创伤患者金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学研究
金黄色葡萄球菌的致病和耐药机制研究进展分析
金黄色葡萄球菌的致病和耐药机制研究进展分析摘要：金黄色葡萄球菌又称为SA，为临床中感染率较高的致病菌，其具有较强的致病性，具有高发病率，且传播迅速，促使治疗的难度升高。
SA 可以产生生物膜、凝集因子、肠毒素各种外毒素等多种致病因子，可诱导生成修饰酶，通过将药物的作用靶点进行改正，从而促使细胞壁通透性下降，导致各类结构不同的抗生素产生程度各异的耐药性。
本研究就对于金黄色葡萄球菌的耐药机制及致病因素、机制进行综述，具体综述如下：关键词：SA；耐药机制；致病机制；进展金黄色葡萄球菌又称SA，为机体脓性感染的常见致病菌体，为导致细菌性肺炎、中毒、脑膜炎等全身感染的菌体[1]。
随着临床中抗生素药物的广泛应用，近年来革兰氏阳性、阴性菌的感染率显著提高，且以SA的耐药性最强，如在临床中，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌普遍分布，且获得了临床中医师、药师的高度关注[2]。
本研究就对于金黄色葡萄球菌的耐药机制及致病因素、机制进行综述，具体综述如下：1、SA的耐药机制大量研究表明，当抗生素使用途径或方法不当可导致金黄色葡萄球菌的耐药菌株增加，还可导致多重耐药细菌的产生，危及患者生命安全。
1.1大环内酯类抗生素药物金黄色葡萄球菌可在大环内酯类药物的作用下生成耐药性，其染色体及质粒上的基因为导致耐药性的主要因素，尤其为ermA、ermB、ermC。
有研究表明，大环内酯类药物可对菌核糖体进行作用[3]，从而将蛋白质的合成过程进行抑制、阻断，从而发挥强效的抗菌效果。
然而该类药物的耐药性可于23S rRNA甲基化而导致，促使RNA及大环内酯类药物的亲和力降低，从而导致耐药性[4]。
不仅如此，由于核糖体出现突变，其23S的rRNA碱基出现突变，导致大环内酯类的药物出现较大的耐药性。
1.2 β-内酰胺类的耐药机制由于SA的耐药基因为mecA，其β-内酰胺酶作用于SA，SA可产生耐药性，其mecA发挥显著的作用[5]。
PBPs，又称细菌菌体表面合成青霉素结合蛋白，其在促进细菌生长方面发挥关键的作用[6]。
临床金黄色葡萄球菌感染的分布及耐药性分析
临床金黄色葡萄球菌感染的分布及耐药性分析发表时间：2014-03-06T16:37:57.467Z 来源：《医药前沿》2013年第35期供稿作者：甘连乐[导读] 金黄色葡萄球菌可产生多种外毒素及侵袭性酶，是医院及社区获得性感染的主要致病菌之一，可引起各系统严重的感染。
甘连乐（广西宁明县人民医院检验科广西宁明 532500）【摘要】目的：了解本院近5年临床金黄色葡萄球菌感染的分布和耐药性情况,为临床合理选用抗菌药物提供依据。
方法：采用常规方法进行微生物鉴定及K-B法和Etest法进行药物敏感性试验。
药敏结果使用WHONET5.6软件进行统计分析。
结果：近5年共收集到316株金黄色葡萄球菌，住院患者占287株（88.6%），来自门诊患者占29株（11.4%）。
其中MRSA占192株（60.8%）。
住院分离菌株主要来源科室为ICU占32.3%（102/316），其次是神经外科、骨外科和呼吸内科，分别占26.9%（85/316）、18.4%（58/316）和10.1%（32/316）。
主要标本来源为呼吸道标本（痰、灌洗液）占48.1%（152/316），伤口、脓液等各类分泌物占36.7%（116/316）。
MRSA多重耐药性严重，对多数所测药物的耐药率高于70%，MSSA对多数药物的耐药率低于40%。
本次调未发现利奈唑胺耐药和万古霉素不敏感金黄色葡萄球菌。
结论：利奈唑胺和万古霉素对金黄色葡萄球菌具有很强的抗菌活性；应重视微生物标本的送检和MRSA的主动监测，临床应加强抗菌药物使用管理。
【关键词】金黄色葡萄球菌抗菌药物分布耐药性【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）35-0222-02金黄色葡萄球菌可产生多种外毒素及侵袭性酶，是医院及社区获得性感染的主要致病菌之一，可引起各系统严重的感染。
随着临床各类抗生素的广泛应用，多重耐药菌株特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出率越来越高，是临床抗感染治疗需面临最为棘手的问题之一。
耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 - 易感人群
1、长期住院使用抗生素患者； 2、ICU患者； 3、皮肤病患者； 4、烧伤病房患者； 5、糖尿病（胰岛素依赖型）； 6、长期腹膜透析/血液透析。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 - 危害 1、感染率越来越高，且病情严重； 2、治疗更加困难； 3、感染其他住院病人； 4、不仅存在于医院，监狱和学校也有出现。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 - 流行病学 传染源——MRSA定植者和感染者 传播途径——接触传播（医护人员、器械传播）
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 - 特性 不均一耐药性 MRSA菌落内细菌存在敏感和耐药两个亚群， 即一株MRSA中只有一小部分细菌约10－4～10－7，对甲氧西林高度耐 药，在50 μg/ml甲氧西林条件下尚能生存，而菌落中大多数细菌对 甲氧西林敏感，在使用抗生素后的几小时内大量敏感菌被杀死，但少 数耐药菌株却缓慢生长，在数小时反又迅速增殖。 广谱耐药性 MRSA除对甲氧西林耐药外，对其它所有与甲氧西林相同结构的 β-内酰胺类和头孢类抗生素均耐药，MRSA还可通过改变抗生素作用 靶位，产生修饰酶，降低膜通透性产生大量PABA等不同机制，对氨基 糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、磺胺类、利福平均产 生不同程度的耐药，唯对万古霉素敏感。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 - 感染病情 1、MRSA是引起不少深部感染的主要致病菌，如肺部感染、脓毒性关 节炎、心内膜炎、败血症等； 2、MRSA能引起许多皮肤、皮肤结构与软组织感染，如脓疱病、烧伤 感染、创伤感染、烫伤样皮肤综合征、中毒性休克综合征（TSS）； 3、MRSA引起的感染具有很高的发病率和病死率。[2]
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 - 治疗对策 1、万古霉素，替考拉宁 2、利奈唑烷 3、链阳霉素 4、TMPCo 5、利福平
金黄色葡萄球菌在人体创伤中的治病作用及预防措施
