人凝血因子Ⅷ(FⅧ)ELISA试剂盒说明书
注射用重组人凝血因子VIIa说明书
注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa说明书 注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa可预防在外科⼿术过程中或有创操作中的出⾎。
下⾯是店铺⼩编整理的注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa说明书，欢迎阅读。
注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa商品介绍 通⽤名：注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa ⽣产⼚家: 丹麦诺和诺德公司 批准⽂号：注册证号S2******* 药品规格：60KIU(1.2mg)/⽀ 药品价格：￥7432元 注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa说明书 【药品名称】 【商⽤名】诺其 【通⽤名】注射⽤重组⼈凝⾎因⼦VIIa 【英⽂名】Recombinant Human Coagulation Factor VIIa for Injection 【主要成分】重组⼈凝⾎因⼦VIIa 【性状】为冻⼲制剂，为⽩⾊疏松体，⽆融化迹象。
按标⽰量加⼊灭菌注射⽤⽔溶解后应为澄清⽆⾊液体、⽆味、⽆⾁眼可见异物、⽆浑浊和沉淀。
【适应症】 ⽤于下列患者群体的出⾎发作及预防在外科⼿术过程中或有创操作中的出⾎。
凝⾎因⼦VIII或IX抑制物>5BU的先天性⾎友病患者; 预计对注射凝⾎因⼦VIII或凝⾎因⼦IX，具有⾼记忆应答的先天性⾎友病患者; 获得性⾎友病患者; 先天性因⼦VII缺乏症患者; 具有GpIIb-IIIa和/或HLA抗体和既往或现在对⾎⼩板输注⽆效或不佳的⾎⼩板⽆⼒症患者。
【⽤法⽤量】 伴有抑制物的⾎友病A或B或获得性⾎友病 ⽤量：应在出⾎发作开始后尽早给予诺其。
静脉推注给药，推荐起始剂量为90ug/每公⽄体重。
初次注射诺其后可能需再次注射。
疗程和注射的间隔将随出⾎的严重性、所进⾏的有创操作或外科⼿术⽽不同。
⽤药间隔：初间隔2-3⼩时，以达到⽌⾎效果。
如需继续治疗，⼀旦达到有效的⽌⾎效果，只要治疗需要，可增⾄每隔4、6、8或12⼩时给药。
轻度⾄中度出⾎发作(包括门诊治疗)：门诊治疗中，早期⼲预的剂量设定为90ug/每公⽄体重，可有效地治疗轻度⾄中度关节、肌⾁和粘膜与⽪肤出⾎。
注射用重组人凝血因子Ⅷ说明书
使用说明 使用本品包装中所提供的预装注射器中的稀释剂（0.9 %氯化钠溶液）复溶冻干粉后，进行静
脉注射给药。 配制：
在进行下列操作前须洗净双手。
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在复溶操作中应采用无菌操作（即洁净和无菌）。 本品复溶和给药所用的所有物品应在开启其无菌包装后尽快使用，以减少在空气中不必要的
系统 器官分类 （异 常）
表 2. 不良反应和发生率*
很常 见 ≥10%
常见 ≥1%
免疫系统异常
心脏异常
实验室检查
神经系统异常
代谢和营养异常 肌肉骨骼和结缔 组织异常
血管异常
呼吸、胸和纵隔 异常 胃肠道异常 皮肤和皮下组织
少见 ≥0.1%且
<1%
罕见 ≥0.01%且<0.1%
非常罕见 <0.01%
过敏反应
不良反应和发生率系统器官分类异常很常见10常见1少见01且1罕见001且01非常罕见001免疫系统异常过敏反应心脏异常心绞痛心动过速心实验室检查f抗体实验室值升高中国仓鼠卵巢细胞cho蛋白抗体实验室值升高磷酸肌酸激酶cpk升高天冬氨酸氨基转移酶升高丙氨酸氨基转移酶升高胆红素升高神经系统异常头痛头晕神经病变出汗增加嗜睡味觉改代谢和营养异常厌食肌肉骨骼和结缔组织异常关节痛血管异常出血血肿潮红血压血管舒张呼吸胸和纵隔异常咳嗽增加呼吸困难胃肠道异常呕吐恶心腹泻腹痛皮肤和皮下组织瘙痒皮疹荨麻疹20150120系统器官分类异常很常见10常见1少见01且1罕见001且01非常罕见001异常全身异常和用药部位异常发热乏力寒战永久性静脉通路导管并发症注射部位疼痛注射部位反应注射部位炎症因子抑制物?既往未接受过治疗的患既往接受过治疗的这些不良反应汇总了所有研究的不良事件和血友病事件不论与研究药物是否相关
注射用重组人凝血因子Ⅷ说明书
注意：如输注时需要使用 1 瓶以上的本品，每瓶药物都应按下列使用说明进行复溶。应移除 稀释液注射器，将接合器留在药瓶上，可另用 1 支一次性大容量无菌注射器，如路厄旋扣注射 器（luer lock syringe）抽取每瓶内的复溶物。直到抽取下一瓶药物时，才应当把待抽取药物的稀 释液注射器移除，并将大容量路厄旋扣注射器从上一瓶药物中取出插入待抽取药物瓶中。 复溶： 1. 使本品瓶内冻干粉末和预装稀释液的注射器放置至室温。 2. 移除小瓶上的塑料盖，露出胶塞的中央部分。
9. 将药瓶放在平整的台面上。将注射器尖部插入接合器开口处，顺时针用力旋转推动注射器 直到锁定，以将稀释液注射器连接在接合器上。
10. 缓慢下压注射器推杆，将所有稀释液注入药瓶内。
