霍乱检测课件
合集下载
霍乱弧菌检测
病人的呕吐物，沾染粪便的衣服和用具，也
可作为检材。
A
11
（2）送检 剧烈腹泻病人的水样便含有大 量病菌，直接分离培养不难检出阳性。不
能立即检查的，要接种于培养基内，尽快 送往检验室。送检标本可放入（PH8.6-9.0） 碱性蛋白胨水，也可放入文—腊二氏保存 液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基 中。
菌体尾端有鞭毛，运动极为活泼，在暗视野 显微镜下呈流星样运动，培养温度以37℃为 最适宜，在碱性（PH8.8～9.0）肉汤或蛋白 胨培养基上易于生长。
A
3
霍乱弧菌染色图片
革
鞭兰毛染 Nhomakorabea染
色
色
A
4
分群和分型：
根据O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成139个 血清群。
根据是否与O1抗血清凝集分两大群， O1群霍乱弧菌：凡能与O1群抗血清发生凝集 非O1群霍乱弧菌：凡不被O1群抗血清凝集的。
的编码。 ▪ O139菌可以产生荚膜 ▪ 与O1群霍乱无交叉免疫力 ▪ 环境适应能力强 ▪ 耐药性强
A
10
标本采集和送检
1、粪便采集
（1）采样 应在发病早期，服用抗菌药物之 前完成，并尽快送到检验室。粪便标本采 集方法如下：用棉拭子采取自然排出的新 鲜大便，也可用直肠棉拭或采便管由肛门 插入直肠内3cm-5cm处采取，水样便采取 1ml-3ml，成型便采取指甲大小的粪便量。
A
16
鉴定
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素 平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可疑 菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多 价和单价抗血清进行玻片凝集试验，结合 菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
A
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疑似菌落鉴定基本要求：
可作为检材。
A
11
（2）送检 剧烈腹泻病人的水样便含有大 量病菌，直接分离培养不难检出阳性。不
能立即检查的，要接种于培养基内，尽快 送往检验室。送检标本可放入（PH8.6-9.0） 碱性蛋白胨水，也可放入文—腊二氏保存 液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基 中。
菌体尾端有鞭毛，运动极为活泼，在暗视野 显微镜下呈流星样运动，培养温度以37℃为 最适宜，在碱性（PH8.8～9.0）肉汤或蛋白 胨培养基上易于生长。
A
3
霍乱弧菌染色图片
革
鞭兰毛染 Nhomakorabea染
色
色
A
4
分群和分型：
根据O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成139个 血清群。
根据是否与O1抗血清凝集分两大群， O1群霍乱弧菌：凡能与O1群抗血清发生凝集 非O1群霍乱弧菌：凡不被O1群抗血清凝集的。
的编码。 ▪ O139菌可以产生荚膜 ▪ 与O1群霍乱无交叉免疫力 ▪ 环境适应能力强 ▪ 耐药性强
A
10
标本采集和送检
1、粪便采集
（1）采样 应在发病早期，服用抗菌药物之 前完成，并尽快送到检验室。粪便标本采 集方法如下：用棉拭子采取自然排出的新 鲜大便，也可用直肠棉拭或采便管由肛门 插入直肠内3cm-5cm处采取，水样便采取 1ml-3ml，成型便采取指甲大小的粪便量。
A
16
鉴定
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素 平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可疑 菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多 价和单价抗血清进行玻片凝集试验，结合 菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
A
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疑似菌落鉴定基本要求：
霍乱弧菌实验室检测ppt课件
11.12.2020
·
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·
20
• 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力 ，进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入 35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取 消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005） 。
11.12.2020
0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。
三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群 菌不产生肠毒素，因此无致病性
