慢病毒实验技术实践操作总结
慢病毒生产及使用操作技巧介绍材料
慢病毒生产及使用操作手册一、实验流程制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
以下内容由汉恒生物科技（上海）有限公司精心整理总结。
二、实验材料（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pHBLV TM系列质粒。
1、载体信息（见附录）2、细胞株293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。
贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。
3、菌株大肠杆菌菌株DH5α。
用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。
三、包装细胞293T细胞的培养（一）293T细胞的冻存随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降、突变等。
为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。
在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。
1、去掉上清液，加入PBS洗去残留的培养基；2、加入0.25%的胰酶，消化1～2min后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。
3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入3mL 37 ℃预热的10％DMEM，用10mL 移液管进行吹打，较大力吹打6～8 次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL 离心管中，取50ul 混匀后的细胞于1.5mL eppendorf 管中，加入450ul 10％DMEM，即为10 倍稀释，混匀，取10ul 细胞于计数板中计数。
计数板上共4 大格，每大格16 小格。
计数时，4 大格均计数，总数除以4（得每大格细胞数），再乘以10（10 倍稀释），即为实际n万/mL 细胞浓度。
4、细胞离心，1000rpm，5min。
关于慢病毒感染的相关知识总结讲解
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
病毒技术实验报告
病毒技术实验报告引言近年来，随着信息技术的快速发展，病毒技术也逐渐成为网络安全领域的研究热点之一。
通过对病毒技术的深入研究，可以加强对现有病毒的分析和防范能力，提高网络安全的水平。
本实验旨在通过深入了解和实践病毒技术，以期对病毒的工作原理、传播途径和防御方法有更全面的认识。
实验目的1.了解病毒的工作原理和分类；2.学习病毒的传播方式和繁殖特性；3.掌握病毒的防御方法和安全措施。
实验步骤1. 病毒的工作原理病毒作为一种恶意软件，其主要功能是通过自我复制和传播感染目标计算机系统，给系统带来破坏和损失。
病毒的工作原理可以分为以下几个步骤：•感染阶段：病毒会通过感染病毒携带者（例如邮件附件、下载文件等）进入目标系统，并在系统中寻找可感染的目标文件；•激活阶段：病毒感染目标文件后，等待触发激活条件，例如特定的日期、时间等；•执行阶段：一旦激活条件满足，病毒会开始执行其恶意功能，例如删除文件、传播自身等。
2. 病毒的分类根据病毒的传播方式和破坏程度，病毒可以分为以下几类：•文件病毒：通过感染可执行文件或系统文件来传播，例如EXE、DLL 等；•宏病毒：通过感染办公软件中的宏来传播，例如Word、Excel等；•蠕虫病毒：通过网络传播，自我复制和传播，例如蠕虫病毒可以通过电子邮件、文件共享等途径感染目标系统；•特洛伊木马：外表看起来正常或有吸引力的程序，但在运行时会执行恶意功能；•广告病毒：通过在用户浏览器中显示广告来获取经济利益。
3. 病毒的传播途径和繁殖特性病毒的传播途径主要有以下几种：•邮件附件：病毒常通过电子邮件附件传播，用户在打开或下载附件时可能被感染；•下载文件：用户在下载可疑的文件时可能会下载并运行病毒；•移动存储设备：病毒可以通过USB闪存驱动器等移动存储设备传播；•网络共享：病毒可以通过共享文件夹在局域网内传播。
病毒的繁殖特性也不尽相同，有的病毒具有自我复制和传播的能力，有的病毒则需要依靠人工操作来传播。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
搞定慢病毒转导,常见问题解决以及实验技巧分享,你只要这么做
导读：慢病毒滴度单位怎样换算？如何确定慢病毒 MOI 值？慢病毒感染效率低怎么破？细胞一添加慢病毒就死亡，是什么情况？感染预实验非做不可？好啦好啦，关于慢病毒转导的这些那些问题我们将一一为您解答，助您轻松搞定慢病毒转导实验！一、如何添加最优化的慢病毒量？确定靶细胞 MOI 值不论是对活体还是体外培养的哺乳动物细胞，慢病毒表达载体对遗传物质的转导效率至关重要。
慢病毒最早起源于人免疫缺陷病毒 (HIV) 或猫免疫缺陷病毒（FIV），能够感染几乎所有类型的细胞，包括难以用质粒转染甚至无法用质粒转染的细胞。
许多客户对如何用慢病毒颗粒进行转导持有疑问，特别是对如何选择适合的慢病毒量感到困惑。
这个问题可根据确定细胞的最佳感染复数（Multiplicity of Infection MOI）来解决。
滴度与 MOI？TU/mL 是目前使用最广泛的慢病毒颗粒滴度单位，「TU」为「Transduction Units」的缩写，表示可成功转导目的细胞的基因组数。