性 关 节 炎 、骨 髓 炎 以 及 脑 膜 炎 、败 血 症 、心 内 膜 炎 等 严 重 感 染 。
主 免 疫 力 降 低 时 ，才 易 引 起 葡 萄 球 菌 感 染 。所 以 人 们 在 注 意 卫 生 做 好 创
注 意 个 人 卫 生 ，对 创 面 及 时 消 毒 。 这 是 最 基 本 的 预 防 措 施 ，医 用 双
的 非 特 异 性 保 护 屏 障 。此 时 ，外 环 境 中 大 量 的 细 菌 、病 毒 和 真 菌 等 物 质 氧水 、碘 伏 、无 菌 棉 签 和 纱 布 等 应 是 家 庭 必 备 品 。 ［７］ 此 外 ，还 应 根 据 具 体
感 染 的 机 率 较 大 。 ［２，３］
生 指 导 下 用 药 。更 严 重 的 创 伤 如 车 祸 ，病 人 往 往 在 公 路 上 发 创 口 接 触 外
由 于 金 黄 色 葡 萄 球 菌（以 下 简 称 金 葡 菌 ）多 数 严 重 感 染 案 例 仍 为 院 界 环 境 ，病 情 严 重 危 急 ，再 伴 有 细 菌 感 染 的 发 生 ，可 能 会 发 生 多 器 官 功 能
对外 来 物 质 进 行 防 御 性 的 炎 症 反 应 ，此 刻 感 染 发 展 还 取 决 于 机 体 免 疫 力 葡 菌 的 概 率 极 大 ，此 时 在 临 时 消 毒 的 前 提 下 ，结 合 自 身 身 体 素 质 免 疫 力 ，
的 情 况 ，患 有 基 础 疾 病 、免 疫 缺 陷 、老 人 、儿 童 等 免 疫 力 较 低 者 发 生 严 重 免 疫 力 低 者 可 加 服 用 抗 生 素 ，预 防 全 身 感 染 的 发 生 ，且 最 好 到 医 院 在 医
创 伤 疾 病 是 在 人 类 社 会 较 为 常 见 的 一 种 疾 病 ，而 且 属 于 日 常 多 发 的 量众 多 的 金 葡 菌 入 侵 及 毒 素 大 量 释 放 ，严 重 感 染 治 病 的 几 率 较 之 注 意 健 情况 ，近 年 来 ，随 着 社 会 经 济 的 发 展 ，交 通 、建 筑 发 展 迅 速 ，导 致 创 伤 的 发 康 卫 生 群 体 大 大 增 加 。 ［６］
金黄色葡萄球菌耐药性、耐药机制与分子流行病学研究
研究成果
研究成果
在金黄色葡萄球菌肠毒素的研究方面，已经有许多重要的成果。例如，研究 者们已经成功研发出针对肠毒素的特异性抗体和疫苗，能够有效预防和治疗金黄 色葡萄球菌引起的食物中毒等疾病。此外，还发现了某些药物可以抑制肠毒素的 产生或作用，为治疗耐药性金黄色葡萄球菌感染提供了新的思路。
研究成果
三、耐甲氧西林菌株全基因组测序
综上所述，奶牛乳腺炎性金黄色葡萄球菌耐药基因检测、分子分型和耐甲氧 西林菌株全基因组测序对于奶牛乳腺炎的防控具有重要意义。通过合理运用这些 技术手段，我们可以更好地了解病原菌的特性和演化过程，制定科学的防控措施， 从而保障畜牧业的健康发挑战
3、研发新的治疗方法和策略。当前针对金黄色葡萄球菌耐药性的治疗方法和 策略主要包括窄谱抗生素、抗生素联合治疗、生物制剂等，但这些方法的效果仍 需进一步验证和完善。因此，研发新的治疗方法和策略是未来的重要研究方向。
未来研究的方向和挑战
4、加强国际合作与交流。金黄色葡萄球菌耐药性的问题具有全球性，需要全 球范围内的合作与交流，分享经验和知识，共同应对这一公共卫生挑战。
耐药基因的检测可以指导临床合理用药，防止滥用抗生素，有效延缓耐药性 的产生。已经发现多种耐药基因存在于金黄色葡萄球菌中，如耐甲氧西林基因 mecA、耐万古霉素基因vanA等。通过聚合酶链反应(PCR)、序列分析等分子生物 学方法，可以快速、准确地检测这些耐药基因。
二、奶牛乳腺炎性金黄色葡萄球 菌分子分型
三、耐甲氧西林菌株全基因组测序
此外，政府部门和相关研究机构也需加强对耐药性的监测和管理，开展耐药 性的风险评估和流行病学调查。同时，要加大新药研发力度，寻找更加有效的抗 菌药物，以应对耐药性的挑战。
三、耐甲氧西林菌株全基因组测序
骨科创伤感染患者伤口病原菌分布及耐药性分析
骨科创伤感染患者伤口病原菌分布及耐药性分析孙景熙王福斌▲陈剑明孙永宁宁波市第六医院重症医学科,浙江宁波315040[摘要]目的了解骨科创伤感染患者病原菌分布特点,为合理使用抗菌药物提供依据。
方法分析本院2014~2016年骨科创伤患者伤口感染2302株病原菌分布特点及对抗菌药物敏感性,对细菌培养阳性并鉴定细菌采用K-B纸片扩散法及最低抑菌浓度琼脂稀释法进行药物敏感性试验。
结果4903份感染伤口共分离出53种2302株细菌,前十位细菌占68.02%。
革兰阴性菌占41.52%,革兰阳性菌占26.49%。
革兰氏阴性菌前几位为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌。
革兰氏阳性菌前几位为金黄色葡萄球菌、粪肠球菌。
药敏结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为9.6%和9.1%;鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为49.6%和46.6%;肠杆菌科细菌对两种碳青霉烯类的耐药率在10%以下。
未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的凝固酶阴性葡萄球菌及金黄色葡萄球菌。
结论骨科创伤感染患者伤口分泌物未检出耐利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁的凝固酶阴性葡萄球菌及金黄色葡萄球菌株。
革兰阴性杆菌呈多重耐药性,均有检出耐碳青霉烯类抗生素的菌株,应积极采取有效措施遏制此类细菌在医院的扩散传播。
[关键词]感染;病原菌分布;耐药性;骨科创伤[中图分类号]R446.5[文献标识码]A[文章编号]1673-9701(2018)17-0004-05 Distribution and drug resistance of pathogenic bacteria in patients with orthopedic trauma infectionSUN Jingxi WANG Fubin CHEN Jianming SUN YongningDepartment of Critical Care Medicine,the Sixth Hospital of Ningbo,Ningbo315040,China[Abstract]Objective To investigate the distribution of pathogenic bacteria in patients with orthopedic trauma infection, in order to provide the basis for rational use of antibacterial agents.Methods We analyzed the distribution