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·
6
霍乱病原学特点
• 形态与染色
– 弧状或逗点状 – 革兰染色阴性 – 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状
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7
霍乱实验室检测
2020/12/11
检验科
·
1
霍乱病原菌发现
• 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 • 1 9 0 5 年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱
弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度 腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到 ElTor弧菌致病性 • 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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疑似菌落初步鉴定：
7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察， 如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。
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11.12.20ห้องสมุดไป่ตู้0
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• 注意：
• 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 • 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并
霍乱检测课件
抵抗力
水中存活20天 怕酸耐碱 庆大霉素耐药 消毒 漂白粉：吐泻物（1：4）,1hr
二、临床意义
致病物质 • 侵袭力： 鞭毛 菌毛 • 霍乱肠毒素（cholera enterotoxin ,CE)
A1肽链
具有激活腺苷酸环
霍 乱 肠 毒 素
1个A亚单 毒性
位 单位 A2肽链
化酶的酶活性
结合B亚单位； 参与转位
生物学性状
具有嗜盐性，氯化钠的最适浓度为3.5%；
增菌培养基: 1%NaCl碱性蛋白胨水或 4%NaCl蛋白胨水 TCBS琼脂: 菌落圆形、隆起、光滑、湿润、不透明， 蓝绿色 SS琼脂： 2-3mm，扁平、无色、半透明、蜡滴状， 菌落不易挑起 我妻琼脂培养集: β–溶血(神奈川现象，KP)
培 养 特 性
cholerae)
• 到目前为止共发生了七 次霍乱世界大流行
流行情况 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地） 古典生物型
1961年
第七次大流行 El Tor生物型
亚洲流行（印度、盂加拉、泰国） O139群
1992年
一、生物学特性
形 态 与 染 色
• 革兰氏染色阴性 • 弧型或逗点状,米泔水样粪便涂片镜检：可见
霍 乱 红 反 应（cholera red test）
硝酸盐 色氨酸 亚硝酸盐 靛基质
红色
浓硫酸
5. 分型鉴定
(1) 使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应 小川型单价血清凝集 小川型 稻叶型 彦岛型 稻叶型单价血清
+
+
+ +
(2)古典型和埃尔托型的鉴别
我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主
【传染病学】霍乱PPT课件
•2、特异性血清制动实验：依次加入01群抗血 清-0139抗血清停止运动
— 早期快速诊断的主要参考
实验室检查（3）
3、培养和分离： 病原诊断：PH8.6碱性蛋白胨增菌后培养 -----确诊、鉴定与分离
4、核酸检测：CTxA TcpA (PCR) o139 5、霍乱弧菌快速辅助检测：胶体金快速检测
不典型OⅠ群霍乱弧菌：可被01群血清凝集，但不产生 肠毒素，无致病性。
病原学（2）
抵抗力：
古典型在外环境抵抗力弱，埃尔托型对 外环境抵抗力强， 易形成流行
两型对热、干燥、酸和一般消毒剂均敏 感，胃酸4分钟杀灭。
自然环境中存活时间较长，河海井水埃 尔托型可存活1-3周，粘附于藻类和甲壳 类动物，存活时间更长，长达1年
液体种类：
5：4：1即含氯化钠5g，碳酸氢钠4g，氯化钾1g， 葡萄糖20g
如： 0.9%氯化钠550ml 1.4%碳酸氢钠300ml
10%氯化钾10ml, 10%葡萄糖140ml
注意：幼儿肾功能排钠功能差，其比例常调整 为氯化钠2.65g，碳酸氢钠3.75g，氯化钾1g，葡 萄糖10g
补液量 ： 最初24h补液量
霍乱疫苗接种 保护率低：50% - 80% 有效时间短：3-6个月
流行特征：流行性（散发和暴发）、地方
性（印度）、 季节性（夏秋季节7-10月） 流行地区：两广，江浙沪一带
