动物实验技术操作训练.共33页
动物实验基本训练
（七）急性动物实验常用手术方法
1. 肌肉、神经和血管的分离
（1） 肌肉组织: 顺肌纤维方向作钝性分离。肌 肉组织内含有小血管，若需切断，应事先用 止血钳作双重钳夹，结扎后才可剪断。
（2） 神经和血管: 玻璃分针顺着血管或神经走 向分。分离手术完成后用浸有温热生理盐水 纱布盖在切口上。
（七）急性动物实验常用手术方法
（七）急性动物实验常用手术方法
（2）颈总动脉插管术
测量动脉血压或放血。呈红色较大的血管， 手触之有搏动感。沿血管走行方向分离出颈 总动脉，长约1.5~2.0 cm ，在其下穿两根丝 线备用。在颈总动脉的远心端结扎，近心端 用动脉夹夹住动脉，用眼科剪将动脉剪一与 血管呈 45 ℃角的向心切口，将动脉套管由切 口向心脏方向插入动脉内，结扎、打结固定、
2. 颈部手术与插管 将实验动物麻醉，仰卧固定，剪去颈部的
毛；用手术刀沿颈部正中线在甲状软骨与胸 骨之间作一切口（ 5~7 厘米）
（1）气管插管术 将左右胸骨舌骨肌向两侧拉 开，穿棉线备用。在甲状软骨下 0.5~1cm 将 气管横向剪开；再向头端作一小纵切口，呈 倒“ T ”形；将气管套管向心端插入气管腔内， 结扎并将结扎线固定于“ Y ”形气管插管分叉 处。
四、实验器械的使用方法
7. 动脉夹: 夹闭动脉 8. 其它: 手术灯、注射器、烧杯、动脉套管、
静脉插管、丝线等。
四、实验器械的使用方法
（一）常用的手术器械及使用方法
（二）手术器械的维护方法： 必须按各种手术器械的用途使用，如手术
剪仅用来剪组织或皮肤，切勿用来剪骨或其它 物品。
手术后必须将各种器械洗净，用小刷子将 齿间血块清除，然后用干布将其擦干。
打开动脉夹。
分 离 颈 总 动 脉
动物实验基本操作
动物实验基本操作一、实验动物的抓取与固定。
（一）小鼠。
1. 抓取。
- 用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙表面上。
当小鼠向前挣扎时，用左手的拇指和食指迅速捏住小鼠两耳后颈背部皮肤，无名指和小指夹住小鼠尾巴根部，将小鼠固定成头部略向上的姿势。
- 原因：捏住尾巴提起小鼠可以避免小鼠咬伤操作人员，将其放在粗糙表面上是利用小鼠的本能反应（向前挣扎），便于后续准确抓取其颈背部皮肤。
而固定成头部略向上的姿势有利于进行诸如灌胃、注射等操作，并且能防止小鼠咬伤操作人员脸部等部位。
2. 固定。
- 如需进一步固定，可将小鼠放在特制的小鼠固定器内，将其身体和四肢固定好。
也可以将小鼠固定在泡沫板上，用大头针固定其四肢（这种方法常用于解剖实验）。
- 原因：使用固定器可以确保小鼠在实验过程中保持稳定，减少因挣扎而影响实验操作的准确性，同时也能保障操作人员的安全。
对于解剖实验，在泡沫板上用大头针固定四肢可以充分暴露小鼠的身体结构，便于进行精细的解剖操作。
（二）大鼠。
1. 抓取。
- 先用右手抓住大鼠尾巴中部，将大鼠提起，放在粗糙平面上。
然后用左手戴防护手套（大鼠体型较大且可能会激烈挣扎，容易咬伤操作人员），从大鼠背部绕到其胸前，拇指和食指捏住大鼠两耳后颈背部皮肤，其余手指握住大鼠身体，将其提起固定。
- 原因：与小鼠抓取类似，先抓住尾巴提起是为了初步控制大鼠，放在粗糙平面上利用其向前挣扎的本能便于后续抓取。
戴防护手套是因为大鼠的咬合力较强，为了防止操作人员受伤。
2. 固定。
- 可将大鼠放入大鼠固定器中固定。
对于需要进行手术等操作的大鼠，也可将其麻醉后固定在手术台上，用绑带固定其四肢。
- 原因：固定器和手术台固定都能保证大鼠在实验过程中保持稳定，使实验操作能够顺利进行，尤其是在进行需要精细操作的手术时，稳定的固定是确保手术成功的关键因素之一。
二、实验动物的给药操作。
（一）口服给药。
1. 灌胃法（以小鼠为例）- 准备好灌胃针（一般为特制的金属针具）和相应的药物溶液。
动物实验基本操作技术