选购慢病毒颗粒之前，首先需了解目的细胞的最佳感染复数：MOI。
MOI 的概念很简单，可有效感染细胞的慢病毒颗粒数与被感染细胞数的比值即为该细胞的 MOI 值。
例如，应用 106 TU 慢病毒感染 106 个细胞可成功使 80% 以上细胞达到转导目的时，MOI=1；如需要以 5 × 106 TU 病毒才可成功感染 106 个细胞，则 MOI = 5。
（TU/mL 为慢病毒滴度单位，TU 表示有活性的慢病毒量）如何确定目的细胞的 MOI 值?慢病毒对不同类型细胞的转导效率各不相同，因此 MOI 也各异。
在此，我们列出了多种常用细胞系的 MOI，助您选购合适的慢病毒量。
下表是 GeneCopoeia 通过实验摸索得出的多种细胞系的MOI 参考值。
了解慢病毒滴度是获得最佳 MOI 的前提条件。
根据上表，若您的实验对象是乳腺癌细胞系MCF-7，其最佳 MOI 参考值= 2，那么当您购买了50μL 的慢病毒颗粒（滴度是 108 TU/mL）时，您得到的慢病毒总量为 5×106TU。
慢病毒包装步骤及经验总结
慢病毒包装步骤及经验总结慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而大大增加了转染效率，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选。
因为是随机整合，也有不确定因素，有些公司还能提供定点整合技术，将靶基因定点整合到基因组特定的部位，从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。
慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。
为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染。
慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。
整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
慢病毒包装系统由一个包装质粒混合物（Mix）和一个慢病毒载体质粒（LentiviralVector）组成，如下图（图片来自MIT）：载体中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他辅助元件等。
不同系统包装质粒混合物也不一样，以本实验室的三质粒系统为例，包装质粒混合物中含pMDL，VSVG，pRSV-Rev，比例为5:3:2；其中pMDL含有编码HIV病毒主要结构蛋白的gag基因和编码病毒特异性酶的pol基因，pRSV-Rev含编码调节gag和pol基因表达的调节因子rev基因，VSVG含有提供病毒包装所需要的单纯疱疹病毒来源的VSVG基因。
以下介绍用293T细胞在六孔板（35mm）中包装病毒，其他孔板相应增加或减少体积。
准备试剂篇核心质粒；指数生长的293T细胞；? 病毒包装质粒Mix:1 μg/μl （Mix=pMDL: VSV-G : REV=5:3:2），不同载体系统所用的包装病毒质粒也不一样，此系统可用于包装PBOBi，PLKO， Plv等载体质粒。
慢病毒使用操作指南
慢病毒使用操作指南慢病毒是一种常用的实验工具，广泛应用于细胞和分子生物学研究。
本文档旨在提供慢病毒使用的操作指南，帮助研究人员更好地利用慢病毒进行实验研究。
第一部分：慢病毒基本知识1. 什么是慢病毒？慢病毒是一种具有RNA基因组的病毒，属于反转录病毒。
它能够将自身的RNA基因组逆转录成DNA，再与宿主细胞的基因组融合，长期稳定地存在于宿主细胞中。
2. 利用慢病毒进行基因转染的优势相比其他常用的基因转染方法，慢病毒具有以下优势：- 高效性：慢病毒能够高效地转染多种类型的细胞，包括非分裂细胞。
- 长期稳定性：慢病毒转染的基因能够长期稳定地存在于宿主细胞中。
- 遗传稳定性：慢病毒转染的基因可以遗传给后代细胞，因此适用于长期实验研究。
第二部分：慢病毒使用的关键步骤1. 选择合适的慢病毒载体慢病毒载体是慢病毒的基础构建单元，其中包含转录启动子、报告基因等必要的元件。
根据实验需要选择合适的载体。
2. 包装慢病毒慢病毒的包装是将慢病毒载体与包装载体共转染至特定细胞株，通过包装载体中的包装酶，将慢病毒的RNA基因组逆转录成DNA，形成可复制的慢病毒。
3. 提取慢病毒经包装后的细胞培养基中含有包装好的慢病毒。
可通过超速离心等方法，将细胞培养物离心，提取慢病毒。
4. 病毒滴定病毒滴定是用来确定病毒滴度的重要步骤。
通过适当稀释提取的慢病毒，将其感染指定细胞株，计算出感染单位的浓度。
5. 慢病毒感染及筛选将提取的慢病毒添加至目标细胞中，通过细胞培养和筛选，筛选出具有所需基因的细胞株。
第三部分：慢病毒使用的注意事项1. 安全操作慢病毒具有一定的传染性，进行实验时需要遵守生物安全操作规范，佩戴一次性手套、口罩等个人防护装备，避免直接接触慢病毒。
2. 避免交叉感染实验室中使用慢病毒时，应尽可能避免交叉感染。
定期对实验室环境进行消毒，使用一次性材料，避免共享器械等措施可以减少交叉感染的风险。
3. 合理控制病毒滴度对于不同类型的细胞，需要确定合适的病毒滴度，以避免过度感染或感染不足的情况。
慢病毒感染细胞实验原理与实用流程（一）
慢病毒感染细胞实验原理与实用流程（一）首先， 包装病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒：慢病毒（Lentivirus ）是逆转录病毒的一种。
可用于感染依靠传统转染试剂瞬转，难于转染的细胞系，如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。
