生物技术制药

生物技术制药

1.大分子和小分子药物的区别

大分子：多肽蛋白，来源于生物体，不容易提纯；小分子：为化学小分子，来源于化学合成，容易提纯。

2.有哪些方法合成第二链cDNA。1）selfpriming；2）Replacementsynthesis。

3.有哪些引物用来合成cDNA第一链

1）oligodT(n=12~18)，它引导的cDNA合成必须从3’开始；2）随机引物（n=6），随机合成6~10寡核苷酸片段作为引物；3）基因特异性引物（n=18~25），当RNA序列或部分序列已知时。

4.与RT—PCR相比，建立的cDNA文库有什么好处。

1）cDNA文库是以mRNA为材料，排除了真核基因组内含子的干扰，而且对于一些RNA 病毒来说，cDNA文库是研究它们的唯一可行的方法；2）cDNA基因文库的筛选简单易行；3）由于每一个cDNA克隆都代表一种mRNA序列，这样在选择中出现假阳性的几率比较低；4）cDNA是双链可以克隆到载体上，能无限扩增，可以随时满足需要，RT—PCR的产物第一链cDNA为单链，不能扩增，一旦用完就没有了。

5.在哺乳动物细胞中表达常用的启动子。SV40、CMV、MLP

6.逆转录病毒载体的主要结构。

1）2个LTR（长末端重复序列）（其插入宿主基因组作用，5’还有启动子作用）；2）φ（装配信号，指导结构蛋白表达）；3）MCS（多克隆位点）；4）backbone（大肠杆菌中增殖必备部分）。

7.哺乳动物细胞表达载体的主要表达元件。启动子、载体的转录终止信号和高效多聚腺苷酸（ploy(A)）加尾信号、选择标记基因。

8.什么是转染？在完成基因克隆之后，大多数的研究人员希望重新把这个基因的自然体和突变体导入到各种细胞来分析它的功能特点，这个过程称之为转染。

9.有哪些转染哺乳动物细胞的方法？

（一)非病毒介导转染法：1）钙转染法（沉淀）；2）脂质体转染法（形成双层质膜包埋DNA）；3）DEAE—葡聚糖转染技术促进哺乳动物细胞捕获外源DNA）；4）电转染（在高压电脉冲作用下使细胞膜上出现微小孔洞，促使细胞吸收）；5）压缩DNA转染法（将DNA压缩成为小颗粒）；6）利用细胞周期转染法（利用G2/M周期细胞分裂时细胞膜的空隙增大）；7）显微注射法（直接将目的基因通过注射器注入受体细胞中）；8）提高转染率（提高细胞内的激酶的pH）；（二）病毒介导转染法：逆转录病毒介导法，病毒介导法（通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色体中）。

10.什么是装配细胞？

指细胞中含有逆转录病毒结构蛋白基因，能够表达病毒的结构蛋白，是逆转录病毒载体转染入细胞后能够合成具有感染型的病毒粒，这种细胞称为装配细胞。

11.举例两个报告基因并说明原理。

1）β—半乳糖甘酶基因（lacZ）：利用它可以进行蓝白斑筛选，大肠杆菌产生的β—半乳糖甘酶能够催化乳糖水解为单糖，是x—gal第五变蓝色；2）萤火虫荧光素酶基因：在Mg2+、ATP、O2的参与下催化荧光素氧化脱羧，产生激活态的氧化荧光素，并放出光子，产生550~580nm的荧光，通过测定荧光酶基因表达检测各种启动子活性，它可以克隆启动子下游，定量测定启动子效率；3）细菌荧光酶：以脂肪醛为底物，在还原型黄系单核苷酸及氧的作用下，在脂肪醛氧化成脂肪的同时发出光子，产生490nm的荧光。

12.胰岛素的结构。

胰岛素含有51个氨基酸，有两条多肽连组成，即A链（21aa）和B链（30aa）,两个多肽链

间由两个二硫键连接，这两个二硫键分别位于A7—B7和A20--B19，第三个二硫键由A链之间的A6—A11组成。

13.胰岛素的主要功能。

主要为促进合成代谢，调节血糖稳定，主要靶器官为肝脏、脂肪组织、骨骼肌。1）对糖代谢的调节：吸收血糖，合成糖原；2）对脂肪代谢的调节：加速葡萄糖转变为脂肪酸；3）对蛋白质代谢的调节：增加蛋白质合成，抑制蛋白质分解。

14.干扰素的三个主要亚型。

1）α—干扰素：白细胞是主要合成场所，其主要功能为：增强免疫力，预防和治疗；2）β—干扰素：有成纤维细胞合成，其主要功能为：抗病毒，免疫调节；3）γ—干扰素：有淋巴细胞合成，其主要功能为：较强的抗病毒作用，抗细胞增殖和免疫调节作用。

15.干扰素的三大功能。

1）抗病毒；2）抗肿瘤；3）免疫调节。

16.红细胞生成素的主要生理功能。

EPO能调节红素祖细胞，红细胞的生成，治疗作用：1）治疗因慢性肾功能衰竭引起的成年和儿童贫血症病人贫血症；2）治疗由叠氮胸苷处理HLV感染所致的贫血；3）治疗非骨髓恶性肿瘤病人因化疗引起的贫血症。

17.ADCC解释抗体依赖的细胞介导细胞毒作用，是指表达Fc受体的细胞通过识别抗体的Fc端直接杀伤被抗体包被的靶细胞。

18.名词解释：VL、CL、VH、CH1、CH2、CH3、CDR。VL：为轻链的可变区，位于IgL 链N端月1/2处，约含108~111个氨基酸，其氨基酸组成和排列顺序在不同抗体间有很大变化。

CL：轻链恒定区，位于IgL链C端1/2处，约含105个氨基酸，氨基酸组成和序列无大的变化。

VH：重链可变区，位于IgH链N端1/5~1/4相互，约由118个氨基酸组成，在不同抗体间氨基酸组成和排列顺序变化很大。

CH1：重链第一恒定区，重链恒定区的一个球状结构域，是重链正链的第二个亚单位。遗传标记所在区。CH2：重链第一恒定区，重链恒定区的一个球状结构域，是重链正链的第三个亚单位。补体结合所在区，抗体糖基化部位。CH3：重链第一恒定区，重链恒定区的一个球状结构域，是重链正链的第四个亚单位。能与细胞表面的Fc受体结合行使抗体功能。CDR：互补决定区。VH和VL的三个高变区共同组成Ig的抗原结合部位，该部位形成一个与抗原决定簇互补的表面，故高变区又称为CDR，分别用CDR1、CDR2、CDR3表示。

19.CDR的数量和功能。

1）数量：Ig轻链有三个CDR：LCDR1、LCDR2、LCDR3，Ig重链有三个CDR：HCDR1、HCDR2、HCDR3；2）功能：CDR的Aa顺序决定抗体的特异性，CDR是Ig的抗原结合部位。

20.Fab和F(ab’)2的区别。

1）Fab是由木瓜蛋白每水解IgG铰链区二硫键连接的2条重链的近N端而得到的，F(ab’)2是由胃蛋白酶水解IgG铰链区二硫键连接的二条重链的近C端而得到的；2）Fab片段为单价，F(ab’)2片段为双价；3）Fab片段与抗原结合后，不能形成凝集反应或沉淀反应，F(ab’)2片段与抗原结合后，可以发生凝集反应或沉淀反应。

21.抗体糖基化的部位。

CH2

22.什么叫HAMA的反应。人抗鼠抗体反应，由于鼠抗体对人体而言具有较强的免疫原性而产生的。