O139的特点：
有荚膜， 能在无NaCL或30g/L NaCL蛋白胨生长 发病无家庭聚集性 以成人为主 男性多于女性 主要经水和食物传播 新流行菌株，普遍易感 霍乱菌苗无保护作用
尿液检查：• 比重1.010 ~ 1.025 • 蛋白、红细胞、白细胞及 管型
粪常规：少许粘液 白细胞 红细胞
— 早期快速诊断的主要参考
实验室检查（3）
3、培养和分离： 病原诊断：PH8.6碱性蛋白胨增菌后培养 -----确诊、鉴定与分离
4、核酸检测：CTxA TcpA (PCR) o139 5、霍乱弧菌快速辅助检测：胶体金快速检测
不典型OⅠ群霍乱弧菌：可被01群血清凝集，但不产生 肠毒素，无致病性。
病原学（2）
抵抗力：
古典型在外环境抵抗力弱，埃尔托型对 外环境抵抗力强， 易形成流行
两型对热、干燥、酸和一般消毒剂均敏 感，胃酸4分钟杀灭。
自然环境中存活时间较长，河海井水埃 尔托型可存活1-3周，粘附于藻类和甲壳 类动物，存活时间更长，长达1年
液体种类：
5：4：1即含氯化钠5g，碳酸氢钠4g，氯化钾1g， 葡萄糖20g
如： 0.9%氯化钠550ml 1.4%碳酸氢钠300ml
10%氯化钾10ml, 10%葡萄糖140ml
注意：幼儿肾功能排钠功能差，其比例常调整 为氯化钠2.65g，碳酸氢钠3.75g，氯化钾1g，葡 萄糖10g
补液量 ： 最初24h补液量
霍乱疫苗接种 保护率低：50% - 80% 有效时间短：3-6个月
流行特征：流行性（散发和暴发）、地方
性（印度）、 季节性（夏秋季节7-10月） 流行地区：两广，江浙沪一带
O139的特点：
有荚膜， 能在无NaCL或30g/L NaCL蛋白胨生长 发病无家庭聚集性 以成人为主 男性多于女性 主要经水和食物传播 新流行菌株，普遍易感 霍乱菌苗无保护作用
尿液检查：• 比重1.010 ~ 1.025 • 蛋白、红细胞、白细胞及 管型
粪常规：少许粘液 白细胞 红细胞
2024年度霍乱ppt课件
抗菌治疗
作为液体疗法的辅助治疗，能 减少腹泻量和缩短排菌期。可 根据病原菌的种类和药敏试验 结果选择抗菌药物。
2024/3/24
12
预防措施及策略
01
02
03
控制传染源
及时发现患者和带菌者， 予以隔离和治疗。对密切 接触者进行医学观察，及 时发现和治疗续发病例。
2024/3/24
切断传播途径
加强饮水消毒和食品管理 ，确保用水安全。改善卫 生设施，提高环境卫生水 平。
心律失常
严重脱水和电解质紊乱可导致心 律失常，如室性心动过速、房颤 等。治疗时应积极纠正脱水和电 解质紊乱，同时给予抗心律失常
药物。
休克
严重脱水、酸中毒和感染可引起 休克，表现为血压下降、四肢湿 冷、脉搏细速等。治疗时应迅速 补充血容量，给予升压药物和抗
休克治疗。
2024/3/24
17
患者心理干预与支持
作提供依据。
2024/3/24
提高公众认知
加强霍乱防治知识宣传，提高 公众对霍乱的认识和自我防护 能力。
强化医疗救治
加强医疗机构对霍乱患者的救 治能力，提高治愈率，降低病 死率。
推进疫苗研发与应用
加大霍乱疫苗研发力度，提高 疫苗保护效果，扩大疫苗接种
覆盖面。
25
未来研究方向及挑战
深入研究霍乱弧菌的致病机制
完善霍乱疫苗研究
进一步揭示霍乱弧菌的致病机理，为药物 研发和临床治疗提供新思路。
针对现有疫苗的不足，研发更加安全、有 效、便捷的霍乱疫苗。
加强国际合作与交流
应对气候变化对霍乱传播的影响
加强全球范围内的霍乱防控合作与交流， 共同应对霍乱疫情的挑战。
关注气候变化对霍乱传播的影响，制定适 应性策略以应对未来可能出现的疫情。
霍乱弧菌检测
浓度的霍乱弧菌。
该方法适用于早期诊断和快速筛 查，尤其在爆发期间对于大量样
本的检测具有优势。
其他检测方法
01
其他检测方法包括免疫层析试纸 条、免疫荧光抗体染色、电子显 微镜观察等。
02
这些方法在某些情况下可能具有 一定的应用价值，但敏感性和特 异性相对较低，且操作较为繁琐 。
03
霍乱弧菌检测的临床意义
这种方法通常用于回顾性调查和 流行病学研究，因为抗体产生需 要一定时间，且在感染后数月仍
可能保持阳性。
血清学检测不能用于早期诊断， 但对于评估疫苗接种效果和群体
免疫水平具有一定的价值。
分子生物学检测
分子生物学检测利用核酸探针或 PCR技术检测霍乱弧菌的遗传物
质。
分子生物学检测具有高敏感性和 特异性，能够快速地检测出极低
02
霍乱弧菌检测方法
粪便培养检测
粪便培养是检测霍乱弧菌的传统方法 ，通过将粪便样本接种在选择性培养 基上，观察是否有霍乱弧菌生长。
粪便培养通常用于确诊霍乱病例，以 及在爆发期间对疑似病例进行筛查。
粪便培养具有较高的特异性，但敏感 性较低，且需要较长时间才能得到结 果。
血清学检测
血清学检测通过检测患者血清中 的抗霍乱弧菌抗体来诊断霍乱。
加强国际合作与交流，共享先进的检 测技术、试剂和仪器资源，提高全球 霍乱弧菌检测能力。
培训与能力建设
通过国际培训和能力建设项目，提高 各国实验室检测人员的技能和水平， 促进检测技术的普及和应用。
05
案例分析
某地区霍乱弧菌检测案例
01
02
03
背景
某地区出现霍乱疫情，需 要对当地水源、食品和人 群进行霍乱弧菌检测。
特异性
该方法适用于早期诊断和快速筛 查，尤其在爆发期间对于大量样
本的检测具有优势。
其他检测方法
01
其他检测方法包括免疫层析试纸 条、免疫荧光抗体染色、电子显 微镜观察等。
02
这些方法在某些情况下可能具有 一定的应用价值，但敏感性和特 异性相对较低，且操作较为繁琐 。