腺病毒 (Adenovirus ，Ad) 是一种无包膜的线状双链DNA 病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。
几乎可以感染所有类型的细胞，可以获得复制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。
它的病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到 1012 PFU/mL 。
腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单。
感染细胞时，不整合到染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险，生物安全性高。
慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较病毒表达系统慢病毒表达系统 腺病毒表达系统病毒基因组RNA 病毒 双链DNA 病毒复制 自主复制 自主复制是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞，适用于难转染的原代细胞（如神经细胞）及体内实验感染分裂和不分裂细胞 表达丰度 中水平表达 高水平表达表达时间 慢（1-3天） 快（1-2天）滴度 滴度最高可达10*8pfU/ml 滴度最高可达10*11pfU/ml 克隆容量 插入不超过8kb 的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低 插入高达8kb 的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低免疫原性 低免疫原性 高免疫原性质粒DNA 和包装质粒共转染293T 细胞病毒包装原理（图片来源网络）293T细胞, 由293细胞派生, 表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于包装病毒以过表达各种目标蛋白。
脂质体，某些细胞质中的天然脂质小体，可作为生物膜，用于捕获外源性物质后更有效地运送到靶细胞，经同细胞融合而释放。
慢病毒生产及使用操作手册
慢病毒生产及使用操作手册一、实验流程制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
以下内容由汉恒生物科技（上海）有限公司精心整理总结。
二、实验材料（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G,pHBLV TM系列质粒。
1、载体信息（见附录）2、细胞株 293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。
贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。
3、菌株大肠杆菌菌株DH5α。
用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。
三、包装细胞293T细胞的培养（一） 293T细胞的冻存随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降、突变等。
为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。
在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。
1、去掉上清液，加入PBS洗去残留的培养基；2、加入0.25%的胰酶，消化1～2min后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。
3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入 3mL 37 ℃预热的 10％ DMEM，用 10mL 移液管进行吹打，较大力吹打 6～8 次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL 离心管中，取 50ul 混匀后的细胞于 1.5mL eppendorf 管中，加入 450ul 10％ DMEM，即为 10 倍稀释，混匀，取 10ul 细胞于计数板中计数。
计数板上共 4 大格，每大格 16 小格。
计数时，4 大格均计数，总数除以 4（得每大格细胞数），再乘以 10（10 倍稀释），即为实际 n万/mL 细胞浓度。
4、细胞离心，1000rpm，5min。
慢性传染病防治科实习报告
实习报告实习单位：XX市疾病预防控制中心慢性传染病防治科实习时间：20XX年X月X日至20XX年X月X日一、实习背景随着社会的发展和人类生活方式的改变，慢性传染病已成为全球范围内公共卫生的一大挑战。
为了提高自身对慢性传染病的防治能力，我选择了XX市疾病预防控制中心慢性传染病防治科进行为期一个月的实习。
二、实习内容1. 了解慢性传染病的基本概念、流行趋势及防控策略。
在实习期间，我通过查阅资料、参加科室例会和向同事请教等方式，对慢性传染病有了更深入的了解。
我了解到，慢性传染病主要包括高血压、糖尿病、冠心病、肿瘤等疾病，具有发病率高、致残率高、死亡率高和医疗费用高等特点。
全球范围内，慢性传染病的防控已成为公共卫生领域的重点和难点。
2. 参与慢性传染病流行病学调查。
在实习期间，我参与了两次慢性传染病的流行病学调查，分别是高血压病和糖尿病的调查。