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11. 保持注射器与接合器相连接，轻轻摇晃药瓶内的液体，直到粉末溶解。 注意：注射前应肉眼检查最终溶液有无颗粒物质；此溶液应为无色澄清至淡乳白色，否则应
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疗进行监控尤为重要。
本品所标示的一个国际单位 (IU)的因子Ⅷ的活性大约相当于 1 ml 正常人血浆中的因子Ⅷ的含 量。所需因子Ⅷ剂量的计算基于实践经验，即每公斤体重的 1 IU 因子Ⅷ平均可使血浆因子Ⅷ的活性 升高约 2 IU/dL。可用下面的公式计算所需剂量： 需要剂量（IU）= 体重(kg) ×因子Ⅷ期望升高值（IU/dL 或% ）×0.5 [(IU/kg)/(IU/dL)]
对下列出血的控制和手术预防，根据以下的分期，因子Ⅷ活性不应低于下述相应阶段的特定血
浆因子活性水平（以正常值的%或 IU/dL 表示）。
表 1. 控制出血和手术预防的给药剂量指导
人血管内皮生长因子 ELISA 试剂盒说明书
产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒（Human VEGF ELISA KIT）产品货号：H6139S, H6139M, H6139L产品规格：24T, 48T, 96T产品内容：注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。
开封后，保存温度详见说明书。
产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。
人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第6号染色体长臂，由8个外显子和7个内含子交替构成，约14 kb。
由于mRNA剪接方式不同，产生了单链分别含121，145，165，183，189和206个氨基酸的不同变异体。
VEGF 121分子量约为34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165分子量为45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。
VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。
VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。
骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34+细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。
血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。
VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。
重组人凝血因子Ⅷ药品安全性及体内药学特性评价
重组人凝血因子Ⅷ药品安全性及体内药学特性评价霍记平;赵志刚【摘要】血友病A是凝血因子Ⅷ缺乏引起的出血性疾病,重组人凝血因子Ⅷ(重组FⅧ)因能大大降低病原体感染风险,被多数指南推荐使用.本文根据中国药品综合评价指南,对我国上市的4种重组FⅧ制剂的药品安全性和体内药学特性从两方面进行比较,以促进临床安全合理用药.这4种产品均可用于A型血友病出血的控制和预防,但4种药品在半衰期方面存在一定差异,在抑制物发生率差异方面尚需在临床实践中进一步验证.临床用药应结合患者个体情况,优先选择半衰期较长的药品,以使患者达到最佳治疗效果.【期刊名称】《药品评价》【年(卷),期】2019(016)010【总页数】5页(P3-6,37)【关键词】血友病A;重组FⅧ;安全性;体内药学特性【作者】霍记平;赵志刚【作者单位】首都医科大学附属北京天坛医院药学部,北京 100070;首都医科大学附属北京天坛医院药学部,北京 100070【正文语种】中文【中图分类】R969.1血友病是一种由凝血因子基因突变引起的X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病，主要分为血友病A(凝血因子Ⅷ缺乏)和血友病B(凝血因子Ⅸ缺乏)，分别约占所有血友病患者的80%～85%和15%～20%。
目前我国血友病的患病率为2.73/10万人口。
血友病患者严重出血时如不及时治疗可危及生命[1]。
凝血因子替代治疗是目前血友病有效的治疗措施，替代治疗药物主要包括重组人凝血因子Ⅷ(重组FⅧ)和血源性人凝血因子Ⅷ(血源FⅧ)[1]。
使用不含任何血液成分的基因重组因子能大大降低已知和未知病原体感染风险，多数指南推荐重组FⅧ治疗[2,3]。
由于不同品牌的药品质量差异较大，加上血友病患者需要终生治疗，这就给患者和医生选择药品带来很大压力[4]。
2018年发表在药品评价的《凝血因子Ⅷ药品综合评价》对中国上市的4种血源FⅧ和3种重组FⅧ进行了综合评价。
2018年新型重组FⅧ科跃奇®上市，为使不同重组FⅧ制剂综合评价更加全面，本文拟依据中国药品综合评价指南从药品安全性和体内药学特性两方面对目前国内市售的4种重组FⅧ制剂进行比较，以期为临床合理用药提供参考。
重组人凝血因子八因子说明书