and suscep⁃tibility to antibiotics of2302strains of pathogenic bacteria in patients with orthopedic trauma in our hospital from2014 to2016.Pathogens that positive in bacterial culture were identified and drug susceptibility test were conducted using K-B disk diffusion method and minimal inhibitory concentration agar dilution method.Results A total of53kinds, 2302strains of bacteria were isolated from4903infected wounds,with the top ten bacteria accounting for68.02%. Gram-negative bacteria accounted for41.52%and Gram-positive bacteria accounted for26.49%.The first few Gram-negative bacteria were Escherichia coli,Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae.The first few Gram-posi⁃tive bacteria were Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis.Drug susceptibility results showed that the resis⁃tance rate of Pseudomonas aeruginosa to imipenem and meropenem were9.6%and9.1%,respectively;resistance rate of Acinetobacter baumannii to imipenem and meropenem were49.6%and46.6%,respectively;resistance rate of Enter⁃obacteriaceae to the two carbapenems were less than10%.No coagulase-negative staphylococci and staphylococcus aureus were found to be resistant to vancomycin,teicoplanin and linezolid.Conclusion Linezolid,vancomycin and te⁃icoplanin-resistant coagulase-negative Staphylococcus aureus and Staphylococcus aureus strains were not detected in wound secretions of patients with orthopedic trauma infection.Gram-negative bacilli showed multi-drug resistance,all of which had strains detected to be resistant to carbapenem.Effective measures should be taken to prevent the spread of such bacteria in hospitals.[Key words]Infection;Distribution of pathogens;Drug resistance;Orthopedic trauma我院创伤骨科所处的地理环境及专科优势明显,骨科创伤患者较多。
金黄色葡萄球菌的耐药机制研究现况
金黄色葡萄球菌的耐药机制研究现况近年来，耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)感染的耐药率和多重耐药菌株不断增长，导致临床抗感染治疗难度增加。
金黄色葡萄球菌是引起化脓性感染和医院感染的常见病原菌。
数十年来，由于细菌的进化和抗生素的滥用，该菌的耐药性逐渐增强，特别是甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌。
为了及时了解该菌的耐药情况，本文从分子水平阐明了其对几种常见抗菌药物耐药机制，对于医务人员从分子生物学角度对临床耐药性加以研究，治疗金黄色葡萄球菌引起的感染，指导临床合理用药，减少耐药性的产生具有重要意义。
1甲氧西林耐药机制甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌是指表达mecA基因或具有其它甲氧西林耐药机制的金黄色葡萄球菌J。
目前，实验室利用苯唑西林或头孢西丁代替甲氧西林进行MRSA检测。
临床微生物实验室检测MRSA，常利用药敏纸片法(K—B 法)，该法将30片头孢西丁纸片贴在培养基上，35℃培养24 h，当抑菌环大于或等于22 mm判为苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌，小于或等于21 HnTI则为苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌。
青霉素结合蛋白(PBP)是金黄色葡萄球菌细胞壁主要成分肽聚糖合成过程中所必需的转肽酶，其催化细胞外五肽侧链的交联而构成肽聚糖网状立体结构。
金葡菌正常的PBP有PBP1、PBP2、PBP3和PBP4 [1]，B-内酰胺类抗生素通过与PBPs结合抑制其酶活性，从而阻碍细胞壁肽聚糖交联，使得细菌细胞壁合成被破坏而死亡。
而MRSA能产生一种新的特殊的PBP2a。
PBP2a常由B一内酰胺类抗生素诱导，对大多数8-内酰胺类抗生素亲和力低，由于其可替代高亲和力的正常PBPs催化肽聚糖交联，使细菌得以逃逸B-内酰胺类抗生素的作用而表现出耐药性[2]。
治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌，首选药物为万古霉素。
然而，目前国际上已经出现了万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。
2万古霉素耐药机制万古霉素为糖肽类抗生素，主要抑制细胞壁的合成。
细胞壁前体D一丙氨酰一D一丙氨酸是万古霉素的作用靶位。
金黄色葡萄球菌的研究进展汇总
金黄色葡萄球菌的研究进展汇总金黄色葡萄球菌，也称“金葡菌”，细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸，是一种重要的院内感染细菌。
