抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定

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circRNA_09505介导M2型巨噬细胞极化失衡在强直性脊柱炎模型中的作用

circRNA_09505介导M2型巨噬细胞极化失衡在强直性脊柱炎模型中的作用*李玄1，张洁2△，向伟能1，蒋林1，王惟达1，周乾1，唐烨1（1长沙市第一医院脊柱外科，湖南长沙 410005；2南华大学附属第二医院脊柱外科，湖南衡阳 421001）［摘要］目的：探讨circRNA_09505（circ09505）是否通过介导M2型巨噬细胞极化失衡参与强直性脊柱炎（AS ）的发病机制。

方法：采用高通量circRNA 测序分析确定AS 患者和健康对照者外周血单个核细胞（PBMC ）中差异表达的circRNA 。

将SKG 小鼠随机分为对照组、sh -NC 组和sh -circ09505组，每组10只。

各组小鼠通过腹腔注射3 mg 可德胶以建立AS 模型。

对sh -circ09505组小鼠尾静脉注射circ09505敲减慢病毒，以检查circ09505敲减对AS 进展的影响。

体外考察circ09505过表达或敲减对巨噬细胞极化影响，并通过流式细胞术分析M1和M2型巨噬细胞比例。

结果：circ09505是AS 患者PBMC 中上调最显著的circRNA 。

sh -circ09505组小鼠脊柱免疫细胞浸润和软骨破坏较sh -NC 组减轻，脊柱炎评分显著降低（P <0.01）。

与sh -NC 组相比，sh -circ09505组中炎性细胞因子IL -1β、IL -6和TNF -α的表达显著降低（P <0.01），并且脊柱组织中CD11b + CD40+细胞数目显著降低（P <0.01），CD11b + CD206+细胞数目显著增加（P <0.01）。

流式细胞术分析表明，circ09505过表达降低了M2巨噬细胞比例（P <0.01），而circ09505敲减则增加了M2巨噬细胞比例（P <0.01）。

circ09505过表达增加了LPS+IFN -γ处理组的M1巨噬细胞比例（P <0.01），而circ09505敲减则降低了M1巨噬细胞比例（P <0.01）。

与肿瘤坏死因子—α—有关的抑制物（综述）

与肿瘤坏死因子—α—有关的抑制物（综述）
唐海兰
【期刊名称】《暨南大学学报：自然科学与医学版》
【年(卷),期】1998(019)002
【摘要】与肿瘤坏死因子－α有关的抑制物（综述）唐海兰（暨南大学医学院组织胚胎学教研室，５１０６３２，广州）关键词：肿瘤坏死因子；免疫；抑制中图分类号：Ｒ３４－２肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α）是机体免疫系统中产生的最重要的细胞因...
【总页数】3页(P89-91)
【作者】唐海兰
【作者单位】暨南大学医学院组织胚胎学研室
【正文语种】中文
【中图分类】R730.3
【相关文献】
1.中西医结合疗法对慢性肾衰竭患者肿瘤坏死因子α及纤溶酶原激活物抑制物1的干预作用 [J], 胡蜀宾;赵雯红;张金楠;张国瑛;左建娇
2.肾小球肾炎患者血清凝血酶激活的纤溶抑制物和r肿瘤坏死因子的水平变化及研究 [J], 夏青;祝匡明;陈莉萍
3.辛伐他汀对肿瘤坏死因子α诱导的人腹膜间皮细胞组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制因子1表达的影响 [J], 田功;何劲松
4.血浆肿瘤坏死因子-α和纤溶酶原激活物抑制物-1与扩张型心肌病关系研究进展
[J], 罗先虎;罗勇
5.化学物诱导的应激反应在免疫抑制中的作用──化学物诱导应激反应和免疫抑制间定量关系和因果关系综述 [J], 邱士起
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人肿瘤坏死因子α(TNF-α)说明书

人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。

用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

肿瘤坏死因子α在肝细胞癌中的研究进展

肿瘤坏死因子α在肝细胞癌中的研究进展
胡永;陈一兴;杜世锁;曾昭冲
【期刊名称】《中国临床医学》
【年(卷),期】2024(31)2
【摘要】肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种多功能炎性细胞因子,在肿瘤发生和发展中具有双向调节作用,对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、发展调节途径多样,机制尚不完全清楚。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分子信号通路和核因子
κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路在HCC发生和发展中扮演着重要的角色。

外周血TNF-α浓度和肿瘤组织中TNF-α浓度对HCC患者接受一些治疗后的预后表现出了较好的预测价值,但对接受精确放疗的HCC患者预后预测价值,需要被进一步明确。

