李芳-重组梅毒螺旋体抗原TpN17纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测(西北大学硕士学位答辩PPT)2007.5

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磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法[发明专利]

专利名称：磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法专利类型：发明专利
发明人：崔亚丽,杨璐,耿婷婷,陈超
申请号：CN200910219357.8
申请日：20091207
公开号：CN101713780A
公开日：
20100526
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于免疫分析诊断技术领域，涉及一种磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法。

该方法以金磁微粒为载体，包被梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原TP15、TP17、TP47、TP44.5中的一种或多种，然后加入待检标本和酶标抗原，最后加入发光底物，进行发光检测。

由于金磁微粒表面对抗原较大的偶联容量，加之其兼备酶联免疫分析的高特异性、无污染的特点，以及化学发光法高灵敏度的特点，使该方法具有检测灵敏度高、特异性好、线性范围宽、无放射性污染等优点。

申请人：陕西北美基因股份有限公司
地址：710069 陕西省西安市太白北路229号
国籍：CN
代理机构：西安智邦专利商标代理有限公司
代理人：徐平
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三种梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析

三种梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析魏从芳;汤巧【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2014(035)004【摘要】目的比较化学发光法(TP-CLIA)、酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝聚试验(TPPA)对梅毒螺旋体特异性抗体(TP-Ab)检测的意义.方法分别用CLIA、ELISA和TPPA检测患者的1 797份血清样本,收集CLIA/ELISA/TPPA/法检测均阳性但临床未明确诊断的标本及结果不一致标本以重组免疫印迹法(RIBA)最终确认.结果三种方法共筛选69例阳性及可疑血清标本.CLIA/ELISA/TPPA法均阳性标本63例,其中52例有临床明确诊断.另11例3种方法检测均阳性但未明确诊断标本和6例检测结果不一致标本用RIBA确证.CLIA法确认阳性66例,阳性率3.67;ELISA法确认阳性65例,阳性率3.62;TPPA 法法确认阳性61例,阳性率3.39;CLIA、ELISA及TPPA法敏感性分别为98.51％、97.02％和91.05％;特异性均为99.88;诊断效率分别99.83％、99.78和99.66％.结论 CLIA法和ELISA法敏感性均高于TPPA法,不管用何种方法检测对于临床诊断不符的标本均应慎重,必要时用RIBA法补充确认,以排除假阳性.【总页数】3页(P458-459,462)【作者】魏从芳;汤巧【作者单位】南京医科大学附属南京医院检验科,江苏南京210006;南京市建邺区江心洲社区卫生服务中心检验科,江苏南京210019;南京医科大学附属南京医院检验科,江苏南京210006【正文语种】中文【相关文献】1.三种方法检测梅毒螺旋体抗体低值标本的比较分析 [J], 覃涛;杨昌伟;宋芳2.梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析 [J], 刘莹;王苏;张桂华3.三种梅毒螺旋体抗体检测方法的应用分析 [J], 刘长秀; 李静; 赵辰娜4.ELISA、TPPA和CLIA三种检测方法在血清梅毒螺旋体特异性抗体检测中的应用观察 [J], 朱纯刚5.三种梅毒螺旋体特异性抗体检测方法性能评价 [J], 王娟梅;方孝美;宋冰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组梅毒螺旋体抗原的研究进展

重组梅毒螺旋体抗原的研究进展
尹跃平
【期刊名称】《国外医学：皮肤性病学分册》
【年(卷),期】1999(025)006
【摘要】在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下，基因克隆技术的出现为
该病原体的研究开辟了一条新的途径。

应用基因工程技术目前已制备出多种重组梅毒螺旋体抗原，这些抗原的制备对梅毒发病机理的探讨，疫苗的研制，以及血清学诊断试验的建立与应用具有重要意义，为梅毒的预防和控制提供了更加有效的手段。

【总页数】4页(P352-355)
【作者】尹跃平
【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R759.1
【相关文献】
1.梅毒螺旋体基因重组抗原及其血清学诊断研究进展 [J], 韦善求;顾国龙
2.梅毒螺旋体基因重组抗原及其血清学诊断研究进展 [J], 莫显文
3.重组梅毒螺旋体诊断抗原的研究进展 [J], 王斯倩; 符波; 赵宇龙; 廖梦佳; 李长清; 曹龙古; 曾铁兵
4.重组抗原免疫印迹法排查化学发光免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体假阳性的价值[J], 王子瑜
5.基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和
甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究 [J], 张贺秋;凌世淦;陈坤;宋晓国;王国华;朱翠霞;刘荷中;马贤凯;邱艳
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5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价