重组人凝血因子八因子说明书
重组人凝血因子八因子（rFⅧ）是一种用于治疗血浆凝血因子Ⅷ（FⅧ）缺乏的甲型血友病的药物。
它可在纠正或预防出血、急诊或择期手术中暂时替代缺失的凝血因子。
使用方法：
用量：应根据患者的具体情况，如FⅧ缺乏的严重程度、出血的部位与范围以及患者的临床状况，由有治疗经验的医师确定剂量和治疗持续时间。
复溶后的药物必须在药物溶解后3小时内注射完毕。
不良反应：
在临床研究中，对曾接受治疗的患者进行了研究，发现注射4160次后有109例发生不良反应，占%。
禁忌：
对本品不耐受或有过敏反应者、对鼠或仓鼠蛋白过敏者禁用。
注意事项：
1. 本品用于治疗FⅧ缺乏的出血障碍。
在注射本品之前，应确诊患者FⅧ缺乏。
2. 甲型血友病患者接受治疗后，可能会产生FⅧ的中和抗体，尤其是严重的血友病患儿在治疗的第一年内，或曾用少量FⅧ治疗的任何年龄患者，产生抗体的情况尤为常见。
甲型血友病患者在治疗的任何时间都有可能产生抗体。
3. 药物相互作用：目前尚未发现和其他药物存在药物相互作用。
以上内容仅供参考，不作为专业的医疗意见。
在使用此类药物时，应始终遵循医疗专业人士的指导，确保安全有效地使用。
血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定
血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定摘要】目的讨论血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定。
方法对样本进行临床检验。
结论参考范围(一期法)FⅧ：C 54.29%～168.51%，FⅨ：C 50.09%～222.05%，FⅪ：C 81%～118%， FⅫ：C 61 %～148%。
因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性检测与Ⅱ：C、V：C、Ⅶ：C、X： C等一样，都是以相当正常人的百分活性来表示的，故工作参考值很重要，志愿者以100例为好，且年龄段分布要有代表性，制成的混合血浆在一30℃下也只能保持3个月。
每次检测都必须制作标准曲线。
【关键词】血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定参考范围(一期法)FⅧ：C54.29%～168.51%，FⅨ：C50.09%～222.05%，FⅪ：C81%～118%，FⅫ：C61 %～148%。
结果评价1.生理情况血浆凝血因子Ⅷ曾称为抗血友病因子(antihemophilic factor，AHF)或抗血友病球蛋白(antihemophilic globulin，AHG)，正常人血浆浓度很不稳定，一般为0.1mg/L，分子质量为3330000，肝脏可能是主要的合成场所，其基因定位于X性染色体(Xq28)，长度为186kb。
凝血因子Ⅸ也称为凝血活酶成分(plasma thromboplastin com-ponent，或叫christmas因子，分子质量为56000，正常血浆浓度为3～4mg/L，为肝脏合成的维生素K依赖性凝血因子，其基因定位于X染色体(Xq27.1)，长度为34kb。
凝血因子Ⅺ，又称血浆凝血活酶前质(plasma thromboplastin antecedent，PTA)，是一种较为稳定的凝血蛋白，血浆正常浓度为4～6mg/L，分子质量为160 000，由肝脏合成，基因定位于4号染色体(4q35)，长度为23kb。
因子Ⅻ，也称Hageman因子，正常血浆浓度为29mg/L，分子质量为80 000，主要由肝脏合成，基因定位于第5号染色体(5q33-ter)，长度为11.9kb。
重组人凝血因子八因子说明书
重组人凝血因子八因子说明书
重组人凝血因子八因子（rFVIII）是一种用于治疗和预防血友
病A的生物制剂。
血友病A是一种由于凝血因子八缺乏或功
能异常而导致的遗传性出血性疾病。
rFVIII通过提供缺失或不足的凝血因子八，补充患者体内的凝
血因子八水平，从而帮助恢复正常的凝血功能。
它是通过基因重组技术生产的，使用全反式工程中的人凝血因子八基因进行表达和制备。
rFVIII通常作为注射剂供应，用于将缺乏的凝血因子八补充到
患者体内。
它需要经过严格的质量控制和检测，以确保有效性和安全性。
使用rFVIII治疗血友病A的剂量必须根据患者的体重、凝血
因子八水平和具体情况来确定。
通常情况下，剂量应由医生根据患者的需要进行调整，以达到最佳的凝血功能。
rFVIII可能会引起一些不良反应，包括过敏反应、发热、头痛、注射部位疼痛等。
如果出现严重的不良反应，患者应立即停止使用，并及时就医。
虽然rFVIII可以显著改善血友病A患者的凝血功能，但并不
能治愈这种疾病。
患者仍需定期接受rFVIII治疗以维持凝血
功能的正常水平。
此说明书仅用于提供一般信息，请在使用rFVIII前仔细阅读产品说明书并遵循医生的指导和建议。
大鼠第八因子相关抗原 (FⅧAg)酶联免疫分析 试剂盒 说明书