【总页数】5页(P257-261)
【作者】胡永;陈一兴;杜世锁;曾昭冲
【作者单位】复旦大学附属中山医院放疗科
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
【相关文献】
1.核因子-κap paB与肿瘤坏死因子α mRNA在肝细胞癌中的表达及其意义
2.炎症细胞因子白介素-6、肿瘤坏死因子-α、转化生长因子-β1在多囊卵巢综合征中作用
机制及临床意义的研究进展3.肿瘤坏死因子受体超家族成员21在肝细胞癌中的表达及临床意义4.纤维蛋白原样蛋白2和肿瘤坏死因子-α在子痫前期发生发展中的作用研究进展5.肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6及白细胞介素-10在脑性瘫痪发病机制中的研究进展
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鸡肿瘤坏死因子-α原核表达及生物活性鉴定

ＣｈｃｎＴＮＦ－ｘｐｏａｙｔｃｅｐｒｓｉｎａｉｌｇｃａｔｖｔｉｋｅ｛ｒｋｒｏｉｘｅｓｏｎｄｂｏｏｉｃｉｉｙ
ＷＡＮＧ — ｉ，ＷＡＮＧａ— ｉＨＡＮＧｉｎｊｎ，ＲＵＡＮｅ — ｅＬｉａ一ｘＣｉｘａ，ＺＪａ－ｕＷｎｋ，ＸＵｎＧｅｇ，ＡＮｉｎＪａ
ｍｇ在５稀释度下能显著促进淋巴细胞增殖。，
关键词：瘤坏死因子一；核表达；物活性肿ａ原生
中图分类号：９Ｑ２１
文献标识码：Ａ
文章编号：５９６０（０１１－０６００２—０５２１）１００４
ｉｄｃｔｄｔｅｐｏｅｎｗａＴｕｉｎｐｏｅｎｎｉａｅｈｒｔｉｓＧＳｆｓｏｒｔｉ．ＴｈｃｉｉｆｔｅｆｓｏｒｔｉｓｄｔｃｅｙＣＥＦＶＳｅａｔｔｏｈｕｉｎｐｏｅｎｗａｅｅｔｄｂｖｙ／Ｖ
ｋａｙｉｘｐｅｓｏａｍｉｎｄｔａｆｒｅｎｔｒｏｔｃｅｒｓｉｎｐｌｓｄａｒｎｓｏｍｄｉｏＢＬ２ｏｐｔｎｅ１ＧＳＴ— ｃｍｅｅｔｃｌ．１ＣｈＴＮＦ— ｃｕｉｏｅｎｗａｏｆｓｏｎｐｒｔｉｓｏｂａｎｄｂｙｔｂｌｉｎｏｕｔｏｎ，ｒ — ｔｅｏｈｅｉｌｓｏｎｏｄｎｄｆｉｉｙｃｒｔｉｅｈｅａｕｔｏｎａｄｓｌｉｅｎａｕｒｄｆｔｎｃｕｉｂｙａａｆｎｔｈｏｍａｏｒｐｈｙｆｔｇａｏＳｅａｏｓＢ．ＴｈｐｃｆｃｂｎｄｗａｄｎｔｆｅｅｔｒｏｎａｙｉｉｇＧＳＴｎｉｄ．Ｔｈｅｒｓｌｓｐｈｒｅ４ｅｓｅｉｉａｓｉｅｉｉｄｂｙＷｓｅｎｂｌｔａｌｓｓｕｓｎａｔｂｏｙｅｕｔ

全人源抗人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体毛细管等电聚焦鉴别方法的建

杨兰兰，张银川，吴小丽，张雅婷，桂芳，吴师师，闭兰，潘勇兵
武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室，湖北武汉４３０２０７摘要：目的建立用于全人源抗人肿瘤坏死因子一ａ（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－ａ，ＴＮＦ一仅）单克隆抗体鉴别的毛细管等电聚
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＰＡＮＹｏｎｇ－ｂｉｎｇ，Ｅ－ｍａｉｈｙｏｎｇｂｉｎｇｐａｎ＠１６３．ｃｏｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎｄｖａｌｉｄａｔｅａｃａｐｉｌｌａｙｒｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｅｆｏｃｕｓｉｎｇ（ｃＩＥＦ）ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎｏｆｆｕｌｌｙｈｕｍａｎａｎｔｉ — ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）一ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ（ｍＡｂ）．ＭｅｔｈｏｄｓＡｃａｐｉｌｌａｙｒｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｅｆｏｃｕｓｉｎｇｍｅｔｈｏｄ
ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｂｙｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｋｅｙｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｃＩＥＦ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃａｔｈｏｄｉｃａｎｄａｎｏｄｉｃｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓａｎｄｃａｒｒｉｅｒａｍｐｈｏｌｙｔｅｓ，ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｍｐｈｏｌｙｔｅｓ３－１０ｔｏ８－１０．５ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｔｉｍｅａｎｄｖｏｌ，ａｎｄｖａｌｉｄａｔｅｄｏｒｆｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃａｔｈｏｄｉｃａｎｄａｎｏｄｉｃｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓｗｅｒｅ３０ａｎｄ３．２ｍｍｏｌ／Ｌ．ｗｈｉｌｅｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆｐｈａｒｍａｌｙｔｅ３－１０ｉｎｓａｍｐｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓ６．０％．ａｎｄｔｈｅｖｏｌｔａｇｅａｎｄｔｉｍｅｆｏｒｆｏｃｕｓｉｎｇｗｅｒｅ２５ｋＶａｎｄ１０ｍｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓｈｏｗｅｄｎｏｕｈｒａｖｉｏｌｅｔａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ

