盐溶蛋白电泳鉴定玉米异交不亲和性的研究
应用盐溶蛋白凝胶电泳法鉴别玉米杂交种丹玉39和铁单10号
直板夹心式） 单籽粒粉碎器、 、 离心管 （． ） 离心管 １ ｍ１ 、 ５
架、 天平、 磁力搅拌器 、 电冰箱 、 电炉子、 移液管 、 容量 瓶、 微量进样器 （—０１ 、 ５１ｕ） 量筒。
丹玉 ３ 和铁单 １ 号都是具有互补型谱带的杂交 ９ Ｏ 种， 两者的识别带均位于 １ 区 （ ３ 主谱带区） 如图所示。 ， 两品种谱带的明显差异 是： 丹玉 ３ 的识别带位于 ９
栽培洋芋的一种新方法。 该项技术具有省工 、 省力、 省 低 山区， 主要在 ８ 月下旬播种 。合理密植是提高稻茬
时、 保温 、 保湿、 防渍 、 除草秸杆还 田培肥地力， 增加土 洋 芋产量的关键 ，采取宽窄行种植洋芋宽行 ６ｃ ０ｍ窄 壤有机质， 改善土壤结构， 减少土壤水分 的表面蒸发 行 ２ｃ 窝距 ２ ｒ ６７ 植 ６０ －００窝， ０ｍ， ２ ｍ，６ｍ２ ５０， ０． 净作洋 ａ ７ 和雨水对表土肥料 的淋失 ， 提高土壤的供水 ， 保肥能 芋，行距 ３ ｃ ３ｍ，窝距 ２ ｃ ６７ ２ ８０～ ５０ ２ｍ，６ｍ 植 ００ ８０ 窝， 力， 增产增效等功能， 对增加农 民收入， 提高秋洋芋生 术一般 比翻 耕 非稻 草覆 盖栽 培 每 ６７ 增 产 １％ ６ｍ２ ５
１实验材 料 、 器 与试 剂 仪 １１实验 材料 ．
采用盐溶蛋白凝胶电泳法。 分别取 ５ 粒丹 ５８ １ ９ 、０
粒丹玉 ３ 、 粒 Ｃ ６ ５ １ ９８ ８０ 、０粒铁单 １ 号 、 粒丹 ３０ ０ ５ ４。 粉碎后装入离心管中，按体积比－ １ １ 的量分别加入样 ： 品提取液， 摇匀后放入冰箱静置 １ 小时， 备用。按 比例 量取试剂配制分离胶和浓缩胶 ， 灌入胶槽制备凝胶。 在
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作物 栽培
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法之改进探究
用盐溶蛋白PAGE法检测杂交玉米种子纯度
８． ２０ ８． ５０ ７． ８０ ７． ７０ ９ ０ ５． ７ ０ ２． ９ ０ ２． ６ ０ ８．
一
阳市涪城区塘汛镇友谊村西南科技大学小麦科研基地 进行。试验地属涪江中游冲积平坝， 灰色潮土、 肥力中
３．， １６表现较低，１ Ｆ 抗条锈病性好 ； 中感品种为 一 ８ ５ ２ ． 一一１ ． ， ３ ６
等， 是小麦条锈病常年高发区。 １２ 供试材料 试验前连续 ２ ． 年对 ７０ ０ 余份品种资
９． ２６ ９ ９ ２． ９ ３ ５．
９ ． ３１ ９ ． ３３ ９ ． ３６ ９ ． ３４ ９ ． ４３ ９ ． ４６ ９ ． ４９ ９ ． ５２
９ ． ５４ ９． ５７ ９． ８０
２ 结果与分析
对 ｌ 个样 品分别 用种植鉴定法和蛋 白质 Ｐ Ｇ ６ ＡＥ
裹 １ 种子纯度测定结果
两种 方 法进 行 回 归分析 表 明 ：二者 相 关达 极显 著 水平 （ ＝ ｒ
０９ ） ．８ ，证 明 玉 米 盐 溶 蛋 白 Ｐ Ｇ 法 用 于 种 子 纯 度 鉴 定 比较 可 ＡＥ
靠。用电泳纯度可推算 出田间鉴 定纯度 。
关 键 词 ： 米 ； 度 ； 间 ； 泳 ； 关 分析 玉 纯 田 电 相
ＰＧ Ａ Ｅ法在鉴定玉米种子纯度中的作用 ，以便正确划
分玉米种子质量等级 。
１ 材料与方法
选用吉林省生产上应用的 １ 个杂交玉米种子样 ６ 品， 每份样品分 ２ ， 份用于小 区种植鉴定 ， 中华 份 ｌ 按《
盐溶蛋白超薄层等电聚焦电泳技术鉴定近缘玉米杂交种
供 试玉 米杂交种 具有 的谱带数 目均在 ３ ０条左 右 ． 型 带
以 Ａ带 为主 ． 平均 含有 ７５条 Ａ带 ．
上， 把凝 胶 液 ５ （ ｍｌ内含凝 胶贮 存 液 ５ 、 ｍｌ牛磺 酸 ０１ ｇ ．６ 、
２ 蛋 白质 提 取 液 。 聚 焦 温 度 设 定 为 ４Ｉ， 泳 ８ ｒ ｎ Ｏ ｃ 电 ＝ Ｆ技术在玉米品种鉴定 中应用 的可行 性． 为玉米品种鉴定提供一种准确 、 可靠 、 经济 、 快速 的方 法． 为玉米种质资源评 价和利用提供参考
２ 结 果与 分 析
供试 的 ｌ 个 玉 米杂 交种 的盐 溶 蛋 白超 薄 层等 电 １
聚焦 电泳 图谱 见 图 １ 共获 得 ３ ． ２条 蛋 白质 谱 带 ． 中 其 有 ２ ０条谱 带具 有 多 态性 ． 占谱 带 总数 的 ６ ．％： 有 ２ ５ 所
１ ０ ０／ ｎ离心 １ ｍ ｎ 取 上 清液备用 ０ ０ｒ ｍｉ ０ ｉ． 超 薄 层 聚 丙烯 酰 胺 凝 胶 制 备 将 一 片 Ｇ ｌ Ｆｘ ｅ— ｉ
１ 材 料 与 方 法
１ ． 试 验材料 供 试 的 １ 个 玉米 杂交 种及 其 亲本 均 １ １ 为 沈 阳市农 业科 学 院近年 来 育成 的玉 米新 品种 （ １ 表 ）
同父 异 母 的 杂 交 种 父 本 均 为 沈 １ ７同母 异 父 的 杂 交 种 ３． 母 本均为 沈 ３ ３ ３６
ｔａｈｎｌｙ ｒ ｓ ｅｅ ｔ ｃｆｃ ｓｎ ｌｃｒＤ ｏｅ ｉ Ｕ Ｌ ＥＦ ｒｔｉ ｅ ｏ ｌｃｒ ｕ ｉｇｅｅ ｔ ｈ ｒｓｓ Ｔ Ｉ ） ａ ｉ ｉ ｏ ０ ，
电工 胶 布 作 为 上 下 两 板 间 隔 ．所 以制 出 的 聚 丙 烯 酰胺
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法
张金 汉
（ 甘 肃省 张掖 市种子 管理局 ， 甘肃张掖
７ ３ ４ ０ ０ ０ ）
摘
要： 种子 纯度检验是 质量检验 的重要 内容 ， 是对一批 玉米种子 中个体与个体之 间在特征特性方面典型一致程度的检验
