南瓜基因组DNA的细菌人工染色体(BAC)文库的构建

合集下载

相关主题

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

Ａｂｓｔｒａｃｔ［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｈｅｐａｐｅｒｗａｓｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｂａｃｔｅｉｒａｌａｒｔｉｉｆｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ（ＢＡＣ）ｌｉｂｒａｒｙｆｏｒｐｕｍｐｋｉｎｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ＴｈｅＢＡＣｌｉｂｒａｒｙｏｆｐｕｍｐｋｉｎｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｐｕｍｐｋｉｎｂｕｄｓａｓｍａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＨｉｎｄｌｌＩｅｎｚｙｍｅ — ｃｕｔｔｉｎｇｓｙｓｔｅｍ．［Ｒｅｓｕｌｔ］ＴｈｅＢＡＣＬｉｂｒａｙｒｏｆｐｕｍｐｋｉｎｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ｈｅＴｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｌａｉｄａ￣ｕｎｄａｔｉｏｎｏｆｒｔｈｅｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ｖｅｉｆｒｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ，ｐｈｙｓｉｃａｌｍａｐｐｉｎｇａｎｄｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｐｕｍｐｋｉｎ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｕｍｐｋｉｎ；Ｇｅｎｏｍｅ；ＢＡＣ
ＺＨＡＯＱｉａｎｅｔａｌ（ＩｎｄｕｓｔｉｒｌａＣｒｏｐｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｎｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｒｂｉｎ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ１５００８６）
关键词南瓜；基２．１文献标识码
Ａ
文章编号０５１７ — ６６１１（２０１３）１１ — ０４７３８— ０２
ＢＡＣＬｉｂｒａｒｙＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｆｏｒＰｕｍｐｋｉｎＧｅｎｏｍｅ
化体系等优点，无疑是南瓜基因组大片段插入的最好选择。Ｓｈｉｚｕｙａ等首次构建了能克隆３００ｋｂ大片段的细菌人工染色体ＢＡＣ并进行高效转化以来，ＢＡＣ克隆文库、酵母人工染色体（ＹＡＣ）文库、细菌人工染色体（ＢＡＣ）
因组ＤＮＡ提取技术提取南瓜ＤＮＡ，将检测质量较好ＤＮＡ
保存于一８０℃冰箱中备用。
１．２．２研究技术流程。ＢＡＣ的克隆从材料ＤＮＡ和载体的准备开始到文库的保存，中间有许多严格的操作程序，具体参照Ｏｓｏｅｇａｗａ等的步骤，如图１所示。１．２．３确定最佳酶切体系。将纯化后ＡＣ）、哺乳动物人工染色体
（ＭＡＣ）和人类游离人工染色体（ＨＡＥＣ）。对于现阶段研究基础还易于分离插入ＤＮＡ、操作简单及可采用高效的电转
安徽农业科学。ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉＡｇｒｉ．Ｓｃｉ．２０１３，４１（１１）：４７３８— ４７３９，４７４４
责任编辑
朱琼琼
责任校对
李岩
南瓜基因组ＤＮＡ的细菌人工染色体（ＢＡＣ）文库的构建
赵茜，张丽艳，徐丽珍，吴建忠
（１．黑龙江省农业科学院经济作物研究所，黑龙江哈尔滨１５００８６；２．中国科学院北方粳稻分子育种联合研究中心，黑龙江哈尔滨１５００８６）
摘要［目的］构建南瓜基因组ＤＮＡ的利用Ｈｉｎｄｌｌｌ酶切体系，初步构建因的克隆、功能验证、物理图谱的构建和基因组测序等研究工作奠定了基础。