高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用

制浓度１分别为３．ｍｌＩ和ｌ５８ｎｌ１结论以ＡｌＩａ内标物，ＩＣ１５ｎｏ／７．ｍｏ／７。ａ）作 —ｐＨＰＣ测定ＴＡＣ酶活性，ＴＥＥ为ＡＣ
抑制剂的筛选提供了一种更准确、实用的方法。更关键词高效液相色谱法；内标法；肿瘤坏死因子ｎ化酶；抑制作用转
中图法分类号Ｒ７．９７３Ｄ：０３７／．ｓｎ１７７１２ｌ．ｌＯｌＯＩ１．８０／ｉ．６２０４．０００＿２ｉｓ
ＤｅｅｍｉａｉｎｏｎｈｂｔｒｆｃｓｏｎｈｂｔｒｎｔｅＴｕｏｅｒｓｓＦａｔｒ￣ｔｒｎｔｏｆＩｉｉｏｙＥｆｅｔｆＩｉｉｏｓｏｈｍｒＮｃｏｉｃｏ－ＣｏｅｔｎｚｍｅＵｓｎｉｈＰｅｆｒａｃｑｕｄＣｈｏａｏｒｐｙｎｖｒｉｇＥｎｙｉｇＨｇ — ｒｏｍｎｅＬｉｉｒｍｔｇａｈＳｅＡｇｉｇＧｕＪｕｉｇ，ｕｎｅｇｌｈｎＩｎｌ，ｉｌＨａｇＷｉｆｎｎａ
第３９卷第１第８期７页
２０年２月０１华来自科技大学学报（医学版）
ＡｃａＭｅｔｄＵｎｖＳｉＴｅｈｏｕｚｏｉｃｃｎｌＨａｈｎｇ
Ｖｏ．９Ｎｏ１Ｐ．８１３．７
Ｆｅ．２０ｂ０ｌ

抑制人肿瘤坏死因子活性的寡聚核苷酸[发明专利]

专利名称：抑制人肿瘤坏死因子活性的寡聚核苷酸专利类型：发明专利
发明人：张智清,严馨蕊,郭克泰,徐春晓
申请号：CN03149656.3
申请日：20030804
公开号：CN1550501A
公开日：
20041201
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一组新的抑制人肿瘤坏死因子α(TNFα)活性的寡聚核苷酸序列，包括DNA序列和RNA序列。

该寡聚核苷酸序列即适配子能与TNFα特异性地结合，并能有效抑制TNFα对L929细胞的杀伤作用。

因此，本发明适配子可以用来检测TNFα，以及治疗由于TNFα水平升高而引起的疾病。

与现有TNFα拮抗剂相比，本发明中的适配子具有高特异性、高亲和力、迅速到达靶组织、快速的血浆清除率、较低的免疫原性、可以反复使用、并在靶组织中保持高浓度等优点。

它既有单克隆抗体的亲和力和特异性，又具有小分子多肽的渗透性和药代动力学性质。

本发明还涉及所述寡聚核苷酸序列的衍生序列，包括修饰后的序列。

本发明进一步涉及所述的寡聚核苷酸序列在制备用于诊断或治疗与TNF－α相关疾病的药物中的用途。

申请人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
地址：100052 北京市宣武区迎新街100号
国籍：CN
代理机构：北京纪凯知识产权代理有限公司
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小鼠肿瘤坏死因子α试剂盒的原理和操作方法

小鼠肿瘤坏死因子α试剂盒的原理和操作方法
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被肿瘤坏死因子α(TNF-α)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

筛选抑癌基因技术

筛选抑癌基因技术
筛选抑癌基因的技术主要包括以下几种：
1. 基因敲除与过表达技术：
1)基因敲除（如CRISPR/Cas9、RNAi等）可以用来阻断或降低潜在抑癌基
因的表达，观察其对细胞增殖和肿瘤形成的影响。

