察：使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。
4. 细胞染色：使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色，观察细胞内部结构。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞，如药物处理、温度变化等，观察细胞的反应和变化。
7. 细胞计数：使用细胞计数板或细胞计数仪等工具，统计细胞的数量。
结果与讨论：1. 细胞生长：观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、对数期和平台期。
2. 细胞形态：细胞在培养基中呈现出典型的形态特征，如细胞核的形状、细胞质的颜色等。
3. 细胞分裂：观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂，并计算细胞分裂指数。
4. 细胞染色：通过荧光染料或细胞染色剂染色后，观察到细胞内部结构的变化，如细胞器的位置和形态。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测到特定基因或蛋白在细胞中的表达水平。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞后，观察到细胞的形态、数量和功能发生变化，如细胞凋亡、增殖等。
细胞的原代培养和传代培养
实验五细胞的原代培养和传代培养1. 实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 实验指导细胞培养(cell culture)是从机体中将细胞取出后，在模拟生物体内生理条件下使其在体外生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命活动过程的方法。
进行细胞生物学、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
近年来，广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成为一种重要的生物学技术。
细胞培养一般可分为原代培养和传代培养。
所谓原代培养，是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培养。
原代培养离体时间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能和分化等研究。
一般动物和人的所有组织都可以用于培养，但幼体组织和细胞(如胚胎组织、幼仔的脏器等)更容易进行原代培养。
传代培养则是为了使体外培养的原代细胞或细胞株在体外持续生长、繁殖。
细胞持续生长繁殖就必须传代，并由此获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞。
培养的贴壁细胞形成单层汇合后，由于密度过大、生存空间不足而引起营养枯竭。
将培养的细胞分散，从容器中取出，以1：2或1：3以上的比例转移到另外的容器中继续进行培养，即为传代培养。
要使细胞在离体情况下生长繁殖，培养条件必须尽可能接近体内，除营养物质外，温度、PH值、生长因子等也至关重要。
此外，还应避免细菌及其他微生物的污染，重金属离子及有毒化学物质及放射线的影响。
贴壁细胞通过质膜表面的粘着蛋白贴附于培养瓶表面。
加入消化液可使粘着蛋白部分水解，从而使培养的细胞游离。
但消化时间不可过长，否则可能导致细胞解体死亡。
常用的消化液为胰蛋白酶和EDTA。
二者可分别使用，也可共同使用。
钙离子是二者的抑制剂，故实验中消化结束时，加入含有钙离子的全培养液，即可终止消化。
细胞的一代是指细胞从接种到分离再培养的一段时间，与细胞世代或倍增不同，在一代中细胞倍增3～6次。
细胞传代后一般经过三个阶段：游离期、指数生长期和停止期。
动物细胞培养传代培养
实验三：动物细胞培养细胞传代培养【实验目的】熟练掌握细胞的传代培养法。
【实验原理】传代培养是组织培养常规保种方法之一。
也是几乎所有细胞生物学实验的基础。
当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。
这一过程就叫传代。
传代培养可获得大量细胞供实验所需。
传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
【材料用品】材料：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯，培养细胞。
药品：培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25％胰蛋白酶，Hanks 液。
仪器：C02培养箱，倒置：显微镜，超净台。
【实验步骤】1．人无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。
2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
将培养用液置37℃下预热。
3．超净台台面应整洁，用0.1％新洁尔灭溶液擦净。
4．打开超净台的紫外灯照射台面20 min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。
5．点燃酒精灯；取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
6．将培养用液瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
7．倒掉培养细胞的旧培养基。
酌情可用2—3 mL Hanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
18．每个大培养瓶加入1 mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。
注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7～10 mL／大瓶，3～5 mL／小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。
盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
10．对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。
实验四 动物细胞的传代培养
实验四动物细胞的传代培养1.实验目的（1）了解动物细胞培养的基本知识。
（2）了解体外培养细胞的的基本形态类型；学会通过镜检判定体外细胞生长的状态。
（3）掌握动物细胞的传代培养法。
2.实验背景与原理2.1 动物细胞培养的基本概念（1）组织培养: 把来自机体内的细胞、组织或器官放在类似于体内的外环境中, 使之成活、生长和繁殖。
严格又分为细胞培养、组织培养和器官培养。
