提取大肠杆菌的质粒

感受态细胞

分子生物学最基本的实验操作

提取大肠杆菌和凝胶电泳

碱裂解法提取质粒

质粒是分子生物学中载体

扩增培养细菌便于提取，为客观化，养细胞来获得质粒二倍体增加

培养后收集裂解，裂解物质有很多物质，分离质粒和纯化质粒

质粒提取的方法

2-3ml少量提取方法碱裂解法

两个环，染色体独立复制能从亲代传到子代

质粒DNA是圆环状

目的基因越多，复性有不好影响

需要大量，让宿主细胞扩增

EP2232考量目的基因的作用，个体，看生物学功能发现

可以弥补目的细胞缺陷

沉默基因片段可以质粒

质粒提取与介质有关

控制PH是细胞破裂，染色体基因变性，质粒基因微变性，空间结构稳定，变性小开链缠绕在一起，蛋白质会沉淀，质粒在水相离心抽提纯化

原理核心物质

Ph8左右培养，变性需要12

Sds裂解细胞，染色体核酸变性，环境是碱

抑制杂菌，空气中的菌，培养中其它生长出来的菌

裂解用的试剂SDS和NAOH溶液

提取试剂溶液1，2，3

先配原始浓度，用时工作浓度，使用时变成终浓度

苯酚氯仿异戊醇分层，用苯酚氯仿比重大，易沉，相配现用

充分混匀

TE Buffer专门储存DNA

裂解时加RNA酶，不加，检测有条带，使制剂更纯

溶液123作用尽可能全地写到讨论区

溶液一震荡混匀二是轻柔颠倒混匀3颠倒混匀

涡旋混匀器