通过调查，我了解了这两种疾病的发病情况、危险因素以及患者的就诊和用药情况。
这次调查使我深刻认识到，慢性传染病的防控需要全面、深入了解疾病的相关信息，才能制定出有效的防控策略。
3. 学习慢性传染病防治知识。
在实习期间，我参加了慢性传染病防治知识的培训课程，学习了慢性病防治的基本原则、干预措施和健康管理等内容。
通过培训，我掌握了慢性病防治的核心知识，为今后的工作打下了坚实的基础。
4. 参与慢性传染病防治宣传活动。
为了提高公众对慢性传染病的认识，实习期间，我参与了两次慢性传染病防治宣传活动。
通过发放宣传资料、现场咨询、举办讲座等形式，向社区居民传播慢性传染病的预防、治疗和康复知识。
宣传活动使我深刻体会到，普及慢性传染病防治知识对于提高全民健康素养具有重要意义。
三、实习收获1. 提高了对慢性传染病的认识。
通过实习，我对慢性传染病的流行趋势、防控策略和防治知识有了更加全面的了解，为今后的工作打下了坚实的基础。
2. 增强了实践操作能力。
参与流行病学调查和宣传活动，使我熟练掌握了调查方法、宣传技巧和健康管理等方面的实践操作能力。
细胞慢病毒感染实验总结
细胞慢病毒感染实验总结
慢病毒源于反转录病毒，但又有所不同。
在感染能力方面比反转录病毒还强，可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞，又很少引发基因的免疫反应。
实验方法：
在大规模的感染之前，优化以下参数：细胞种植密度，慢病毒的数量，嘌呤霉素的浓度，感染时间，以确定一个实验的最适条件。
在6cm培养皿中种植适当密度的XXX细胞，每孔体积6mL。
贴壁细胞：转染前1天种植XXX细胞。
悬浮细胞：转染当天种植XXX细胞，培养基中需要含有凝聚胺。
XXX细胞中加入病毒：贴壁细胞，弃掉培养基，加入新鲜的含有凝聚胺的培养基。
或者，弃掉部分培养基并且补充含有凝聚胺的培养基。
调整体积和凝聚胺的浓度，使得凝聚胺的终浓度为8μg/mL。
病毒感染：孵育细胞过夜。
感染后24h更换培养基。
弃掉培养基，换入6mL新鲜的培养基。
如果需要抗生素选择，则使用含有抗生素的新鲜培养基。
注意：嘌呤霉素的浓度根据每种细胞系来进行优化；常用的浓度范围为2-5μg/mL。
孵育细胞，根据需要每隔几天更换培养基（如果需要，则要含有抗生素）。
孵育时间的长短主要依赖于感染后的试验。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒得储存与稀释:1、病毒得储存:收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验,可以将病毒暂时放置于4 ℃保存;如需长期保存请放置于-80℃(病毒置于冻存管,并使用封口膜封口)①病毒可以存放于-80℃6个月以上;但如果病毒储存时间超过6个月,建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度:每次冻融会降低病毒滴度10%;因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融,为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次得使用量进行分装。
2、病毒得稀释:如果需要稀释病毒,请将病毒取出置于冰浴融解后,使用培养目得细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外(In Vitro)实验:感染培养原代细胞与建系细胞。
慢病毒对各种细胞与组织得亲嗜性不同,在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献,了解慢病毒对您得目得细胞得亲嗜性,感染复数(MOI 值)以及在体(In Vivo)注射所需要得病毒量。
如果没有相关文献支持,可以通过感染预实验得到合适得感染复数(MOI 值)(使用24孔板检测病毒对目得细胞得亲嗜性)。
慢病毒感染目得细胞预实验1、慢病毒感染目得细胞预实验注意事项:①测定慢病毒对目得细胞得亲嗜性时,需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高得细胞(HEK293T,Hela)作为平行实验得对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时,可以用完全培养基(培养目得细胞用)稀释;理论上,含有血清,双抗或者其她营养因子得完全培养基不影响慢病毒得感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml,即每毫升中含有具有生物活性得病毒颗粒数。
如:病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性得慢病毒颗粒。
2、以24孔培养板为例,进行目得细胞与HEK293T 细胞得感染预实验实验前按照不同得MOI设置不同得感染孔,并根据MOI与细胞数量计算所需要得病毒量,如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
病毒实验总结
病毒实验总结病毒实验总结近年来，病毒实验逐渐成为科学研究领域中的热点。
病毒实验通过模拟病毒的传播、感染和治疗过程，能够为人类提供重要的疾病防治策略和治疗方法。
本文将对病毒实验的研究内容、方法和意义进行总结。
一、研究内容病毒实验的研究内容包括：1. 病毒分离和鉴定；2. 病毒传播和感染机制；3. 病毒与宿主细胞的相互作用；4. 病毒的致病性和免疫机制；5. 病毒的防治方法和疫苗研发。
