HPLC测定糕点类食品中的苯甲酸[1]
食品中防腐剂-------苯甲酸含量的测定
4. 影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关 溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑ 溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓， tR↓ 注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间
5. 出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱
（四）. 凝胶色谱法 (SEC)
① 分离原理：凝胶色谱又称为体积排阻色谱(SEC)，是按溶 质分子大小进行分离的一种色谱法。
② 分类：按流动相类型不同分为： 凝胶渗透色谱(GPC)：流动相为有机溶剂 凝胶过滤色谱(GFC)：流动相为水溶液
③ 适用：高分子物质的相对分子量分布以此鉴定高分子聚 合物。
1、泵体材料能耐化学腐蚀； 2、能在高压（30～60MPa）下连续工作； 3、输出流量稳定（±1%），无脉冲，重复性高（±0.5%），而且输出流量范
围宽； 4、适用于梯度洗脱。
类型：恒压泵和恒流泵两大类
（3）过滤器
在高压输液泵的进口和它的出口与进样阀之间，应设 置过滤器。过滤器的滤芯是用不锈钢烧结构材料制造的， 孔径为2～3μm，耐有机溶剂的侵蚀。若发现过滤器堵塞 （发生流量减小的现象），可将其浸入稀HNO3溶液中， 在超声波清洗器中用超声波振荡10～15min，即可将堵塞 的固体杂质洗出。若清洗后仍不能达到要求，则应更换滤 芯。
0HPLC测定食品添加剂的方法优化
0HPLC测定食品添加剂的方法优化
作者：马文思李彪金璐
来源：《食品安全导刊》2023年第12期
摘要：以2023年昆明市市场监督管理局抽检样品（草莓面包、酱卤肉、饮料、腐乳）为研究对象，采用高效液相色谱法对样品中5种食品添加剂（安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸）进行检测。结果表明，安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸在浓度为0.078 125～20 μg·mL-1时线性关系良好，R2均＞0.999；方法检出限在0.15～1.81 mg·kg-1，定量限在0.38～4.53 mg·kg-1；各食品添加剂的平均回收率在89.99%～102.30%，相对标准偏差均＜2%。该方法操作简单、重现性较好、灵敏度高，可满足食品中5种食品添加剂的同时测定。
关键词：高效液相色谱法；食品添加剂；方法优化
Optimization of HPLC Method for Determination of Food Additives
MA Wensi1， LI Biao2， JIN Lu3
（1.Kunming Institute for Food and Drug Control， Kunming 650032， China; 2.Kunming Dongchuan District Food and Drug Control Institute， Kunming 654100， China; 3.Kunming Physical Education School， Kunming 650500， China）
教案3 食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定
项目五用高效液相色谱法检测物质
任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）
单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成
教学内容
苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。
表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准
抑制物质腐败的药剂。即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一
般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。
我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。
防腐剂应具备的几个条件：
1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性
2、低浓度下具有较强的抑菌作用
3、本身不应具有刺激气味和异味
4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用
5、价格合理，使用较方便。
防腐剂的作用机理：
1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。
高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量
分析检测
高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量
字琴江1，杨 冲1，王 瑾2，左李美3，赵 芳1，罗桂槐1