和种子真 实性的测定。 一般 有田间检验 、 室 内检验和种植检验 三种 ， 室 内检验 杂交玉米种子纯度 以电泳法鉴定最为普遍。 作 者就
称 取氯化钠 ５ ． ８ ０ ｇ ， 蔗糖 ２ ０ ０ ． ０ ０ ｇ ， 甲基 绿 ０ １ ５ ｇ ， 倒入 ｌ
０ ０ ０ｍＬ烧杯 中 ， 加去离子水 ８ ０ ０ｍＬ溶解 ， 加热至微沸 ， 放 至
月底移栽 ， ５月 中旬揭去棚膜 ， ７月初 上市 。第 三茬 ７月 中旬 点种菠菜 ， ９月 中旬上市 。第 四茬 ９月下旬再扣棚点 种菠菜
试剂均为分析纯 ， 所 用 水 均 为 去 离 子水 ） 。
３ 溶 液配 制 ３ ． １ 电极缓 冲 液
电泳 图谱加 以鉴 别 ，从而对种 子真实性 和品种纯度进 行鉴
定。
２ 仪 器设 备及 试 剂
２ ． １ 仪 器设 备
称取甘氨酸 ６ ． ０ ０ ｇ ，倒入 ２ ０ ０ ０ｍ Ｌ烧杯 中，加入 ｌ ８ ０ ０
【 油白菜 ） １ １ 月初上市 。 ８ 水萝 卜 一 菠菜 （ 油 白菜 ） 一菠 菜 （ 油 白菜 ） 一 菠菜 （ 油 白
菜） 一 菠菜（ 油 白菜 ）
上市。 第 四茬 ８月初点种菠菜（ 油 白菜 ） ， ９月中旬上市。第五 茬９ 月下旬再扣棚点种菠菜（ 油 白菜 ） ， １ １ 月初上 市。
１ 原 理
器（ ５ ～１ ０ ０ Ｌ ） 、 恒温箱 、 观片灯等。
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度试验中的几个问题
采 用 盐 溶 蛋 白 电泳 法 鉴 定 玉 米 种 子 的纯 度 主要 是 根 据 玉 米 种 子 中提 取 的 盐 溶 蛋 白在 聚丙
几分 钟 ， 后再 吸 取 上清 液 。溶 液一 般保 存 时 间 然 在７ ｄ内（ 氧 化 氢 ３ ） 宜 ； 过 ｄ为 提取 液 一 般 保 存 时 间 为 ３ ， 样 做 出 的胶 带 清 晰 ， 果 明 显 。时 间 ｄ这 效
烯 酰 胺 凝 胶 的浓 缩 效 应 、 子 筛 选效 应 和 电泳 分 分 离 的电 荷效 应 作 用 下 得 到 良好 的分 离 。 过 染 色 通
酸 的加 人量 ， 这样 操 作起 来 比较 容易 掌握 。
２２ 分 离胶 和 浓 缩胶 溶 液 中过 氧 化 氢 的 用量 ．
分 离 胶 和 浓 缩 胶 溶 液 均 需 要 加 入 过 氧 化 氢 催 化 反应 ， 实 际操 作 中 ， 氧 化 氢 用 量 不 好 掌 在 过
向 东 山
（ 北 省 生 物 资 源 保 护 与 利 用 重 点 试 验 室 、 湖 北 民 族 学 院 生 物 技 术 研 究 所 。湖 北 恩 施 湖 ４ ５０ ４ ０ ０）
摘 要 ： 溶 蛋 白电 泳 法 鉴 定 玉 米 种 子 纯 度 已经 广 泛 应 用 于 种 子 鉴 定 中 ， 仍 然 存 在 一 定 的 技 术 问题 。 文 章 盐 但 仅 就 鉴 定 过 程 中 药品 的 选 择 、 液 的 配 制 和 电泳 成 像 方 面 易 出现 问 题 的 技 术 环 节 进 行 分析 。 溶
玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带分析
玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的工作原理，是从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下得到良好分离，通过染色显示蛋白质谱带类型；根据分子遗传学的理论，遗传信息的转移是遵守DNA →RNA →蛋白质这样的中心法则的，遗传信息在不同的大分子之间的转移都是单向的，不可逆的，只能从DNA 到RNA （转录），从RNA 到蛋白质（翻译）。
不同的玉米品种具有不同的遗传物质，那么种子内也就具有不同的蛋白质，不同的蛋白质其所带电荷不同，电泳谱带也就不同，通过对电泳谱带的分析达到对种子的真实性和品种纯度的鉴定。
玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过从试剂的配制到灌胶制板、从样品的制备到点样、从通电到卸板、再到胶板的染色等一系列复杂的程序之后，终于得到了一块染色清晰的胶板，接下来最关键也是最重要的一步就是对谱带进行分析，如何对谱带进行正确的分析、分析时又会遇到哪些问题，现结合多年工作经验就这些问题总结分析。
1 电泳谱带区域划分及其作用首先要对谱带进行区域划分，电泳谱带一般按分子量的大小划分为3个区域：主谱带区、次谱带区、辅助区。
主谱带区位于胶板的中间区域，该区由中分子量的蛋白质所组成，在该区域中，蛋白质谱带数量多、染色深，品种间差异大，是纯度鉴定的主要区域；次谱带区，位于胶板的下部区域，该区由小分子量的蛋白质所组成，在该区域中蛋白质谱带数量少，谱带扩散，染色相对较浅，品种间有差异，但不太显著，在纯度鉴定中，当主谱带区差异不明显时，可根据该区域的谱带差异进行鉴定；辅助区，该区域在胶板的上部，该区由大分子量的蛋白质所组成，蛋白质谱带数量多，染色谱带细，易受电泳条件的影响，对于虫蚀、发霉、生病的子粒，该区域谱带会部分或全部消失，所以，在磨样时要先将虫蚀、发霉、生病的子粒剔除，该区域品种间差异小，不太容易观察，最好不作为纯度鉴定时用，如果主谱带区和次谱带区无差异，只有辅助区有差异时，最好严格控制操作条件，使该区域的谱带清晰，以便容易观察分析。
盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应注意的问题
・
种子科技 ・
・０ ７ ６ ・ ２０ （ ）
中 图分 类号 ： １． ７ Ｓ５３０ ３ 文 献标 识码 ： Ｂ
・ 用技 术 ・ 适
文 章 编 号 ：１０ — ６ ０ ２ ０ ）６ ０ ６ — ２ ０５ ２ ９ （０ ７ ０ — ０ ０ ０