2)过表达实验则是将潜在抑癌基因在细胞中过度表达，观察是否能抑制肿
瘤细胞的生长。

2. 功能遗传学筛查：
通过全基因组水平的功能性遗传学筛选，例如利用RNA干扰文库、CRISPR文库进行高通量筛选，大规模地鉴定出能够抑制肿瘤发生发展的基因。

3. 表观遗传学分析：
分析癌症样本中的DNA甲基化状态，找出由于甲基化导致表达沉默的抑癌基因。

4. 生物信息学分析：
利用公共数据库资源和计算生物学方法，对比正常组织与癌变组织的基因表达谱差异，预测并验证潜在的抑癌基因。

5. 蛋白质相互作用研究：
研究蛋白质-蛋白质相互作用网络，寻找与已知抑癌蛋白有密切关联的新候选抑癌基因。

6. 动物模型实验：
在小鼠或其他模式生物中构建基因敲除或转基因模型，观察模型动物肿瘤发生的改变，从而验证基因的抑癌功能。

7. 药物敏感性与耐药性研究：
观察特定基因表达变化对药物敏感性的影响，如果降低某个基因表达能够增加细胞对抗癌药物的敏感性，那么该基因可能具有抑癌功能。

这些技术的综合应用可以帮助科学家系统地发现和验证新的抑癌基因，并为癌症治疗提供新的靶点和策略。

靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定

靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定孙亚薇;公海艳;曹善楠;刘鹏;朱海燕;耿广锋;许元富【摘要】Objective To explore a novel and highly specific small-molecule TNFβinhibitor by using computer-aid⁃ed virtual screening and cell-based assays in vitro. Methods Computer-aided drug design and virtual screening were used to design and identify chemical compounds that targeted TNFβbased on the crystal structure of the TNFβ-TNFR1 com⁃plex. The effect of the small-molecule compound against TNFβ-induced cytotoxicity of L929 cells was detected by MTT as⁃say, and the efficacy of the compound to inhibit TNFβ-induced apoptosis of L929 cells was determined by flow cytometry as⁃say. The impact of the compound onL929 cell cycle was examined by Propidium Iodide (PI) staining and flow cytometry, and the infl uence of the compound on TNFβ-triggered signal pathway was analyzed by Western blot assay and Ultra VIEW VOX 3D Live Cell Imaging System. Results No.35 compound (named as C35 thereafter) could effectively inhibit TNFβ-induced cell death in a dose dependent manner, and the half-maximum inhibition concentration (IC50) was8.19μmol/L. Furthermore, C35 had lower cytotoxicity and minimal effect on L929 proliferation. Here we further revealed that C35 could affect TNFβ-induced apoptotic pathway by blocking the activation of Caspase 3, and markedly reduce L929 cell apoptosis induced by TNFβ. Conclusion A novel TNFβsmall-molecule inhibitor was identified by combining computer-aided virtual screening with functional assays, and which could blockTNFβ-triggered apoptotic pathway and efficiently inhibit the cell deathin⁃duced by TNFβ.%目的：通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选，获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。

肿瘤坏死因子-α抑制剂高通量药物筛选模型的建立及筛选药物的体外实验

肿瘤坏死因子-α抑制剂高通量药物筛选模型的建立及筛选药物的体外实验刘文斌;周宁;杨秀敏;杨秀颖;王月华;杜冠华【期刊名称】《中国急救复苏与灾害医学杂志》【年(卷),期】2012(007)009【摘要】目的建立TNF-α抑制剂的高通量药物筛选模型.方法用对TNF-α敏感的L929细胞株通过MTT法建立TNF-α抑制剂的筛选模型;筛选了样品并对筛得的活性样品进行进一步的评价.结果建立了TNF-α抑制剂L929细胞株筛选模型;初筛样品数:870个,复筛样品数:47个,活性药物:8个;对其中的鹿衔草做了淋巴细胞转化抑制实验.结论 TNF-α抑制剂的L929细胞株筛选模型经济稳定可以用于高通量药物筛选;鹿衔草可能具有抑制TNF-α作用和一定的免疫调节作用.%Objective To establish a high-throughput drug screening model of TNF-α inhibitors. Methods A screening model for inhibitors of TNF-α was established by adopting TNF-α-sensitive L929 cell line with MTT assay. The active samples were further analyzed and evaluated. Results TNF-ct inhibitor L929 cell line screening model was utilized for primarily screening of 870 samples, re-screened 47 samles and 8 active drugs, as well as the experiment of Chinese Pyrola herb transformation inhibition assay. Conclusion TNF-α inhibitors L929 cell line screening model with its feature of the low cost and being stable is recommended for high-throughput drug screening. Chinese Pyrola herb may inhibit TNF-α role and carry certain immunomodulatory effect.【总页数】3页(P826-828)【作者】刘文斌;周宁;杨秀敏;杨秀颖;王月华;杜冠华【作者单位】100730,北京,首都医科大学附属同仁医院皮肤性病科;中国康复研究中心北京博爱医院;100730,北京,首都医科大学附属同仁医院皮肤性病科;中国医学科学院药物研究所;中国医学科学院药物研究所;中国医学科学院药物研究所【正文语种】中文【中图分类】R246.5【相关文献】1.以丙氨酸消旋酶为靶点的高通量抗结核药物筛选模型的建立及应用2.以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用3.以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用4.人亲环素A抑制剂高通量筛选模型的建立及在微生物药物筛选中的应用5.以端粒酶为靶标抗癌药物筛选模型建立及端粒酶抑制剂筛选因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体