5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价摘要目的评价分析5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果。

方法基于本次研究需求，分别采取梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、化学发光法（CLIA）、甲苯胺红不加热血清试验（Trust）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及免疫印迹法（WB）对120例标本实施梅毒螺旋体抗体检测，对比分析5种检测法阳性率，将WB作为参照分析其他4种检测法的总符合率、特异度以及敏感度。

结果经分析，TPPA法、CLIA法、ELISA法以及Trust法和WB法阳性率对比差异无统计学意义（P>0.05）；将WB检测法当作确认试验，TPPA 法、CLIA法、ELISA法特异度、敏感度和总符合率均比较高。

结论经研究结果分析可知，TPPA法、CLIA法、ELISA法不管是敏感度，还是特异度均比较高，实际应用中可根据梅毒螺旋体抗体实际情况合理选用检测法。

关键词血清学；梅毒螺旋体抗体；检测在临床中梅毒作为常见性传播疾病之一，传染性非常高，目前在献血员以及临床患者输血之前、各种创伤性检验中梅毒血清学检验已成为常规检测中一项基本项目，基于该形势下，选用快捷、灵敏度和特异度均比较高以及操作便捷的检测法对于正确筛查与诊断梅毒也变得尤为重要[1，2]。

本次研究就5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果进行评价。

现报告如下。

1 资料与方法1. 1 一般资料本次研究所用标本来自2012年7月～2015年5月到本院诊治患者120例，全部标本均实施梅毒螺旋体抗体检测，其中男50例，女70例，年龄32～56岁，平均年龄（45.26±4.9）岁。

1. 2 方法于空腹状态下采集3 ml静脉血，以3000 r/min进行离心，离心时间一般为10 min，经血清分离实施检测。

5种血清检测法所用仪器如下：洗板机、水浴箱、Clem Clin化学发光免疫分析仪、振荡器、Roto-2600c酶标仪以及离心器等；所用试剂有CLIA试剂、ELISA试剂、TPPA试剂、WB试剂以及Trust试剂。

化学发光法检测梅毒螺旋体抗体的临床价值研究

化学发光法检测梅毒螺旋体抗体的临床价值研究王伟诗【摘要】目的：研究分析化学发光法检测梅毒螺旋体抗体的临床价值。

方法将2823份标本分别采用梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附实验（ELISA）和化学发光法（CLIA）检测梅毒螺旋体特异性抗体。

结果2823份血清标本中，TPPA方法检测出梅毒螺旋体特异性抗体阳性94例，阳性检出率为3.33%，以该方法检测结果为标准；CLIA法同TPPA方法检测结果相比，阳性符合率为98.94%，阴性符合率为99.63%，总符合率为99.61%；ELISA法同TPPA 方法比较，阳性符合率为91.49%，阴性符合率为99.45%，总符合率为99.19%。

结论化学发光法检测梅毒螺旋体抗体具有较高的灵敏性和特异性，结果客观，易分析等优点，能够为梅毒血清学临床诊断提供科学依据。

%Objective To explore the clinical application value of chemiluminescent immunoassay (CLIA) in screening treponema pallidum antibody.Methods 2 823 specimens were tested by syphilis spiral gelatin agglutination test (TPPA), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and chemiluminescence method (CLIA).Results 2 823 serum specimens, detection of treponema pallidum specific antibody was positive in 94 cases of TPPA method, the positiverate was 3.33%, the detection results of the method as the standard, results compared with the TPPA method of CLIA assay, the positive coincidence rate was 98.94%, the negative coincidence rate was 99.63%,the total coincidence rate was 99.61%, ELISA was the same as the TPPA method, the positive coincidence rate was 91.49%, the negative coincidence rate was 99.45%, the total coincidence rate was99.19%.Conclusion The detection of syphilis antibody with chemiluminescence immunoassay detection has high sensitivity and specificity, and it can provide scientific basis for clinical diagnosis of syphilis.【期刊名称】《中国继续医学教育》【年(卷),期】2016(008)030【总页数】2页(P47-48)【关键词】化学发光法;梅毒螺旋体抗体;免疫印迹;颗粒凝集实验【作者】王伟诗【作者单位】扬州市江都人民医院检验科，江苏扬州 225200【正文语种】中文【中图分类】R446梅毒螺旋体（treponemapallidum）是密螺旋体属苍白螺旋体的苍白亚种，能够引起具有高度传染性的性传播疾病称之为梅毒[1]。