影响鉴 定 的正常进 行 。下 面结 合 多年在实 践丁 作 中的 经 验 和教 训 ．现 将 电 泳 操作 中应 注 意 的 问题 叙 述 如
２ 样 品提 取 需注意 的 问题
取样 要 有 代 表 性 ， 机取 样 ， 能 取霉 烂 、 质 、 随 不 变 虫蛀 或病 粒 种子 ＋ 以防 由于 蛋 白质 变性 和 异种 蛋 白影
的。
２３２ 合理 的通 风 。 ．． 空气是 热 和湿 的传载介质 ． 冷的 干 空气 通 过 种仓 内可将 种 堆 内的 湿热 吸 收 后带 出仓外 ， 起 到 降低种 子温 度和水 分 的作 用 。 子堆放 在仓库 内． 种 不论 是长 期贮存 还 是短 期贮 存都需 要 进行 通 风 。合 理 的通 风能 降温 散湿 ， 同时起 到气体 交换 ， 持 种子 生活 保 力 的作 用 。合 理 通风是 种 子贮 藏期 间 的一 项 非常 重要
种 子入库前 必须 严格 进行 清选 、 干燥和 分级 。尤其 是种 子水分 ． 不 到标准 的种 子不 能入 库 ， 达 对贮 藏 期长 的种子 更应严 格要 求 。 入库 时种 子必须 经过 冷却 （ 热进 仓 处理 的除外 ） 。 ２２ 做好 清仓 消毒 ． ． 改善仓 贮 务件 贮 藏条 件 的好坏 直接 影 响种子 的安 全 状况 。种子 入库前 要 对仓 库 内外进 行彻 底清 除并 消毒 处 理 ，杀 除 有 害微 生物 。仓库 要 具 备通 风 、 闭 、 湿 、 热 的 性 密 隔 隔 能． 以保证 在气 候 剧变期 做 好密 闭＿ ， 在 仓 内温湿 Ｔ作 或 度高 于仓 外时 能及 时通 风 ． 以使种 子 长期处 理 干燥 、 低 温 、 闭 的条件 下 ， 密 确保安 全 贮藏 。 ２ 加 强管理 ． ． ３ 勤于检 查
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法之改进探究
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法之改进探究摘要：种子检验是保证种子质量最有效的手段，笔者总结多年从事检验工作之经验，探究玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法中的有关步骤，提出一些改进方法，旨在为从事种子纯度鉴定的同行提供参考。
关键词：种子；纯度；鉴定；方法中图分类号：s513 文献标识码：b我国的玉米种植面积仅次于美国，位居世界第二。
由于玉米较之其他农作物抗逆性强、适应性广、产量高、价格也在逐年上涨，致使玉米单交种的数量每年都在递增。
同时，利润的驱使，全国每年都有不少假种和低纯度种子播种的案件发生，给农民和农业生产造成重大的损失。
玉米种子的纯度鉴定已成为我国种子生产和质量管理中突出的问题之一。
因此探究和掌握玉米种子纯度实验室精准的鉴定方法显得尤为重要。
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法在20世纪70年代开始应用于种子纯度鉴定，并逐渐得到推广，2001年9月被列为行业标准，是现阶段各级农作物种子质量监督检验站及种业集团普遍采用的实验室纯度检测方法。
较传统的鉴定方法它具有成本低、准确可靠、快速和稳定等优点，另外重演性也比较好，特别是作为种子营销过程的验证方法，具有很大的使用价值，在检验工作中广泛应用。
但是玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法，科技含量高，专业技术性强，测定操作步骤较为烦琐，在实际操作中往往会出现一些问题，影响鉴定的正常进行。
笔者根据多年从事种子检验工作的实际经验，探究该鉴定方法中的有关步骤，总结提出以下一些改进方法，在此供同行们体会参考。
1药剂配置方面1.1玉米盐溶蛋白质电泳的试剂配制如下1.1.1 90克丙烯酰胺+3克双丙烯酰胺用蒸馏水准确定容至500ml，过滤液存放在棕色瓶中。
1.1.2 1.14 ml乳酸钠+3.5～4 ml乳酸用蒸馏水准确定容至100 ml，过滤液存放在棕色瓶中。
1.1.3 0.2900g维生素c+0.0030g硫酸亚铁用蒸馏水准确定容至200 ml，过滤液存放在棕色瓶中。
盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应用中存在问题及应注意问题
Ｚｈ ｎ ｚ ｓ ｉｉ ｏ ｇ ｉｈ ｊｅ
盐溶蛋 白电泳鉴定玉米种子纯度应用中 存在问题及应注意问题
贾 敏
（ 宁省 朝 阳 北票 市种 子 管理 站 ） 辽
盐 溶 蛋 白电 泳 鉴 定 玉 米 种 子 纯 度 具 有 快 速 、 确 、 廉 准 低 等优 点 ， 别 是 ２０ 年 列 入 本 行 业 标 准 以 后 ， 各 检 验 室 广 特 ０１ 被 泛 采 用 。我 单 位 于 １９ ９ ６年开 始 利 用 盐 溶 蛋 白 电 泳 测 定 玉 米 种 子 纯 度 ． 多 年 实 践 探 索 ， 现 实 验 结 果 存 在 以 下 问题 及 经 发 实 验 当 中应 该 注 意 的 一 些 问 题 。
龟 裂 通 常在 高 浓 度 凝 胶 上 发生 。 常 是 由 于 聚合 反应 本 常
身 产 生 过 量 的 热 。可 以 用冷 溶 液 来 补 救 ， 泳 是 凝 胶 发 生 龟 电
在 正 常 情 况 下 。 白 质 在 电场 作 用 下 。 线 泳 动 而 形 成 蛋 直 正 常 的谱 带 ， 由 于凝 胶 浓 度 不 均 匀 ， 在 气 泡 和 温 度 太 高 但 存
难代表种子样品的真实性纯度 。并且在样 品研磨要注意 ， 研
磨 样 品 的 各 部 件 每 磨 完 一 粒 要 用 纱 布 擦 干 净 ， 以 防 交 叉 污
考马 斯 亮 蓝 染 色 后 凝 胶 呈 现 金 黄 色 金 属 光 泽 ， 常 是 因 通