1. 病毒分离和鉴定：研究人员通过采集病毒携带者的样本，如血液、唾液等，利用细胞培养、PCR等方法，将携带的病毒从样本中分离出来，并通过电镜、核酸测序等技术对病毒进行鉴定。
2. 病毒传播和感染机制：研究人员通过体外和体内实验，模拟和研究病毒的传播和感染机制。
他们研究病毒在宿主细胞上的结合和进入机制，研究病毒的侵袭路径和途径，以及病毒的传播速度和范围。
3. 病毒与宿主细胞的相互作用：研究人员研究病毒如何感染宿主细胞，如何利用宿主细胞的机制进行自身复制和扩散，以及宿主细胞如何抵抗病毒入侵等。
4. 病毒的致病性和免疫机制：研究人员通过动物实验、细胞培养等方法研究病毒对宿主的致病性和毒力，同时研究免疫系统如何对抗病毒感染，以及病毒如何逃避宿主的免疫应答。
5. 病毒的防治方法和疫苗研发：研究人员通过病毒实验研究开发各种防治方法，如药物疗法、抗病毒疫苗。
他们研究病毒的抗药性和药物敏感性，以及疫苗的免疫力和安全性等。
二、研究方法病毒实验采用了多种研究方法，包括体外实验、体内实验、细胞培养、分子生物学技术等。
1. 体外实验：研究人员将病毒和宿主细胞分离培养在体外环境中，模拟和研究病毒的传播、感染和治疗过程。
这种方法可以更好地控制实验条件，研究病毒与细胞之间的相互作用和动态过程。
2. 体内实验：研究人员通过动物模型进行实验研究，模拟和研究病毒在宿主动物体内的传播、感染和治疗过程。
这种方法可以更好地模拟人体内的复杂情况，研究病毒与宿主动物之间的相互作用和病理过程。
慢病毒实验技术实践操作总结
慢病毒实验技术实践操作总结表格1：推荐不同规格培养板下转染试剂的⽤量(引⽤⾃Qiagen公司技术⼿册)9号孔⾥⾯细胞的克隆数）设为X和Y，则滴度（TU/ml）=（X+Y×10）×1000/2/X孔的病毒液的含量（ul）。
2、定量PCR法Day1：在六孔板中按照5×104个/孔接种293FT细胞。
在加⼊病毒液之前，取两个孔的细胞进⾏计数，以确定感染时细胞的实际数⽬，记为N。
Day2：吸去剩余四个孔中的培养基，将病毒浓缩液⽤培养基稀释200倍，也就是取1ul 病毒加⼊到199ul的培养基中。
留下⼀孔不加⼊病毒稀释液作为对照，另外三个孔中分别加⼊0.5ul，5ul和50ul的稀释病毒，四孔均补充2ml新的培养基。
感染24h。
更换1ml/孔新的培基，并在培基中添加DnaseI以去除残余的质粒DNA，37℃消化15min；最后加⼊2ml 293FT 专⽤培养基，继续培养48h。
Day3：抽提DNA，定量后妥善保存或者马上开展后续实验。
条件（不同公司的要求不⼀样在此不做统⼀的标准化介绍）。
数据分析：测得的DNA样品中整合的慢病毒载体拷贝数⽤基因组数加以标定，得到每基因组整合的病毒拷贝数。
滴度（integration units per ml，IU ml-1）的计算公式如下：IU ml-1= (C ×N× D×1000)/V。
（C = 平均每基因组整合的病毒拷贝数；N = 感染时细胞的数⽬（约为1×105）D = 病毒载体的稀释倍数；V = 加⼊的稀释病毒的体积数）。
（以上的病毒滴度定量⽅法，主要是针对收取的病毒原液经过浓缩以后进⾏定量。
）ShRNA的设计，以李洋设计的shCD133human序列为例讲述Human shCD133 Lentiviral 从序列设计到病毒包装成形1．cDNA sequence（设计原理见附件资料）773-792: GACCCAACATCATCCCTGT5’-3’ GATCT GACCCAACATCATCCCTGT TTCAAGAGA ACAGGGATGATGTTGGGTC TTTTTA5’-3’ AGCTTAAAAA GACCCAACATCATCCCTGT TCTCTTGAA ACAGGGATGATGTTGGGTC A订单发INVITROGEN公司合成，详见：Invitrogen Custom Primers certificate of analysis Fa 5⽀Rb 5⽀然后⽤⽆酶⽔配成50uM/L每⽀⼀共150ul/FA 155ul/RB各取100ul 做成mixture: Day1 95℃5min↓70℃10min↓Room temper water bath overnight↓Day2 Vortex gently↓Stored at -20℃or placed on ice for current use.2. Human shCD133操作程序Day 1psuper载体酶切，切出带有与shCD133 cDNA序列相配的酶切接头Psuper 10 ulBgl II 2 ulHind III 2 ulBuffer k 5 ulddH2O 31 ul37℃酶切过夜50 ul reagent（⼀次多做⼏管）Day 21．Psuper 酶切产物鉴定回收（qiagen回收试剂盒）2．回收后点样确定⽚段⼤⼩（约3170bp）3．与合成的shCD133 mix 连接反应DNA T4 ligase 1 ulLigase buffer 2.5 ul退⽕后的寡核苷酸mix 10pmol 0.4 ulPsuper酶切产物0.5pmol 10 ul(15.3ng/ul,具体定量要根据质粒浓度确定) ddH2O 11.1 ul (25ul reagent, 16℃连接过夜) Day 3连接产物转化stbk3感受态，铺板Day 4挑取3-4克隆，摇菌（3ml左右）Day 5抽质粒，酶切鉴定酶切体系：1．酶切pSUPER-shCD133质粒shRNA 41 ul (约6 ug)ECor1 2 ulCla1 2 ul37℃酶切过夜50 ul体系buffer H 5 ulMarker 1 2 3 4 5 6 MDNA20001.2号质粒酶切⽚段处于Marker DNA2000 的250bp上⽅，273是正确的⽚段⼤⼩.注意3-6道的错误⽚段，其实与正确的273bp 差别不⼤，要注意仔细区分参⽐marker250这条带对应的位置。