（1.洱源县检验检测院，云南洱源 671200；2.云南农业职业技术学院，云南昆明650031；3.昆明市城市排水监测站，云
南昆明 650118）
摘 要：本文采用高效液相色谱法对橙汁中的防腐剂山梨酸、苯甲酸含量进行测定，对方法的线性、加标回收率、精密度进行验证。结果显示，山梨酸和苯甲酸浓度与峰面积在0.5～20.0 mg/L呈良好的线性关系，相关系数为0.999 6，样品的加标回收率为93.60%～95.90%，RSD为0.97%~1.96%。该方法能准确测定橙汁中的防腐剂山梨酸和苯甲酸，且操作简单、准确度高，适用于大多数检测机构。
关键词：山梨酸；苯甲酸；高效液相色谱
Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid by HPLC ZI Qinjiang1, YANG Chong1, WANG Jin2, ZUO Limei3, ZHAO Fang1, LUO Guihuai1
(1.Eryuan County Inspection and Testing Institute, Eryuan 671200, China; 2.Yunnan V ocational and Techical College of Agriculture, Kunming 650031, China; 3.Kunming City Drainage Monitoring Station, Kunming
食品中对羟基苯甲酸酯类的检测
食品中对羟基苯甲酸酯类的检测
摘要：文章采用超声提取-高效液相色谱法同时测定食品中3种对羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）含量的方法。对羟基苯甲酸酯类属于防腐剂，按
gb/t5009.31-2003国家推荐方法检测[1]，样品提取比较繁琐、费时，且回收效果欠佳。本文利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济、灵敏，又能保证一定精度的测定方法。本方法加标回收率在86.08%～112.71%之间，线性系数
r>0.9998，检出限可达0.10ug/ml，分析时间短，完全能够满足分析要求，可广泛应用于食品中对羟基苯甲酸酯类检测分析。
关键词：对羟基苯甲酸酯类；高效液相色谱法
中图分类号：o657.7+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0064-2
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
1.1.1 仪器 shimadzu lc 10vp plus高效液相色谱系统（日本shimadzu公司），配紫外检测器及lc solution色谱工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹仪：美国organomation n-evap112型；均质机：ikar werke t25型均质机；溶剂过滤装置；0.45μm和0.22μm过滤膜和过滤头；milli-q超纯水机。
1.1.2 试剂甲醇、乙腈为hplc级；乙醇为分析纯；水为超纯水。标准品：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸
丙酯，纯度为99.0%，美国进口，购于上海安谱。
1.2 标准溶液的配制[2]
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤
1 材料与方法：
1.1仪器：(1)高效液相色谱仪
(2)分析天平，
(3)酸度计，
(4)离心机，
(5)振荡器，
(6)超纯水仪；
试剂：(1)苯甲酸，
(2)山梨酸，
(3)脱氢乙酸，
(4)甲醇；
提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液,
(2)0.02mol/L磷酸氢二钾溶液
1.2标准溶液的配制
精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml 的标准储备溶液。
1.3色谱参数和条件
（1）色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18(4.6*250mm,5μm)
（2）流动相：甲醇—0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（10:90）
（3）流速：1.0ml/min
（4）进样量：10μL
（5）检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm（脱氢乙酸）
1.4样品处理
1.4.1 固体样品（如熟肉制品.豆制品及糕点类）
（1）称取捣碎混匀的样品5g ( 精确至0.01g ) 于具塞三角瓶中，
（2）精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4℃放置24h ，
（3）离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。
1.4.2 液体样品( 如冷冻饮品)
（1）将样品于室温下解冻后，称取10g ( 精确至0.001g ) 于25ml 量瓶中，（2）用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4℃放置24h ，