为溶剂蒸发后使染料在凝胶的这一部位上干燥 ， 脱色后凝胶
梳。 五 、 色 不佳 染 ．
取 样 按 ＜ ＢＩ ５ ３２ １９ 农 作物 种 子 检 验 规 程 ＜ ／３４ ．— ９ ５ Ｇ ＇
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法摘要介绍了盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法，以期为玉米种子纯度鉴定提供参考。
关键词盐溶蛋白电泳法；玉米种子；纯度鉴定；常见问题；处理方法盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度是基于品种间种子贮藏蛋白中盐溶蛋白质的组分差异来鉴定玉米种子纯度[1]。
从玉米种子中提取出的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应、分子筛效应、电荷效应作用下得到分离，通过染色显示系列蛋白质谱带根据谱带差异情况鉴定玉米种子的真实性和品种纯度。
该方法快速准确、经济实用，于2001年被列为行业标准。
该标准是我国第一部利用种子贮藏蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度的行业标准。
标准的实施为我国玉米种子室内纯度鉴定提供了重要的手段，在玉米种子纯度检验工作中得到了广泛的应用。
笔者结合工作实践总结在实际使用该标准中可能遇见的问题及处理建议，以供同行们商榷。
1 凝胶液不凝或者聚合缓慢不能形成胶体如果在胶液中加入催化剂过氧化氢后，凝胶液不凝或聚合缓慢不能形成胶体，可能由以下几个原因造成：一是药品纯度不够；二是试剂配比不当；三是胶液过期；四是催化剂失效。
在实际操作中，常常会碰到分离胶能够聚合，而浓缩胶不能聚合成胶体的情况，这是因为浓缩胶对试剂纯度的要求比分离胶液更高，若出现该种情况，首先，要特别注意N，N-亚甲基甲叉双丙烯酰胺的纯度和保质期，要求其纯度最好是99.0%以上的分析纯；其次，由于抗坏血酸不稳定，极易分解，因此在胶液中可适当增大抗坏血酸的比例至标准中的1.5倍或2.0倍。
可促进胶液聚合，并可有效延长胶液的保存期30～40 d。
2 点样孔破裂较多从浓缩胶中拔出样品梳时，点样孔破裂较多，会使试验终止。
这是应用电泳法检测种子纯度最常发生的情况，可能有以下几种原因，一是样品梳齿厚度不合适；二是催化剂过氧化氢的用量不合适；三是凝胶聚合的时间不够；四是拔梳子时用力不均，方式不对。
通常在进行该步操作时，首先，要仔细检查样品梳齿的厚度与两玻璃板狭槽是否合适，不能过紧，要稍微有一点空隙为宜，否则凝胶聚合后，很难拔出。
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法
盐溶 蛋 白电泳 法鉴 定 玉米 种 子纯 度 是基 于 品种 间 种 子
贮藏 蛋 白中盐 溶 蛋 白质 的组 分差 异 来鉴 定玉 米 种子 纯度 【 １ 】 。
子 ， 意 如 果两 端梳 子 齿 已抬起 而 中部 梳 子齿 未 抬起 时 ， 注 不 能 再 向上抬 ， 把两 手 平放 在近 中部 ， 倾斜 往 自己怀 里 方 可 稍
解 ， 成蛋 白谱 带缺 失 ， 般放 置 ３ ～ ０ｍ ｎ即可进 行 点样 。 造 一 ０４ ｉ
电泳技 术 鉴定 玉 米 种 子纯 度 的行 业 标 准 。 准 的实 施 为 我 标 国 玉 米 种子 室 内 纯度 鉴 定 提 供 了 重 要 的手 段 ． 玉米 种 子 在 纯 度检 验 工作 中 得 到 了广 泛 的 应 用 。 笔者 结 合 工 作 实践 总 结 在 实际 使 用 该 标 准 中可 能 遇 见 的 问题 及 处 理建 议 ， 以供
毛 刷 小 心刷 洗 玻 璃 板 两面 ， 在 蒸 馏水 中浸 泡 然 后 放 在 玻 并
璃架 上 自然 晾 干 或烘 干 。 是取 凝 胶 时温 度较 高 。 二 一般 电泳
同行 们商 榷 。
１ 凝胶 液 不凝 或者 聚合 缓慢 不 能形 成胶体
完成后， 玻璃 板还 很 热 ， 果 马 上卸板 取 出凝 胶 就容 易 出现 如
热胀 冷 缩效 应使 玻璃 板 与凝胶 分 离再进 行 卸胶 。
４ 蛋 白质 谱带 问题 ４１ 蛋 白质 谱 带 较 少 或 样 品 间 普 带 宽 窄 及 着 色 深 浅 不 一 ．
的 要 求 比分 离 胶 液 更高 ， 出 现 该 种情 况 。 先 ， 若 首 要特 别 注 意 Ｎ， 一 甲基 甲 叉双 丙烯 酰胺 的 纯度 和保 质 期 ， 求 其纯 Ｎ亚 要
玉米异交不亲和性转育方法的研究
玉米异交不亲和性转育方法的研究冯云选;杨秋英;董炳友;刘启;邹良栋;孙平【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2011(023)001【摘要】随着人们对玉米异交不亲和性认识的不断深入,在国内外玉米育种及生产上,开始进行高配合力且性状优良的玉米异交不亲和系的选育,但是由于受到其本身异交不亲和的因素的影响,一些常规转育方法受到限制.对目前玉米育种中玉米异交不亲和性性状转育可行的三种方法进行比较研究,结果表明.在系谱株行选择法、单穗半分选择法和稀植单株双穗法这三种选择方法中,稀植单株双穗转育法是优良的玉米异交不亲和性性状的田间转育方法,在此方法中采用上位果穗做测交选择,下位果穗做自交留神的方式是单株双穗转育法中最好的技术手段.【总页数】4页(P21-24)【作者】冯云选;杨秋英;董炳友;刘启;邹良栋;孙平【作者单位】辽宁农业职业技术学院农艺系,营口,115009;辽宁农业职业技术学院农艺系,营口,115009;辽宁农业职业技术学院农艺系,营口,115009;辽宁农业职业技术学院农艺系,营口,115009;辽宁农业职业技术学院农艺系,营口,115009;辽宁农业职业技术学院农艺系,营口,115009【正文语种】中文【中图分类】S513.035【相关文献】1.盐溶蛋白电泳鉴定玉米异交不亲和性的研究 [J], 董炳友;王再鹏2.玉米异交不亲和性及其应用 [J], 董炳友;冯云选;王立忠;李立申;邹良栋;孙平3.自交不亲和性控制机理研究进展Ⅰ：配子体型自交不亲和性 [J], 张明方4.水稻东野型不育系异交不亲和性的鉴定和遗传分析 [J], 熊涛;聂元元;毛方明;雷建国;毛凌华;朱珊;黄仁良;沈显华;严松5.用化学方法克服油菜等芸苔属(Brassica)作物自交不亲和性的研究Ⅳ.用NaCl克服自交不亲和性的机理初探 [J], 安彩泰;孙万泉;李学才因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