TP17蛋白的重组表达及其在梅毒血清学诊断中的初步应用

TP17蛋白的重组表达及其在梅毒血清学诊断中的初步应用俞辉;林勇平;张婷;侯剑辉;何丽斯;刘忠民【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2013(34)10【摘要】目的通过基因工程技术获得梅毒重组蛋白TP17,并探索其在梅毒血清学诊断中的初步应用.方法以PCR扩增获得TP17基因,构建pET28b-TP17原核表达载体,将其转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白表达,重组蛋白经镍柱纯化后,以飞行时间质谱和免疫印迹法进行鉴定.建立基于TP17的ELISA间接法,通过检测临床患者的血清标本,评价其与化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)的检测符合率.结果成功构建了原核表达载体pET28b-TP17,重组蛋白TP17以包涵体形式存在,分子量约20 kD.质谱和免疫印迹分析表明重组蛋白为梅毒蛋白TP17,并且能够与梅毒阳性血清发生特异性反应.基于TP17的ELISA 法与CMIA法和TPPA法的符合率均为99.2%(125/126),3种方法检测梅毒特异性抗体的差异无统计学意义.结论基因工程技术获得的重组蛋白TP17能够与梅毒阳性血清发生特异性反应,有良好的临床应用前景.【总页数】3页(P1490-1492)【作者】俞辉;林勇平;张婷;侯剑辉;何丽斯;刘忠民【作者单位】广州医学院第一附属医院检验科,广州,510120;广州医学院第一附属医院检验科,广州,510120;广州医学院第一附属医院检验科,广州,510120;广州医学院第一附属医院检验科,广州,510120;广州医学院第一附属医院检验科,广州,510120;广州医学院第一附属医院检验科,广州,510120【正文语种】中文【相关文献】1.TpN17重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的初步应用 [J], 宋春涵;吕香花;严杰2.梅毒血清学诊断用抗原Gpd蛋白的重组表达及鉴定 [J], 林勇平;陆中奎;俞辉;刘忠民3.梅毒螺旋体重组蛋白rTp0608在梅毒血清学诊断中的初步应用 [J], 高飞;罗宏;谈园;李丽琴;张帅;张莲4.梅毒螺旋体重组蛋白在血清学诊断中应用的研究进展 [J], 邓毅; 雷鸣; 赵飞骏; 张晓红5.梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达及在梅毒血清学诊断中的应用(英文) [J], 刘双全;吴移谋;赵飞骏;曾铁兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基因重组抗原检测梅毒螺旋体抗体研究

基因重组抗原检测梅毒螺旋体抗体研究
李新鸣;李鲁平
【期刊名称】《微生物学杂志》
【年(卷),期】2000(20)1
【摘要】梅毒是一种传染性委有强的性传播疾病，早期诊断是防止其传播及治疗
的关键。

采用基因重组的梅毒螺旋体Ｐ４７和Ｐ１５抗原对２８９份临床标本进行梅毒螺旋体抗体的检测，并与常规方法进行了比较，结果表明，重组抗原ＥＬＩＳＡ法具有较高的敏感性和特异性，并能对梅毒进行早期诊断，可以代替常规方法检测梅毒螺旋体抗体。

１８６份现患和已治愈梅毒患者标本，重组抗原ＥＬＩＳＡ法、ＴＰＨＡ法和ＲＰＲ法均为阳性；６０份健康献血员标
【总页数】2页(P1-2)
【作者】李新鸣;李鲁平
【作者单位】中国医科大学病原生物教研室;沈阳市第六医院
【正文语种】中文
【中图分类】R759.104
【相关文献】
1.基因重组丝虫融合蛋白抗原检测晚期丝虫病血清特异性抗体的实验研究 [J], 王
世海;刘涛;陈兆义;郑惠君
2.基因重组抗原ELISA法在梅毒螺旋体抗体检测中的评价 [J], 傅均星;周潇;曾铁兵
3.用基因重组丁型肝炎病毒抗原检测丁肝病毒IgM抗体及其初步应用 [J], 谢立;黄德庄;贺立香;谢无畏;温韬
4.基因重组克隆技术制备的幽门螺杆菌抗原检测血清抗体的对比研究 [J], 韩英;武子涛;李世荣;皮国华;
5.基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究 [J], 张贺秋;凌世淦;陈坤;宋晓国;王国华;朱翠霞;刘荷中;马贤凯;邱艳
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李芳-重组梅毒螺旋体抗原TpN17纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测(西北大学硕士学位答辩PPT)2007.5