（3）离心，取上清液3ml ，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。
高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸
一 资讯阶段
1、为什么要测定饮料中苯甲酸含量
苯甲酸具有抑制细菌生长和繁殖的作用，广 泛应用于食品工业中作为防腐剂。但是苯甲酸的 过量摄入，可对人们的健康造成危害：如苯甲酸 进入人体后，在肝脏内与甘氨酸结合，代谢成马 尿酸由尿排出，对肝脏造成一定的损害；同时口 服过多的苯甲酸，在体内积蓄过多会对身体造成 一定的危害。国家限定碳酸饮料中苯甲酸的浓度 不得超过0.07mg/ml,由于苯甲酸价格低廉在食品 工业中得到广泛的应用，因此有必要测定饮料中 苯甲酸含量。
• 所以选择HPLC，并且，HPLC在工业、科学研究，尤其是在生物 学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、 碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金 属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。
4、液相色谱的结构
• 一 流路系统： 流动相、管路、泵、混 合器、脱气机等组成
３、在做定量测试标准曲线的范围是怎么确定的？ 应对多批次样品进行检测,样品含量的最大和最
小值就是你定量的范围,一旦分析方法确定,检测的样 品都应该在范围之内.所以实践产出理论,理论再指导 实践 另外就是定量范围不能超过仪器检测的范围,这 也很重要 ４、高效液相色谱法中的测定波长怎么确定？
用紫外分光光度计检测单个组分的最大吸收波 长。 作为这个组分的测定波长 ５、高效液相色谱法中定性和定量依据是什么？在 HPLC中的定量方法有哪些
高效液相色谱法测定绿豆糕中5种常见的食品添加剂
高效液相色谱法测定绿豆糕中5种常见的食品添加剂
作者：***
来源：《食品安全导刊》2021年第03期
摘要：本文旨在建立高效液相色谱法同时测定绿豆糕中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸，样品经正己烷去除油脂、硫酸锌-氢氧化钠去除蛋白质，然后采用色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇和0.02mol/L乙酸铵（pH值8.0）溶液为流动相，按照
5∶95的比例进行等度洗脱，DAD检测波长为230nm，以保留时间和待测物的紫外吸收光谱进行定性分析、外标法进行定量分析。结果显示，5种食品添加剂的线性范围为0.5～100mg/L （r2>0.999），检出限为0.12～0.64mg/kg，平均回收率为94.0%～99.9%，相对标准偏差为0.72%～1.31%。由此可见，该方法可实现对绿豆糕中5种常见食品添加剂的同时检测，具有高效、准确、灵敏的特点。
关键词：高效液相色谱食品添加剂绿豆糕
随着人们生活水平的不断提升，对于食品安全的要求也随之增高。绿豆糕是百姓家中常备的糕点之一，参照《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）[1]，糕点中可添加的食品添加剂种类繁多，但市面上销售的绿豆糕配料表中常见的添加剂种类为防腐剂和
甜味剂。安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸是较为常见的防腐剂和甜味剂种类，由于它们都是人工合成的化学物质，故具有一定的毒性[2-4]。因此，《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）[1]中规定了它们的最大使用量。为了避免企业过量使用食品添加剂，故需要通过简单、快捷的检测手段对市场上流通的产品进行监管。
高效液相色谱法(HPLC)在食品检验中的应用研究
高效液相色谱法(HPLC)在食品检验中的
应用研究
摘要：新时期食品安全关系到人们的身体健康，人们对食品安全的重视程度
也越来越高，所以在食品安全检测当中引进这一项技术，对现代社会食品安全有
十分积极的作用。本文围绕食品检测展开分析，论述当前食品安全的重要性，讨
论高效液相色谱法（HPLC）检验技术在食品检测中的应用。
关键词：高效液相色谱(HPLC)；食品检验；添加剂；溶质
目前，有不少公司和企业在食品加工环节中，通过大量加入抗氧化剂、甜味剂、着色剂、防腐剂等添加剂去优化、改善产品的口感和提升其在食品市场的竞
争力。所以在一定程度上，食品添加剂在食品加工厂制作过程中的使用频率和用
量很大。为食品检测带来了很多难度，因此需要借助高效液相色谱技术，不断强
化对食品内部添加成分的探讨与研究，促进食品行业朝着绿色健康的方向发展。
有效地发现食品添加剂以及其他不适宜添加的辅助原材料的超标现象，及时召回
不符合要求的食品产品，进而避免对消费者的身体健康产生危害[1]。
1高效液相色谱技术的概述
1.1高效液相色谱技术的原理
高效液相色谱（HPLC）主要是由高压输液泵、贮液器、脱气装置、进样器、
控制器、色谱柱、检测器和数据处理系统组成。高效液相色谱(HPLC)是在高压条
件下溶质在固定相和流动相之间进行多次连续交换的一个过程，以液体为流动相，在高压状态下将不同极性的单一溶剂的流动相泵入到固定相的色谱柱内进行测定，也可以将不同比例混合溶剂和缓冲液等流动相泵入其中，在柱内成分被分离之后，进入到检测器中经行检测，可以实现对样本的分析。