基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体李常颖;李宏杰;张婷;畅继武【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2009(019)014【摘要】目的利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性.方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性.结果成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体.ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应.结论成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径.为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础.【总页数】4页(P2081-2084)【作者】李常颖;李宏杰;张婷;畅继武【作者单位】天津医科大学第二医院,泌尿外科研究所,天津,300211;华北煤炭医学院基础部,病理生理学教研室,河北,唐山,063000;天津医科大学第二医院,泌尿外科研究所,天津,300211;天津医科大学第二医院,泌尿外科研究所,天津,300211【正文语种】中文【中图分类】R730.51【相关文献】1.基因工程技术制备抗IL-2蛋白抗体Fab片段及其鉴定方法的建立 [J], 李常颖;李宏杰;畅继武2.KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定 [J], 马新廷;郝婷婷;朱小飞;卢春3.基因工程技术制备的人源性抗Mr 48×103角蛋白抗体Fab片段的纯化与活性鉴定 [J], 李承新;刘玉峰;王刚;李春英;万业宏4.抗TNF-α蛋白Fab抗体的制备和鉴定 [J], 李常颖;李宏杰;张婷;畅继武5.人源抗TNF-α抗体Fab基因的单链化及其表达和纯化 [J], 袁斌;白洁;张广育;刘一平;何君;王慧;黄策因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肿瘤坏死因子抑制剂的研究进展

肿瘤坏死因子抑制剂的研究进展
刘静
【期刊名称】《化工中间体》
【年(卷),期】2017(000)008
【摘要】肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种具有多种生物学活性的细胞因子,其过量表达与多种疾病密切相关.TNF-α抑制剂可以抑制TNF-α与受体TNFR1之间的结合,破坏二者之间的信号传导,抑制TNF-α过度表达所引起的一系列疾病.已开发的抑制剂主要包括合成抗体、合成小分子、天然产物、金属和多肽,本文将对一系列抑制剂作一综述.
【总页数】3页(P126-128)
【作者】刘静
【作者单位】泰州学院医药与化学化工学院江苏 225300
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.肿瘤坏死因子α-308G/A多态性与类风湿关节炎疾病及肿瘤坏死因子α抑制剂疗效的相关性研究进展 [J], 李文思;陈璋璋;吕迁洲
2.肿瘤坏死因子抑制剂治疗类风湿性关节炎的不良反应研究进展 [J], 蔡悦;刘晓龙;袁捷;陈晓洁
3.CD40-肿瘤坏死因子受体相关因子抑制剂在动脉粥样硬化治疗中的研究进展 [J], 王洁; 周鹏
4.肿瘤坏死因子抑制剂治疗子宫内膜异位症的研究进展 [J], 王纪元; 索青霞; 成丽; 王微; 王志芳; 雷洁
5.抗肿瘤坏死因子-α及白细胞介素抑制剂治疗非感染性葡萄膜炎的研究进展 [J], 程希;孙旭芳
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秋水仙碱对肿瘤坏死因子—α基因表达的影响

秋水仙碱对肿瘤坏死因子—α基因表达的影响
李卓娅;Gem.,D
【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》
【年(卷),期】1996(016)002
【摘要】微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ）可抑制ＬＰＳ刺激ＰＵ５－１．８细胞的ＴＮＦ－α基因表达，以前工作曾证实Ｃｏｌ主要抑制ＴＮＦ－αｍＲＮＡ的转录。

本研究进一步证实这种抑制作用呈延迟性，即Ｃｏｌ需作用３小时才能充分表现其负性影响。

而且这种抑制作用可被蛋白合成抑制剂放线菌酮（ＣＨＸ）完全阻断。

单用Ｃｏｌ对ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ－αｍＲＮＡ稳定性无明显影响，而与ＣＨＸ联用时则可明显延长ＬＰＳ诱
【总页数】5页(P108-112)
【作者】李卓娅;Gem.,D
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R979.19
【相关文献】
1.大鼠电针后血清对肿瘤坏死因子α诱导凋亡软骨细胞Erk1/2、C-Myc、C-Fos 和C-Jun基因表达的影响
2.秋水仙碱对博来霉素致气道纤维化大鼠白细胞介素-8和肿瘤坏死因子-α含量的影响
3.L-精氨酸对冷应激仔猪生长性能、免疫功能及肝脏、肾脏中肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ基因表达量的影响
4.肿瘤坏死因子-α刺激对IPEC⁃1细胞活力、物理屏障以及炎症相关基因表达的影响
5.重组人Ⅱ型肿瘤坏
死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺治疗强直性脊柱炎的疗效及其对CD14 Dkk-1基因表达的影响
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鳜鱼肿瘤坏死因子α基因的克隆和鉴定的开题报告

鳜鱼肿瘤坏死因子α基因的克隆和鉴定的开题报告
题目：鳜鱼肿瘤坏死因子α基因的克隆和鉴定
研究背景及意义：
肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种重要的免疫介质，在炎症和免疫应答中发挥着重要的作用。

近年来，研究发现TNF-α在鱼类的免疫中也发挥着重要作用，并与鱼类的抗病能力密切相关。

鳜鱼（Megalobrama amblycephala）是我国南方常见的经济鱼类，其肿瘤坏死因子α基因的克隆和鉴定，对深入了解其免疫调控机制以及提高鳜鱼的抗病能力具有重要意义。