20
西北大学硕士研究生论文答辩
梅毒螺旋体抗体检测
Tp抗原在金磁微粒表面的固定化和封闭
2.0 1.5
吸光度值
1.0 0.5 0.0
2 1
1：固定前 2：固定后
固定前抗原溶液在280 nm 处具有明显的光吸收，固定后上清液在280 nm 处无特征光吸收，说明大部分抗原均固定在金磁微粒表面。
表达并成功纯化了梅毒螺旋体抗原Tp17。用CM介质装成层析柱， Tp17 最佳纯化条件是——在pH 6.9、20mmol/L PB 的条件下上样，目的抗原约在0.6mol/L NaCl 的条件下被洗脱下来。通过SDS-PAGE鉴定可得到高纯度的Tp17，经Bradford法测定所得到的蛋白浓度为0.66mg/mL。双抗原夹心法测定HRP-标记抗原的滴度为1:3,200。
金磁微粒检测梅毒螺旋体抗体方法的建立

• •
Tp抗原在金磁微粒表面的固定化和封闭 Tp17抗原用于双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体
临界值的确定血液筛查中的应用

• • • •
商品化抗原Tp15、Tp17 和Tp47用于双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体
温育时间的选择精密度分析灵敏度分析血液筛查中的应用
0.054
0.035 0.052 0.052 0.034 0.084
0.034
0.035 0.050 0.102 0.074 0.073
0.026
0.050 0.050 0.063 0.042 0.072
0.073
0.042 0.047 2.031 0.085 0.056
抗原标记，过夜透析后(NH4)2SO4 沉淀透析后离心收集上清物即为酶结合物

TP17蛋白的重组表达及其在梅毒血清学诊断中的初步应用

子亲和层析柱（ＨｉｓＴｒａｐ—Ｇｒａｖｉｔｙ）购自ＧＥ公司；ＨＲＰ
的标准化和量化困难
。近年来，梅毒的血清学试
标记的羊抗人ＩｇＧ购自英国Ａｂｃａｍ公司。
１．２方法
验逐渐由传统的非特异性、手工、定性的方法向高特异
过ｂｌａｓｔ分析表明，ＴＰ１７基因与其他细菌无同源性，可避免检测过程中的交叉反应。因此，本研究利用基因工程技术，克隆并表达ＴＰ１７蛋白，以其建立ＥＬＩＳＡ法来评价抗原的临床应用价值，为新一代梅毒诊断试剂
选获得阳性重组子。
１．１材料ＴＰ模板：梅毒螺旋体Ｎｉｃｈｏｌｓ株基因组ＤＮＡ由南华大学病原微生物实验室提供。菌株与载
．
１４９０・
广东医学
２０１３年５月第３４卷第ｌ０期
ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＭａｙ．２０１３，Ｖｏ１．３４，！．
ＴＰ１７蛋白的重组表达及其在梅毒血清学
性、自动化、定量的方法发展。随着梅毒螺旋体基因
组序列的测序成功，以基因工程技术获得重组的梅毒
诊断抗原，建立ＥＬＩＳＡ和化学发光微粒子免疫分析法
１．２．１ＴＰ１７基因的扩增以梅毒螺旋体基因组ＤＮＡ为模板，利用Ｏｌｉｇｏ６．０软件设计引物如下：正向引物

梅毒螺旋体膜蛋白 Tpp17体外活化血管内皮细胞的实验研究

梅毒螺旋体膜蛋白 Tpp17体外活化血管内皮细胞的实验研究张瑞丽;王千秋【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》【年(卷),期】2013(000)011【摘要】目的：研究梅毒螺旋体重组蛋白Tpp17体外对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）的活化作用，探讨膜蛋白Tpp17在梅毒免疫学发病机制中的作用。

