紫外可见分光光度计的曲线绘制
UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程
UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程1开机预热1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源，打开桌面上软件UVProbe2.21,单击，出现如下对话框（UV-2550PC Series-Rev.A(FD 00)）：仪器进入初始化状态。
1.2初始化大约需要5min，进行一系列的机械和光路的检查和初置，当所有项目初始化完毕后，单击OK。
1.3初始化完成后，需预热15min，即可往下操作。
2基线校正2.1选择中的（photometric光度），打开光度模块。
2.2单击光度计键条中的（baseline基线），启动基线校正操作。
2.3当基线参数对话框（baseline Parameters）弹出时：在开始波长和结束波长中分别输入实验所需的波长范围内进行基线校正,点击OK。
例如，在Start中输入700，在 End中输入300，点击OK，从700nm开始扫描。
2.4待扫描结束后，点击输出窗口Instrument History（仪器履历）标签。
查看列出的基线校正信息。
注意在基线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，读数变化≤3nm可接受。
当完成基线校正后，可进行以下操作。
3光度测定3.1首先选择测定方式，在主菜单的所示的各键中，选择（photometric 光度）。
3.2 参数的设置（以硝酸盐为例说明）：点击菜单栏中的键，出现图（photometric Method Wizard-[Wavelengths]：在wavelength(波长类型)中可供选择point（单点）和range（范围）,point表示测定单点波长； range表示测定波长范围。
例如选择Point,在Wavelength(nm)（波长）中输入538，则Column Name出现WL538.0，点击add（添加）加入，点下一步，出现图（photometric Method Wizard-[Calibration]）：在Type（Multi Point,Single Point，K-Factor，Raw date）中选择MultiPoint，在Formula（Fixed wavelength，Ratio，Different）中选择Fixed Wavelength,WL1选择上一步添加过的波长，例如WL538.0为上面添加过的。
仪器分析 10.1紫外可见分光光度法 图文
61-19
二、UV光谱的有关知识和概念
2、物质吸光的程度表达
辐射功率P：单位时间内所传输的能量， 光度法中用光强 I 代替。 透过率 T：透过光与入射光强度的比值 吸光度 A :
I T
I0
A lgT lg IO I
2020年9月13日星期日 上一内容 下一内容
61-20
3、UV吸收光谱——吸收曲线
镧系元素：f-f 跃迁
二、UV光谱的有关知识和概念
1、物质吸光的选择性
M h I0 M * It h
ΔΕ ΔΕe ΔΕv ΔΕr
分子轨道包括三种： 分子轨道能级的量子化：光吸收具有选择性 电子能级差：约为1～20ev（1250～60nm）
2020年9月13日星期日 上一内容 下一内容
一、分子轨道中的电子跃迁类型 二、UV光谱的常用概念 三、吸收带及其与分子结构的关系 四、影响吸收带的因素 五、物质对光的吸收与吸收曲线 五、朗伯-比尔定律
2020年9月13日星期日 上一内容 下一内容
61-3
练习：
下面五个电磁辐射区域
A：X射线区
B：红外区
C：无线电波
D：可见光区
E：紫外光区
请指出：
61-22
4、有关概念：
① 吸收带：吸收峰位置 ② 红移或长移 ③ 蓝移或短移 ④ 增色效应
减色效应
⑤ 强带 ε ≥104
弱带 ε ≤102
2020年9月13日星期日 上一内容 下一内容
61-23
⑥ 生色团（chromophore ）：含π→π* 、 n →π* 等跃迁的基团，即能产生UV吸收的 基团
61-12
5、电荷迁移跃迁
Charge transfer transition
紫外-可见分光光度法
2.2.2 波长扫描：分别将两个比色皿装上空 白溶液和样品溶液，放入比色槽中，拉动 拉杆使光路孔对准空白溶液，按[Start/Stop] 键进行谱图扫描（如想终止扫描再次按 [Start/Stop]键），待仪器自动进行基线校正， 提示拉入样品自动测试，测试完毕后有扫 描图谱出现，下方有相应的数据处理选项 ①Process ②Baseline（重新进行基线校正） ③Print。
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理 论基础。
Alg1lgI0 ECL TI
式中，A为吸光度，T为透光率，I0、I分别为入射光
和透过光的强度；E为吸光系数，当c用物质的量浓 度表示，L用厘米表示，用ε代替E，称为摩尔吸光 系数，单位为（L·mol-1·cm-1）；当c用百分浓度 （g/100mL），L用厘米表示时，用E1cm1%表示E，称 为比吸光系数。它们的关系如下：
4 要点与注意事项
4.1 开机前将样品室内的干燥剂取出， 仪器自检过程中禁止打开样品室盖。