抗生素的使用以及滥用催生并富集了耐药性菌株，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染已成为最难解决的感染性疾患。
目前，细菌毒力因子的表达调控正在成为病原细菌学研究的热点，研究的深入将会给新型的抗细菌感染策略—抗毒力治疗(Anti-virulence therapies)提供理论基础和切入点。
抗金黄色葡萄球菌理论的研究研究发现，在金黄色葡萄球菌细菌毒力调节因子SarA蛋白家族中存在一种新的蛋白质修饰—半胱氨酸的磷酸化，并由一对蛋白激酶-蛋白磷酸酯酶(Stk1-Stp1)所控制。
细菌的毒力调节因子SarA家族蛋白包括MgA、SarA和SarZ等蛋白分子中半胱氨酸的磷酸化修饰引起了蛋白质构象的变化从而调节了金黄色葡萄球菌毒力因子的产生以及细菌对万古霉素的抗性。
靶向细菌细胞壁的抗生素如万古霉素及头孢曲松能够抑制蛋白激酶Stk1的活性。
stp1基因的缺失导致了SarA/MgrA蛋白半胱氨酸的磷酸化水平的增加、细菌产生毒力因子溶血素的能力减弱并使得细菌丧失在小鼠体内的致病能力。
这些研究为开发高效特异、以磷酸酯酶stp1为靶向蛋白的小分子抑制剂提供了理论基础。
芝加哥大学何川教授曾表示“新研究印证了我们之前的猜测，表明RNA修饰有可能具有远比人们所认为的要大得多的遗传学影响。
这或将意味着一个新研究领域——RNA表观遗传学之门的开启。
”1金黄色葡萄球菌的耐药性研究万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的出现使细菌感染再次成为非常棘手的临床问题，2003年美国CDC制定了“VRSA/VISA检测和控制指南”，2005年NCCLS药敏试验执行标准中增加了万古霉素耐药金黄色葡萄球菌检测方法，要求各实验室开展对万古霉素耐药菌的监测。
在万古霉素敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)中含有5种与b-内酰胺类抗生素亲和力高的青霉素结合蛋白(PBP)，即PBP1、PBP2、PBP3、PBP3’和PBP4，总称为PBPs，PBPs具有羧肽酶或转肽酶作用，主要参与细胞壁粘肽层的合成，对于细菌生长繁殖、保持正常形态起重要的作用，是细菌生长、繁殖所必需的。
感染科中的病原菌分子流行病学研究
感染科中的病原菌分子流行病学研究【感染科中的病原菌分子流行病学研究】随着现代医学科技的发展，病原菌分子流行病学已经成为感染科研究的重要方向之一。
通过对病原菌的分子特性、感染机制以及流行规律的研究，可以更好地理解和控制感染疾病的传播和流行。
本文将探讨感染科中病原菌分子流行病学研究的重要性、方法以及未来发展趋势。
一、病原菌分子流行病学的重要性病原菌分子流行病学是通过研究病原菌的基因组、基因表达、变异、传播途径以及宿主因素等方面的信息，来揭示疾病在人群中的传播规律和影响因素。
通过对病原菌的分子流行病学研究，可以帮助我们了解以下几个方面的问题：1. 病原菌的来源与传播途径：病原菌分子流行病学可以通过分析菌株间的遗传相似性和与宿主间的关联性来确定病原菌的来源与传播途径，从而帮助我们追踪病原菌的传播链，及时采取控制措施。
2. 病原菌的演化与变异：通过分析病原菌在不同时间和地理位置的变异情况，可以推断其演化历史，为制定针对性的预防策略提供依据。
3. 感染疾病的流行规律：通过对病原菌感染和传播过程的研究，可以揭示感染疾病的流行规律，帮助我们了解疾病的发病机制、高危人群以及有效的防控措施。
二、病原菌分子流行病学的研究方法1. 基因组学研究：通过测序病原菌的基因组，可以了解其基因组组成、变异情况以及与其他菌株的关系。
基因组学研究可以通过比较分析来揭示病原菌的来源、传播途径及其与宿主的关系。
2. 基因表达研究：病原菌在感染宿主过程中的基因表达变化可以揭示其适应性进化和致病机制。
通过转录组学和蛋白质组学等方法，可以研究病原菌感染宿主后基因的调控情况，从而对疾病发生发展的分子机制有更深入的了解。
3. 流行病学调查：结合病原菌基因组学研究方法，进行流行病学调查可以追踪病原菌的传播链，并找到潜在的感染源和传播途径。
流行病学调查可以通过问卷调查、数据分析等方法，收集大量的流行病学数据，为制定疾病的防控策略提供科学依据。
三、病原菌分子流行病学的未来发展趋势1. 病原菌基因组学的应用扩大：随着高通量测序技术的发展和成本的降低，基因组学研究将成为病原菌流行病学中的重要手段。
骨科手术后伤口感染MRSA的原因分析及预防策略
骨科手术后伤口感染MRSA的原因分析及预防策略发表时间：2014-04-04T09:53:47.123Z 来源：《医药前沿》2014年第2期作者：周秋莉[导读] MRSA是多重耐药菌的一种，叫做耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，具有接触传播的特性。
周秋莉（贵港市覃塘区人民医院骨科二区广西贵港 537121）【摘要】目的探讨分析骨科术后伤口感染MRSA的原因，并采取有效预防措施提高手术成功率，观察预防效果。
方法采用回顾性调查分析法对2013年1月-2013年12月在我科实施的600例手术伤口情况进行调查。
结果 2013年1月-2013年12月共发生6例术后伤口感染MRSA。
感染率为0.01%。
其中医务人员手卫生、手术室环境、患者自身伤口情况均是引起术后伤口感染MRSA的因素。
采取无菌操作、改善手术室及病房环境、加强医务人员手卫生、建立管理监护体系等方式予以预防，取得了良好的预防效果。
结论对骨科术后伤口引发MRSA感染的因素予以预防，有利于提高患者的手术治愈成功率，改善患者身体状况，提高患者的满意度，值得临床推广。
【关键词】骨科手术伤口感染 MRSA 原因分析预防策略【中图分类号】R619 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）02-0068-02 MRSA是多重耐药菌的一种，叫做耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，具有接触传播的特性。
骨科患者术后感染MRSA，不仅会增加患者的住院时长，也会增加患者支出的经济费用，不利于患者的身体健康与精神健康。
因此必须找出感染因素，并采取有效措施予以预防，提高患者的手术治愈成功率，减轻患者的经济负担和心理负担。
本文通过对在我科进行手术治疗的患者的临床治疗资料进行分析，观察引起手术部位感染MRSA的原因，现将结果报道如下。
1.资料与方法1.1一般资料对我科自2013年1月—2013年12月实施的600例骨科手术进行资料分析，并配合医院感染管理科展开调查，采取有效措施予以预防。
创伤患者伤口分泌物细菌分布及耐药性分析
用． 具有 一 定 的临 床 病理 意 义 ， 判 断 大 肠癌 的浸 对