研究内容及方法：
1.鳜鱼采集和组织处理：从实验室养殖的健康鳜鱼中，采集肝脏和肾脏组织，用RNAzol试剂提取组织总RNA。

2.克隆鳜鱼TNF-α基因：根据GenBank中已知的其他鱼类TNF-α基因序列，设计鳜鱼TNF-α基因的引物。

利用RT-PCR技术从鳜鱼的肝脏和肾脏组织中克隆出TNF-α基因的cDNA序列。

3.序列分析和比较：利用基因测序技术对克隆的鳜鱼TNF-α基因进行序列分析和比较，包括序列长度、氨基酸序列、启动子区域等。

4.生物信息学分析：对克隆的鳜鱼TNF-α基因序列进行生物信息学分析，包括基因结构、蛋白质结构、进化关系等。

预期结果：
通过上述方法，可以克隆出鳜鱼TNF-α基因的cDNA序列，并对其进行序列分析和比较，以及生物信息学分析，从而获得关于鳜鱼免疫调控机制的重要信息，为其抗病育种提供必要的理论指导。

研究意义与创新点：
本研究将首次报道鳜鱼肿瘤坏死因子α基因的克隆和鉴定，可以为鳜鱼免疫调控研究提供基础数据，并有助于深入了解其抗病机制。

同时，本研究还可为其他鱼类肿瘤坏死因子α的研究提供参考和借鉴，具有一定的学术价值和应用前景。

基于虚拟筛选方法从天然产物中发现TNF-α抑制剂

基于虚拟筛选方法从天然产物中发现TNF-α抑制剂
史丽颖;温泽宇;宋昱;宋佳;于大永
【期刊名称】《化学研究与应用》
【年(卷),期】2022(34)3
【摘要】肿瘤坏死因子α(TNF-α)是治疗类风湿性疾病、克罗恩肠炎、银屑病等自身免疫性疾病的重要靶点。

TNF-α与TNF-1受体(TNFR1)相互作用参与了这些疾病的病理过程。

本次实验基于TNF-α活性位点结构特征构建药效团,利用该药效团对天然产物数据库进行筛选,通过Lipinski’s规则和Veber规则判断化合物类药性,应用SwissADME评价化合物成药性。

筛选结果显示化合物1(ZINC02479145)与化合物7(ZINC67902410)具有良好的成药性,同阳性对照药物苄吡呤作用方式类似,可与TNF-α形成稳定性较强的复合物。

配体受体互作分析初步揭示了TNF-α抑制剂的构效关系,对设计特异性高、效力强的TNF-α抑制剂有一定的指导意义。

【总页数】8页(P468-475)
【作者】史丽颖;温泽宇;宋昱;宋佳;于大永
【作者单位】大连大学生命科学与技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】O621.2
【相关文献】
1.天然产物在新药开发中的应用--HMG-CoA还原酶抑制剂新药的发现对天然产物研究与开发的启示
2.基于毛细管电泳的天然产物中酶抑制剂筛选研究进展
3.基于
虚拟筛选方法从中药中发现SARS-CoV-2抑制剂4.用于筛选天然产物中脲酶抑制剂的脲酶活性测试方法的建立5.基于药效团模型及虚拟筛选方法发现EphB4全新抑制剂
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人源抗肿瘤坏死因子-α噬菌体抗体的基因结构分析

人源抗肿瘤坏死因子-α噬菌体抗体的基因结构分析袁斌;何君;俞晓峰;王慧;刘怀田;周育森;黄策【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2000(011)001【摘要】从混合的噬菌体抗体库中筛选到了抗人TNFα的人源单克隆抗体,并对筛选到的抗体基因进行了序列测定和分析.结果表明,筛选到的4个特异性抗TNFα噬菌体抗体克隆的重链基因序列相同,该重链基因长681 bp,编码227个氨基酸残基,属于人免疫球蛋白第Ⅲ家族,其中1～119位氨基酸残基为重链可变区(VH),120～227位为重链恒定区1(CH1).4个噬菌体抗体克隆的轻链均缺失,因此实际上筛选到的是单重链抗体.对重链基因编码的重链蛋白的特性进行了分析.【总页数】4页(P5-8)【作者】袁斌;何君;俞晓峰;王慧;刘怀田;周育森;黄策【作者单位】军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071【正文语种】中文【中图分类】Q81【相关文献】1.利用噬菌体抗体库技术制备人源化抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体 [J], 冀学斌;侯明2.人源抗HBsAg噬菌体抗体的筛选及其重链基因结构分析 [J], 宋宏彬;毛春生3.抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对Bcl-2基因蛋白及mRNA表达的影响 [J], 贾清华;张万义;李小鹰4.从混合的噬菌体抗体库中直接筛选高亲和性的抗肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体 [J], 袁斌;何君;周育森;刘怀田;俞晓峰;王慧;黄策5.人源性噬菌体抗体库的构建及抗肺癌抗体基因的筛选、表达和核苷酸序列分析[J], 胡建林;郭先健;胡义德;黄桂君;李淑平;陈维中因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肿瘤坏死因子-α基因启动子-850位多态性与强直性脊柱炎相关性研究(病人和13个家族调查)