值得注意的是和植物组织培养不同, 目前动物组织培养在一般培养条件下难以维持组织的结构和功能, 常最终转变成为细胞培养, 所以动物细胞与组织培养并无严格区别。
（2）原代培养: 直接从供体取来的细胞, 组织或器官进行的初次培养。
通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。
（3）传代培养：原代培养物长成单层细胞, 达到一定密度时, 营养消耗殆尽, 需要补充营养, 分开扩大培养, 使之继续增殖。
注意的是传代的这个“代”与细胞分裂的一个世代不同, 一代细胞约分裂3~5次, 不要混淆。
（4）细胞系：原代培养后的细胞经传代即可成为细胞系。
若其形态均一, 生长增殖稳定, 生物性状明确, 即可称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。
不同种类的细胞成系的难易程度也不同, 一般胚胎、更新组织的细胞如造血、上皮等以及癌细胞较容易成系, 而神经等细胞则较难成系。
按照其生存期可分为有限细胞系（生存期有限的正常二倍体细胞）和无限细胞系（生存期无限的癌细胞、转化细胞等, 大多异倍体）2.2 动物细胞培养的基本条件体外培养细胞的条件总原则就是要尽可能模拟细胞在体内生长的环境, 因此必要的营养、适宜的胞外环境以及严格的无菌条件是主要的三个方面。
（1）营养: 早期培养主要采用天然的生物性液体, 但其成分不确定, 难以控制营养成分。
现广泛使用的是化学成分明确的各种商品化的合成培养基, 其主要成分包括各种氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等必要的营养物质。
培养基中还含有酚红指示剂, 使培养基的颜色可显示细胞生长状态。
传代细胞培养实验报告单
实验名称：传代细胞培养实验实验日期：2023年4月10日实验者：张三一、实验目的1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 熟悉细胞传代过程中所需的无菌操作技术。
3. 了解细胞传代对细胞生物学研究的重要性。
二、实验原理细胞培养是一种在人工条件下模拟体内生理环境，使细胞生长、繁殖或传代的技术。
细胞培养技术可以让我们直接观察活细胞，避免体内实验的复杂因素，为生物学研究提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象。
细胞培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出组织或细胞进行首次培养，而传代培养则是在原代培养基础上，将细胞从一个容器转移到另一个容器中扩大培养。
传代培养的累积次数即为细胞的代数。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素双抗）2. 细胞：小鼠成纤维细胞3. 工具：超净台、移液器、吸管、培养皿、离心机、显微镜、无菌操作箱、消毒剂等四、实验步骤1. 培养基配制：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清和青链霉素双抗。
2. 细胞复苏：将冻存细胞从-80℃冰箱取出，放入37℃水浴中解冻，轻轻摇匀后移入离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清，加入适量DMEM培养基重悬细胞。
3. 细胞接种：将重悬细胞接种于培养皿中，放入培养箱中培养，保持细胞密度在80%-90%。
4. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，进行细胞传代。
具体操作如下：a. 吸除旧培养基，用PBS缓冲液清洗细胞2-3次。
b. 加入适量胰蛋白酶，37℃水浴消化细胞，显微镜下观察细胞变圆、收缩，待大部分细胞脱离培养皿底面时，立即终止消化。
c. 加入适量DMEM培养基终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散均匀。
d. 将细胞接种于新的培养皿中，放入培养箱中继续培养。
5. 细胞观察：在显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞形态、生长速度等指标。
五、实验结果1. 细胞在培养皿中生长良好，细胞形态正常，呈梭形。
传代实验报告
实验名称：细胞传代培养实验实验目的：1. 了解动物细胞传代培养的基本原理。
2. 掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对Hela细胞进行传代培养。
实验原理：细胞传代培养是指将已经培养的细胞从培养容器中取出，分散后重新接种到新的培养容器中，以扩大培养数量或维持细胞活性。
细胞传代培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代。
传代培养是指在原代培养的基础上，将细胞分散后转移到新的培养容器中，扩大培养数量。
实验材料：1. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素、链霉素。
2. 培养容器：培养皿、培养瓶。
3. 工具：移液枪、移液器、加样器、剪刀、镊子、酒精灯、无菌操作台等。
实验步骤：1. 准备培养基：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清、青霉素和链霉素，混匀后过滤除菌。
2. 准备细胞：取出冻存的Hela细胞，解冻后用培养基洗涤2次，加入适量培养基，制成细胞悬液。
3. 原代培养：将细胞悬液接种到培养皿中，放入培养箱中培养，观察细胞生长情况。
4. 传代培养：a. 当细胞生长到一定密度时，用移液枪将细胞悬液移入新的培养瓶中，加入适量培养基。
b. 将培养瓶放入培养箱中培养，观察细胞生长情况。
c. 当细胞生长到一定密度时，重复步骤a和b，进行传代培养。
5. 观察细胞形态和生长情况，记录实验数据。
实验结果：1. 原代培养：细胞接种后，细胞逐渐贴壁生长，形态呈不规则或多边形，细胞间连接紧密。
2. 传代培养：随着传代次数的增加，细胞形态逐渐趋于一致，细胞间连接逐渐变松，细胞密度逐渐增加。
实验分析：1. 细胞传代培养过程中，细胞形态、生长情况和活性逐渐发生变化，这与细胞分裂、增殖和衰老有关。
2. 传代次数越多，细胞生长速度越快，细胞密度越高，但细胞活性逐渐降低。
3. 在传代培养过程中，要注意细胞污染问题，保持无菌操作，以保证实验结果的准确性。
细胞传代实习报告
一、实验目的本次实习的主要目的是通过实践操作，掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程，了解细胞传代培养的基本原理和注意事项，为后续的生物技术研究奠定基础。
二、实验原理细胞传代培养是指将已培养的细胞从培养容器中取出，通过消化、分离、稀释等步骤，将细胞重新接种到新的培养容器中，使细胞继续生长繁殖。