HPLC法测定糌粑中过氧化苯甲酰
高效 液相 色谱 仪 ， 附有 紫 外检 测 器 ； 天平 （ 感量 ０ ．
０ １ ｇ ￣０ ． ０ ０ ０ １ ｇ ） ； ５ ０ ｍＩ ， 具塞离心管 ； １ ０ ｍＩ ， 具塞 离 心
过 氧化 苯 甲酰又 称 面 粉 增 白剂 ， 是一 种 为 国 内外 广 泛使 用 的面粉 质量 改 良剂 和增 白剂 ， 它 会 缓 慢 氧化
液， １ ｍｇ ／ ｍＬ （ 来自百度文库家标准 物质 中心 ） 。
１ ． ３ 仪 器 与 设 备
小 麦粉 中的类胡 萝 卜 素和叶黄素， 而使 得 小 麦 粉 脱 色 增 白， 还可 以促进 小麦 粉熟 化 ， 改善质 量 。但 同时它 还 会 破坏 小麦 粉 中多种 维 生 素 等 营养 成 分 ， 过 量 摄 入 还 会 影 响人体 的肝 脏 生 理 功 能 ， 不利 于 人 体 健康 。我 国
卫 生 得不 到有力 保 障 ， 保证 其使 用安 全性 就势 在必 得 。
现有卫 生部 卫 法 监 发 ￣ ２ ０ ０ １ ３ １ ５ ９号 文【 ， 以及 国 家 质 量 监 督 检 验 检疫 总 局发 布 的 ＧＢ ／ Ｔ１ ８ ４ １ ５ —２ ０ ０ ｔ ＿ ４ 方 法都 是测 定面 粉 中过氧 化 苯 甲酰 ， 还 未 建 立糌 粑 中过 氧化 苯 甲酰 的测 定方 法 ， 为此 我 们 参 照 上述 两 种 方 法
苯甲酸和山梨酸的测定
食品中苯甲酸和山梨酸的检测
摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。食品安全已越来越引
起广大消费者的密切关注和担忧。目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还
涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲
酸钠的摄食是不适合的嘲。另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。在体
外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的
报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。日本的进口食品
中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。但因价值低廉，在中国仍作为主
要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发
达国家的主流防腐剂。但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测
在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规
定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。因此，食品防腐剂的定性
与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
苯甲酸及苯甲酸钠的测定
安全防护措施
个人防护
01
实验人员需佩戴实验服、护目镜、手套等个人防护用品，避免
化学品对皮肤和眼睛的直接接触。
通风要求
02
实验过程中要确保室内通风良好，及时排出有害气体，防止实
验人员吸入有害物质。
防火防爆
03
苯甲酸及苯甲酸钠属于可燃物质，实验过程中要注意远离火源，
避免产生静电引发火灾或爆炸。
废弃物处理与环保要求
意义
准确测定苯甲酸及其钠盐的含量对于 保障食品安全、确保合规性、实现质 量控制具有重要意义，同时也有助于 指导食品生产工艺的优化和改进。
02
苯甲酸及苯甲酸钠概述
苯甲酸的性质和用途
性质
苯甲酸是一种白色结晶性粉末，微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。具 有弱酸性，可与碱反应生成盐。
用途
苯甲酸主要用作食品防腐剂，可抑制霉菌、酵母菌和细菌的生长，延长食品的 保质期。此外，还可用于合成香料、染料、医药等。
制备
以甲苯为原料，通过氧化反应可制得苯甲酸。将苯甲酸与氢 氧化钠反应，可制得苯甲酸钠。在实验室中，也可通过苯甲 酰氯与氢氧化钠反应制备苯甲酸钠。
03
测定方法与技术
样品前处理
样品提取
将待测样品粉碎或研磨成细粉， 用适量溶剂（如乙醇、水等）进 行提取，得到含有苯甲酸及苯甲
酸钠的提取液。
高效液相色谱法同时测定食品中11种添加剂
工程管理与技术
现代商贸工业２０１８年第１３期１８２㊀㊀
作者简介:周原(１９８６－)
,女,汉族,湖北荆州人,硕士,武汉食品化妆品检验所,工程师,研究方向:食品检测.由于激励函数没有初始状态,故其拉氏变换只有对应的第一项.将方程化为F (s )＝H １(S )＋H ２(s
) E (S ),其中H １(S )对应零输入,H ２(s ) E (S )对应零状态.将H １(S )㊁H ２(s ) E (S )都用部分分式展开法化为
ðk i
s －λi
,则有对应的时域解为ðk
i e λi
t
ε(t ),最后同样将零状态解与零输入解相加即得总的系统方程解.复频域法十分适用于求解全响应,对于系统的微分方程,运用时域微分性质及和部分分式展开法,将方程两边进行拉氏变换,求解全响应十分简便.