第三章动物实验基本操作技术3.1 常用手术器械及使用方法生理学实验常用手术器械与医学外科手术器械大致相同，但也有一些专用器械，下面所列的是几种常规的手术器械（图3.1-1）。
图3.1-1 常用的生理实验手术器械（1）手术刀：用于切开皮肤和脏器。
由刀片和刀柄组成，刀片有圆刃、尖刃和弯刃3种，可根据需要自由拆装和更换（图3.1-2）。
常用的执刀方法有4种（见图3.1-3），其中执弓式是一种常用的执刀方法，动作范围大而灵活，用于腹部、颈部、股部的皮肤切口。
图3.1-2 安装、取下刀片法图3.1-3 执刀方法1．执弓式；2．握持式；3．执笔式；4．反挑式（2）手术剪：手术剪分钝头剪和尖头剪，其尖端有直、弯两型。
用于剪切皮肤、肌肉、血管等软组织。
钝头手术剪的钝头端可插入组织间隙，分离、剪切无大血管的肌肉和结缔组织。
还有一种小型的眼科剪刀，常用于剪神经、血管、包膜等。
正确的执剪姿势是用拇指和环指持剪，示指置于手术剪的上方（图3.1-4）图3.1-4 手术剪的握持方法禁用手术剪刀剪骨头等坚硬组织。
在蛙类实验中，常用粗剪刀（即普通剪刀）剪切蛙的脊柱、骨和皮肤等粗硬组织。
（3）镊子：分有齿和无齿两类，大小长短不一，主要用于夹捏或提起组织。
圆头镊子用于较大或较厚的组织及牵拉皮肤切口，眼科镊子或钟表镊子用于夹捏细软组织。
执镊方法为用拇指对食指和中指（图3.1-5）。
图3.1-5 镊子的握持方法（4）止血钳：有大、小、有齿、无齿、直形、弯形之分。
根据不同操作部位选用不同类型的止血钳。
小号止血钳也叫“蚊式钳”。
持止血钳的方法与手术剪相同。
主要用于夹血管或止血点，以达止血目的，也用于分离组织、牵引缝线等。
正确持钳和持剪方法相同（图3.1-6）。
开放血管钳的方法是利用右手已套入止血钳的拇指与环指相对挤压，继而两指向相反的放向旋开，放开止血钳（图3.1-6）。
图3.1-6 持钳法和松钳法（5）骨钳：先用颅骨钻钻孔，然后用骨钳咬切骨质，扩大骨孔。
动物实验基本操作技术
ｄ．颈静脉
狗、猫、兔
ｅ．心脏
豚鼠、大鼠、小鼠
ｆ．断头
大鼠、小鼠
ｇ．翼下静脉
鸡、鸭、鸽、鹅
ｈ．颈动脉
鸡、鸭、鸽、鹅
第44页/共85页
部 位
动物种类
ａ．股动脉、颈动脉
狗、猴、猫、兔
ｂ．心脏
狗、猴、猫、兔
ｃ．颈静脉
马、牛、山羊、绵羊
ｄ．摘眼球
大鼠、小鼠
第45页/共85页
第34页/共85页
第六节 常规采血方法
第35页/共85页
第36页/共85页
第37页/共85页
第38页/共85页
第39页方法的选择，决定于实验目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。而研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。
ａ．尾静脉
大鼠、小鼠
ｂ．耳静脉
兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊
ｃ．眼底静脉丛
兔、大鼠、小鼠
d．舌下静脉
兔
e．腹壁静脉
青蛙、蟾蜍
f．冠、脚蹼皮下静脉
鸡、鸭、鹅
第43页/共85页
部 位
动物种类
ａ．后肢外侧皮下小隐静脉
狗、猴、猫
ｂ．前肢内侧皮下头静脉
狗、猴、猫
ｃ．耳中央动脉
体重/g
150～210 170～240 210～270 240～320
第18页/共85页
动物实验基本操作技术
动物实验基本操作技术1. 什么是动物实验？动物实验，顾名思义，就是用动物来做实验。
这可是个很有争议的话题，有人觉得这是科学进步的必要步骤，有人则认为这样对小动物太不公平。
其实，动物实验在医学、心理学、毒理学等领域都扮演着重要角色，就像是科学界的小伙伴，帮助我们找到很多问题的答案。
它让我们在研发新药、测试产品之前，先看看这些东西对生命的影响。
嘿，谁会愿意拿自己去试验呢，对吧？2. 动物实验的基本操作2.1 准备工作开始实验前，咱们得做好充分的准备工作。
想象一下，你准备去野外露营，得先把帐篷、食物、睡袋全都备齐，动物实验也是一样。