4.2 比色皿内溶液以皿高的2/3～4/5为 宜，不可过满以防液体溢出腐蚀仪器。 测定时应保持比色皿清洁，池壁上液 滴应用滤纸擦干，切勿用手捏透光面。 测定紫外波长时，需选用石英比色皿。
2. 使用 仪器自检结束后（7个自检项目均出现
OK字样），按[MAIN MENU]键（主 菜单），屏幕显示如下5个功能项： 1. Phtometry（定量运算）；2. Wavelength Scan（波长扫描模式）；3. Time Scan （时间曲线扫描）；4. System（系统校 正）；5. Data display（光度直接测量 模式）。根据需要测量的实验项目按相
§3. 紫外-可见分光光度计
主要部件的性能与作用 基本结构:
紫外-可见分光光度法测定
紫外-可见分光光度法测定1. 引言1.1 引言紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，通常用于测定物质的浓度或测定物质的吸光度。
该方法利用紫外-可见光谱仪测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而推断样品中所含物质的浓度或结构。
在化学分析实验中，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确性高和简便易行的优点，因此被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
本实验旨在通过该方法测定样品中目标物质的浓度，并探讨影响测定结果的因素。
通过对仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素的详细讨论，我们将深入了解紫外-可见分光光度法的原理和应用，并为今后在相关领域的研究提供参考和借鉴。
希望本实验能够为我们提供更多关于分光光度法的实际操作经验，提升我们的实验技能和分析能力。
1.2 背景介绍紫外-可见分光光度法是一种广泛应用于化学分析领域的分析方法，通过测定物质在紫外-可见光区域的吸收特性，从而确定物质的浓度或者进行定性分析。
紫外-可见分光光度法具有操作简单、灵敏度高、选择性强的特点，被广泛应用于环境监测、食品安全检测、药品质量控制等领域。
随着科学技术的不断发展，紫外-可见分光光度法在实验室分析中扮演着越来越重要的角色。
通过测定物质在特定波长范围内的光吸收情况，我们可以获得关于物质性质的重要信息，如浓度、溶解度、稳定性等。
掌握紫外-可见分光光度法的原理和操作方法，对于提高实验准确性和效率具有重要意义。
在本文中，我们将介绍紫外-可见分光光度法的仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素，希望能够为读者提供一份系统全面的紫外-可见分光光度法测定指南。
通过总结和展望，我们也希望能够进一步探讨该方法在化学分析领域的应用前景。
1.3 研究目的紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学技术，可以用于测定物质的吸光度，从而推断物质的浓度。
本实验的研究目的主要分为以下几点：1. 研究紫外-可见分光光度法在测定物质浓度方面的应用。
紫外可见分光光度法实验
紫外可见分光 光度法实验
实验2 鉴定和识别有机化合 物中的电子跃迁类型
实验3 紫外分光光度法同时测 定维生素C和维生素E
指导老师：马少妹
实验4 三氯苯酚存在时苯 酚含量的紫外分光 光度法测定
实验5 紫外可见吸收光谱法 测定双组分混合物
2020/9/30
仪器分析实验报告写法
1.每个实验于下个实验之前交，每人交一份。报告要书写整齐清楚。 2.报告不可剽窃或抄袭他人之作，更不可造假数据。 3.报告以A4大小纸张撰写，格式如下: 封面 : 记载实验序号、实验项目、实验日期及报告人姓名。 內容 : 按“前言→实验方法及步骤→实验結果→ 讨论→结语→参考文献→ 附录”等。 (I)在“前言”(或“绪论”)部份，扼要敘述实验目的，所使用之仪器的特 性，分析的基本原理，理论背景等，并用几句话归纳所作的实验项目及所 获得的结果。
2020/9/30
（6）气态苯和溶液中苯的吸收曲线有何个同？为什么？ （7）助色团—NH2将如何影响苯胺？质子化作用后，产高等教育出版社 赵文宽等编，《仪器分析实验》）
2020/9/30
实验3 同时测定维生素C和维生素E 2．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系[抗坏血酸(维生素C) 和α-生育酚(维生索E)的实验方法。 2．仪器和试剂 916型紫外-可见分光光度计； ，石英比色皿2只，容量瓶移和 液管若干。抗坏血酸（AR）：0.0132g／L在无水乙醇中(7.50 ×l0-5mol/L)；α-生育酚(维生素E)：0.0488g/L在无水乙醇中； 无水乙醇；未知溶液：在无水乙醇中含有抗杯血酸和α-生育酚 溶液。
2020/9/30
为292nm)，以吸光度对浓度作图。
（2）计算抗坏血酸和α-生育酚在最大吸收波长（246nm和 292nm）时的摩尔吸光系数：即标准曲线图的斜率。
岛津UV-1800紫外可见分光光度计操作规程(仪器版)
岛津UV-1800紫外可见分光光度计操作规程(仪器版)操作规程：岛津UV-1800紫外可见分光光度计一、操作步骤1.开启主机电源，进行自检和初始化。
2.初始化结束后，进入“模式菜单”。
3.在“模式菜单”下，选择测定样品吸光度的单波长模式或制作标准曲线和样品测定的定量模式。