大鼠第八因子相关抗原（FⅧAg）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠组织匀浆或其它相关生物液体中FⅧAg含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗FⅧAg抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗FⅧAg抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的FⅧAg呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20ng/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625 ng/ml，0.312ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制10ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）20ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100ul/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
注射用重组人凝血因子VIII说明书
9. 将药瓶放在平整的台面上。将注射器尖部插入接合器开口处，顺时针用力旋转推动注射器 直到锁定，以将稀释液注射器连接在接合器上。
10. 缓慢下压注射器推杆，将所有稀释液注入药瓶内。
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11. 保持注射器与接合器相连接，轻轻摇晃药瓶内的液体，直到粉末溶解。 注意：注射前应肉眼检查最终溶液有无颗粒物质；此溶液应为无色澄清至淡乳白色，否则应
呼吸困难
腹泻、呕吐、腹痛、恶 心 荨麻疹、皮疹、瘙痒 肌痛
多汗
寒战、导管部位相关反 应 抗体试验阳性、 抗因子 VIII 抗体试验 阳性
衰弱、注射部位反应、注射部 位疼痛、注射部位炎症 天冬氨酸转氨酶升高、丙氨酸 氨基转移酶升高、血胆红素升 高、血液中磷酸肌酸激酶增加
免疫原性（中和抗体） 临床试验期间和上市后收到的疗效不足报告主要来源于预防使用的患者。产生了抑制物的患者
曾报告过疗效不足和/或因子 VIII 恢复情况不佳的事件，但未发现抑制物的患者也出现过这些情况。 疗效不足表现为：特定关节出血、新发现的关节出血、其他出血或患者发现的新部位自发性出血。 为了确保充分的治疗反应，必须对每例患者进行个体化的递增剂量并进行监测，尤其是在开始接受 本品治疗的初期。
在关键的 III 期临床研究中（研究 310），既往接受过治疗的甲型血友病患者用本品进行常规预 防和按需治疗，94 例受试者使用了至少 1 剂本品，输液的总次数为 6775 次。这项研究的主要安全 性终点是对于本品因子 VIII 抑制物的发生率。上述 94 例患者中有 2 例患者（2.1%）出现了低滴度 的一过性抑制物。
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ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
凝血因子Ⅷ抑制物测定试验标准操作程序-202
凝血因子Ⅷ抑制物测定试验标准操作程序1 检验目的明确凝血因子Ⅷ抑制物测定试验的操作程序，指导检验人员正确进行凝血因子Ⅷ抑制物测定试验的检测。
测定甲型血友病患者血液中凝血因子Ⅷ抑制物的含量。
2 检测原理将受检者血浆与已知量的正常人因子Ⅷ血浆（乏血小板）混合，温育一定时间后，测定剩余凝血因子Ⅷ的活性，把受检温育混合物和正常温育混合物的因子Ⅷ活性进行比较，以Bethesda单位来计算抑制物的含量，1个Bethesda单位相当于灭活50%因子Ⅷ的量。
3 标本采集3.1 患者准备患者应处于休息状态下进行，早餐前采血。
服用某些药物或某些生理状况下（如怀孕、情绪激动或剧烈运动）会对一些凝血试验结果造成影响。
所以一般在进行此类检测时，应停用有关药物一周，因故不能停药者必须注明。
3.2 标本采集容器与添加剂血液标本采集的容器是一次性含枸橼酸钠溶液的真空采血管（蓝头）。
抗凝剂与血的比例是1:9（即1份抗凝剂与9份血液混合），此比例必须准确，否则影响检测结果。
若果血球比积<20%或>55%，须调整血与抗凝剂比例，方法是：0.00185×血液毫升数×（100-压积）=抗凝剂毫升数。
3.3 血浆，枸橼酸钠抗凝（抗凝剂与血的比例为1:9）。
4 设备和试剂4.1 设备4.1.1 STA-R全自动凝血分析仪4.1.2 恒温水浴箱4.2 试剂4.2.1 STA®-FⅧ(Cat.No.00725):凝血因子Ⅷ试剂，生产厂家法国STAGO公司；4.2.2 STA®-PTTA(Cat.No.00595):活化部分凝血活酶试剂，生产厂家法国STAGO公司。
4.2.3 STA.- OWREN-KOLLER缓冲液（Cat. No. 00360）。
4.2.4 STA.-氯化钙0.025M（Cat. No. 00367）。
4.2.5 STA.-通用定标血浆（Cat. No. 00675）。
4.2.6 STA®-系统质控N + P(Cal.No.00678):试剂盒中有正常和异常两个水平的质控血浆。
百因止说明书
百因止说明书∙通用名称：∙注射用重组人凝血因子Ⅷ∙功能主治：∙本品用于血浆凝血因子Ⅷ（FⅧ）缺乏的甲型血友病治疗。