首先，你得了解实验的目的，确保你知道自己要干嘛。
接着，选好实验动物，常见的有小鼠、大鼠、兔子等。
它们可是咱们的实验小明星哦！要确保动物的健康状况良好，毕竟，咱们可不能让小动物们在实验中受苦。
2.2 操作过程好了，准备工作都做好了，咱们就可以开始操作了。
在实验过程中，保持冷静和专注是关键。
比如说，给小动物打针的时候，手一定要稳，不然就像大厨切菜时不小心切到手一样，得不偿失。
此外，注意观察动物的反应，如果它们表现得很不舒服，那可得立即停止实验。
记住，咱们不是要折磨它们，而是要让它们帮助我们获取知识。
3. 实验后的处理3.1 数据记录实验结束后，别急着松一口气，咱们还有一项重要工作——记录数据。
好比你考试后要整理笔记，数据记录能帮助咱们分析实验结果。
确保每一个细节都被记录下来，包括动物的状态、实验条件等等，这些都是今后研究的重要参考。
没有记录，实验就像是没吃过的榴莲，香味全无，完全没办法享受。
3.2 动物的安置最后，咱们得考虑动物的安置问题。
根据实验的性质，有些动物可能需要被安乐死，而有些则可以继续观察一段时间。
无论怎样，处理动物的时候一定要尊重它们。
动物也有生命，它们的价值不仅仅在于实验数据，更在于它们是这个地球上的一部分。
我们得对它们负责，尽量给它们一个体面的归宿。
4. 总结动物实验虽然重要，但这并不意味着我们可以随意对待小动物。
动物生理与代谢调节技术实验实训
理解动物生理与 代谢调节的基本
概念
学会使用动物生 理与代谢调节技 术进行实验操作
掌握动物生理与 代谢调节的基本
原理和方法
提高实验操作技 能和实验数据分
析能力
掌握实验仪器的基本操作 方法
学会使用实验设备进行实 验操作
掌握实验数据的采集和处 理方法
学会撰写实验报告和总结 实验结果
实验操作规范： 遵守实验操作 规程，确保实
验安全
实验结果准确 性：实验结果 与预期结果相 符，数据准确
实验报告撰写： 实验报告完整， 条理清晰，数
据详实
团队合作与沟 通：与团队成 员有效沟通， 共同完成实验
任务
数据准确性：数据的采集、处理和 分析是否准确无误
实验结果分析：实验结果是否合理， 分析是否深入透彻
单击此处输入你 的项正文
实验材料：动物模型、 试剂、仪器设备等
单击此处输入你 的项正文
实验步骤： a. 动物模型 的制备和选择 b. 实验数 据的采集和处理 c. 实验
结果的分析和解释
a. 动物模型的制 备和选择
b. 实验数据的采 集和处理
c. 实验结果的分 析和解释
实验注意事项： a. 遵守实 验操作规程 b. 确保实验数 据的准确性和可靠性 c. 注
实验操作：按照操作流程进行实验，注 意操作规范和仪器使用安全
数据记录：准确记录实验数据，注意数 据的准确性和完整性
实验后处理：清洗仪器，整理实验数据， 撰写实验报告
注意事项：遵守实验室规章制度，注意 安全防护，避免操作失误导致实验失败 或人员受伤
数据采集：确保数据的准确性、完整性和代表性 数据处理：遵循科学、严谨、客观的原则，避免主观臆断 数据分析：运用统计学方法，对数据进行深入分析 数据展示：采用图表、图形等方式，清晰、直观地展示数据结果 数据保存：妥善保存原始数据和分析结果，便于后续查阅和验证
动物实验基本操作技术
动物实验中的化学安全防护
化学试剂的储存：分类存放远离火源和热源
化学试剂的使用：严格按照操作规程使用避免直接接触皮肤和眼睛
化学废液的处理：分类收集妥善处理避免污染环境 化学防护设备的使用：佩戴防护眼镜、手套、口罩等避免吸入或接触有害 物质
动物实验中的放射性安全防护
放射性物质的分 类和特性
放射性防护的基 本原则和方法
提供适当的活动空间：确保动物有足够的活动空间避免过 度限制活动
记录动物状态：记录动物的行为、食欲、排便等情况以便 及时发现问题并采取措施
实验动物的组织取材与处理