润 和淋 巴结 转移起 到重要 的作用 。 有 研 究 表 明 ，Ｔ Ｎ突 变 或缺 失 可 促进 血 管 内 ＰＥ
ｃｎｅ［］ ｄＰ ｔｏ，ｏ ｌ ｌ （ ）６ ２ ６ ６ ａｃｒＪ． ａｈｌ２ ｏ ，４ ７ ：７ － ７ ． Ｍｏ
调查结果。
对 于 创 伤 患 者伤 口感 染 ，经 验 性 选 择 抗 生 素应 依 据 当 地 细 菌 流 行 病学
【 关键词 】 创伤； 细菌感染 ； 耐药性 【 中图分类号】 ６ １ 【 ４ 文献标识码 】 Ａ
在 临床创 伤外 科领 域 中 ， 菌感 染仍 然 是较 为 细 常见 也是 非常 重要 的一 组疾 病和 并发 症 ， 是影 响 治 疗效 果 的一 个 重要 因素 。特 别是 由于抗生 素 、 免疫
５ Ｈｕ ｎ Ｋｏ ｔｓ ＣＤ．ＴＥＮ ｄ ｌｔｓ ｖ ｓｕ ａ ｎ ｏｈ ｌ ｒｗｔ ａ ｇ Ｊ＋ ｎｏ Ｐ ｍｏ ｕａｅ ａｃ ｌｒｅ ｄ ｔｅｉ ｇｏ ｈ ｌ ａ
皮 因子 形成 ， 使血 管 内皮 细胞增 殖 和肿 瘤微 血管 形 成 ， 而使 肿瘤侵 袭转移 能力 增 高［。本研 究发 现 ， 从 ８ ］
顾 性分 析 ２ ０ ０ ７年 １月 至 ２ ０ ｏ ９年 １ Ｏ月 在本 院就 诊 的 ３ １例创 伤 患者 伤 口分泌 物 细菌培 养 的结 果 ． ９ 以
了解该 类 患者 中细 菌流 行病 学及 药物 敏感 性 ， 以期 指导 临床抗 生素 的合理 应用 。
１ 材 料 与 方 法
球 菌 １４株 ， ４ ＿１ ； 一 菌 １ ８株 ， ５ ． ％ ； ０ 占 ０３ ％ Ｇ 杆 ４ 占 ７３ ６ Ｇ 杆 菌 ２株 ， ０７ ％ ； 菌 ４株 ， １ ５ 。检 出 率 占 ． ８ 真 占 ． ％ ５
金黄色葡萄球菌的流行病学和致病性
金黄色葡萄球菌的流行病学和致病性流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
致病性金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。
葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C1、C2、C3、D、E及F八种血清型。
肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。
金黄色葡萄球菌抗菌药物耐药分子机制的研究进展概要
热带医学杂志２００８年８月第８卷第８期・８７３・【文章编号】１６７２—３６１９（２００８）０８－０８７３－０４・综述・金黄色葡萄球菌抗菌药物耐药分子机制的研究进展黄革１，２综述．周晓红ｈ审校（１．南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系，广州５１０５１５；２．广东省人民医院医学研究中心，广州５１００８０）【摘要】金黄色葡萄球菌是引起人类感染的重要病原菌之一，也是Ｉ临床常见的多重耐药细菌之一。
金黄色葡萄球菌具有多种同有耐药基因，同时亦易获得外来耐药基因。
本文就导致金黄色葡萄球菌对临床常用抗菌药物产生抗性的耐药基因及其耐药机制的研究进展进行综述。
【关键词】金黄色葡萄球菌；耐药基因；耐药分子机制中图分类号：Ｒ３７８．１１文献标识码：Ａ金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染的重要病原菌，毒状立体结构。
金葡菌正常的ＰＢＰ有四种：ＰＢＰｌ、ＰＢＰ２、力强，除引起局部毛囊炎、疖肿、蜂窝织炎外，还可以引起ＰＢＰ３、ＰＢＰ４ｒ“。
３－内酰胺类抗生素通过与ＰＢＰｓ结合抑制其肺炎、心包炎、骨髓炎、肾盂肾炎、肾脓肿等多种系统的化酶活性．从而阻碍细胞壁肽聚糖交联。
使得细菌细胞壁合脓性疾患以及菌血症、心内膜炎等危及生命的疾病…。
成被破坏而死亡。
而ＭＲＳＡ能产生一种新的特殊的ＰＢＰ．１９６０年半合成青霉素——甲氧西林应用于耐青霉素金黄ＰＢＰ２ａ（亦称为ＰＢＰ２’）。
ＰＢＰ２ａ常由Ｂ．内酰胺类抗生素诱色葡萄球菌的治疗．１９６１年Ｊｅｖｏｎｓ在英国发现第一株耐导，对大多数Ｂ一内酰胺类抗生素亲和力低，由于其可替代甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ，ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ．ｒｅｓｉｓｔａｎｔ高亲和力的正常ＰＢＰｓ催化肽聚糖交联，使细菌得以逃逸Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｌｘｇｅｕｓ）。
２０世纪７０年代中期，ＭＲＳＡ一般Ｂ一内酰胺类抗生素的作用而表现ｆｆ｛耐药性［６’…。
ＰＢＰ２ａ由仅为散发，且只对ｐ一内酰胺类抗生素耐药。
然而，近十余ｍｅｃＡ（ｇｅｎｅｔｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｏｆｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，甲氧西年来，ＭＲＳＡ在世界各地的感染率不断上升。
金黄色葡萄球菌感染病例的多重感染和耐药性分析
Ｓ ｈ ａ ｏ — ｊ ｕ ｎ。 ， ＬＵＯ Ｚ ｈ ｉ — ｘｉ ｏ ｎ ｇ。 ， Ｌ Ｎ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ — ｌ ｉ ， ＨＯＮＧ Ｓ ｈ ｕ — ｈ ｕ ｉ 。 （ １ ． Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｄｉ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ； ２ ．
检 验医学与临床 ２ ０ １ ３年 第 １ Ｏ卷 增 刊 Ｉ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ Ｃ ｌ ｉ ｎ ， ２ ０ １ ３ ， Ｖｏ １ ． １ ０ Ｓ ｕ ｐ ｐ ｌ Ｉ
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４１ ・
ｇ ｅ ｎ ｔ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｊ ａ ｐ ａ ｎ ［ Ｊ ］ ． Ｃ ｌ ｉ ｎ Ｌ ａ ｂ ， ２ ０ ０ ９ ， ５ ５ （ １ － ２ ） ： ９ － ２ ２ ． Ｅ ８ ］ 张贺秋 ， 李少波 ， 刘劭 钢 ， 等． 血 清 转 换 样 本 丙 型 肝 炎 病 毒
核酸 、 核心抗原及抗体检测对 比研究 ［ Ｊ ］ ． 中国输血 杂志 ，
２ ０ １ ３ — ０ ３ — ２ ６ ） （ 收稿 日期 ： ２ Ｏ １ ３ 一 Ｏ １ ２ ５ 修 回 日期 ：
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论 著