方法将采用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白Tpp17刺激HUVEC，ELISA测培养上清中细胞因子TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-selectin的水平，荧光定量聚合酶链反应测HUVEC中TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-selectin mRNA的转录水平；将重组蛋白Tpp17预处理的HUVEC与Calcein-AM标记的THP-1细胞共培养，荧光倒置显微镜下观察HUVEC与THP-1细胞的黏附情况；将HUVEC接种于transwell小室的下室，重组蛋白Tpp17处理后，Calcein-AM 标记的THP-1细胞接种于上室，荧光倒置显微镜观察下并计数THP-1细胞的迁移率。

结果梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17可上调HUVEC细胞因子TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-se-lectin的表达水平，提高其对THP-1细胞的趋化和黏附能力，与空白组比较，差异有统计学意义（ P＜0．05）。

结论梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17可体外活化HUVEC，提高HUVEC对THP-1细胞的趋化和黏附能力，可能在梅毒的免疫病理中起重要作用。

%Objective To study the effects of Treponema pallidum membrane protein Tpp17 on ac-tivation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro and to understand its role in the immu-nopathogenesis of syphilis .Methods HUVECs were co-cultured with recombinant protein Tpp 17.Then the expressions of TNF-α,MCP-1, ICAM-1 and E-selectin at mRNA and protein levels in supernatants were re-spectively detected by enzyme-linked immunosobent assay( ELISA ) and fluorescent real-time quantitative PCR.The adhesive ability of THP-1 cells was observed by fluorescence microscopy after co-cultured pretrea-ted HUVECs with recombinant protein Tpp 17 with Calcein-AM labeled THP-1.Pretreated HUVECs were cultured in the lower chamber of Transwell with recombinant protein Tpp 17 and monocytic THP-1 cells were cultured in the upper chamber of Transwell .After that, the migration of monocytic THP-1 cells was evalua-ted by using fluorescence microscopy .Results Compared with the blank control group , the expression of TNF-α, ICAM-1, E-selectin, especially the MCP-1, were enhanced by recombinant protein Tpp 17 of Trepo-nemapallidum.Moreover, Tpp17 improved the adhesive ability and migration of monocytic THP-1 cells, es-pecially the latter.Conclusion Treponema pallidum membrane protein Tpp17 might play a certain role in the immunopathogenesis of syphilis by enhancing the expression of TNF-α, MCP-1, ICAM-1 and E-selectin, and by promoting the adherence ability and migration of monocytic THP-1 cells.【总页数】6页(P807-812)【作者】张瑞丽;王千秋【作者单位】210042 南京，中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所;210042 南京，中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所【正文语种】中文【相关文献】1.梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd在Hela细胞中的表达及鉴定2.梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd基因的克隆、表达及其免疫活性研究3.姜黄素对AngⅡ活化的血管内皮细胞增殖及与中性粒细胞相互作用的干预性实验研究4.血小板活化对肠微血管内皮细胞血管生成影响的实验研究5.梅毒螺旋体膜蛋白Tpp17和Tpp47引起的免疫反应及信号通路因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

梅毒螺旋体TpN17抗原的表达及纯化

利用该抗原建立梅毒诊断血清学方法。方法：将化学合成的ＴｐＮ１７基因序列，克隆到ｐＥＴ２２ｂ质粒并转化到大肠杆菌ＢＬ２１菌株中进行ＩＰＴＧ的诱导表达。利用Ｎｉ亲和层析柱对表达抗原进行纯化。结果：对插入片段进行测序，证实该序列结果与合成序列一致，并在大肠杆菌中成功表达ＴｐＮ１７抗原，通过亲和层析获得纯度较高的目的抗原。结论：本研究中构建的大肠杆菌重组表达载体可有效的表达ＴｐＮ１７抗原，经纯化后的抗原，可有望进一步应用于梅毒感染的血清学检测试剂盒的研发。关键词梅毒螺旋体ＴｐＮ１７：ｐＥＴ２２ｂ表达载体；重组表达蛋白；Ｎｉ２＋亲和层析法
ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｒｅｓｓａｎｄｐｕｒｉｆｙｔｈｅｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｌｌｉｄｕｍ１７（ＴｐＮ一１７）ｐｒｏｔｅｉｎｂｙｕｓｉｎｇａ
ｇｅｎｅｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＥＴ２２ｂｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｅｎｔｈｅＴｐＮ１７ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｔｏｅｘｐｒｅｓｓｗｉｔｈ

一种血清中梅毒螺旋体抗体的快速检测方法及其应用[发明专利]