03
霍乱弧菌检测的临床意义
这种方法通常用于回顾性调查和 流行病学研究，因为抗体产生需 要一定时间，且在感染后数月仍
可能保持阳性。
血清学检测不能用于早期诊断， 但对于评估疫苗接种效果和群体
免疫水平具有一定的价值。
分子生物学检测
分子生物学检测利用核酸探针或 PCR技术检测霍乱弧菌的遗传物
质。
分子生物学检测具有高敏感性和 特异性，能够快速地检测出极低
02
霍乱弧菌检测方法
粪便培养检测
粪便培养是检测霍乱弧菌的传统方法 ，通过将粪便样本接种在选择性培养 基上，观察是否有霍乱弧菌生长。
粪便培养通常用于确诊霍乱病例，以 及在爆发期间对疑似病例进行筛查。
粪便培养具有较高的特异性，但敏感 性较低，且需要较长时间才能得到结 果。
血清学检测
血清学检测通过检测患者血清中 的抗霍乱弧菌抗体来诊断霍乱。
加强国际合作与交流，共享先进的检 测技术、试剂和仪器资源，提高全球 霍乱弧菌检测能力。
培训与能力建设
通过国际培训和能力建设项目，提高 各国实验室检测人员的技能和水平， 促进检测技术的普及和应用。
05
案例分析
某地区霍乱弧菌检测案例
01
02
03
背景
某地区出现霍乱疫情，需 要对当地水源、食品和人 群进行霍乱弧菌检测。
特异性
霍乱弧菌检测ppt
A、C
异型 中间型
小川型（Ogawa）
彦岛型 （Hikojima）
A、B A、B、C
-
非O1群霍乱弧菌
O139群霍乱弧菌 1992年，在印度印度马德拉斯、泰米尔纳
德发生的霍乱疫情，分离到的菌株不与O1 群霍乱血清凝集，但是引起O1群霍乱的典 型症状。引起WHO重视，定为O139群霍乱弧 菌，被认为下一次霍乱大流行主角。
-
疑似菌落鉴定基本要求：
分别从庆大霉素琼脂或TCBS 琼脂、碱性琼脂 平板上各挑取5 个以上的（少于5 个的全部挑取）
疑似菌落接种于营养琼脂斜面置37℃18-24h 纯培养（即每份样品至少从4 个分离平板上获 得约20 株可疑菌落菌株），取斜面纯培养物 进行O1 群及O139 群霍乱诊断血清玻片凝集试 验，血清凝集阳性的菌株继续相关的系统鉴定 并报告结果。必须注意同一样品中O1、O139群 霍乱弧菌可能同时存在，有必要对所有选出的
TCBS 琼脂平板和一个碱性琼脂平板进行划线 分离培养。 同时，以无菌吸管吸取0.2-0.5ml 增菌液接种 到新的碱性蛋白胨水中，进行二次增菌培养后， 再如上述步骤进行划线分离培养。 特别强调所有环境样品的增菌分离培养步骤必 须包括上述二次增菌和强、弱双平板分离。
-
鉴定
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素 平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可疑 菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多 价和单价抗血清进行玻片凝集试验，结合 菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
El Tor霍乱弧菌为主。
-
霍乱弧菌古典生物型和 El-Tor生物型的区别
特征
古典生物型
羊红细胞溶血
-
鸡红细胞凝集
-
VP 试验
霍乱PPT课件
10
1961－2000年全球报告霍乱病例数
700000 600000 500000
病例数
400000 300000
200000 100000
0
60பைடு நூலகம்
65
70
75
80
85
90
95
00
11
传染源 病人、带菌者
流
行
传播途径 水、食物
病
学
易感人群 普遍、隐性感染
12
霍乱传播流程图
13
14
流行病学特征： 1、地方性及流行扩散(沿海沿江地区)，
20
21
22
脱水期：( Dehydration Stage )
①脱水、周围循环衰竭、代谢性酸中毒、 急性肾衰.
②低钾综合征:肌张力下降，肌腱反射消失、 鼓肠 、心律失常、 Q-T延长, T波低平或倒置,出现 U波 .
注意因血液浓缩而引起的假性电解质正常.
23
脱水虚脱期
烦躁，声嘶，口渴
眼窝深陷，两颊深凹
29
疑似诊断标准
符合两项之一者：
– 有典型症状，病原学检查未确定； – 流行期间有明确接触史，发生泻吐症状不
能用其他原因解释者。
30
霍 乱鉴别诊断
细菌性痢疾
大肠杆菌性肠炎
细菌性食物中毒
31
霍乱 急性菌痢 大肠杆菌 细菌性食
性肠炎
物中毒
发热 ( - )
(+)
(+)
(+)
腹痛 ( - )
(+)
古典生物型：印度恒河三角洲 埃尔托生物型：印度尼西亚苏拉威西岛
9
霍乱自1817年迄今曾有过7次大流行； 前六次大流行与古典生物型有关； 始于1961年的第七次大流行持续至今，
1961－2000年全球报告霍乱病例数
700000 600000 500000
病例数
400000 300000
200000 100000
0
60பைடு நூலகம்
65
70
75
80
85
90
95
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传染源 病人、带菌者
流
行
传播途径 水、食物
病
学
易感人群 普遍、隐性感染
12
霍乱传播流程图
13
14
流行病学特征： 1、地方性及流行扩散(沿海沿江地区)，
20
21
22
脱水期：( Dehydration Stage )
①脱水、周围循环衰竭、代谢性酸中毒、 急性肾衰.