３㊀结论
通过上述对连续时间系统的响应分析与求解,可以得出以下结论:当求解电路的电压响应或者电流响应,即先列出K C L 或者K V L 方程,
再运用微分算子创建微分方程,用时域法求解全响应㊁零输入响应㊁零状态响应.频域法是运用傅里叶变换及其性质进行求解,但是只能求解零状态响应.复频域法特别适用于微分方程已知的情况下,对方程两边进行拉氏变换,即可以十分简便的得到全响应㊁零输入响应㊁零状态响应.当然这些方法是系统分析的重要方法,如果能够将M a t l a b 的数值运算功能与绘图功能有机结合起来,将会使系统分析更简便和精确.
参考文献
[１]吴湘淇．信号与系统(第３版)[M ]．北京:电子工业出版社,２００９．[２]郑君里,应启珩,杨为理．信号与系统(第二版)[M ]．
高效液相色谱法同时测定月饼中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠
高效液相色谱法同时测定月饼中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠程盛华;丁丽;林玲;杨春亮
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2008(029)006
【摘要】目的:建立一种前处理简单、方便、灵敏度高、重现性好的月饼样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的检测方法.方法:采用反相色谱法同时测定月饼样品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量.氢氧化钠溶液和硫酸锌作为沉淀剂,Symmetry C1s柱(250mm × 4.6mm,5μm)液相色谱柱分离,乙酸盐缓冲溶液-甲醇(体积比90:10)作为流动相,二级管阵列检测器进行检测.结果:检测波长选择230nm:样品加标回收率为92.4%～103.0%;苯甲酸、山梨酸和糖精钠检测限都为0.5mg/kg.结论:该方法可用于月饼中防腐剂的检测.