玉米异交不亲和基因Ga1-S的蛋白质组分析
作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2011, 37(7): 1212-1218/zwxb/ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9E-mail: xbzw@本研究由国家自然科学基金项目(30971788), 中国科学院所级领域前沿探索项目和山东省农业良种重大课题(鲁农良种字2008-6)资助。
*通讯作者(Corresponding author): 陈化榜, E-mail: hbchen@, Tel: 0538-*******第一作者联系方式: E-mail: hhliu2005@(刘怀华); liwen-wang163@(王莉雯) ** 共同第一作者 Received(收稿日期): 2010-11-16; Accepted(接受日期): 2011-03-28.DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.01212玉米异交不亲和基因Ga1-S 的蛋白质组分析刘怀华 王莉雯** 刘 旭 马 侠 宁丽华 张 华 崔德周 姜 川 陈化榜*山东农业大学农学院 / 作物生物学国家重点实验室 / 山东省作物生物学重点实验室, 山东泰安271018摘 要: 为了研究玉米异交不亲和的蛋白表达机制, 以玉米(Zea mays L.)异交不亲和基因Gal-S 的一对近等基因系W22(GG )与w22(gg )为材料, 组配自交(GG×GG )、正交(gg×GG )与反交(GG×gg ) 3个组合。
首先采用荧光显微技术, 观察比较了3个组合中花粉管在花丝中的生长过程; 其次采用IEF/SDS-PAGE 双向凝胶电泳与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术, 比较研究了授粉后10 h 自交与反交母本W22(GG )花丝蛋白质组的特异表达差异。
结果表明, 授粉后10 h, 自交与正交花粉管伸长可达花丝基部, 而反交花丝基部未观察到花粉管; 自交与反交母本W22(GG )花丝蛋白质组共检测到25个差异蛋白质点, 其中15个在自交中特异表达, 10个在反交中特异表达。
盐溶蛋白电泳技术及其在玉米种子鉴定中的应用
盐溶蛋白电泳技术及其在玉米种子鉴定中的
应用
1 什么是盐溶蛋白电泳技术？
盐溶蛋白电泳技术是一种常用的蛋白质分析方法，它通过盐水的
特定浓度、pH值，将样品中的蛋白质分离出来，并进行电泳分析。
这
种技术可用于蛋白质分子的质量分析、功能分析、种群遗传学分析等
多个领域，特别适用于种子鉴定。
2 盐溶蛋白电泳技术的步骤
盐溶蛋白电泳技术的步骤为：收集要分析的样品；将样品加入盐
水混合物中，使其分离出蛋白质；将分离后的蛋白质进行电泳分析，
得到分子质量。
3 在玉米种子鉴定中的应用
玉米种子鉴定是农业生产中的重要一环，可以实现种子的品种确
定和纯度检测。
盐溶蛋白电泳技术在玉米种子鉴定中发挥了重要作用，可通过对不同品种、不同生长时期的种子进行蛋白质分析，实现种子
的鉴定和鉴别。
4 盐溶蛋白电泳技术在玉米种子鉴定中的优势
盐溶蛋白电泳技术在玉米种子鉴定中的优势主要有以下几点：
1）种子蛋白质分析可以更好地反映种子的遗传背景和品种特性。
2）盐溶蛋白电泳技术操作简单、精度高，能够得到准确的结果。
3）该技术不需要对样品进行预处理和分离提取，可以同时分析多个样品，提高了工作效率。
5 结论
综上所述，盐溶蛋白电泳技术是一种简单、灵敏、高效的蛋白质分析方法，在玉米种子鉴定中具有重要的应用价值。
它可以为农业生产提供有力的保障，推动农业发展。
玉米杂交种双亲差异互补盐溶蛋白与杂种优势关系研究
玉米杂交种双亲差异互补盐溶蛋白与杂种优势关系研究袁金海;张天佑;李涛;李自峰;贾晓莉;鲁丽莉;顾学平【摘要】本研究以玉米生产中常用的7个杂交种的12个亲本自交系,以优良杂交种先玉335父本PH4CV为共同父本与其余11个自交系组配的11个杂交组合为试验材料,采用A-PAGE电泳技术,对其种子盐溶蛋白电泳谱带表现特征进行分析,探讨了杂种双亲共显性特征谱带与杂种优势的关系.结果表明:12个亲本自交系种子盐溶蛋白质均具有明显的特征谱带,相互之间可以区别,可视作它们各自的蛋白指纹;先玉335种子不同组分谱带间的差异是一种由核基因控制的遗传性状,而且F1的谱带可以由双亲谱带类型预测和演示.【期刊名称】《河西学院学报》【年(卷),期】2017(033)005【总页数】6页(P59-64)【关键词】玉米;乳酸-PAGE;杂种优势【作者】袁金海;张天佑;李涛;李自峰;贾晓莉;鲁丽莉;顾学平【作者单位】临泽县种子管理局,甘肃临泽734200;甘肃农业大学农学院,甘肃兰州730070;临泽县种子管理局,甘肃临泽734200;临泽县种子管理局,甘肃临泽734200;临泽县种子管理局,甘肃临泽734200;临泽县种子管理局,甘肃临泽734200;临泽县种子管理局,甘肃临泽734200【正文语种】中文【中图分类】S513玉米（Zea mays L.）