②低钾综合征:肌张力下降，肌腱反射消失、 鼓肠 、心律失常、 Q-T延长, T波低平或倒置,出现 U波 .
注意因血液浓缩而引起的假性电解质正常.
23
脱水虚脱期
烦躁，声嘶，口渴
眼窝深陷，两颊深凹
29
疑似诊断标准
符合两项之一者：
– 有典型症状，病原学检查未确定； – 流行期间有明确接触史，发生泻吐症状不
能用其他原因解释者。
30
霍 乱鉴别诊断
细菌性痢疾
大肠杆菌性肠炎
细菌性食物中毒
31
霍乱 急性菌痢 大肠杆菌 细菌性食
性肠炎
物中毒
发热 ( - )
(+)
(+)
(+)
腹痛 ( - )
(+)
古典生物型：印度恒河三角洲 埃尔托生物型：印度尼西亚苏拉威西岛
9
霍乱自1817年迄今曾有过7次大流行； 前六次大流行与古典生物型有关； 始于1961年的第七次大流行持续至今，
《霍乱弧菌检测》课件
苍蝇等昆虫可携带霍乱弧菌， 短暂接触食物即可造成污染。
霍乱的危害与影响
腹泻与脱水
霍乱导致剧烈腹泻，严重时引 起脱水、电解质紊乱。
休克与死亡
严重病例可能出现休克甚至死 亡，尤其是儿童和老年人。
社会经济影响
霍乱的爆发和流行对当地经济 和社会秩序造成严重影响，如 交通中断、旅游业受挫等。
公共卫生挑战
霍乱的频繁爆发增加了公共卫 生负担，对防控体系提出了更
国际卫生组织（WHO）标准
01
WHO发布了《霍乱弧菌检测指南》，规定了霍乱弧菌的检测方
法、诊断标准及疫情报告要求。
世界动物卫生组织（OIE）标准
Байду номын сангаас
02
OIE制定了《霍乱弧菌检测操作手册》，适用于动物源霍乱的检
测和诊断。
国际标准化组织（ISO）标准
03
ISO发布了一系列与霍乱弧菌检测相关的标准，如ISO 16140-2
高的要求。
02
霍乱弧菌检测方法
常规检测方法
01
02
03
培养法
将样品接种于选择性培养 基上，培养后进行菌落筛 选和鉴定。
显微镜检查
直接观察样品中的弧菌形 态和运动性。
生化试验
对分离的菌株进行生化反 应检测，以确定其属性和 种别。
快速检测方法
免疫学方法
利用特异性抗体检测弧菌抗原， 如ELISA、免疫荧光等。
等，为各国制定相关标准提供了参考。
国内检测规范
国家卫生健康委员会标准
我国卫生部门制定了《霍乱弧菌检测技术规范》，规范了霍乱弧 菌的采样、运输、检测和报告等环节。
农业农村部标准
农业部门针对动物源霍乱弧菌的检测制定了相关规范，如《动物霍 乱弧菌检测技术规范》。
霍乱的危害与影响
腹泻与脱水
霍乱导致剧烈腹泻，严重时引 起脱水、电解质紊乱。
休克与死亡
严重病例可能出现休克甚至死 亡，尤其是儿童和老年人。
社会经济影响
霍乱的爆发和流行对当地经济 和社会秩序造成严重影响，如 交通中断、旅游业受挫等。
公共卫生挑战
霍乱的频繁爆发增加了公共卫 生负担，对防控体系提出了更
国际卫生组织（WHO）标准
01
WHO发布了《霍乱弧菌检测指南》，规定了霍乱弧菌的检测方
法、诊断标准及疫情报告要求。
世界动物卫生组织（OIE）标准
Байду номын сангаас
02
OIE制定了《霍乱弧菌检测操作手册》，适用于动物源霍乱的检
测和诊断。
国际标准化组织（ISO）标准
03
ISO发布了一系列与霍乱弧菌检测相关的标准，如ISO 16140-2
高的要求。
02
霍乱弧菌检测方法
常规检测方法
01
02
03
培养法
将样品接种于选择性培养 基上，培养后进行菌落筛 选和鉴定。
显微镜检查
直接观察样品中的弧菌形 态和运动性。
生化试验
对分离的菌株进行生化反 应检测，以确定其属性和 种别。
快速检测方法
免疫学方法
利用特异性抗体检测弧菌抗原， 如ELISA、免疫荧光等。
等，为各国制定相关标准提供了参考。
国内检测规范
国家卫生健康委员会标准
我国卫生部门制定了《霍乱弧菌检测技术规范》，规范了霍乱弧 菌的采样、运输、检测和报告等环节。
农业农村部标准
农业部门针对动物源霍乱弧菌的检测制定了相关规范，如《动物霍 乱弧菌检测技术规范》。
《霍乱弧菌检测》课件
分液器
分液器可以准确地移液和加试 样，是进行霍乱弧菌检测所必 需的工具之一。
案例分析
案例名称 某超市水产品检测案例 某井水源检测案例 某餐厅检测案例
检测方法
结果分析
使用PCR技术检测水产品样品
检测结果呈阳性，超市被责 令整改
使用文化法检测井水样品
检测结果呈阴性，水源安全 受到了保障