在纠正或预防出血、急诊或择期手术中，本品起到暂时代替缺失的凝血因子的作用。
∙用法用量：∙在瓶签上本品用国际单位标示rFⅧ（重组人凝血因子Ⅷ）的效价，其效价用一期法测定。
复溶后的药物必须在药物溶解后3小时内注射完毕。
建议使用包装内提供的静脉注射用器具。
一般性治疗方法和疗效评估下述剂量提供了一般性指导原则。
须强调的是不同患者达到止血所需要的本品剂量各不相同，应视患者的需要、FⅧ缺乏的严重程度、出血的严重程度、抗体存在的情况和期望达到的FⅧ水平而定。
治疗时监控患者的FⅧ尤为重要。
FⅧ水平为疗效评估的重要因素。
为达到满意疗效，必要时使用剂量可高于计算值。
如果按公式计算的剂量注射后未达到预期的FⅧ水平，或出血未得到控制，应怀疑患者体内是否存在抗体。
通过实验室检查可检测和定量抗体。
存在抗体时，不同患者所需的FⅧ剂量差异较大，可根据疗效优化治疗方案。
某些低抗体滴度(<10BU)的患者应用FⅧ制剂成功治疗后，并未产生免疫记忆应答抗体滴度升高。
通过评估FⅧ的水平和临床疗效进行适宜治疗。
对FⅧ产生记忆应答或具有高滴度抗体的患者，必要时可选择其他治疗药物，如凝血因子IX复合物制剂、抗血友病因子（猪源性）、重组激活凝血因子Ⅶa或抗抑制剂凝血因子复合物。
剂量计算体内FⅧ水平升高的百分比可用每公斤体重注射本品的剂量（IU/kg）乘以每公斤体重每个单位的2%(2%/IU/kg)计算而得。
计算方法依据血浆FⅧ和重组AHF在临床使用的剂量，下面举例说明：预计的FVIII升高值(%)=#注射单位2%/IU/kg/体重70kg的成年人：1400IU2%、/IU/kg/70kg或者需要的剂量(IU)=体重(kg)预计的FVIII升高值/(2%/IU/kg)15kg的儿童：15kg100%/(2%/IU/kg)=750IU参照下述指导原则，根据出血的类型和严重程度计算到达止血所需要的注射剂量。
人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
人凝血因子Ⅷ效价测定一步法1 试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。
1.1.1 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。
1.1.23.8%枸橼酸钠溶液称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。
1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。
用前用生理盐水稀释至适当倍数。
1.3白陶土生理盐水混悬液称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。
1.4 基质血浆取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化钙溶液称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。
标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。
自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。
1.7待测样品按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。
2 测定2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。
2.2 标准品或标准血浆用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。
2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。
人凝血因子Ⅷ效价测定二步法
人凝血因子Ⅷ效价测定二步法1 材料1.1试剂1.1.10.05mol/L CaCl2溶液称7.35gCaCl2·2H2O（分析纯），加蒸馏水溶解，稀释至1000ml。
1.1.20.025mol/L CaCl2溶液称3.675gCaCl2·2H2O（分析纯），加蒸馏水溶解，稀释至1000ml。
1.1.3 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17gNaCl，溶于约100ml蒸馏水中，加37.2ml0.1mol/l HCl，加蒸馏水至200ml，pH为7.3～7.4。
1.1.4 枸橼酸盐-氯化钠溶液1份3.8%枸橼酸三钠溶液加5份0.85%NaCl溶液混匀。
1.1.5Al(OH)3胶a称（NH4）2SO45.5g，溶于150ml63℃蒸馏水中。
B称氨明矾19.175g，溶于250ml58℃的蒸馏水中。
C最取12.5ml氨水（比重0.88），加12.5ml蒸馏水。
三种溶液配毕后，立即将c液迅速倒入a液中搅匀，然后在搅拌下将此混合液迅速倒入b液，用力搅拌10分钟（保持温度不低于58℃），离心（2500r/min，15分钟），弃上清，沉淀洗涤5次。
第一次：用75ml蒸馏水加0.055ml氨水（比重0.88）混匀，离心，弃上清。
第二次：用75ml蒸馏水加0.11ml氨水（比重0.88）混匀，离心，弃上清。