专利名称：一种血清中梅毒螺旋体抗体的快速检测方法及其应用
专利类型：发明专利
发明人：危宏平,余军平,李俊花
申请号：CN201910778256.8
申请日：20190822
公开号：CN110456052A
公开日：
20191115
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种血清中梅毒螺旋体抗体的快速检测方法及其应用，该方法通过使用修饰了protein A和protein G的树脂颗粒捕获血清中的抗体，利用融合了荧光素酶的梅毒脂蛋白TP15、TP17和TP47与捕获在树脂上的抗体结合，再通过检测融合的热稳定荧光素酶的发光活性，实现血清中梅毒螺旋体抗体的灵敏快速检测。

该方法使用的荧光素酶与梅毒脂蛋白融合蛋白，能特异地结合梅毒螺旋体的抗体，而且其中的荧光素酶是热稳定性好的荧光素酶。

该融合蛋白应用于本发明的快速检测方法，方法使用的血清样本量少，仅需1μL血清就能在20分钟内实现血清中梅毒螺旋体抗体的检测，能准确区分抗体的阴阳性，与传统的ELISA有着相似的灵敏度。

申请人：中国科学院武汉病毒研究所
地址：430000湖北省武汉市武昌区水果湖街小洪山中区44号
国籍：CN
代理机构：上海精晟知识产权代理有限公司
代理人：安曼
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梅毒螺旋体抗体诊断试剂(金标法)的方法学评价

梅毒螺旋体抗体诊断试剂（金标法）的方法学评价摘要】目的评价两种试剂盒的灵敏度性与特异性。

方法随机收集107例临床血清标本，分别按操作说明用两种金标试剂盒以及参考方法进行梅毒螺旋体抗体的检测，并进行统计学分析。

结果将两种试剂盒所检测结果分别与参考方法进行配对四格表χ2检验，χ2值分别为6.67（P<0.01），18.05(P<0.005)。

结论两种试剂盒在灵敏度和特异性方面各自存在一定缺陷。

【关键词】梅毒螺旋体抗体金标法凝集法梅毒血清学试验分为非密螺旋体抗原试验和密螺旋体抗原试验，前者可同时作为疗效监测，但由于其特异性较低，因此仅作为筛选试验，其试验阳性的标本必须进行密螺旋体抗原试验进行确证[1]。

近年来，新的，快速可靠，简单经济的诊断方法不断问世，非密螺旋体抗原试验有VDRL、RPR等，密螺旋体抗原试验有FTA-ABS、TPHA、TPPA、EIA、WB等。

目前国内开发了很多品牌的梅毒抗体金标试剂盒，我实验室在使用过程中发现不同试剂盒其阳性检出率存在明显差别，故作此比较实验，现将比较分析结果汇报如下：1 材料和方法1.1 标本来源107例样本来自我院门诊或住院病人，按照常规采血方法采集3ml静脉血，离心取血清进行检测。

1.2 试剂来源两种梅毒抗体金标试纸条分别由北京万泰生物药业有限公司和英科新创厦门科技有限公司提供。

本实验以凝集法（TPPA法）作为参考方法，试剂盒由日本东京富士瑞必欧（FUJIREBIO）株式会社提供。

2 结果检测结果以配对四格表形式表示，分别见表1，2。

3 讨论梅毒是由梅毒螺旋体梅毒亚种感染引起的慢性性传播疾病，今年来在世界范围内已构成巨大的健康危害，据WHO调查显示，1999年因性交传播而新增了一千二百万梅毒患者，其中90%以上在发展中国家，东欧国家患者增多速度也日益加快[2，3]。

最近几年在欧洲和北美许多城市中出现的病例是由于男性同性恋而引起的感染[4]。

由于自然感染过程中其潜伏期因人而异，因此血清中梅毒螺旋体抗体的检测对于梅毒诊断显得尤其重要[5，6]。

微粒子化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能评价

微粒子化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能评价李囡;金燕萍;阎超【期刊名称】《中日友好医院学报》【年(卷),期】2012(026)006【总页数】2页(P370-371)【作者】李囡;金燕萍;阎超【作者单位】中日友好医院检验科,北京100029;中日友好医院检验科,北京100029;中日友好医院检验科,北京100029【正文语种】中文目前，大多医院将梅毒螺旋体抗体检测作为术前常规检查和产前筛查项目，这使得传统的血清学手工实验难以满足日益增长的样本量需要。