使用PCR技术检测餐厅内具 体物品
《霍乱菌检测》PPT课 件
欢迎来到《霍乱弧菌检测》课件。本课件将为您介绍霍乱弧菌的危害和检测 方法，以及常用仪器和案例分析。让我们一起探索这一重要的公共卫生话题。
霍乱弧菌的概述
什么是霍乱弧菌？
霍乱弧菌是一种引起严重肠道感染的细菌，主要通过饮用被污染的水或食物传播。
危害有多大？
霍乱是一种严重疾病，病人会出现剧烈的腹泻和呕吐，严重时可能导致脱水、休克和死亡。
发现具体物品霍乱弧菌含量 过高，餐厅被责令整改
检测的意义和结论
1 重要性
霍乱弧菌检测是保障公共卫生和生命安全的重要手段之一，可以及早发现潜在的危害。
2 选择
不同的检测方法有不同的优缺点，需要根据具体情况进行选择，以保证检测结果的准确 性。
3 途径
案例分析是了解检测方法和结果的有效途径，可以为日后的检测提供借鉴。
采用正确的采样和处理方法是成功进行霍乱弧菌检测的重要保证，同时还需要进 行DNA提取、PCR扩增和结果分析等多个步骤。
常用仪器和工具
PCR扩增仪
PCR扩增仪是进行分子生物学 检测的重要仪器，可以实现自 动化PCR扩增和荧光检测等功 能。
常用培养基
经典培养基包括TCBS和寒天 葡萄糖盐水等，在实验室中被 广泛使用。
感谢观看
霍乱诊疗方案(2023版)ppt
临床表现
（三）并发症。 1.电解质紊乱： 钠、钾的大量丢失导致低钾血症、低钠血症、低钙血症，可出现心律失常、神志淡漠、四肢抽搐等。少数 患者脱水较电解质丢失更显著，可表现为高钠血症。儿童霍乱粪便中含有更高浓度的钠、钾、碳酸氢盐等 电解质，更容易出现电解质紊乱。 2.代谢性酸中毒： 碳酸氢盐的大量丢失，以及低血容量、 组织灌注不足均可导致代谢性酸中毒，患者常表现为 Kussmaul 呼吸（深大呼吸、过度通气）。代谢性酸中毒可加重休克并可诱发心律失常。 3.急性肾功能衰竭： 低血容量性休克未纠正可导致急性肾功能衰竭，低钾血症也可加重肾功能损害。临床上表现为少尿 及氮 质血症，严重者出现无尿，可因尿毒症而死亡。
治疗
（二）对症支持治疗。 对于重症患者，经补足液体、纠正酸中毒，组织灌注仍不足者，可使用血管活性药 物。注意控制输液速度，避免出现高血容量和急性肺水肿。同时纠正电解质紊乱，5 岁以下儿童注意补锌。急性肾衰竭符合血液透析指征时给予血液透析治疗。 （三）病原治疗。 抗菌药物治疗能缩短腹泻及排菌时间，减少液体丢失量。抗菌药物包括氟喹诺酮类、 四环素类和大环内酯类，首选口服给药，呕吐严重或无法口服的静脉给药。
治疗
3.大环内酯类。 阿奇霉素：成人 1g，儿童 20mg/kg，单次口服。成人 500mg，静脉滴注，1 次/天，疗程 3 天，或第 1 天 500mg，第 2~5 天250mg，静脉滴注，1 次/天。儿童 10mg/kg，静脉滴注，1 次/ 天，疗程 3 天，或第 1 天 10mg/kg，第 2~5 天 5mg/kg，静脉滴注，1 次/天。 红霉素：成人 250~500mg/次，口服，4 次/天；儿童 10mg/kg/次（最大剂量不超过 500mg），口服， 4 次/天。疗程 3 天。
临床表现
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• 5、报告方式：经分离培养和鉴定试验，符合鉴定依 据各项即可报告：“有副溶血弧菌生长”。
生物学性状
生 化 反 应
( 1) 耐盐试验
3%NaCl(+), 7%NaCl(+) 0% NaCl(-), 10% NaCl(-)
(2) 神奈川现象 （3) 氧化酶(+) 、蔗糖(-) 吲哚试验(+)、赖氨酸脱羧酶（+） 鸟氨酸脱羧酶（+）
生物学性状
抗 原 构 造 与 血 清 学 分 型 （1） 鞭毛(H)抗原
霍 乱 红 反 应（cholera red test）
硝酸盐 色氨酸 亚硝酸盐 靛基质
红色
浓硫酸
5. 分型鉴定
(1) 使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应 小川型单价血清凝集 小川型 稻叶型 彦岛型 稻叶型单价血清
+
+
+ +
(2)古典型和埃尔托型的鉴别
我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主
用悬滴法或半固体穿刺法检测动力
3. 生化反应