第三、四、五次分别用75ml蒸馏水洗。
将沉淀物悬浮于总体积为175ml蒸馏水中，混匀，分装，4℃保存。
1.1.6 正常人血清分别收集20份以上正常人血于干燥灭菌的玻璃瓶中，待血凝固后，放于37℃保温5～6小时，置4℃冰箱过液，分离血清，混匀，定量分装（0.5ml/安瓿），冷冻干燥，-20℃保存。
缓冲液作1∶10稀释，4℃冰箱过夜（使血清活化），试验当日再用咪唑缓冲液作最适浓度稀释（一般为1∶20），置冰浴备用。
1.1.7 牛Ⅴ因子收集公牛血于干燥灭菌的玻璃容器中，室温放置4小时，离心（2500r/min，30分钟），分离血清，取血清加10%（g/ml）BaSO4在室温下搅拌吸附40分钟，离心（2500r/min，40分钟），弃沉淀，定量（1ml/瓶）分装，冷冻干燥，-20℃保存。
8因子说明书
因子分析，相较于主成分分析而言，通过对因子的旋转处理，使得我们可以更直观的认识到数据内部之间的关系，其目的即用有限个不可观测的因变量来解释原始变量间的相关关系。
即用几个少数的综合因子来取代错综复杂关系的变量。
因子分析函数：factanal(x,factors,scores=”none”,rotation=”varimax”) 这个函数是基于极大似然方法求解x为数据，矩阵或者数据框factors为因子个数scores为因子得分的计算方法，”regression”,”bartlett”rotation为因子旋转方法自编因子分析函数：factpc(x,m,scores=”none”,rotation=”varimax”) 这个函数是基于主成分方法来求解的。
极大似然法要求数据来自多元正态分布，这一点一般是很难满足的。
而主成分法没有正态总体的要求。
对于数据d9.1 水泥行业运营因素做因子分析。
输入：> x=read.table(clipboard,header=t) > cor(x) #计算相关系数矩阵#极大似然法进行因子分析 > fa0=factanal(x,3,rotation=none) > fa0 call:factanal(x = x, factors = 3, rotation = none) uniquenesses: x1 x2 x3x4 x5 x60.005 0.005 0.005 0.271 0.005 0.548 loadings: #因子载荷矩阵factor1 factor2 factor3 x1 0.950 -0.307 x2 0.948 -0.310x3 -0.340 -0.782 0.517 x4 0.363 0.561 -0.531 x5 0.454 0.693 0.556 x6 0.383 0.163 0.527factor1 factor2 factor3 ss loadings 2.402 1.623 1.140 proportion var 0.400 0.271 0.190 #方差贡献率 cumulative var 0.4000.671 0.861 #累计方差贡献率the degrees of freedom for the model is 0 and the fit was 1.1422 #主成分法进行因子分析> library(mvstats)> fa1=factpc(x,3) $vars #方差方差贡献率累计方差贡献率vars vars.prop vars.cumfactor1 2.570 0.4283 42.83 factor2 1.713 0.2855 71.38 factor31.249 0.2082 92.19$loadings #载荷矩阵 factor1 factor2 factor3 x1 0.7829 0.5029 -0.3624 x2 0.7811 0.4964 -0.3756 x3 -0.5786 0.7685 0.0802 x4 0.5951 -0.6990 -0.2415 x5 0.6317 -0.1457 0.6557 x6 0.5084 0.3367 0.6943 $scores #因子得分factor1 factor2 factor3 冀东水泥 1.10805 0.19287 -0.40233 大同水泥 -1.07195 1.46385 -0.37413 四川双马 -0.58577 -0.49848 0.24193 牡丹江 -1.17442 -0.77791 0.08986 西水股份 -0.05264 -0.46073 2.31615 狮头股份 -1.05007 2.04151 0.25174 太行股份 0.20807 0.48809 -0.23430 海螺水泥 2.20745 0.32524 1.16336 尖峰集团 -1.11541 -1.53235 0.39013 四川金顶 0.09714 -0.60602 -1.45691 祁连山 0.66096 1.03293 0.04173 华新水泥 0.41359 -1.08331 0.19805 福建水泥 0.86840 -0.53255 -1.82104 天鹅股份 -0.51340 -0.05315 -0.40422 $rank #得分排名 f ri 冀东水泥 0.48359 3大同水泥 -0.12910 8四川双马 -0.37184 11牡丹江 -0.76615 13西水股份 0.35587 4狮头股份 0.20127 5太行股份 0.19490 6海螺水泥 1.38882 1尖峰集团 -0.90457 14四川金顶 -0.47152 12祁连山 0.63632 2华新水泥 -0.09863 7福建水泥 -0.17273 9天鹅股份 -0.34622 10 x1 x2 x3 x4 x5 x6 0.9971 0.9976 0.9318 0.9011 0.8502 0.8539从上面结果来看，用极大似然法解释的方差为86%，基本可以全面反映六项财务指标的信息。