目前已有多种全自动免疫分析仪具备大量检测梅毒螺旋体抗体的能力，本文着重对Architect i2000SR全自动化学发光微粒子免疫分析仪检测梅毒螺旋体特异性抗体的灵敏度、精密度、携带污染率等方面进行评价。

1 材料1.1 标本来源收集130例血清为2011年10月～2012年8月间我院门诊和住院患者，均行TPPA和CMIA检测。

1.2 仪器和试剂梅毒螺旋体特异性抗体明胶颗粒凝集试验（TPPA）试剂盒（由日本富士株氏会社提供）；Architect i2000SR型微粒子化学发光免疫分析仪（CMIA）及其配套Syphilis TP诊断试剂（由美国雅培提供）。

2 方法（1）明胶颗粒凝集法检测：严格按照TPPA试剂盒说明书对130例临床血清进行梅毒螺旋体特异性抗体检测。

仪器法检测：用i2000重复检测130例临床样本，S/Co值≥1为阳性，＜1为阴性。

（2）比较仪器法与TPPA的灵敏度：将弱阳性混合血清进行4个稀释度的倍比稀释，对每个稀释度的血清分别用CMIA法和TPPA试剂盒测定10次，比较两者的灵敏度。

（3）精密度：将阳性混合血清制成3个稀释水平的样本，作为高值、中值、和低值血清。

3个水平的样本每天测定3次，（每次测定间隔不得少于2h），每次测定均做3份，连续测定3d。

对所得数据计算批间、日间及总变异。

（4）携带污染率：选取强阳性血清为高值标本，均分为3管，标注为H1、H2、H3，选取阴性血清为低值标本，均分为 3管，标注为 L1、L2、L3，将低高值血清相互交叉排放，连续测定6管，利用以下公式计算携带污染率，携带污染率＝（L1－L3）/（H3－L3）×100%。

4种梅毒血清学检测方法的临床应用及评价

4种梅毒血清学检测方法的临床应用及评价尹静;徐贵江;刘艳【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2014(000)023【摘要】目的：比较目前常用的4种梅毒血清检测方法即梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）及梅毒螺旋体抗体检测-乳胶法（TP-AD）在梅毒检测中的价值。

方法对5870例门诊及住院患者的标本，先用 TP-ELISA 进行筛查，对查出的121例阳性标本同时做 TP-AD、TPPA 与 RPR 的检测，对检测结果进行比较分析。

结果5870例标本用 TP-ELISA 法检出阳性121例，检出率为2.06％。

121例阳性标本同时做TPPA、RPR 及TP-AD 检测，TPPA 检出阳性119例，符合度为98.34％；RPR 检出阳性49例，符合度为40.41％；TP-AD 检出阳性113例，符合度为93.39％。

以 TPPA 的检测结果为标准，经过统计学处理，TPPA 与 TP-AD 之间比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），TPPA与 RPR 之间，比较差异有统计学意义（P ＜0.01）。

结论4种方法各有适用性，TP-ELISA 法特异性好、灵敏度高，操作简单，适用于大批孕、产妇及健康人群的体检。

TPPA 特异性好、准确性高，适用于确诊，RPR 适用于梅毒活动期患者的监测与疗效观察。

TP-AD 与 ELISA 法比较，敏感性略差，特异性好可用于没有特定仪器时的筛查。

【总页数】3页(P3244-3245,3248)【作者】尹静;徐贵江;刘艳【作者单位】江苏省扬州市妇幼保健院检验科，江苏扬州 225002;江苏省扬州市妇幼保健院检验科，江苏扬州 225002;江苏省扬州市妇幼保健院检验科，江苏扬州 225002【正文语种】中文【相关文献】1.几种梅毒血清学检测方法的评价及临床应用 [J], 唐满玲;顾敏;将最明;周娟2.不同梅毒血清学检测方法的临床应用比较 [J], 杨丽玲;潘希力;谢彩霞3.3种梅毒血清学检测方法的临床应用研究 [J], 何成禄;耿仕菊;4.5种梅毒血清学检测方法的临床应用评价 [J], 郑颖;丁文杰;单晓洁;刘素霞5.四种梅毒血清学检测方法在梅毒抗体不确定样本的分析及评价 [J], 王欣俞;赵晋文;张延海;高雅婷;孙斌;高德禄;魏殿军;郭奕阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试验的临床评价