细胞传代培养是生物技术研究中常用的技术手段，对于研究细胞生物学、遗传学、分子生物学等领域具有重要意义。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 哺乳动物细胞（如Hela细胞）- 胰蛋白酶- DMEM培养基- 小牛血清- 75%乙醇- 灭菌水- 吸管、移液器、培养皿、培养箱等2. 实验仪器：- 培养箱- 显微镜- 灭菌锅- 离心机- 烧杯、试管等四、实验步骤1. 细胞原代培养：- 将细胞接种到培养皿中，加入适量的DMEM培养基和血清，置于培养箱中培养。
- 观察细胞生长情况，待细胞铺满培养皿底部后，进行传代培养。
2. 细胞传代培养：- 使用胰蛋白酶消化细胞，收集消化后的细胞悬液。
- 将细胞悬液稀释至适宜浓度，接种到新的培养皿中。
- 加入适量的DMEM培养基和血清，置于培养箱中培养。
- 观察细胞生长情况，待细胞铺满培养皿底部后，再次进行传代培养。
3. 细胞传代培养的注意事项：- 操作过程应保持无菌状态，避免污染。
- 使用胰蛋白酶消化细胞时，应控制好时间，避免消化过度。
- 接种细胞时，注意稀释度，避免细胞过密。
- 观察细胞生长情况，适时进行传代培养。
五、实验结果与分析1. 细胞原代培养：- 成功接种细胞，细胞生长状况良好，细胞呈梭形，排列整齐。
2. 细胞传代培养：- 第一次传代培养后，细胞生长状况良好，细胞数量增加。
- 第二次传代培养后，细胞生长状况良好，细胞数量继续增加。
3. 实验结果分析：- 通过细胞传代培养，成功实现了细胞的增殖。
- 实验过程中，严格遵守无菌操作规程，保证了细胞传代培养的成功。
六、实验总结本次实习，我们成功掌握了哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程，了解了细胞传代培养的基本原理和注意事项。
乳鼠传代培养实验报告
一、实验目的1. 掌握乳鼠细胞传代培养的基本方法；2. 观察乳鼠细胞在体外培养过程中的形态变化；3. 熟悉乳鼠细胞传代培养的注意事项。
二、实验原理乳鼠细胞传代培养是指在体外条件下，将培养的细胞从一个培养瓶转移到另一个培养瓶的过程。
通过传代培养，可以扩大细胞数量，保持细胞的遗传稳定性，并研究细胞在不同条件下的生物学特性。
三、实验材料1. 乳鼠细胞；2. 75%乙醇；3. PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）；4. 0.25%胰蛋白酶；5. 细胞培养基（DMEM/F12，含10%胎牛血清）；6. 细胞培养瓶；7. 移液器；8. 离心机；9. 显微镜。
四、实验方法1. 准备工作（1）将细胞培养瓶用75%乙醇消毒，然后用无菌PBS冲洗；（2）取适量乳鼠细胞，加入适量细胞培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/mL；（3）将细胞培养瓶放入二氧化碳培养箱中，37℃、5%CO2培养。
2. 传代培养（1）取出一瓶培养好的乳鼠细胞，用移液器将细胞悬液转移至另一个培养瓶中；（2）加入适量细胞培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/mL；（3）将细胞培养瓶放入二氧化碳培养箱中，37℃、5%CO2培养。
3. 观察细胞形态（1）取出一瓶培养好的乳鼠细胞，用移液器将细胞悬液转移至另一个培养瓶中；（2）加入适量细胞培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/mL；（3）将细胞培养瓶放入二氧化碳培养箱中，37℃、5%CO2培养；（4）每隔一定时间观察细胞形态变化，记录实验结果。
五、实验结果1. 乳鼠细胞在体外培养过程中，细胞形态逐渐从圆形变为扁平状，细胞密度逐渐增加；2. 在传代培养过程中，细胞形态保持一致，细胞密度逐渐增加；3. 观察细胞形态变化，未发现细胞异常。
六、实验讨论1. 乳鼠细胞在体外培养过程中，细胞形态逐渐发生变化，可能与细胞生长、代谢等因素有关；2. 传代培养过程中，细胞形态保持一致，说明乳鼠细胞具有较强的遗传稳定性；3. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免细胞污染。
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篇一：细胞传代培养实验报告
细胞传代培养
一.实验目的
初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本
操作过程，为生物技术在医学上的
应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生
长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察
活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与
体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细
胞作为研究对象，耗费少，比较经济，
因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为
原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散
后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传
代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受
温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操
作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂
1、细胞:293细胞株
2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）
3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精
灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟
4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代
5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液
6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱
7.收拾整理超净台
附：消化液配制方法：
称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌，4℃保存，
用前可在37℃下回温。
10xpbs 配方：
na2hpo4(14.2g)Kh2po4(2.32g)nac1(80g)Kc1(2.02g) (调至ph=7.4)
五、实验结果