金 黄 色葡 萄 球 菌 感 染 病 例 的 多 重 感 染 和 耐 药 性 分 析
Ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｓ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ａ ｕ ｒ ｅ ｕ ｓ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ＨＯＮＧ Ｊｉ ｎ ｇ — ｃ ｈ ａ ｎ ・ ＧＵＯ
《一例肾移植术后切口并发金黄色葡萄球菌感染护理》
《一例肾移植术后切口并发金黄色葡萄球菌感染护理》一、疾病概述肾移植是治疗终末期肾病的有效方法之一。
然而，肾移植术后患者由于免疫抑制剂的使用，机体免疫力降低，容易发生各种感染。
切口感染是肾移植术后常见的并发症之一，其中金黄色葡萄球菌是引起切口感染的常见病原菌之一。
金黄色葡萄球菌感染可导致切口红肿、疼痛、渗出，严重时可引起全身感染，甚至危及患者生命。
二、病因及发病机制1. 免疫抑制剂的使用：肾移植术后患者需要长期服用免疫抑制剂，以防止移植肾的排斥反应。
然而，免疫抑制剂会抑制机体的免疫系统，使患者的免疫力降低，容易发生各种感染。
2. 手术创伤：肾移植手术是一种较大的手术，手术创伤会破坏皮肤和黏膜的屏障功能，使病原菌容易侵入机体。
3. 患者自身因素：患者的年龄、营养状况、基础疾病等因素也会影响切口感染的发生。
例如，年龄较大、营养状况差、患有糖尿病等基础疾病的患者，切口感染的风险较高。
4. 金黄色葡萄球菌的特性：金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，具有较强的致病性和耐药性。
金黄色葡萄球菌可以产生多种毒素和酶，破坏组织细胞，引起炎症反应。
同时，金黄色葡萄球菌还可以形成生物膜，抵抗抗生素的作用，使感染难以控制。
三、临床表现1. 局部症状：切口红肿、疼痛、渗出是金黄色葡萄球菌感染的常见局部症状。
渗出液可为脓性或血性，有时可伴有异味。
切口周围皮肤温度升高，触之有硬结。
2. 全身症状：严重的金黄色葡萄球菌感染可引起全身症状，如发热、寒战、乏力、食欲不振等。
患者可出现白细胞计数升高、中性粒细胞比例升高、C 反应蛋白升高等炎症指标异常。
四、治疗要点1. 抗生素治疗：根据病原菌培养和药敏试验结果，选择敏感的抗生素进行治疗。
对于金黄色葡萄球菌感染，常用的抗生素有万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁等。
抗生素的使用应足量、足疗程，以确保彻底清除病原菌。
2. 切口处理：对于切口感染较轻的患者，可以进行局部换药、引流等处理。
对于切口感染严重的患者，可能需要进行切口清创、二期缝合等手术治疗。
创伤患者合并感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的护理体会
创伤患者合并感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的护理体会刘蓉【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2012(036)009【总页数】2页(P858-859)【作者】刘蓉【作者单位】贵州省安顺市人民医院骨三科,561000【正文语种】中文【中图分类】R473耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是医院感染的重要病菌之一，因对临床使用的多种抗菌药物耐药，在治疗上非常棘手。
由于MRSA分布广，传播快，容易产生暴发流行。
在医院感染管理过程中，如何有效预防和控制MRSA的播散，避免医院感染的流行或暴发尤为重要。
笔者通过骨科病区5例创伤病人合并MRSA感染的护理，现将护理体会总结如下。
1 资料与方法1.1 一般资料 2011年3月至2012年2月本病区收治的病人中共检出MRSA感染患者5例，其中，女性1例，男性4例；年龄最大65岁，最小19岁，平均±40.4岁；其中烧伤病人2例，骨科创伤病人3例；取样培养检出MRSA阳性时间：最早于住院后第2天，最晚于住院后67天，平均入院后19天；根据医院感染诊断标准属于院内感染4例，院外感染1例（入院48h内发生无明确潜伏期的感染不屈于院内感染［1］。
1.2 方法患者一旦检出MRSA，立即按照接触隔离标准进行隔离，采取相应措施，控制感染扩散；并根据细菌药敏实验选择敏感抗生素静脉给药，大多对万古霉素敏感，遵医嘱定时给药；给予换药或冲洗，保持伤口创面清洁；对烧伤患者进行创面切痂植皮手术。
2 结果在给予相应的治疗及护理后，患者病情好转，感染得到控制，未发生院内感染的流行或暴发。
3 护理3.1 患者创面取样培养后一旦检出MRSA，立即采取单间隔离，无条件者须实行同种同源同室床旁隔离，如本病区收治骨科及烧伤患者，须将骨科患者与烧伤患者隔离于不同病室。
对病室、床头卡、病历夹应有蓝色醒目标识，以引起工作人员重视。
3.2 加强病房管理，严格控制探视人员，对进出病室的人员要求穿鞋套、隔离衣、戴手套、及时关门和洗手。
冲洗清创对大面积烧伤残余创面合并金黄色葡萄球菌感染的疗效观察
冲洗清创对大面积烧伤残余创面合并金黄色葡萄球菌感染的疗效观察罗斌杰;李罗珠;陈传俊;田甜【摘要】选择我科于2012年3月～2015年6月收治的107例大面积烧伤残余创面合并金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的患者，随机分为试验组（62例）及对照组（45例），两组均予积极的全身支持治疗，创面处理方面，试验组采用每日或者隔日冲洗清创治疗，对照组采用常规换药治疗，每周行创面分泌物培养，并观察创面情况4w，比较两组治疗效果。
第1、2、3、4w，试验组创面培养金黄色葡萄球菌转阴率分别为48.4%，95.2%，98.4%，98.4%，对照组为2.2%，31.1%，73.3%，88.9%，试验组显著优于对照组（第1、2、3w，P＜0.01，第4w0.01＜P＜0.05）。
试验组创面炎症反应明显较轻，创面上皮化速度快。
冲洗清创对大面积烧伤残余创面的治疗效果显著，可有效控制金黄色葡萄球菌感染，促进创面愈合。
【期刊名称】《现代诊断与治疗》【年(卷),期】2016(027)015【总页数】3页(P2864-2865,2866)【关键词】烧伤残余创面;冲洗清创;金黄色葡萄球菌【作者】罗斌杰;李罗珠;陈传俊;田甜【作者单位】泰州市人民医院烧伤科，江苏泰州225300;泰州市人民医院烧伤科，江苏泰州 225300;泰州市人民医院烧伤科，江苏泰州 225300;泰州市人民医院烧伤科，江苏泰州 225300【正文语种】中文【中图分类】R644大面积烧伤后期残余创面的治疗较为棘手，往往迁延不愈，病情反复，严重时可能出现烧伤脓毒症，甚至危及生命［1］。