组织取材：选择合适的组织进行取材如心脏、肝脏、肾脏等 固定：使用固定液对组织进行固定如福尔马林、乙醇等 切片：将固定后的组织切成薄片便于显微镜观察 染色：使用染色液对切片进行染色如苏木精、伊红等 观察：使用显微镜对染色后的切片进行观察记录组织形态和结构 保存：将组织切片保存在适当的环境中如冰箱、干燥器等
科学性：实验设计必须科学 合理符合伦理要求
尊重动物生命：尊重动物的 生命权避免不必要的伤害和 痛苦
知情同意：实验人员必须了 解实验的目的、方法和可能
的风险并同意参与实验
监管与监督：实验必须遵守 相关法律法规接受监管和监
督
教育与培训：实验人员必须 接受相关伦理教育和培训提
高伦理意识
动物实验的法律法规与标准
采血与注射的常 用工具：注射器、 采血针、止血带 等
采血与注射的常 见问题及解决方 法：出血、感染、 动物应激反应等
实验动物的观察指标与数据记录
数据记录：记录观察指标的 变化包括时间、地点、观察 人员等信息
数据分析：对观察数据进行 统计分析得出结论
观察指标：体重、体温、呼 吸、心跳、行为、饮食、排 泄等
动物实验技术操作训练
③将气管导管由切口向胸部方向插入气管腔内。
④在气管软骨环之间进行结扎，并将棉线固定于插管分叉 处。
(3)注意事项
①颈部皮肤切口，皮下组织和颈前肌肉群的分离均在一 定要沿正中线进行。
②分离肌肉时，要顺着肌肉的走向钝性分离，而且动作 须轻柔，止血钳插入不宜过深，以防损伤深层的食管和血 管。
(视频)
(1)输尿管插管操作要点：
①在耻骨联合上方备皮，做一3~5cm的切口，沿腹白线 打开腹腔，暴露膀胱，将膀胱向下方翻开，可见白色输尿 管。
②游离输尿管，下方穿2根线，在入膀胱处用一细线结 扎输尿管，另一细线打松结备用。
③待输尿管充盈后，在结扎处前方的管壁上剪一楔形小 口（小于管径1/2），从此孔向肾脏方向插管，固定。
2020/11/5
谢谢观赏！
①暴露神经的手法。 ②仔细辨认神经，用玻璃分针轻轻分离神经。 ③分离神经的先后顺序。
(视频) (1)颈总动脉插管术操作要点：
①于气管一侧小心分离颈总动脉约3cm穿两线备用。
②远心端结扎、近心端用动脉夹夹紧。
③用眼科剪与血管呈45℃的角度从远心端开始在向心 一侧剪开管壁的1/3。
④插管前导管和压力换能器的肝素化。
图3 家兔耳缘静脉(红色箭头)
(1)助手按下图的方式将家兔固定
助手的一侧上肢弯 曲与同侧的躯干夹住家 兔的后半部位，同时该 侧的手托住家兔的腹部 ，另一只向上抓住家兔 的颈背部。
图4 家兔耳缘静脉麻醉前固定
(2)注射方法(视频) 静脉穿刺意外(视频)
图5 家兔耳缘静脉注射方法
(3)耳缘静脉注射要点：
[实验器材和药品]
1.器材： 兔手术台、哺乳类手术器械一套、三通、动
实验动物基本操作
2、固定板固定：方法与小鼠固定板固定相同， 只是需选择更大一些的固定板。
3、固定器（盒）固定：方法与小鼠固定器（盒） 固定相同，只是固定器较小鼠的大。同样适用 于大鼠尾静脉注射。
• 动物实验时，当使用的动物数或实验分组数大于1 时，需要对动物个体间或组间区别开来，就需进 行编号与标记。因此编号与标记的目的就是动物 个体与组别的识别。
• 标记的方法很多，良好的标记方法应满足：号码 清楚、持久、简便易认和适用，不影响实验结果 ，对动物的刺激小，标记物对动物无毒性。编号 方法无定法，原则是使实验者能够识别动物个体 和组别。
兔子固定板固定
五、实验犬
（一）抓取 对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特制的 长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带或粗绳 缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈部，防止 脱落 。
（二）固定