慢病毒实验技术实践操作总结
表格1：推荐不同规格培养板下转染试剂的用量(引用自Qiagen公司技术手册)9号孔里面细胞的克隆数）设为X和Y，则滴度（TU/ml）=（X+Y×10）×1000/2/X孔的病毒液的含量（ul）。
2、定量PCR法Day1：在六孔板中按照5×104个/孔接种293FT细胞。
在加入病毒液之前，取两个孔的细胞进行计数，以确定感染时细胞的实际数目，记为N。
Day2：吸去剩余四个孔中的培养基，将病毒浓缩液用培养基稀释200倍，也就是取1ul 病毒加入到199ul的培养基中。
留下一孔不加入病毒稀释液作为对照，另外三个孔中分别加入0.5ul，5ul和50ul的稀释病毒，四孔均补充2ml新的培养基。
感染24h。
更换1ml/孔新的培基，并在培基中添加DnaseI以去除残余的质粒DNA，37℃消化15min；最后加入2ml 293FT 专用培养基，继续培养48h。
Day3：抽提DNA，定量后妥善保存或者马上开展后续实验。
条件（不同公司的要求不一样在此不做统一的标准化介绍）。
数据分析：测得的DNA样品中整合的慢病毒载体拷贝数用基因组数加以标定，得到每基因组整合的病毒拷贝数。
滴度（integration units per ml，IU ml-1）的计算公式如下：IU ml-1= (C ×N× D×1000)/V。
（C = 平均每基因组整合的病毒拷贝数；N = 感染时细胞的数目（约为1×105）D = 病毒载体的稀释倍数；V = 加入的稀释病毒的体积数）。
（以上的病毒滴度定量方法，主要是针对收取的病毒原液经过浓缩以后进行定量。
）ShRNA的设计，以李洋设计的shCD133human序列为例讲述Human shCD133 Lentiviral 从序列设计到病毒包装成形1．cDNA sequence（设计原理见附件资料）773-792: GACCCAACATCATCCCTGT5’-3’ GATCT GACCCAACATCATCCCTGT TTCAAGAGA ACAGGGATGATGTTGGGTC TTTTTA5’-3’ AGCTTAAAAA GACCCAACATCATCCCTGT TCTCTTGAA ACAGGGATGATGTTGGGTC A订单发INVITROGEN公司合成，详见：Invitrogen Custom Primers certificate of analysis Fa 5支Rb 5支然后用无酶水配成50uM/L每支一共150ul/FA 155ul/RB各取100ul 做成mixture: Day1 95℃5min↓70℃10min↓Room temper water bath overnight↓Day2 Vortex gently↓Stored at -20℃or placed on ice for current use.2. Human shCD133操作程序Day 1psuper载体酶切，切出带有与shCD133 cDNA序列相配的酶切接头Psuper 10 ulBgl II 2 ulHind III 2 ulBuffer k 5 ulddH2O 31 ul37℃酶切过夜50 ul reagent（一次多做几管）Day 21．Psuper 酶切产物鉴定回收（qiagen回收试剂盒）2．回收后点样确定片段大小（约3170bp）3．与合成的shCD133 mix 连接反应DNA T4 ligase 1 ulLigase buffer 2.5 ul退火后的寡核苷酸mix 10pmol 0.4 ulPsuper酶切产物0.5pmol 10 ul(15.3ng/ul,具体定量要根据质粒浓度确定) ddH2O 11.1 ul (25ul reagent, 16℃连接过夜)Day 3连接产物转化stbk3感受态，铺板Day 4挑取3-4克隆，摇菌（3ml左右）Day 5抽质粒，酶切鉴定酶切体系：1．酶切pSUPER-shCD133质粒shRNA 41 ul (约6 ug)ECor1 2 ulCla1 2 ul37℃酶切过夜50 ul体系buffer H 5 ulMarker 1 2 3 4 5 6 MDNA20001.2号质粒酶切片段处于Marker DNA2000 的250bp上方，273是正确的片段大小.注意3-6道的错误片段，其实与正确的273bp差别不大，要注意仔细区分参比marker250这条带对应的位置。
疾控慢病所实习报告
一、实习背景随着我国社会经济的快速发展，慢性非传染性疾病（以下简称“慢病”）已成为威胁人民群众健康的重要因素。
为了提高慢性病防控能力，我国疾病预防控制中心（以下简称“疾控中心”）设立了慢性病防治所（以下简称“慢病所”）。
为了深入了解慢性病防控工作，我于2021年7月至9月在某市疾控慢病所进行了为期两个月的实习。
二、实习目的1. 熟悉慢性病防控的基本知识、方法和策略。
2. 了解慢性病防控工作的实际操作流程。
3. 培养临床思维和沟通能力，提高自身综合素质。
三、实习内容1. 慢性病防控基本知识学习实习期间，我参加了慢病所组织的慢性病防控知识培训，学习了慢性病的定义、分类、流行病学特点、防控策略等相关知识。
通过学习，我对慢性病防控有了更深入的了解。
2. 慢性病防控工作实地调研在慢病所工作人员的带领下，我参与了多项慢性病防控工作实地调研。
包括：（1）对社区居民进行慢性病筛查，了解社区居民慢性病患病情况。
（2）对医疗机构进行慢性病诊疗工作调研，了解医疗机构慢性病诊疗现状。
（3）对慢性病防治政策进行调研，了解政策实施效果。
3. 慢性病防控宣传与健康教育在慢病所的指导下，我参与了慢性病防控宣传与健康教育活动的策划与实施。
包括：（1）编写慢性病防控宣传资料，如宣传册、海报等。