二、单波长下，样品吸光度的测定1.在单波长模式下，按下“___”键，输入测定波长。
2.若需要空白校正，先放置空白样品，按下“AUTO ZERO”键。
3.放入样品，按下“START/STOP”键，完成样品吸光度的测定。
三、标准曲线的制作1.在定量模式下，进入“测量参数配置屏幕”，设置测量参数选项。
2.选择“1λ”测量方法，输入测量波长。
3.选择定量法，手动输入K、B值制作曲线或根据实际输入标准样品数目，校准曲线方程的次数和零截距条件。
4.设置重复测量次数和样品浓度单位。
5.按下“START/STOP”键，输入标样浓度和吸光度值，进行一次空白调零，消除皿差。
6.查看校准曲线和标准曲线方程和相关系数是否符合要求，保存测量参数和校准曲线。
四、样品的测定按照单波长或定量模式操作，放入样品，进行测定。
1.在测量前，将比色皿放在吸收池样品侧和参考侧，盛有蒸馏水，进行空白校正。
然后按下【AUTOZERO】键，将测量值设为“0ABS(100%)”。
2.在“模式菜单”下，选择【3.定量】键，进入“测量参数配置屏幕”，引用上一次的标准曲线。
如果标准曲线有改变，在“模式菜单”下，按下【F1】键调入需要的标准曲线。
接着按下【F3】键，进入样品测量屏幕，或在参数配置屏幕下按下“START/STOP”键进行样品测量。
3.样品测量后，按下【F4】键保存测量数据，或按下【CE】清除当前数据。
4.最后按下【RETURN】键返回“模式菜单”，关闭主机电源。
5.在测定或100%T（0Abs）校准时，保持样品室盖闭合。
6.定量测定完毕后，多次按下RETURN键返回至“测定参数设置”界面，系统显示“是否删除数据”，选择“是”。
紫外可见分光光度计的曲线绘制(特选参考)
一、测定溶液中物质的含量可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。
测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。
也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。
含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；⑵可以避免其它物质的干扰。
二、用紫外光谱鉴定化合物使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。
方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。
各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。
当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。
一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。
紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。
紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。
除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。
紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。
选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。
当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。
配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。
紫外可见分光光度计技术与检定
紫外可见分光光度计技术与检定随着分析化学的不断发展，分光光度法已成为一种常用的分析方法。
其中，紫外可见分光光度计是一种基于分子电子能级的吸收原理进行定量分析的仪器，广泛应用于医药、环保、生化分析等领域。
本文将重点介绍紫外可见分光光度计的技术原理、检定方法以及常见问题及解决方法。
紫外可见分光光度计是利用样品中的颜色和吸收性质定量分析的仪器。
在分光光度计中，样品被分别照射在可见光和紫外线的光源下，分别探测它在这两个范围内的光的强度。
简单来说，就是采用一束宽谱的白光或滤过可见光或紫外线，使样品吸收特定波长的光线而得到吸收光的强度值。
下面是紫外可见分光光度计的各部分功能描述：1. 光源紫外可见分光光度计的光源有两种，一种是氢氖灯，适用于360-780nm的波长范围，另一种是钨灯，适用于200-800nm的波长范围。
2. 分光器分光器用于将光线分为两束——参比光和样品光，以确保样品和参比光在相同的条件下测量。
两束光线从分光器出来后，经过不同的道（即光谱），分别接触到检测器。
光谱可以是单色光通道或带通滤光片通道。
3. 检测器检测器用于将光信号转化为电信号，电信号被计算机进行数字化处理并输出到显示器上，形成光谱图。
光谱图可用于定量分析光谱中的化合物。
4. 数据分析软件数据分析软件将检测器输出的光信号转化为数字信号，然后可以通过公式计算样品浓度。
同时可以用于更高级的数据分析，如光谱分解和样品分类。