肿瘤坏死因子-α基因启动子-850位多态性与强直性脊柱炎相关性研究(病人和13个家族调查)肖征宇;侯志铎;陈肃标;林玲【期刊名称】《实用预防医学》【年(卷),期】2006(13)3【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的基因启动子-850位点多态性对强直性脊柱炎(AS)易感性和临床表现的影响。

方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对33名AS患者、13个家庭的AS患者一级亲属39名以及187名正常对照者的TNF-α基因启动子-850位点进行基因分型,并分析基因型与疾病临床表现之间的关系。

结果经病例-对照研究,TT基因型在AS组中的分布显著高于正常对照组(15.2%vs2.1%,P<0.01);T等位基因携带者在AS组与正常对照组间分布存在显著差异(75.8%vs21.4%,P<0.01);家庭调查也发现在AS一级亲属中T等位基因携带者显著高于正常对照组(64.1%vs21.4%,P<0.01);TX(CT+TT)基因型与CC基因型的AS患者在病程、临床症状、B27阳性率方面无明显差异;CT 分级方面,TX基因型AS患者的骶髂关节CT分级≥Ⅲ级者的比例较CC基因型AS 患者高(60%vs37.5%,P>0.05);但在ESR、CRP方面,TX基因型AS患者较CC基因型AS患者明显升高(分别为80%vs37.5%;56%vs12.5%。