其中残余创面治疗的难点在于创面感染的控制，往往以耐药菌株为主，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）较为常见［2］，可造成创面逐渐加深、扩大，且明显影响植皮成活。
在2012 年3月～2015年3月，我科对收治的大面积烧伤患者，后期残余创面检出金黄色葡萄球菌者（均为MRSA），采用冲洗清创的方式处理，取得了良好效果。
骨科创伤患者伤口分泌物金黄色葡萄球菌毒力基因分析
骨科创伤患者伤口分泌物金黄色葡萄球菌毒力基因分析陈日寿;段俊林;陈伟;叶林强;冯永洪;黄祖辉;刘亮洪【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2022(39)4【摘要】目的了解骨科创伤患者伤口分泌物金黄色葡萄球菌(SAU)分离株的毒力基因分布情况,为防控SAU的医院内感染提供依据。
方法收集2018年10月至2019年12月东莞市中医院骨科创伤患者伤口分泌物标本80份,经细菌培养分离出80株SAU菌株,根据感染位置深浅将其分为浅表感染组和深部感染组,每组40株。
采用聚合酶链反应(PCR)进行毒力基因检测,观察浅表感染组和深部感染组SAU菌株的毒力基因分布情况,比较2组SAU菌株毒力基因检出率的差异。
结果80株SAU 共检出20种毒力基因,分别为黏附素基因bbp、clfA、clfB、cna、ebpS、fnbA、sdrC、sdrD、sdrE、icaA、map,溶血毒素基因hla、hlb、hld、hlg,杀白细胞素基因lukE、lukM、pvl,侵袭毒素基因splB、ssp;其中各种毒力基因的检出情况分别为:黏附素基因bbp 78株(97.5%)、clfA 74株(92.5%)、clfB 75株(93.8%)、cna 66株(82.5%)、ebpS 75株(93.8%)、fnbA 80株(100.0%)、sdrC 56株(70.0%)、sdrD 40株(50.0%)、sdrE 77株(96.2%)、icaA 78株(97.5%)、map72株(90.0%),溶血毒素基因hla 80株(100.0%)、hlb 78株(97.5%)、hld 74株(92.5%)、hlg 72株(90.0%),杀白细胞素基因lukE 71株(88.8%)、lukM 6株(7.5%)、pvl 19株(23.8%),侵袭毒素基因splB 14株(17.5%)、ssp 66株(82.5%)。
浅表感染组及深部感染组fnbA、hla基因检出率均为100.0%(40/40);深部感染组SAU的clfA、pvl、ssp基因检出率高于浅表感染组(P<0.05);深部感染组与浅表感染组SAU的bbp、clfB、cna、ebpS、sdrC、sdrD、sdrE、icaA、map、hlb、hld、hlg、lukE、lukM及splB基因检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。
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・论 著・创伤患者金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学研究刘明华1,张庆玲2,刘玉馥2,府伟灵1(1.第三军医大学西南医院,重庆400038;2.第三军医大学新桥医院,重庆400037)摘要:目的 通过对创伤病房金黄色葡萄球菌(SA)感染的分子流行病学研究,为临床预防和治疗SA感染提供科学依据。
方法 收集创伤病房近3年SA培养阳性病例29例,采用多重PCR扩增SA的毒素基因tst和sec,分析毒素基因的存在与发热的关系;通过PCR扩增M R SA基因组稀有限制区旁的DNA序列,对M R SA进行基因分型。
结果 29例患者中,12例为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(M SSA);17例为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M R SA);M R SA携带tst和sec基因比率(均为88.2%)显著高于M SSA(分别为33.3%和41.7%,P=0.014);19例伴有发热,其中16例含有tst和sec基因,10例不伴发热,其中4例含tst和sec基因,发热组携带两种基因比率显著高于不发热组(P=0.032);稀有限制区PCR(I R S2PCR)分型表明2001年感染M R SA的10例患者有8例为同种基因型。
结论 tst和sec基因的存在可能与金黄色葡萄球菌引起的发热有关,2001年创伤病房可能存在M R SA暴发流行。
关键词:金黄色葡萄球菌;分子流行病学;毒素基因;稀有限制区PCR;基因分型中图分类号:R378.1+1 文献标识码:A 文章编号:100524529(2004)0120100204S tap hylococcus au reus I nfection i n Trau ma tic Pa tien ts:A M olecular Ep idem iolog ica l StudyL I U M ing2hua,ZHAN G Q ing2ling,L I U Yu2fu,FU W ei2ling(S ou thw est H osp ita l,Chong qing400038,Ch ina)Abstract:OBJECTIVE To investigate mo lecu lar ep idem i o logical characteristics of S tap hy lococcus au reus(SA) infecti on in traum atic w ard.M ETHOD S A to tal of29patien ts in recen t3years in traum atic w ard w ere studies.Tox in genes,including tst and sec genes,w ere amp lified by u sing m u lti p le PCR and the relati on sh i p betw een the p resence of the tw o genes and fever w as analyzed.In the m ean ti m e,m eticillin2resistan t S.au reus(M R SA)w ere geno typed by infrequen t restricti on site PCR(I R S2PCR).RESUL TS Among29patien ts,17patien ts w ere M R SA,w h ich took tst and sec genes in rate of88.2%,12patien ts w ere m eticillin2su scep tib ile S au reus (M SSA),w h ich took tst and sec