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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）凝血因子Ⅷ（FⅧ）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被凝血因子Ⅷ（FⅧ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的凝血因子Ⅷ（FⅧ）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最低检测浓度小于1.0U/L。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
上海笃玛生物科技有限公司FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.Human coagulation factorⅧ(FⅧ)ELISA KitinstructionIntended useThis FⅧELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of FⅧin the sample,this FⅧELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus FⅧconcentration.The concentration of FⅧin the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum-Use a serum separator tube and allow samples to clot for30minutes before centrifugation for10minutes at approximately3000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma-Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant.Centrifuge samples for30minutes at3000×g at2-8℃within30minutes of collection.Store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids-Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1.Standard microplate reader(450nm)2.Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.37℃incubatorPrecautions1.Do not substitute reagents from one kit to another.Standard,conjugate and microplates are matched for optimal e only the reagents supplied by manufacturer.2.Do not remove microplate from the storage bag until needed.Unused strips上海笃玛生物科技有限公司should be stored at2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3.Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature (20-25°C)Materials suppliedName96determinations48determinations Microelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent 6.0ml 3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml 5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A 6.0ml 3.0mlChromogen Solution B 6.0ml 3.0mlStop Solution 6.0ml 3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note:Standard(S0→S5)concentration was followed by:0,25,50,100,200,400 