传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2 天左右就在瓶内形成单层，
达到七八成满。
这时需再次传代
六、讨论与反思
无菌操作中的注意事项
在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。
为此，在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。
操作前20〜30 分钟起动超净台灭菌。
培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。
操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。
使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。
总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
多做，熟能生巧
篇二：细胞传代实验报告
篇一：细胞传代培养实验报告
细胞传代培养
一.实验目的
初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在
人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂
1、细胞:293细胞株
2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）
3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟
4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代
5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液
6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱
7.收拾整理超净台
附：消化液配制方法：
称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到11,滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
10xpbs 配方：
na2hpo4(14.2g)kh2po4(2.32g)nac1(80g)kc1(2.02g) (调至ph=7.4)
五、实验结果
传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2 天左右就在瓶内形成单层，达到七八成满。
这时需再次传代
六、讨论与反思
无菌操作中的注意事项
在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。
为此，在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。
操作前20〜30 分钟起动超净台灭菌。
培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和
加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。
操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。
使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。
总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
多做，熟能生巧篇二：细胞生物学实验传代培养
一、【实验目的】
1、了解动物细胞传代培养的基本原理。
2、掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对hela细胞进行传代培养。
二、【实验原理】
hela 是 heiettalacks 的简称，heiettalacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。
培养细胞的特性：
贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长。
见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。
见于各种造血系统肿瘤细胞。
每代贴附生长细胞的生长过程：
1、游离期细胞接种后在培养液中呈悬浮状态.也称悬浮期。
此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。
10分钟一 4小时
2、贴壁期细胞附着于底物上，游离期结束。
细胞株平均在10分钟一 4小时贴壁。
3、血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原（:动物细胞传代培养实验报告）等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
4、潜伏期此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6〜24小时。
5、对数生长期细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。
6、停止期（平台期）细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂
细胞传代方法
1、悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培
养液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2 — 2/3,用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2.悬浮生长细胞传代（hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
3、贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。
常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
细胞培养用液的配制
1、d-hanks原液试剂配方
氯化钠80.0g磷酸氢二钠（nahpo - 2ho） 0.6g氯化钾4.0g磷酸二氢钾0.6g三蒸水1000ml
2、d-hanks工作液试剂配方
d-hanks原液100ml三蒸水896m10.5%酚红液4ml
3、消化液：
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。
胰蛋
白酶是一种黄白色粉末，用无ca2+、mg2+的pbs缓冲液。