genes in rate of33.3%and41.7%,the tw o rates had sign ifican tly difference( P=0.014);19patien ts w ith fever,among them16patien ts took tst and sec genes:10patien ts w ithou t fever, from them4patien ts took tst and sec genes,the tw o group s had sign ifican tly difference(P=0.032);by I R S2 PCR,8patien ts w ith M R SA infecti on had iden tical geno type in2001.CONCL USI ONS T he p resence of tst and sec genes m ay be associated w ith the incidence of feb rile infecti on cases cau sed by SA.Geno typ ing of M R SA byI R S2PCR revealed an ou tb reak of M R SA infecti on at traum atic w ard in2001.Key words:S tap hy lococcus au reus;M o lecu lar ep idem i o logy;Tox in gene;Infrequen t restricti on site PCR;Geno type 金黄色葡萄球菌(SA)是引起医院感染的主要病原菌之一,它可以产生多种毒素,其中能引起中毒休克综合征的中毒休克综合征毒素21(T SST21)和能引起食物中毒的SEC肠毒素是较为常见的两种毒素。
随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M R SA)的增加和其耐药程度不断加重,M R SA也日益受到各国学者的重视1。
在本研究中,我们对创伤病房近收稿日期:2003207225; 修回日期:20032092253年从29例患者所分离的44株金黄色葡萄球菌的tst和sec毒素基因进行了探讨,同时对M R SA采用稀有限制区聚合酶链反应(I R S2PCR)进行基因分型,并结合患者临床表现分析,以期通过流行病学研究,得出一些有利于指导临床治疗的结论。
1 资料与方法1.1 资料鉴定,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌按美国临床实验室标准化委员会(N CCL S)抗生素药物敏感试验执行标准,用苯唑西林纸片进行筛选确认。
2000年1月～2002年12月创伤病房共有31例患者细菌学检查培养出金黄色葡萄球菌(来源于痰液、尿液、伤口分泌物),其中2例合并有其他菌种感染,为便于分析,此2例不列于本实验中。
共获得M SSA16株, M R SA25株。
1.1.2 主要试剂 扩增毒素基因tst引物序列:tst①:5′A CCCCT GT TCCCT TA TCA TC3′;tst②:5′T T T TCA GTA T T T GTAA CGCC3′; 扩增毒素基因sec引物序列:sec①5′A GA T GAA GTA GT T GA T GT GTA T GG3′;sec②5′CA CA CT T T TA GAA TCAA CCG3′。
I R S2PCR所需寡聚核苷酸序列:序列①:22碱基A H15′A GAA CT GA CCTCGA CTCGCA CG;序列②:7碱基A H25′T GCGA GT;序列③:5′端磷酸化的18碱基A X15′PO4CTA GTA CT GGCA GA CTCT;序列④:7碱基A X25′GCCA GTA;序列⑤:20碱基PX2G5′A GA GTCT GCCA GT A CTA GA G。
上述所有由寡聚核苷酸单链均由上海生物工程有限公司合成,限制性内切酶H ha I和Xba I及酶切反应缓冲液、T4DNA连接酶及连接缓冲液、dN T P、T aq DNA聚合酶、PCR反应配套试剂均由上海生物工程有限公司提供,DNA标志物(m arker)由申能博采生物技术有限公司提供。
1.1.3 主要仪器 梯度PCR循环仪(美国B i o R ad)、凝胶成像系统(美国B i o R ad),电泳槽、电泳仪、离心机、恒温水浴锅。
1.2 方法1.2.1 金黄色葡萄球菌染色体DNA的提取 参照作者既往报道的方法2,用DNA抽提试剂盒提取各株金黄色葡萄球菌染色体DNA。
1.2.2 I R S2PCR模板DNA的制备3,4适配子(adap to r)构建 用无菌双蒸水200Λl分别稀释寡聚核苷酸A H1和A H2,取A H162.6Λl和A H2 20Λl(以保证A H1和A H2摩尔量相等)混和于PCR缓冲液,使PCR缓冲液终浓度为1×,混和溶液总体积为200Λl。
将装有混和溶液的EP管置于90℃恒温器孔内2m in,然后将恒温器调到25℃,使-20℃冰箱备用。
同法可构建A X(7.865m o l L)适配子。
取10Λl基因组DNA用5U H ha 和5U Xba 在37℃水浴中消化1h;T4DNA连接酶50 U,10×连接酶缓冲液2Λl,A X、A H适配子及酶消化后产物共20Λl在16℃孵育1h以将适配子连接到被消化的DNA上;再将连接产物用5U H ha 和5U Xba 在37℃水浴中消化15m in。
1.2.3 毒素基因的扩增5 采用特异的引物,通过多重PCR检测分别编码T SST21、SEC的基因tst, sec,94℃预变性5m in,然后94℃变性2m in,57℃退火2m in,72℃延伸1m in,进行35个循环,72℃终延伸7m in。
PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳40m in,用EB染色并用凝胶成像仪观察DNA条带并进行分析,tst、sec片段的大小应分别为326bp和451bp。
1.2.4 I R S2PCR基因分型 扩增条件94℃,预变性5m in,然后变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1.5m in,进行30个循环,72℃终延伸5m in。
PCR 产物在8%聚丙烯酰胺凝胶中,电压3.5V c m,电泳12h后的分布并参照PFGE基因图谱分型方法6进行分析。
1.3 统计学处理 以SPSS10.0软件进行统计学分析(ς2检验),P<0.05为相差显著。
2 结 果2.1 临床标本细菌学鉴定 3年从12个患者的临床标本中分离出M SSA16株(其中3例为2次培养出SA,1例为不同部位培养出SA);从17个患者的临床标本中分离出M R SA25株(其中5例为2次培养出SA,3例为2个部位培养出SA)。