分解葡萄糖、蔗糖，产酸不产气； 氧化酶试验（+）吲哚（+） 赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶（+） 精氨酸双水解酶（-） 霍乱红试验（+） 粘丝试验（+） O/129敏感试验(+) 耐盐试验: 3%NaCl(+), 6%NaCl(+) 0% NaCl(+), 10% NaCl(-)
5个B亚单 结合 位（4～6） 单位
特异地识别肠上皮细胞膜上的 神经节苷脂受体
致病机理
霍乱弧菌
胃 肠
鞭毛、菌毛、粘液素酶 对酸敏感，很快被杀死
胃酸降低或缺乏，菌体增多
绒毛上大量繁殖
CT的B亚单位结合神经节苷脂受体
形成膜通道
A1肽链进入细胞
激活腺苷酸环化酶系统 ATP → cAMP↑ 粘膜细胞分泌亢进、Na+、Cl-吸收抑制
中间型
A、B、C
生物型： 根据表型差异,O1群霍乱弧菌有古典生物型和E1 Tor 生物型之分
性状\生物型 Ⅳ组噬菌体裂解 Ⅴ组噬菌体裂解 对多粘菌素B的敏感性 鸡RBC凝集 羊RBC溶血 V-P
古典型 + + -
EL Tor + + + +
霍乱弧菌两个生物型 的鉴别
鸡红细胞凝集试验：在玻片上滴加生理盐水一滴，
一.直接检查
1.直接涂片镜检:革兰氏染色阴性,鱼群状排列的弧菌 2.动力及制动试验 • 动力观察：采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴片， 观察细菌动力，可见流星或穿梭状动力的细菌。 • 制动试验： 标本， 霍乱多价诊断血清（效价1：64），用暗视野镜观 察，3分钟内运动被抑制的即为阳性 快速而特异操作简便，但必须有数量较多的弧菌才检出
０139型霍乱弧菌
• O139血清群它是已发现的第一个能引起霍乱流行的非０1 群霍乱弧菌
• 目前世界卫生组织规定，霍乱病原菌包括O1群霍乱弧菌与
O139群霍乱弧菌 • 与Ｏ1群霍乱弧菌O抗原不同；O22群与O155群有交叉反应 • 对弧菌抑制剂０/129的低浓度和高浓度均具有抗性 • 具有荚膜
• 对多种抗生素耐药
O1 群
El Tor型
小川型(AB) 稻叶型(AC) 彦岛型(ABC)
非 O1 群
(O2-
群)
变异性
形态变异 弧型→直杆状
霍 乱 弧 菌 的 变 异 性
菌落变异
溶血性变异 （ El Tor型） 毒力变异
S ←→R←→L
溶血性 ←→非溶血性 传代 强毒株←→ 弱毒株 ←→无毒株
血清型别变异 彦岛型←→小川型←→ 稻叶型
3.直接荧光抗体染色
4. CT测定
检验方法 二.分离培养：
• 分离用的培养基有强、弱2种选择培养基。
• 弱选择培养基：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。 • 强选择培养基：常用的有庆大霉素琼脂、4号琼脂和 TCBS琼脂等
• 现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行分离。
检验方法
三. 鉴定
以血清学（玻片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出判断
选择性的增菌培养基:碱性蛋白胨水pH8.5
培 养 特 性
常用的强选择性培养基： 庆大霉素琼脂(GTA)pH8.4-8.5 四号琼脂pH8.4 硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板 (TCBS琼脂)pH8.6 常用的弱选择性培养基： 碱性琼脂pH8.4 碱性胆盐琼脂pH8.4
培 养 特 性
菌落特征
0% NaCl(-), 10% NaCl(-)
氧化酶阳性、蔗糖阴性、 赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶（+）精氨酸双水解酶（-）
KP(+)
• 4、鉴定依据
（1）形态染色特点：G-杆菌具有多形性,悬滴标本运动活泼； （2）培养特点：在选择平板上菌落形态典型，TCBS琼脂 上菌落为蓝绿色； （3）嗜盐性试验：3%NaCl(+), 7%NaCl(+) 0% NaCl(-), 10% NaCl(-)； （4）生化反应：KP(+),氧化酶阳性、蔗糖阴性、脲酶阴性等。 （5）毒素测定
生物学性状
具有嗜盐性，氯化钠的最适浓度为3.5%；