紫外可见分光光度计的准确性和可靠性对于分析化学实验室的研究和诊断非常关键。
根据ISO 17025：2005标准，检验员必须定期检测光度计的性能以确保其准确可靠。
下面是检定紫外可见分光光度计的步骤：1. 清洁光学系统光学系统包括光谱仪，样品池和检测器。
必须确保光学系统干净且无灰尘。
使用干净的棉棒和无水酒精（IPA）清洁样品池和检测器窗口。
2. 灵敏度检定在可见光波段，研制标准液，并测量一组不同的光强度值。
以强度和浓度的负对数作为横纵坐标根据Lamber-Beer定律绘制标准曲线。
分析实验
实验七高锰酸钾吸收曲线的绘制【实验目的】1.熟悉紫外可见分光光度计的原理、组成及使用方法；2.掌握测定及绘制药物吸收曲线的方法。
【实验器材】752N型紫外可见分光光度计、万分之一电子天平、计算机1000ml棕色容量瓶、20ml大肚移液管、烧杯、50ml容量瓶、胶头滴管、擦镜纸、滤纸、坐标纸KMnO4（分析纯）、蒸馏水、甲醇（分析纯）【实验原理】在紫外-可见光区，物质对光的吸收主要是分子中外层电子的能级跃迁所致，主要是指π→π*、n→π*两种跃迁类型，物质分子结构不同，产生的跃迁类型也不同，物质通过紫外吸收产生的吸收光谱也不相同。
在待测物质的浓度一定的条件下，用各种不同波长的光线作为入射光，测定物质的吸光度（A），然后以波长（λ）为横坐标，相应的吸光度（A）为纵坐标，绘制出的曲线就称为该物质的吸收光谱曲线。
吸收光谱曲线是物质的特征曲线，体现了物质对不同波长的光的吸收能力。
在一定的温度、pH值等条件下，待测物质的性质确定，吸收光谱的曲线形状是一定的。
在吸收光谱中，往往可找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。
物质的结构不同，它们的最大吸收波长也往往不同。
本实验是采用紫外可见分光光度计测定相应波长下的高锰酸钾溶液的吸光度，作图可得吸收曲线，分析高锰酸钾溶液的最大吸收波长。
紫外-可见分光光度计的介绍一、构造：二、操作步骤：1接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热20分钟。
2.缓缓转动波长选择钮至所需波长。
3.将空白溶液及待测溶液分别倒入比色杯4/5处，用擦镜纸擦净外壁，分别放入吸收池内，使空白溶液的比色皿对准光路。
4. 轻按“A/T/C/F”键使光标处于“T”位臵，开启暗箱盖，轻按“▽/0%”键调零，应显示“0000.0”；盖上暗箱盖，轻按“Δ/100%”键，应显示“100.0”。
5. 轻按“A/T/C/F”键使光标处于“A”位臵，应显示“0.000”，拉动拉杆使待测溶液处于光路中，待数字稳定后读数，记录吸光度A值。
紫外可见分光光度计曲线设置已发布
紫外可见分光光度计曲线设置吸收曲线又称吸收光谱，是以波长λ（nm)为横坐标，以吸光度A为纵坐标所描绘的曲线。
曲线设置包括K系数法，单点标定和多点标定。
实际操作如下：（上海奥析科学仪器有限公司型号UV1700PC紫外可见分光光度计仪器开机自检进入定量分析，应用方法和曲线设置选择曲线设置。
）1.单点标定有两种方法实现单点标定。
一、直接输入法。
二、测量获得法。
使用直接输入法可以点击下方的浓度和吸光度文本框，分别输入浓度和吸光度即可。
使用测量获得法可以通过测量标准样品的吸光度来获得吸光度，同时输入标准样品的浓度即可获得一根标准曲线。
（CONC=Bconc/BABS)B代表标准样品。
操作如下：放入参比样品后，对该波长进行调满度，再单击【样品测试】键进入测量标准样品吸光度的画面。
进入样品测试画面后直接点击【测试】键获得吸光度。
获得吸光度后按【退出】键退出该画面并返回定量参数设置画面，在定量参数设置画面中的吸光度处自动更新为刚才测量获得得吸光度。
此时再按【确认】键即可开始测量被测样品。
2.K系数法在下面的斜率和截距文本框中分别输入斜率和截距即可。
此时的测量方法将封闭。
同时标准曲线建立。
（CONC=K*ABS+B)3 多点标定有两种方法实现多点标定。
一、直接输入法。
二、测量获得法。
本例以5个标样和建立1此方程曲线，以测量方式来获得吸光度。
操作如下：第一步：确定标准样品的个数，和所建立方程次方。
分别在标样个数和曲线次方后的文本框中输入5和1.第二步：选中测量方法中的测量数据。
第三步：放入参比样品单机调零键对参比样品在该波长下调满度。
第四步：按确认键进入建立方程阶段。
进入建立方程画面后首先输入标准样品的浓度，此时可以通过输入样品浓度的实际个数来修改标样的个数。
输入结束后，依次放入标准样品，再点击[读取标样值]按键。
分别读出标样的吸光度，经过几次平均后并自动写入相应浓度的吸光度中。
再点击[建立方程]按键，完成了方程的建立，同时可以看到方程的系数和相关系数及方程曲线。
紫外可见分光光度法
T与A的关系
T 100% 50% 25% 10% 1.0% 0.1% 0.01% 0.001% 0%
A 0 0.301 0.602 1.00 2.0 3.0 4.0
5.0
上述说明： T值为0％至100％内的任何值。 A值可以取任意的正数值。
入射光强度 I0
等 条件一定时， E 仅与吸收物质本身的性质有关， 与待测物浓度无关； （3）同一吸收物质在不同波长下的E 值是不同的。在最大 吸收波长λmax处的摩尔吸收系数E max表明了该 吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法 测定该物质可能达到的最大灵敏度。