（2）开展慢性病防控知识讲座，提高社区居民的健康意识。
（3）组织慢性病防治志愿者团队，开展社区慢性病防治宣传活动。
4. 慢性病防治项目管理实习期间，我参与了慢性病防治项目的管理工作，包括项目策划、实施、监督和评估等。
通过实际操作，我了解了项目管理的基本流程和方法。
四、实习收获1. 知识收获通过实习，我对慢性病防控的基本知识、方法和策略有了更加深入的了解，为今后从事慢性病防控工作奠定了基础。
2. 能力收获（1）沟通能力：在实习过程中，我与社区居民、医疗机构工作人员等进行了广泛交流，提高了自己的沟通能力。
（2）团队合作能力：在参与慢性病防控项目的过程中，我与团队成员紧密合作，共同完成了各项工作任务。
病毒感染实验总结
病毒感染实验总结引言病毒感染是一种严重的健康威胁，对人类和动物的生命健康造成了巨大的影响。
为了更好地了解病毒感染的机制和寻找治疗方法，科学家们进行了大量的病毒感染实验。
本文将总结我在最近一次病毒感染实验中的经验和结果。
实验目的本次实验的目的是分析不同类型病毒感染对细胞生长和功能的影响，并探究可能的治疗方法。
实验步骤1.培养细胞：采用细胞培养技术，将细胞在培养皿中培养至适当的密度。
2.病毒感染：将已知病毒株接种到细胞培养物中，并以不同的浓度进行感染。
3.细胞观察：使用显微镜观察感染后的细胞形态和数量。
记录细胞的变化，比如细胞颜色、形状和数量的变化等。
4.细胞存活率：通过细胞计数仪计算感染前后细胞的存活率，并与对照组进行比较。
5.分析细胞功能：根据实验需要，可以进行细胞凋亡、细胞周期等功能的分析。
这些分析可以通过荧光显微镜、流式细胞术等技术进行。
6.数据分析：整合和统计实验结果，进行数据分析和图表绘制。
实验结果细胞形态变化病毒感染后，观察到细胞形态发生了明显的变化。
部分细胞呈现典型的病毒感染形态，比如变形、萎缩和凋亡等。
这些观察结果表明病毒感染对细胞形态有明显的破坏性影响。
细胞存活率通过细胞计数仪计算细胞存活率发现，感染组的细胞存活率明显低于对照组。
随着病毒感染浓度的增加，细胞存活率逐渐下降。
这说明病毒感染对细胞的生存能力造成了明显的不利影响。
细胞功能变化经过细胞周期和凋亡分析，发现感染组细胞的细胞周期受到了严重的干扰，凋亡率明显上升。
这表明病毒感染会对细胞的正常功能产生抑制作用。
结论通过这次病毒感染实验，我们得出以下结论： 1. 病毒感染会导致细胞形态变化，包括细胞颜色、形状和数量的改变。
2. 病毒感染对细胞存活率造成明显影响，存活率随病毒感染浓度的增加而降低。
3. 病毒感染会干扰细胞的正常功能，包括细胞周期和凋亡等。
综上所述，病毒感染对细胞生长和功能产生了极大的负面影响。
这些实验结果为进一步研究病毒感染的机制和寻找相应治疗方法提供了重要的依据。
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表格1：推荐不同规格培养板下转染试剂的用量(引用自Qiagen公司技术手册)
9号孔里面细胞的克隆数）设为X和Y，则滴度（TU/ml）=（X+Y×10）×1000/2/X孔的病毒液的含量（ul）。
2、定量PCR法
Day1：在六孔板中按照5×104个/孔接种293FT细胞。
在加入病毒液之前，取两个孔的细胞进行计数，以确定感染时细胞的实际数目，记为N。
Day2：吸去剩余四个孔中的培养基，将病毒浓缩液用培养基稀释200倍，也就是取1ul 病毒加入到199ul的培养基中。
留下一孔不加入病毒稀释液作为对照，另外三个孔中分别加入0.5ul，5ul和50ul的稀释病毒，四孔均补充2ml新的培养基。
感染24h。
更换1ml/孔新的培基，并在培基中添加DnaseI以去除残余的质粒DNA，37℃消化15min；最后加入2ml 293FT 专用培养基，继续培养48h。
Day3：抽提DNA，定量后妥善保存或者马上开展后续实验。
条件（不同公司的要求不一样在此不做统一的标准化介绍）。
数据分析：测得的DNA样品中整合的慢病毒载体拷贝数用基因组数加以标定，得到每基因组整合的病毒拷贝数。
滴度（integration units per ml，IU ml-1）的计算公式如下：IU ml-1= (C ×N× D×1000)/V。
（C = 平均每基因组整合的病毒拷贝数；N = 感染时细胞的数目（约为1×105）D = 病毒载体的稀释倍数；V = 加入的稀释病毒的体积数）。
（以上的病毒滴度定量方法，主要是针对收取的病毒原液经过浓缩以后进行定量。
）ShRNA的设计，以李洋设计的shCD133human序列为例讲述
Human shCD133 Lentiviral 从序列设计到病毒包装成形
1．cDNA sequence（设计原理见附件资料）
773-792: GACCCAACATCATCCCTGT
5’-3’ GATCT GACCCAACATCATCCCTGT TTCAAGAGA ACAGGGATGATGTTGGGTC TTTTTA
5’-3’ AGCTTAAAAA GACCCAACATCATCCCTGT TCTCTTGAA ACAGGGATGATGTTGGGTC A
订单发INVITROGEN公司合成，详见：Invitrogen Custom Primers certificate of analysis Fa 5支
Rb 5支
然后用无酶水配成50uM/L每支一共150ul/FA 155ul/RB
各取100ul 做成mixture: Day1 95℃5min
↓
70℃10min
↓
Room temper water bath overnight
↓
Day2 Vortex gently
↓
Stored at -20℃or placed on ice for current use.