种子盐溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳法具有准确性高、条带清晰、时间较短等优点，被列为行业标准［1］（NY/T449-2001）并于2001年11月1日正式颁布实施.从事杂种优势的科研工作者曾经通过同工酶电泳过程中产生的互补谱带与杂交谱带研究其是否与杂种优势的形成有关.宋同明、张春庆等［2-3］研究表明：大多数玉米杂种品种种子盐溶蛋白在杂交种中呈双亲共显性，具有一对父母本互补的特征谱带，且正、反交谱带完全相同.罗长安、张守润［4-5］研究表明室内种子纯度检验结果与田间鉴定结果存在显著相关性.Krieger U.等［6］报道了番茄中单个基因造成显著杂种优势的实例，该研究表明杂种优势可能是由剂量依赖效应所控制的信号转导与转录调控模式改变造成的，而不是由等位基因之间互作所产生的超显性效应造成的.同时，该研究通过筛选单基因突变而获得的显著杂种优势方法为作物育种及品种改良提供了新的思路，并暗示了在其它物种之中也可能存在强烈控制杂种优势的特殊基因.众多研究结果表明杂种双亲共显性谱带可能与杂种优势存在某种联系，但目前对于这种双亲互补谱带具体由何种蛋白组成、其与亲本对应谱带有何差异、以及是否与杂种优势有关等问题尚不清楚.笔者采用A-PAGE电泳技术，对玉米种子不同杂交种盐溶蛋白电泳谱带表现特征进行分析；在此基础上探讨了杂种双亲共显性特征谱带与杂种优势的关系，以期为进一步利用双亲差异互补盐溶蛋白预测杂种优势和强优杂交玉米育种提供理论指导.玉米生产中常用7个杂交种的12个亲本自交系（表1），及以PH4CV为共同父本与其余11个自交系组配的11个杂交组合，上述材料均由甘肃农业大学玉米育种课题组提供.盐溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）参照“玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法”（NY/T449-2001）及宋同明［2］的方法，略加改进.采用15%分离胶和6%浓缩胶的聚丙烯酰胺凝胶进行A-PAGE电泳；电泳初始电压300V，10min后将电压升至500V，在500V恒压下电泳90min.电泳结束经考马斯亮蓝染液固定染色，4h后蒸馏水脱色，然后采集凝胶图像.盐溶蛋白因其特有的稳定性及不受环境影响的特点，是种子相关指标检验的重要成分.笔者对《杂交玉米品种蛋白电泳图谱书》（辛景树主编）中的玉米杂交品种与其双亲之间的差异互补盐溶蛋白条带进行了分类统计（表1、图1），结果发现：参试的160个玉米杂交种与其亲本关系可分为4大类，分别为双亲共显性（占88.125%）、母本显性或偏母表达（占6.875%）、杂种偏父表达（占3.125%）、其它类型（占1.875%）.由此可以看出大部分的杂交优势品种都有与其双亲相同的差异互补盐溶蛋白，说明杂交种中与双亲互补的差异盐溶蛋白在杂交优势的发挥中起着非常重要的作用，种子优势可能与蛋白互补带有关，但是杂交优势是一个非常复杂的多效应调控的遗传机制，所以差异互补盐溶蛋白没有完全在所有统计的杂交品种中出现.在生产中，同一父本的不同单交种，其F1代子粒与其父本自交系通常在形态上很难区别鉴定.因此，本研究对供试的12个亲本自交系及以PH4CV为共同父本组配的11个杂交组合，将父、母本及其单交种种子盐溶蛋白提取液在同一胶板上点样进行电泳分析（图2）.可以看出：12个亲本自交系种子盐溶蛋白质均具有明显的特征谱带，且谱带位置各不相同，可以彼此区分，说明差异互补盐溶蛋白的功能可能与杂种优势有密切的关系.以PH4CV为共同父本组配的11个杂交组合中均出现一对呈双亲共显性的互补特征谱带，且位置各不相同，可以明显区分11个杂交种.其中B73×PH4CV和PH6WC×PH4CV组合的两条互补谱带距离较远，黄201×PH4CV组合互补条带的距离较近，观察较困难.将先玉335及其亲本种子用刀片分别剥离胚乳和胚，按整粒种子、胚和胚乳不同组分分别进行盐溶蛋白A-PAGE电泳分析（图3），可以看出：不管是亲本还是杂交种，胚的电泳谱带染色最深，其次是全籽粒，而胚乳染色较浅，这可能与种胚中相对贮藏蛋白含量较高有关.但就谱带数量和位置而言，整粒与胚的电泳谱带完全相同，虽然胚乳的谱带较少且弱，但很多谱带和胚的谱带发生重叠，尤其是杂种双亲互补特征谱带较明显，且位置与整粒及胚中的一致.另外，虽然先玉335的正、反交杂交种种子在子粒形态上具有很大的差异，但正交整粒种子、胚和胚乳电泳谱带与其反交种完全一样，这表明玉米种子贮藏蛋白的遗传是受核基因控制的，而与细胞质无关.按整粒种子、胚和胚乳不同组分，分别提取先玉335父、母本及其单交种盐溶蛋白，将杂种F1、双亲及双亲样品等体积混合液在同一胶板上点样进行电泳分析（图4）.可以看出：双亲杂交种子与双亲种子蛋白质提取液等提及混合所得到的谱带基本一致，没有新谱带产生，说明玉米种子盐溶蛋白质的PAGE谱带在杂交种内呈共显性.因此，F1的谱带可以由双亲谱带类型预测，也可由双亲的种子蛋白提取液混合而产生的电泳图谱所演示，这与宋同明等［2］、方玉春等［7］的研究结果一致.盐溶蛋白因其特有的稳定性及不受环境影响等特点，日渐成为种子检验的主要技术.方玉春等［7］对38份玉米杂交种检测发现有34份单交种具有清晰的双亲共显性互补带，鉴定有效率为89%.颜廷进等［8］研究发现登海11号杂交种与母本谱带完全相同，表现偏母型谱带.张守润等［5］分别利用酯酶同工酶电泳法、蛋白质凝胶电泳法、醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法对12个杂交组合及其亲本种子纯度进行试验，结果表明3种方法主要表现为以下3种类型：双亲差异谱带在F1基本呈母本显性（偏母型）、父本显性（偏父型）及双亲共显性，但双亲共显性仍为主要类型.