实验台固定：用特制的长柄铁钳夹住犬的颈 部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上， 再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。并将 犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、 胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、 背部位的实验。
（二）固定
1、徒手固定：用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另 一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。
也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳， 大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将 兔固定。此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及 经口给药。
2、固定盒固定 ：此固定方法适用于头、耳部位实 验。
3、固定板（台）固定：此固定方法可使兔俯卧、 仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术 及其它实验操作。
动物实验基本技术和方法PPT课件
第1页，共115页。
主要内容
一、 实验前准备 二、实验动物抓取与固定 三、年龄的大致判断
四、性别、发情、与妊娠鉴定
五、编号和标记 六、分组
七、去毛 八、给药途径与方法
九、采血方法 十、其他体液采集
十一、麻醉方法 十二、处死方法 十三、动物病理检查
第2页，共115页。
一、 实验前准备
第34页，共115页。
Female
Male
第35页，共115页。
（三）大、小鼠发情鉴定
第36页，共115页。
小鼠性周期阴道分泌物涂片变化
阶 段 持续时 涂 片 可 见 间（h）
卵巢变化
动情前期 9-18
大量有核上皮细胞 卵泡加速生 少量角化上皮细胞 长
动 情 期 6-12
满视野角化上皮细 卵泡成熟、 胞，少量有核上皮 排卵 细胞
动情后期 30-48 角化上皮细胞及白 黄体生成 细胞
动情间期 36-42 大量白细胞及少量 黄体退化 粘液
第37页，共115页。
（四）妊娠鉴定
1、阴道栓法（大、小鼠、豚鼠） 2、外部检查法 3、摸胎法 4、阴道检查法 5、直肠检查法 6、超声波检查法 7、孕酮含量测定法
第38页，共115页。
阴道栓
日龄/d
体重/g 日龄/d 体重/g
初生 7
20
30
60
60～80 100～120 150～200 170～220 240～300
90
120
180
330～400 400～470 520～600
第29页，共115页。
（三）家兔
家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重 要标志。青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔 门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家 兔趾小基本呈红色，尖端呈白色。1岁家兔红色与白色
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61、辍学如磨刀之石，不见其损，日 有所亏 。 62、奇文共欣赞，疑义相与析。
63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠 深巷中 ，鸡鸣 桑树颠 。 64、一生复能几，倏如流电惊。 65、少无适俗韵，性本爱丘山。
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