增菌培养基: 1%NaCl碱性蛋白胨水或 4%NaCl蛋白胨水 TCBS琼脂: 菌落圆形、隆起、光滑、湿润、不透明， 蓝绿色 SS琼脂： 2-3mm，扁平、无色、半透明、蜡滴状， 菌落不易挑起 我妻琼脂培养集: β–溶血(神奈川现象，KP)
培 养 特 性
采得的标本应立即接种于培养基 不能立即检查的，要放入碱性蛋白胨水或插入CaryBlair运送培养基中 标本与保存液比例约为1∶5
检验程序
标本
直接检查
碱胨水增菌培养 直接荧光抗体染色 凝集试验 CT测定 直接涂片 动力及制动试验
TCBS等分离培养
血清学鉴定
药敏试验
初步报告
生化鉴定、分型
确诊报告
检验方法
抵抗力
水中存活20天 怕酸耐碱 庆大霉素耐药 消毒 漂白粉：吐泻物（1：4）,1hr
二、临床意义
致病物质 • 侵袭力： 鞭毛 菌毛 • 霍乱肠毒素（cholera enterotoxin ,CE)
A1肽链
具有激活腺苷酸环
霍 乱 肠 毒 素
1个A亚单 毒性
位 单位 A2肽链
化酶的酶活性
结合B亚单位； 参与转位
1.玻片凝集试验:
试剂;O1群霍乱弧菌多价和单价诊断血清 O139群诊断血清
方法:从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌多价诊
断血清作玻片凝集试验。诊断血清应稀释成1:32-1:64 的效价使用，立即出现凝集者为阳性，同时设生理盐 水和阳性细菌株对照
2. 形态学检查
取纯培养物涂片革兰氏染色，观察菌体形态及染色性
抗 原
• O抗原：耐热，耐受100 ℃ 2h 特异性高，分群和分型的基础 • H抗原：不耐热，特异性低
性
抗
特性
霍乱弧菌的抗原结构 O抗原 H抗原 ＋ ＋ －
原
Hale Waihona Puke 属共同抗原 群特异性性
型特异性 耐热性 （100℃ 2h）
＋
＋
－
－
根据O抗原不同: 霍乱弧菌分155个血清群 根据与O1抗血清凝集与否：
大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻
大量脱水和失盐
发生代谢性酸中毒，血循环衰竭，甚至休克或死亡
二、临床意义
所致疾病
烈性肠道传染病 我国的法定传染病（甲类）
霍 乱
表现为剧烈的上吐下泻
泻出物呈“米泔水样”，并含 大量弧菌，此为本病典型的特 征
微生物学检查
标本采集
粪便（主） 肛拭子 呕吐物
尸体肠内容物
弧 菌 属
(Vibrio) 侯 珏 临 床 微 免 教 研 室
目的与要求 1、掌握霍乱弧菌及副溶血弧菌的主要生物 学性状、微生物鉴定方法 2、 熟悉霍乱弧菌及副溶血弧菌致病性
一、概述
弧菌科包括4个菌属 弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属 发光杆菌属 共性： 革兰氏染色阴性 氧化酶阳性 发酵糖类 具有极端单鞭毛
（2） 菌体(O)抗原 是分群的依据 （3） 表面(K)抗原
生物学性状
抵 抗 力 抵抗力弱 不耐冷不耐热 65℃30min即被杀死 耐碱怕酸
二、临床意义
1、致病因素: 粘附因子和毒素 （1）菌毛 （2）毒素 1）耐热性溶血素 细胞致死活性 溶血作用 肠毒性作用 心脏毒性 2）耐热相关溶血素 2、所致疾病 食物中毒、急性胃肠炎
鉴定依据
1、形态学 G—弧菌或杆菌，具有活泼动力， 制动试验阳性；
2、培养特点 弧菌选择培养基上菌落形态典型；
3、血清学 能与霍乱弧菌诊断血清发生明显凝集；
4、生化反应 分解葡萄糖、蔗糖，产酸不产气
氧化酶试验（+），霍乱红试（+） 粘丝试验（+）, O/129敏感试验(+)
报告方式
1、标本直接镜检：见形态典型、运动活泼、 制动试验（+），可作初报。 2、若确定为霍乱弧菌时，可报告：经培养有 霍乱弧菌生长。
“ 鱼群样排列"
• 单端单鞭毛，无荚膜，无芽胞
• 活菌悬滴镜检, 可见“ 穿梭或流星状运动”
霍乱弧菌（革兰染色，1000倍）
Vibrio cholerae with its single polar flagellum.
营养要求不高，生长较快 培 养 特 性
兼性厌氧
最适生长温度： 37℃ 怕酸嗜碱，最适pH:7.2-7.4 pH:7.4-9.6快速生长
TCBS琼脂：形成圆形、微凸、表面光 滑 湿润整齐、大黄色菌落 庆大霉素培养基：扁平、湿润、半透 明菌落中心呈灰褐色
血琼脂上形成的菌落较大，EL Tor生 物型可形成β -溶血