本研究对以PH4CV为共同父本组配的11个杂交组合及其亲本种子盐溶蛋白进行A-PAGE电泳分析发现，12个亲本自交系种子盐溶蛋白质均具有明显的特征谱带；11个杂交F1中双亲差异谱带类型均为双亲共显性互补带，未发现偏母型或偏父型现象，这可能与本研究选用的材料较少，且主要为常用杂交种的亲本有关.相对于SDS-PAGE电泳技术，A-PAGE电泳技术是蛋白质不做变性处理的凝胶电泳技术，根据蛋白质电荷量和分子量大小来分离蛋白.相同迁移位置的电泳谱带可能是由分子量和带电荷量均不相同蛋白组成，前人研究中出现的偏母型或偏父型现象都是在同一电泳条件下的检测结果，因此，可以通过改变电泳条件进行进一步分离和验证.宋同明等［2］、方玉春等［7］研究发现正、反交与双亲种子蛋白质提取液等量混合所得到的谱带一致，表明谱带间的差异是一种由核基因控制的遗传性状.本研究对先玉335及其亲本种子电泳发现整粒种子、胚和胚乳不同组分电泳谱带虽然染色深浅有差异，但谱带类型和位置基本一致，且正交、反交F1与双亲种子蛋白质提取液等量混合所得到的谱带一致.没有新谱带产生，F1谱带可以由双亲谱带类型预测和演示，这与前人研究结果一致.至于正交、反交F1与双亲种子蛋白质提取液等量混合电泳谱带一致的生物学机理有待进一步研究，但这一现象在杂种优势预测及玉米育种中具有广阔的潜在应用价值.Abtract：Using good hybrids Xianyu-335 male of PH4CV common parent made 11 hybrid combinations with the other 11 inbred lines of 12 crosses of seven hybrids commonly cultivated maize as experiment material in this study，the characteristic of seed salt-soluble protein electrophoresis band is analyzed by A-PAGE electro⁃phoresis，and the relationship between heterozygous bimodal characteristic bands and heterosis is also investigat⁃ed.The results shows that 12 parent inbred lines seed of salt soluble protein have obvious band characteristics and band between each other are difference，which could be regard as their respective protein fingerprints.Xianyu-335 seed jade the differences between differentcomponents band are controlled by nuclear genes of a kind of genetic traits，and F1 band could be predicted by parental band type and presentation.＊通讯作者：顾学平，男，高级农艺师，研究方向：农机推广、种子生产技术指导.【相关文献】［1］肖海峻，孟利前，李凌燕，等.盐溶蛋白电泳技术及其在玉米种子鉴定中的应用［J］.中国种业，2010（9），17-18.［2］宋同明，郑大浩，刘岩.利用玉米种子白蛋白和球蛋白乳酸聚丙烯酰胺电泳鉴定品种（英文）［J］.植物学报，1996，38（8）： 599-604.［3］张春庆，金锡奎，郑成超.NAU-PAGE技术与玉米种子纯度测定［J］.中国农业科学，1995，28（6）：20-24.［4］罗长安，周本义，蔚世林，等.蛋白质凝胶电泳技术在玉米种子纯度鉴定中的应用［J］.种子科技，2007（2）：41-43.［5］张守润.3种电泳法鉴定玉米种子纯度比较［J］.甘肃农业科技，2010（5）：22-25.［6］Krieger U，Lippman Z B，Zamir D.The flowering gene SINGLE FLOWER TRUSS drives heterosis for yield in tomato［J］.Nat Genet，2010，42（5）：459-463.［7］方玉春，张兴和，冯德举，等.应用盐溶蛋白电泳图谱鉴定玉米种子纯度［J］.吉林农业大学学报，2001，23（4）：6-10.［8］颜廷进，戴双.蛋白质电泳技术在玉米杂交种子纯度鉴定中的应用［J］.种子科技，2007（1）：37-39.。
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关 键词 ：玉米；异交不亲和性；盐溶蛋白；电泳谱带
中图分 类号 ：￥３３０
文 献识别 码 ：Ａ
文章 编号 ：１６７１—０５１７（２０１０）０４—０００１—０３
随着国内外玉米育种水平的不断提高 ，育种者 六 个 玉 米 异 交 不 亲 和 系 ，另 外 ，选 用 异 交 不 亲 和 系
对 玉米 种 质资 源 的研究 也 不 断拓 宽 与深 入 ，一 些 具 “４ｌ要”作为异交不亲和与异交 亲和的对照 ，选用