4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试验的临床评价王林娜;郑和义;李军;王晓峰;邵燕玲;王玉琪;刘秀荣【期刊名称】《临床皮肤科杂志》【年(卷),期】2005(34)11【摘要】目的:评估4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试剂盒的敏感性和特异性,及其在临床应用中的可操作性。

方法:选择860例性传播疾病(STD)门诊患者,签署知情同意书并采集其静脉血。

分别取全血和血清进行梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)及4种试剂盒的检测。

检测方法分别按照说明书进行。

结果:以TPHA为标准,结果分别为:①AbbottDetermineSyphilisTPtest:血清敏感性为100%,特异性为98.9%;全血敏感性为81.9%,特异性为99.4%。

②SDBIOLINESyphilis3.0te st:血清敏感性为95.5%,特异性为97.9%;全血敏感性为87.6%,特异性为99.4%。

③VISITECT-SYPHILIStest:血清敏感性为94.0%,特异性为98.1%;全血敏感性为73.5%,特异性为99.7%。

④Syphicheck-WBtest:血清敏感性为67.4%,特异性为98.8%;全血敏感性为64.0%,特异性为99.7%。

结论:4种试剂盒均具有优良的临床操作性能,适用于STD门诊的梅毒快速检测。

而且这4种快速诊断试剂盒在血清中的检测比全血具有更高的敏感性。

【总页数】3页(P726-728)【关键词】梅毒;诊断;梅毒螺旋体;抗原;重组【作者】王林娜;郑和义;李军;王晓峰;邵燕玲;王玉琪;刘秀荣【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学北京协和医院皮肤性病科【正文语种】中文【中图分类】R759.1【相关文献】1.特异性梅毒螺旋体确认试验与梅毒快速血浆反应素诊断试验在梅毒检验的比较研究 [J], 王华;廖为;宋予娟;魏巍;孙政敏2.特异性梅毒螺旋体抗体试验与梅毒快速血浆反应素诊断试验在梅毒检验中的诊断价值分析 [J], 张敏3.特异性梅毒螺旋体抗体试验与梅毒快速血浆反应素诊断试验的临床诊断价值对比分析 [J], 田广海4.特异性梅毒螺旋体抗体试验与梅毒快速血浆反应素诊断试验的临床诊断价值对比分析 [J], 田广海5.基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究 [J], 张贺秋;凌世淦;陈坤;宋晓国;王国华;朱翠霞;刘荷中;马贤凯;邱艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

梅毒螺旋体基因重组抗原及其血清学诊断研究进展

梅毒螺旋体基因重组抗原及其血清学诊断研究进展作者：莫显文来源：《中国医学创新》2014年第28期【摘要】梅毒这种慢性传染病，不仅临床表现复杂，而且病程长，危害性大，长期以来在临床中无法完整的培养好苍白密螺旋体，因而导致在临床中以苍白密螺旋体为基础的抗原研究受到了极大的阻碍。

近些年来随着对苍白密螺旋体基因研究的不断深入，与苍白密螺旋体基因相关的抗原研究也得了极大的发展。

目前临床中对于梅毒的诊断主要以血清学实验为主，掌握与其相关的血清学诊断方法，有利于梅毒的早发现、早治疗。

本文将对苍白密螺旋体重组抗原以及与其对应的血清学诊断的进展做一个综述。

【关键词】梅毒；慢性传染病；苍白密螺旋体；血清学Research Progress on Gene Recombinant Antigen of Treponema Pallidum （TP） and Its Serology Diagnosis/MO Xian-wen.//Medical Innovation of China，2014，11（28）：141-144【Abstract】 Syphilis， a chtonic infectious disease， with complicated clinical manifestaion，long course and huge perniciousness， and complete treponema pallidum （TP） is unable to culture in clinical for a long time， which leads hinders in the antigen study based on TP. In latest years，with the constant and deeper study on the TP genes， it reached a big process that the study on related antigens of TP genes. The diagnosis of sphilis is based on serology currently， so it would be helpful for the treatment of syphilis that mastering related serology diagnosis. This paper is a summary about the research progress on gene recombinant antigen of TP and its serology diagnosis.【Key words】 Syphilis； Chronic infectious disease； Treponema pallidum； SerologyFirst-a uthor’s address：Guidong People’s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Wuzhou 543001， Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.28.048导致人体感染梅毒的致病菌为苍白螺旋体的亚种-密螺旋体（TP），感染人体的主要致病菌株为Nichols株。