（4）可作为定性鉴定的参数；
（5）物质的吸光能力的度量
? EK2带
B带 R带
苯乙酮的紫外吸收光谱
四、影响吸收带的因素
• 位阻影响 • 跨环效应
共轭系统共平面性↓→共轭效应↓ → max ↓（短移）， ↓
• 溶剂效应 溶剂极性↑→ K带长移，R带短移
• pH影响
max 210.5nm,270nm
235nm,287nm
位阻影响
顺式
反式
二苯乙烯顺反异构体 的紫外吸收光谱
最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax。 吸收曲线的形状、λmax及吸收强度等与分子 的结构密切相关。
在吸收曲线上，最大吸收峰所对应的是最大吸收波长 （λmax），为不同化合物的特征波长。吸收曲线的形状是物 质定性的主要依据，在定量分析中可提供测定波长，一般以灵 敏度较大的λmax为测定波长。
峰与峰之间的部位叫谷，该处对应波长为最小吸收波长。 在图谱短波端只呈现强吸收但不成峰的部分称为末端吸收 （end absorption）。
紫外可见光谱实验报告
一、实验目的1. 熟悉紫外可见分光光度计的仪器结构和工作原理。
2. 掌握紫外可见光谱的基本原理和操作方法。
3. 学习利用紫外可见光谱进行物质定性和定量分析。
4. 了解紫外可见光谱在化学、生物、材料等领域的应用。
二、实验原理紫外可见光谱（Ultraviolet-Visible Spectroscopy, UV-Vis）是利用物质分子对紫外光和可见光的吸收特性进行物质定性和定量分析的一种方法。
紫外光波长范围一般为10-400nm，可见光波长范围一般为400-750nm。
当分子吸收紫外光或可见光时，分子中的电子会从基态跃迁到激发态。
不同物质的分子具有不同的电子能级结构，因此对紫外光和可见光的吸收特性也不同。
通过分析吸收光谱，可以确定物质的组成和结构。
三、实验仪器与试剂仪器：1. 紫外可见分光光度计2. 移液器3. 容量瓶4. 玻璃仪器试剂：1. 标准溶液：如邻苯二甲酸氢钾、对硝基苯酚等2. 未知样品溶液四、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 准备一系列已知浓度的标准溶液。
b. 将标准溶液依次倒入比色皿中。
c. 使用紫外可见分光光度计测定各标准溶液的吸光度。
d. 以吸光度为纵坐标，浓度或吸光系数为横坐标，绘制标准曲线。
2. 未知样品测定：a. 准备未知样品溶液。
b. 将未知样品溶液倒入比色皿中。
c. 使用紫外可见分光光度计测定未知样品溶液的吸光度。
d. 根据标准曲线，计算未知样品的浓度或吸光系数。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：a. 以吸光度为纵坐标，浓度或吸光系数为横坐标，绘制标准曲线。
b. 计算相关系数，评估标准曲线的线性度。
2. 未知样品测定：a. 根据标准曲线，计算未知样品的浓度或吸光系数。
b. 分析未知样品的组成和结构。
六、讨论与心得1. 紫外可见光谱是一种快速、灵敏、简便的分析方法，广泛应用于化学、生物、材料等领域。
2. 实验过程中，需要注意以下事项：a. 标准溶液和未知样品溶液的浓度应准确配制。
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量一、实验目的1.了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。
2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。
3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。
二、实验原理为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。
根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。
三、仪器和试剂1.紫外可见分光光度计UV-2501（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。
2.NaOH溶液（0.1mol/L）3.苯甲酸钠标准溶液的配制(1)苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。
该贮备液可置于冰箱保存一段时间。
(2)苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。
(3)系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。
得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。
4.雪碧（500mL）5.蒸馏水四、实验步骤1.吸收曲线的绘制（1）系列标准溶液的配制50mL瓶编号 1 2 3 4 5 6 100.0mg/L苯甲酸钠标准溶液体积（mL）0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.000.1mol/L NaOH溶液体积（mL） 1.00用蒸馏水容量50.0系列标准溶液浓度（mg/L）0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 记录吸光度A值（2）吸收曲线的测定用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收曲线。