2. Human shCD133操作程序
Day 1
psuper载体酶切，切出带有与shCD133 cDNA序列相配的酶切接头Psuper 10 ul
Bgl II 2 ul
Hind III 2 ul
Buffer k 5 ul
ddH2O 31 ul
37℃酶切过夜50 ul reagent
（一次多做几管）
Day 2
1．
Psuper 酶切产物鉴定回收（qiagen回收试剂盒）
2．
回收后点样确定片段大小（约3170bp）
3．
与合成的shCD133 mix 连接反应
DNA T4 ligase 1 ul
Ligase buffer 2.5 ul
退火后的寡核苷酸mix 10pmol 0.4 ul
Psuper酶切产物0.5pmol 10 ul(15.3ng/ul,具体定量要根据质粒浓度确定) ddH2O 11.1 ul (25ul reagent, 16℃连接过夜)
Day 3
连接产物转化stbk3感受态，铺板
Day 4
挑取3-4克隆，摇菌（3ml左右）
Day 5
抽质粒，酶切鉴定
酶切体系：
1．酶切pSUPER-shCD133质粒
shRNA 41 ul (约6 ug)
ECor1 2 ul
Cla1 2 ul
37℃酶切过夜50 ul体系
buffer H 5 ul
Marker 1 2 3 4 5 6 M
DNA2000
1.2号质粒酶切片段处于Marker DNA2000 的250bp上方，273是正确的片段大小.注意3-6道的错误片段，其实与正确的273bp差别不大，要注意仔细区分参比marker250这条带对应的位置。
2．同时酶切pLVTH 载体，用同样的ECOR1 CLA1酶切，切出有能连接pSUPER-CD133质粒的连接端口
pLVTH 10 ul
ECor1 2 ul
Cla1 2 ul
buffer H 5 ul
H2O 31 ul
37℃酶切过夜50 ul体系
Day 6
用1.5的胶全部点样上去，鉴定质粒酶切产物是否正确（shCD133约275bp;
pLVTH11085bp左右），将两种酶切产物鉴定后，进行胶回收（qiagen胶回收试剂盒）shRNA酶切产物
0.3 pmol (1bp的摩尔质量333；273*333=90909 我的回收有45 ng/ul,最后算得加1ul)
pLVTH酶切产物0.003 pmol (11085*333=3691305 我的回收有45 ng/ul,最后算得加11.1ul)
Ligase 1 ul
Ligase buffer 2.5 ul98
H2O up to 25 ul reagent
16℃连接过夜25 ul体系
Day 7
连接产物转化stbk3感受态，铺板
Day 8
挑取3-4克隆，摇菌（3ml左右）,记得保留相对应编号的菌种，待酶切验证后，保留正确的单克隆扩增的菌种。
Day 9
抽质粒，酶切鉴定有上述273bp左右条带，PCR扩增产物，送测序，如果正确，就可以大量抽提。
Marker 1 2 3 4 5 6 7 8 M
Marker 164-1 164-2 164-3 164-4 M 9 10 M
DNA 2000
从验证图来看，单克隆1、4、6、9号是正确的片段大小，保留其相应的菌种和质粒，质粒用于PCR扩增后送检测序。
（164-1.2.3.4是其他的质粒，序列不在此考虑对错），接下来对1、4、6、9号质粒（还有19 ul）进行定量，然后PCR扩增测序。
测序结果经过比对之后，正确，至此shCD133-Human PLVTH构建成功，可投入病毒的包装。
病毒制备成功之后，感染细胞必须经过Western Blot和RealtimePCR的验证，一般设计sh序列尽量参考有价值的文献进行，如果没有文献可参考，多设计几条，进行封闭效果的摸索和比对。
这是必经的过程，工作量大，但不要怕困难，不要推三推四。
总结
慢病毒实验技术是实用性、稳定性比较高的技术，并且应用前景广泛。
掌握并能熟练应用慢病毒技术，能有助于博士研究生拥有一技之长，对于李桂源实验室也有相应的贡献价值。
而慢病毒实验技术的核心技术在于对穿梭质粒的改造。
细胞的培养，病毒的包装都只属于技巧性的部分。
最后，祝各位兄弟姐妹，尊敬的老师们实验顺利，学业顺利，工作顺利，文章顺利，基金顺利。