U/LReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water1:20.Assay procedure1.Prepare all re a g e n t s before starting assay procedure.It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2.Add standard:Set Standard wells,testing sample wells.Add standard50μl to standard well.3.Add Sample:Add testing sample10μl then add Sample Diluent40μl to testing sample well;Blank well doesn’t add anyting.4.Add100μl of HRP-conjugate reagent to each well,c over with an adhesive strip and incubate for60minutes at37°C.5.Aspirate each well and wash,repeating the process four times for a total of five washes.Wash by filling each well with Wash Solution(400μl)using a squirt bottle, manifold dispenser or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.6.Add chromogen solution A50μl and chromogen solution B50μl to each well. Gently mix and incubate for15minutes at37°C.Protect from light.7.Add50μl Stop Solution to each well.The color in the wells should change from blue to yellow.If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.8.Read the Optical Density(O.D.)at450nm using a microtiter plate reader within15minutes.上海笃玛生物科技有限公司Calculation of results1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample.The standard curve is generated by plotting the average O.D.(450nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical(Y)axis versus the corresponding concentration on the horizontal(X)axis.2.First,calculate the mean O.D.value for each standard and sample.All O.D.values,are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation.Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3.To determine the amount in each sample,first locate the O.D.value on theY-axis and extend a horizontal line to the standard curve.At the point of intersection,draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4.Any variation in operator,pipetting and washing technique,incubation time ortemperature,and kit age can cause variation in result.Each user should obtain their own standard curve.5.The sensitivity by this assay is1.0U/L6.StandardcurveStorage：2-8℃.validity：six months.FOR RESEARCH USE ONLY;NOT FOR THERAPEUTIC ORDIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE READ THROUGHENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!上海笃玛生物科技有限公司。