紫外可见分光光度计-测铅已发布
紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯一比耳定律( Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l（吸收光程）的函数。
其常用表达式为：A=∈×l×C （式中，∈为系数）紫外可见分光光度计广泛应用于冶金、机械、化工、医疗卫生、临床检验、生物化学、环境保护、食品、材料科学等领域的生产、教学和科研工作中，特别适合对各种物质进行定量及定性分析。
铅是一种具有蓄积性的元素，铅污染直接来源于饮用水、蔬菜、粮食、水果、肉类与畜产品，间接来源于食品的生产、包装、运输等过程。
铅危害主要表现为以下几个方面：影响脑、肾、神经系统和血红细胞等的功能；影响婴幼儿的生长和智力发育，损伤认知功能、神经行为和学习记忆能力等，严重者造成痴呆。
因此，对铅的有效检测一直备受关注。
本文采用紫外可见分光光度计法测定微量铅含量，通过正交实验研究了缓冲溶液PH值、显色剂二甲酚橙（XO）用量、表面活性剂氯代十六烷基吡啶（CPC）用量对铅含量测定的影响。
主要实验仪器：UV1902型双光束紫可见分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）以二溴羟基苯基卟啉为显色剂，配合物最大吸收波长为479nm，在最佳实验条件下绘制标准曲线，在0.06~1.00mg/ml范围内呈线性相关，线性回归方程为y=0.894x-0.022，相关系数为0.9994，摩尔吸光系数ε=2.8×105L·mol-1·cm-1，方法检出限为0.02ug/ml。
第七章 紫外分光光度法
3)吸收池(样品池)(Cell，Container)：
吸收池放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池 架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。 在紫外区须采用石英比色皿，可见区一般用石英比色 皿和玻璃池比色皿。
4)检测器
利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电 信号，常用的有硒光电池、光电管或光电倍增管。
式中:
Ｅ为光的能量；
γ为频率；
λ为波长；
h为普朗克常数，6.6256×10-27尔格· 秒；
c为光速。
§2 紫外-可见光分光光度法
基于物质的分子对可见和紫外区域辐射的吸收
而进行分析的方法,广泛用于无机物和有机化合物
的定性、定量分析。
紫外-可见吸收光谱波长范围
(1)远紫外光区(真空紫外区): (2)近紫外光区: (3)可见光区:
取代基 -SR 红移距离 45(nm) -NR2 40(nm) -OR 30(nm) -Cl 5(nm) CH3 5(nm)
3. 共轭双烯
在不饱和烃类分子中，当有两个以上的双键 共轭时，随着共轭系统的延长， *跃迁的吸收
带 将明显向长波方向移动，吸收强度也随之增强
。共轭双键愈多，红移愈显著，甚至产生颜色。
短移:使吸收峰向短波长移动的现象称为短移或蓝移 （blue shift），引起蓝移效应的基团称为向蓝基 团。
2.4 分子结构与紫外吸收光谱
1. 饱和烃化合物
饱和烃类化合物只含有单键（σ键），只能产 生σ→σ* 跃迁，由于电子由σ被跃迁至σ*反键所 需的能量高，吸收带位于真空紫外区，如甲烷和乙 烷的吸收带分别在125nm和135nm。
定义:不饱和度是指分子结构中达到饱和所缺一价元素的“对”数。 如：乙烯变成饱和烷烃需要两个氢原子，不饱和度为1。 计算：若分子中仅含一，二，三，四价元素(H，O，N，C)，则可 按下式进行不饱和度的计算：
4紫外-可见分光光度法
• 2.参比溶液的选择原则：
• (1)溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂 不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比；
• (2) 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反 应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。
紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法
一、紫外-可见分光光度法原理 二、紫外-可见分光光度计 三、紫外-可见分光光度法应用
紫外-可见分光光度法
分子的能量变化E为各种形式能量变化的总和：
ΔΕ ΔΕe ΔΕv ΔΕr
电子能级间隔比振动能级和转 动能级间隔大1~2个数量级， 在发生电子能级跃迁时，伴有 振-转能级的跃迁，形成所谓的 带状光谱。
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
Lambert-Beer 定律适用范围： ①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。
吸光度具有加和性：
不仅适用于紫外光、可见光，也适用红外光；在同一波长下， 各组分吸光度具有加和性