【总页数】3页(P376-378)
【作者】程盛华;丁丽;林玲;杨春亮
【作者单位】中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东,湛
江,524001
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3
【相关文献】
1.液相色谱法(HPLC)同时测定月饼中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠 [J], 历燃冉
2.月饼中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的HPLC法测定 [J], 戴桂梅;黄智明
3.高效液相色谱法测定月饼中的脱氢乙酸、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜 [J], 李歆;苏建国;赵燕
高效液相色谱法测定食品中山梨酸
高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法
探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。方法不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。结果该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。
高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。
1 材料与方法
1.1仪器与试剂
1.1.1 仪器戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。
1.1.2 试剂色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。
1.1.3 色谱条件色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。
高效液相色谱法(HPLC)测定饮料中山梨酸和苯甲酸
卫生化学实验七
高效液相色谱法（HPLC）测定饮料中山梨酸和苯甲酸
一、实验目的与要求
1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法
2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法
3、熟悉饮料样品的处理方法
二、实验方法与原理
苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。因此国家严格限制其使用量。在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
三、实验仪器与试剂
1、仪器：高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯（1个）；
1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.2
2 μm）。
2、试剂：
（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min）
（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加超纯水定容至250 ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加超纯水定容至250 ml。
四、实验步骤
1、样品处理
碳酸饮料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min，然后用微孔滤膜（0.22 μm）过滤，滤液备用。吸取100 μl滤液于离心管中，并加入900 μl超纯水，混合均匀标记为样品。
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第22卷,第5期光 谱 实 验 室
Vol .22,No .5
2005年9月
Chinese J ournal of Spectrosco py Labora tory
September ,2005
HPLC 测定糕点类食品中的苯甲酸
¹联系人,电话:(0754)8674054;E-mail:ywfang @
作者简介:徐宁(1975—),男,广东省汕头市人,助理工程师,主要从事化学分析检测和质量检验工作。收稿日期:2005-07-09
徐宁
¹
(汕头质量计量监督检测所 广东省汕头市金砂路中段 515041)
摘 要
以亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂对糕点类食品进行预处理,并用HP LC 法测定处理后样品溶液中苯甲酸的含量。方法加标回收率为91.52%—103.20%,相对标准偏差小于2.25%,苯甲酸检出限为0.50mg /L 。该方法操作方便,分析速度快,结果准确。
关键词 高效液相色谱,苯甲酸,糕点类食品。
中图分类号:O 657.7+2 文献标识码:A 文章编号:1004-8138(2005)05-1105-03
1 引言
糕点类食品的主要原料是面粉,奶油。我国食品卫生标准明文规定,糕点类食品不能添加苯甲酸[1],但为了颜色的美观,一些面粉厂商仍在面粉中添加过氧化苯甲酰,该物质最终以苯甲酸的形式存在。一些奶油厂家也可能为节约成本而在奶油中添加苯甲酸。因此,准确测定糕点类食品中苯甲酸的含量,对于保护人们身体健康有重要意义。
目前,食品中苯甲酸的检验方法主要有薄层色谱法[2]、气相色谱法[3],液相色谱法[4]等。其中薄层色谱法和气相色谱法都是将样品酸化后用有机溶剂多次萃取,这种方法费时费力,苯甲酸的损耗较大。液相色谱法主要用于汽水饮料、果汁及酒类等食品中苯甲酸含量的测定,而用于糕点类这种高蛋白高脂肪食品中苯甲酸的测定,还鲜见文献报道。本文采用亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂,用以去除糕点类食品中的蛋白质和油脂等杂质,并用HPLC 测定苯甲酸的含量,取得了满意的结果。