的分 析研究 发 现 ，在 Ｂ区 Ｒｆ＝２５．８和 Ｒｆ＝４７．８的位 置上各有一条这样的谱带 ，且谱带清晰可见 ；在 Ｄ 区 Ｒｆ＝７８．８的位置上也有一条这样清晰的谱带 ，但 是 唯 一缺 陷 的是 在异 交 不 亲 和系 ＬＮＹＢ一９三个 试 样 中的 中间试样 没 有 显现 出来 ，通 过对 其 盐溶 蛋 白 带谱分析表 明，其主要原因是此粒种子 的纯度还未 十 分 稳定 所 致 ，此 条 谱 带 还有 待 于进 一 步 试验 验 证 。以上三条谱 带 见 图 ｌ箭头 标注 。通过 以上 的结 果分析 ，充分说 明用盐溶蛋 白电泳法鉴定玉米异交 不 亲和性是行 之有 效 的方法 。
液（１０ ｍＬ２％考马斯亮蓝 Ｒ２５０，２００ｒｏＬｌ０％＝＂氯 乙酸） 中染色 ３—４ ｈ，用 ０．５％的不加酶洗衣粉水洗净 ，放置 于胶片板上观察分析 ，并照相保存 ；谱带记录法采用 迁移率 （ ）与谱 带强弱 比较表相结合的方法表示 ， 迁移率按下式计算，谱带强弱用“＋”和“一”表示 。Ｒｆ－
实的现象称之为异交不亲和性或 杂交不亲 和性或 凝胶 厚度 ｌｍｍ。
单向杂交不育不育性。为了更好 的研究和利用这些 １．３ 试 验方 法
性状 ，因此对 这 些性 状进 行 有效 的鉴 定就 显得 至 关 １．３．１ 盐溶蛋 白的提 取
重要 ，当前人 们 对 玉米性 状 鉴定 的技术 方 法很 多 ，
也是性 状鉴定 技术 发展 的趋势 。本 研究 基 于 以上 原 １０００￣ａ）摇 匀 ，放置 ５ｒａｉｎ后 ，再摇 一 次 ，３０ｍｉｎ后 ，用
则 ，采用盐溶蛋 白电泳对我院育种研究室选育 的 ７ 离心机离 Ｌ，（５０００ｒ／ｍｉｎ）１５ｍｉｎ，取上清液用于电泳。
个 玉 米异 交不 亲 和 系的不 亲 和性 进 行分 析研 究 ，探 １．３．２ 电泳 、染 色和 照相
按 ＧＢ／Ｔ３５４３．２的要 求 ，从送 验样 品 中每份 材
常见 的有 蛋 白质 和 同工 酶 电 泳 、ＤＮＡ指 纹技 术 等 ； 料取单粒种子用单籽粒粉碎器粉碎 ，放人 １．５ｍＬ离
理想的性状鉴定技术不但要准确可靠 ，还要简单快 心管 中，用滴管加入与样品体积相同的样品提取液
速经济 ，这是品种或品系鉴定实现商品化的前提 ， （氯化 钠 ５．８０ｇ，蔗糖 ２００．００ｇ，甲基 绿 ０．１５ｇ，定 溶
摘 要 ：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对六个玉米异交不亲和系的盐溶蛋白进行了初步研究，共有 ２￣３条玉米异交
不亲和性的盐溶蛋 白谱带 可作 为今 后玉米异交不 亲和性性状鉴定 的依据 ，其分别位于 Ｂ区的 Ｒｆ＝２５．８、Ｒｆ＝４７．８
和 Ｄ区中 Ｒｆ＝７８．８位置上 ，且谱带清晰明 朗。结果表明 ：盐溶蛋 白电泳可以用来 鉴定玉米异交不亲和性 。
第 １２卷 第 ４期 ２０１０年 ７月
辽 宁农业职业技术学院学报
Ｊｏｕｍ Ｍ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ａｇｆｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ
Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．４ Ｊｕ１．２０１０
盐溶 蛋 白电泳鉴定玉米异 交不亲和性 的研 究
董炳友 ，王再鹏
（辽宁农业职业技术学院，辽宁 营口 １ １５００９）
ＬＮＹＱ一３６、ＬＮＹＱ一６７、ＬＮＹＢ一９ ＬＮＹＭ一２１ ＬＮＹＨ一６ 时，关闭电源。电泳结束后 ，胶板在考马斯亮蓝染色
收稿 日期：２０１０—０４—２０ 作者简介 ：董炳友 （１９７０一），男 ，副教授 ，主要 从事作物遗传 育种的教学与玉米育种 的科研工作 。 基金项 目：辽宁省教育厅科学技 术研 究项 目 （项 目编号 ： ２００６０４４７）
有优异农艺性状 的种质资源或 自交系被选育 出来 正常 自交系“丹 ３４０”作为异交 亲和的对照 ，共计 ８
并加 以充分合理 的利用 ，其 中玉米异交不亲和性 的 份 材料 。
研究与利用就是一个典型的实例 。异交不亲和性是 １．２ 试 验仪 器
指在 玉米 材 料 中 ，当授 上与 其非 相 近 亲缘 关 系 的其
２
辽 宁农业职业技术学院学报
第 １２卷
（谱 带迁移距离 ÷前沿指示剂迁 于以上原 因，我们对 图 １和表 １进行全面
２ 结果与分析
本 试 验 分 析 了含 两 个 对 照 在 内 的 ８个 材 料 的 盐溶蛋 白谱带 ，从试验结果看 ，这些供试材料的盐 溶蛋白在 Ｒｆ＝７．５８～９４．２的位置上表现谱带 ，且谱带 清 晰明显 ，见 图 １。从 图 １可 以将谱 带分 为 ４个 区 ，Ａ 区各 个试 验 样 品的谱 带 条数 较少 ，在 ０—２条 之 间 ， 并且 谱 带较 弱 ；Ｂ区和 Ｄ各个 试 验样 品 的谱 带条 数 较多且复杂，谱带有强有弱 ；Ｃ区各个试验样 品的谱 带条数也较多，且大多相同 ，谱带较强。这表明供试 玉米盐溶蛋 白位点遗传变异较大 ，盐溶蛋 白谱带在 数 量和组 合 方式上 变 化 丰富 ，存在 着广 泛 的 等位 基
索该方法对玉米异交不亲和性鉴定 中实际应 用的
用 ＰＨ３．３的酸 性 聚 丙 烯 酰 胺凝 胶 电 泳 分 离 盐
可行 性 。
溶蛋 白。凝胶液浓度为 １５．５％，以 ３％的 Ｈ２ｏ 溶液
１ 材 料 与 方 法
１．１ 试 验 材料 供试材料为我院育种研究室选育的 ＬＮＹＱ一３、
催化使其 聚合 ；电极缓冲液采用甘氨酸 一乳酸缓冲 系统 （０．３％甘氨酸 ，０．１％乳酸）；每个样品上样量为 １５ Ｌ，前沿指示剂为甲基绿 ；在 ４００Ｖ，３００ｍＡ条件 下 电泳 ，待甲基绿指示剂下移至胶底部边缘或消失
采 用 北 京 六 一 仪 器 厂 生 产 的 ＤＹＹ—ＩｌＩ ８Ｂ型稳
他玉米花粉后 ，不能受精结实 ，反之 ，如果用这个材 压 稳 流 定 时 电泳 仪 和 ＤＹＹ—ｌｌＩ ２３型加 宽 双 垂 直 电
料的花粉授到其他玉米的花丝上 ，则能正常受精结 泳槽，每板每个材料点样 ３个 ，每板共点样 ２４个，