A=A1+A2++An
（1）入射光必须为单色光 （2）被测样品必须是均匀介质 （3）在吸收过程中吸收物质之间不能发生相
偏离Lambert-Beer 定律的因素 1. 样品性质影响
1）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射的吸收 能力发生变化--- 变化；
2）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； 3）被测溶液不均匀导致的偏离
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
上海元析UV5100紫外-可见分光光度计的使用
UV/VIS5100紫外-可见分光光度计的使用UV5100是由上海元析仪器有限公司生产的紫外-可见分光光度计，因波长范围是：200～1000nm的连续光谱，所以能在紫外、可见、近红外光谱区区域对样品物质作定性和定量分析。
一、UV/VIS-5100型分光光度计的性能指标波长范围：200nm-1000nm光谱带宽：4nm波长精度：≤±2nm波长重复性：≤0.5nm光度准确度：±0.5%T光度重复性：0.3%T稳定性：0.003A/h杂散光：≤0.2%T数据输出：USB打印输出：并行口显示系统：128×64位液晶显示器光源：钨灯、氘灯透射比范围：0.0－200%(T)吸光度范围：-0.3－3（A）浓度显示范围：0-9999（C）外形尺寸：430×300×160mm二、仪器的外部结构功能键描述：按钮功能用于测量模式（T，A，C，F）切换用于系统参数设定用于波长设置校空白键，用于调0.000Abs和100.0%T用于打印测试结果及数据删除上键，选择向上移动下键，选择向下移动返回上级菜单和停止键确认键，用于数据和菜单的确认三、仪器的基本操作1、开启和自检（1）仪器开启用电源线连接上电源，打开仪器开关（位于仪器的后右侧），仪器开机后进入系统自检过程。
（2）系统自检在自检状态，仪器会自动对滤光片、灯源切换、检测器、氘灯、钨灯、波长校正、系统参数和暗电流进行检测。
注：如果某一项自检出错，仪器会自动鸣叫报警，同时显示错误项，用户可按任意键跳过，继续自检下一项。
（3）系统预热仪器开机后，因电器件需要预热一定的时间后方可达到稳定状态；另外氘灯周围环境也需要一定时间方能达到热平衡，所以仪器需要预热约20分钟后，方可正常使用。
自检结果后，仪器进入预热状态，预热时间为20分钟，预热结束后仪器会自动检测暗电流一次。
预热时可以按任意键跳过。
（4）进入系统主菜单仪器自检结束后进入主界面。
岛津UV-1800紫外可见分光光度计操作规程(仪器版)
岛津UV-1800紫外可见分光光度计操作规程(仪器版)岛津UV-1800紫外可见-分光光度计操作规程（仪器版）一、操作步骤1、开启主机电源，分光光度计进行自检和初始化。
2、初始化结束后，出现“用户、密码输入”界面，直接按下【ENTER】键完成后进入到“模式菜单”。
3、进入“模式菜单”3.1、单波长下，测定样品的吸光度，则选择【1.光度】；3.2、制作标准曲线和样品的测定，则选择【3.定量】。
4、单波长下，样品吸光度的测定4.1、在“模式菜单”下，选择【1.光度】，继续选择【1.光度】。
4.2、按下【GOTO WL】键，输入测定波长。
注：当需要空白校正时，在样品之前放置空白样品，按下【AUTO ZERO】键），测定值将被设置为0Abs。
4.3、然后按下【F3】或【START/STOP】键，进入测定界面。
4.4、放入样品，再次按下【START/STOP】键，即可完成一次样品吸光度的测定。
5、标准曲线的制作5.1、在“模式菜单”下，按【3.定量】键选择进入“测量参数配置屏幕”，在对话框中设置不同测量参数选项，输入选项编号选择需要设置的参数。
5.2、按【1.测定】键选择“1λ”测量方法，然后按屏幕提示输入测量波长，按【ENTER】键返回参数配置屏幕。
5.3、按【2.方法】键选择定量法。
（1）当K、B值已知时，选“K系数法”，手动输入K、B值制作曲线。
（2）当K、B值未知时，选“多点校正曲线法”，根据指示和实际输入标准样品数目，校准曲线方程的次数和零截距条件，然后按【ENTER】键返回参数配置屏幕。
5.4、按【3.测定次数】键设置重复测量次数，然后按【ENTER】键返回参数配置屏幕。
5.5、按【4.单位】键选择样品浓度单位，然后按【ENTER】键返回参数配置屏幕。
5.6、按【START/STOP】键时出现标准样品浓度（浓度表）输入屏幕，按顺序输入标样浓度完成后，出现“键入”或“测定”吸光度值的选项。
若已知每个标样对应的吸光度值，选择“键入”；若未知每个标样的吸光度值，选择“测定”，参数设定后应进行一次空白调零，消除皿差。
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一、测定溶液中物质的含量
可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。
测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。
也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。
含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：
⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；
⑵可以避免其它物质的干扰。
二、用紫外光谱鉴定化合物
使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。
方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。
各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。
当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。
一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。
紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。
紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。
除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。
紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。
选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。
当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。
配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。
那是否需要强制令A=0，再来进行拟合呢？如果y=A+Bx这样的形式可以，那么A需要多小才是可以接受的？
答：如果用样品空白溶液做参比，一般可以设置强制过零点；如果用蒸馏水做参比，一般不能强制过零点。
做曲线时一是要带双空白并减去空白A0, 二是应加0回归。
减去A0是希望消除试验方法固定偏倚对校准曲线的影响，当用校准曲线来估计未知样的浓度时，要考虑到试样的测量吸光度也会受到固定偏倚的影响，如果校准曲线和试样测定过程中出现的偏倚一样，偏倚是无需校正的，可有时两者的操作往往不是同时同批进行的，如由于时间或批次不同，固定偏倚有所变化，那么两者的吸光度就要做不同的校正。
即在每批分析时带空白，并对相应的信号进行校正。
试验证明加零回归的校准曲线与不加零回归校准曲线比较，两者的r和b值均无差异，但加零回归校准曲线截距a的绝对值明显变小，因此在作校准曲线的回归计算时必须加零回归，使回归线接近原点。
截距a对低浓度样品计算却影响甚大。
尤其是当样品浓度接近空白浓时，用回归方程计算时会出现负值，这是因为校准曲线回归后截距a>空白信号值所致，
并非样品中存在产生负值的物质。
用回归方程计算结果将引入一个固定的误差，当a为正时，计算结果为负误差，当a为负时，计算结果为正误差。
本来样品的信号值>空白信号值，计算出来的结果却为负值，本来不可能检出的，却通过计算被检出了。
若将这些截然相反的结果上报将误导数据的后续应用工作。
因此应按规定将回归方程中的截距a与0作t检验，当取95％置信水平，经检验无显著性差异时，a作0处理，方程y=a+bx简化为y=bx后再投入使用，一般情况下a<0.005 和r≥0.999时可不必进行检验，a=处理(3)。
回归方程若不经过上述检验和处理而直接投入使用，必将使计算结果引入差值相当于截距a的系统误差。
肉桂醛-苯甲醛双组分体系的紫外光谱特性研究：标准曲线的绘制及检出限
分别用空白液配制桂醛标准质量浓度系列0.595mg/L、0.794mg/L、0.99211mg/L、2.013nmg/L、3.005mg/LL、3.997mg/L、4.990mg/L、6.010mg/L、7.003mg/L和苯甲醛标准质量浓度系列0.998mg/L、1.995mg/L、2.993mg/L、3.997mg/L、
5.986mg/L、7.981mg/L、10.026mg/L、12021mg/L.以空白液为参比，于249nm
和291nm处分别测定苯甲醛和桂醛的吸光度.以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，即得标准曲线，如图3所示.
经线性回归，得桂醛回归方程：A=01706x十0.004，A为吸光度，x为桂醛质量浓度(mg/L)，相关系数r＝0.9997，方法的线性范围0.8～8mg/L，检出限0.0352mg/L。
苯甲醛的回归方程为：A＝0.1169x+0.0007，x为桂醛质量浓度(mg/L)，相关系数：=0.9998，方法的线性范围1-12mg/L，检出限0.0796mg/L。
紫外可见分光光度计，先建立标准曲线，大概测多少个样比较准确？还有一般测的时候如何分布浓度会使得结果比较准确呢？
答：标准曲线的建立一般选取5个以上的浓度水平，浓度选取范围一般在方法规定浓度的70%~130%，但紫外分光光度法还要考虑吸收值在0.2~0.6之间比较好！物质的最大吸收峰是在可见光范围内的。
所以想问下那样的话最好在什么范围比较好呢？而且标准曲线的范围要包括自己以后测样中的浓度才行吧？
答：不论是紫外还是可见，吸光度值最好在0.2-0.8之间。
样品浓度可以稀释。
最好是7个样，浓度前几个成倍数梯度分布，但是最大值不要太大，吸光度在0. 2到0.8之间，这是测样最可信的区域。