2 实验部分
2.1 样品与试剂
糕点类食品:市售蛋糕类食品。
试剂:甲醇,专用试剂;乙酸铵,优级纯;亚铁氰化钾,分析纯;乙酸锌,分析纯;碳酸氢钠,分析纯(广州化学试剂厂)。
苯甲酸标准溶液,1.0mg/mL(国家标准物质研究中心)。实验用水为蒸馏水。
1106光谱实验室第22卷
2.2 仪器及分析条件
1100型液相色谱仪(带紫外检测器,美国Agilent公司);
仪器工作条件:色谱柱为ODS(200mm×4.5L m),流动相为甲醇和0.02mol/L乙酸铵混合溶液(V甲醇∶V乙酸铵=5∶95),流速为1.0mL/min,波长为230nm,定量杯为20L L。
CQ-250型超声仪(上海船舶电子研究所)。
2.3 标准溶液的配制
取购置的苯甲酸标准溶液逐级稀释配成标准溶液系列,浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0mg/L。
2.4 样品预处理[5]
准确称取糕点类食品10.00g左右样品于250mL锥形瓶中,加入少量热水溶解,经超声仪处理30min后,加入10mL饱和碳酸氢钠,再加入质量比为10.6%的亚铁氰化钾溶液和质量比为21.9%的乙酸锌溶液各5mL,充分混合后,用蒸馏水定容于250mL容量瓶中。沉淀后先用普通滤纸过滤,再用4.5L m水相微孔滤膜过滤,收集滤液于样品瓶中。
3 结果与讨论
3.1 样品预处理方法的选择
糕点类食品中含有较多的脂肪和蛋白质,用水直接溶解提取时,样品液为粘稠状,较难过滤。采用有机溶液提取,是将样品酸化后用乙醚分几次提取,吸取提取液经洗涤脱水后,水浴蒸干,最后用乙醚-石油醚溶解定容后进行检测。这种方法耗时较长,且苯甲酸的损耗也较大。本文采用超声波溶解样品,并加入沉淀剂,不需要有机溶剂,能使糕点类食品中的油脂和蛋白质沉淀,容易过滤,大大缩短了检测时间。
3.2 沉淀剂用量的确定
在糕点类食品中加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液作为沉淀剂,实验表明,当亚铁氰化钾和乙酸锌溶液的加入量各为5mL时,溶液澄清,沉淀完全,固本实验选用的沉淀剂用量为5mL。
3.3 校准曲线和检出限
按选定的仪器操作条件对已配制的标准溶液中的苯甲酸进行测量,以组分的色谱峰面积为纵坐标,组分的质量浓度为横坐标绘制校准曲线,曲线的回归方程为:y=0.3065x+0.0044,相关系数为0.9998,按S/N=3计算苯甲酸的检出限[6],结果为0.50mg/L。
3.4 分析结果及方法精密度试验
按选定的仪器操作条件对样品进行6次重复测定,并计算相对标准偏差,结果如表1所示。
表1 分析结果及相对标准偏差
样品编号123456含量(mg·kg-1)46.5049.5152.0850.3651.7547.50 RSD(%) 1.98 2.25 1.90 2.20 2.10 2.03 3.5 标准加入回收试验
在预处理之前,将一定量的标准溶液加入到样品中,按既定的方法进行预处理,测定样品中苯甲酸的含量,计算回收率,结果如表2所示。
4 结论
以亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂对糕点类食品进行预处理,并用HPLC法测定处理后样品
溶液中苯甲酸的含量,方法操作简单,效率高,结果准确。方法可用于质量检测部门对糕点类食品中苯甲酸含量的监测。
表2 标准加入回收试验结果
样品原测定量(mg ·k g -1)
加入量(m g ·kg -1)
加标后测定值(mg ·kg -1)
回收率(%)1
46.501056.68101.80249.512572.3991.52352.0850101.2598.34450.3675127.76103.20551.75100147.0795.326
47.50
200
251.82
102.16
参考文献
[1]中华人民共和国国家标准.食品中山梨酸、苯甲酸的测定[S].GB/T 5009.29-2003.北京:中国标准出版社,2004.233—239.[2]杨祖英.食品检验[M].北京:化学出版社,2001.30—31.
[3]翟永信.现代食品分析手册[M ].北京:北京大学出版社,1988.379—393.
[4]中华人民共和国国家标准.食品添加剂使用卫生标准[S ].GB /T 2760-1996.北京:中国标准出版社,1997.15—17.[5]林奕芝,刘奋,戴京晶等.高效液相色谱法测定蜜饯食品中防腐剂、甜味剂[J].食品科学,2000,21(9):47—48.[6]于世林.高效液相色谱方法及应用[M].北京:化学工业出版社,2001.85—87.
Determination of Benzoic Acid in Cake by HPLC
X U Ning
(Pr od uct Quality Monitor I ns titu te ,Shantou ,Guang dong 516002,P .R .China )
Abstr act
The amount of benzoic acid in cake pretreated using ferrocyanic cyano-potassium and acetic acid znic as precipitating agent was deter mined by HPLC .The recovery of standar d addition is 91.52%—103.20%with r elative standard deviation(n =6)less than 2.25%and detection limit of 0.50mg /L .T he method is efficient ,accurate and easy to operate .
Key wor ds HPLC,Benzoic Acid,Cake.
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第5期徐宁:HPLC 测定糕点类食品中的苯甲酸