P<0.05)。

结论TNF-α基因启动子-850C→T的突变可能是AS发生的新易感基因。

与AS的炎症严重程度也可能存在关联。

【总页数】4页(P505-508)【关键词】强直性脊柱炎;易感基因;TNFα基因启动因子【作者】肖征宇;侯志铎;陈肃标;林玲【作者单位】汕头大学医学院第一附属医院风湿病科【正文语种】中文【中图分类】R593.23【相关文献】1.肿瘤坏死因子-α基因启动子376位点基因多态性与强直性脊柱炎的相关性 [J], 李志华;韩捷;马群;付嘉;李春霞;张惠;司传平2.肿瘤坏死因子-α基因启动子308位点基因多态性与强直性脊柱炎的相关性Meta分析 [J], 陈银河;刘晓敏;申才良3.肿瘤坏死因子基因启动子-308位多态性与强直性脊柱炎相关性研究 [J], 刘巧红;滕云;吴清敏;沈凌汛;王慧;陈燕;杨真荣4.肿瘤坏死因子α基因启动子多态性与泛发性脓疱性银屑病相关性研究 [J], 龙福泉;刘业强;钱伊弘;蒙秉新;赵丽诗;王千秋5.妊娠期糖尿病与肿瘤坏死因子-α启动子基因多态性相关性的研究 [J], 柳宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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生物工程学报 !"#$%&% ’()*$+, (- .#(/%0"$(,(12
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*&+ 适配子的二级结构分析用 F6GLSL P.;2 软件分析 52 个适配子序列的
最低二级结构能量，模拟其二级结构，发现至少可能存在 ! 种二级结构，主要特征都包括发夹结构或茎环结构。这些结构与其结合功能的关系尚待进一步研究。 ,"# 适配子与 *&+ 亲和力的测定我们筛选的 F6G 适配 F$E,?%$E 测定结果表明，子可与 (67 结合，并随浓度变化而改变。当 (67 为信号随浓度增加逐渐 2 0、 ++F6G 量不超过 ! 0 时， ! ! 增强；信号不再增强；当 ++F6G ++F6G 量大于 ! 0 后， ! YU 量少于 5" ! 无阳性信号，见图 .。 0 时，将 52 种生物素标记的 F6G 适配子各取同样量进行酶联法检测，结果表明不同的适配子序列与 (67 的亲和力不同，见图 8。其中 5" 号最高， . 号最低。
抑制肿瘤坏死因子 !! 的 "#$ 适配子的筛选与鉴定
郭克泰"" 严馨蕊黄国锦徐春晓柴映爽张智清"
（中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所基因室，北京
!%%%4$）
摘
要
应用 F9G9H 技术筛选能与 5+6 结合的 I+3 适配子。化学合成随机寡聚 I+3 库，以 5+6 为靶蛋白，经过
将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚 I+3 适配子，用生物素1亲和素1辣根过氧化 !$ 轮 F9G9H 筛选，物酶显色系统检测适配子与 5+6 的结合活性；用鼠 G"$" 细胞检测适配子拮抗 5+6 活性。结果显示，所筛选到的寡聚 I+3 能与 5+61 并能在细胞培养中拮抗 5+61 !高亲和力结合， !的细胞毒活性。关键词，7AE7.-0，结合活性 F9G9H，5+61 ! JK4# 文献标识码 3 文章编号 !%%%1&%#! （$%%&） %#1%K&%1%L 中图分类号
%
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材料和方法
寡聚 "#$ 库的构建与引物的合成
酸与靶物质相结合的部位、序列及空间构象。经（ 3AE7.-0）。目前， F9G9H 筛选出的配体称为适配子该技术已被成功地用于筛选各种靶物质的结合序列，包括小分子、肽、单体蛋白、核酸、病毒等等。用 F9G9H 技术筛选出的与细胞因子及其受体特异结合的寡核苷酸具有很多优点，如高特异性、高亲和力，能很快进入靶组织，具有快速的血浆清除率，从肾脏排泄，免疫原性低，可以反复使用等，是一种理
［&］。想的抑制剂［$］
寡聚随机 I+3 库由大连 57U7S7 公司合成，两中间 L% 个为随机序端为固定序列以便 VWS 扩增，列的单链 I+3： 4X1RRR 3RR 3WR 35R 553（ +L% ）其库容约为 !%!# 。 33R 33R 3W5 WRW 33R 3 1&X，由大连 VWS 引物参考 V0:.-0 I-N:>= 软件设计， 57U7S7 公司合成。其序列如下：引物 !：引物 $： 4X1RRR 3RR 3WR 35R 5531&X； 4X15 W55 RWR 3R5 W551&X。 %&’ ()*)+ 过程取随机 I+3 库 ! （"4Y L4N， G 作 VWS 扩增 L4Y " !.:=， K$Y!.:=， Z 4； "4Y L4N， 44Y !.:=， K$Y !.:=，，将产物 Z $%； "4Y L4N， L4Y !.:=， K$Y 2.:=，Z !）回收。循环参数：取! G 作不对称 VWS， "4Y &.:=； " ，，； "4Y !4N 44Y !4N K$Y !4N Z !4 K$Y 2.:=。引物 ! 与引物 $ 的浓度比分别为 !： !、 !%： !、 4%： !、 !%%： !、 4%%： !。不对称 VWS 的产物作琼脂糖凝胶电泳分析。根据预实验结果，引物 ! 与引物 $ 的最佳浓度比为 4%： !。将产物回收，加 [:=P:=> /BOO-0 （$ Z ， !.()\G +7W)，
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结
果
./0/1 筛选产物的克隆和测序按照材料与方法中的 LC’CM 过程进行了 5. 轮
筛选，使能与 (67, "结合的序列富集。然后将筛选出的 F6G 适配子克隆到 NOC/,( 载体，提取质粒作内切酶谱鉴定，其中一个克隆的鉴定结果见图 5。
G;!
生
物
工
程
学
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图! *+,- !
""为安徽医科大学代培的硕士研究生。
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郭克泰等：抑制肿瘤坏死因子, "的 F6G 适配子的筛选与鉴定
985
!"##$%&’ ()*+,-%， .##$%&’ /0-%. ） ."" ’， 123 2#*4， ! 加入 5 （5 ，过硝酸冰浴 2#*4； ’ (67 0&! ’） 893 5:； ! ! 纤维素膜（";!2 ，用 5 < =*4>*40 ?@AAB) 2#’ 冲洗； #） ! 然后将膜放入 CD 管，加入 8"" （ ?*4>, ’ B%@E*40 ?@AAB) ! 和 ."" *40 ?@AAB) 中加 CF(G 5"##$%&’） ’ 9#$%&’ 尿 ! 素，用等体积的酚 & 氯仿抽提；异丙醇沉 123 2#*4；淀，最后溶于 8" 9"H 乙醇洗沉淀， ’ >>I. J。 ! 进行不对称取上述洗脱的 F6G 5" ’ 作模板， ! 产物回收后用于下一轮筛选。 D-K 扩增， !"# 克隆和测序
“配体通过指数富集达到系统进化” F9G9H 是（ FMNE-.7E:C -,()BE:(= (O ):>7=PN /M -8A(=-=E:7) -=0:C<1 的缩写，是由 5B-0Q 和 R()P 在 !""% 年分别研究 .-=E）
［!］，用于研究小分子核出的一种新型体外筛选技术
研究。
选 52 个克隆子测定其 F6G 序列，结果如下：
5 2T-OG(-(G-O(OO(OG-(-G(G-O(O(-OG(O(O--(((-- 8T . 2T(O-G-G--OO(OG(((GO--(OO-O(O-((-G--((-G-- 8T 8 2TG(OO-O-GO(-OO-OG-GG(-G-(((OO((G-(G((OO-- 8T ! 2TO-G-G-(GGO(((-(G-G-O(-(-O(-O---(-(((O(O- 8T 2 2T-O-O-O(GGG(-((-((-(O((G---(-(-((-G(O(-O- 8T U 2T(OOOOG(O-OO(-(O--(GG-GG-GOOO-((-G-((G--- 8T 9 2T(OO-OGO(G(G-(-G-GGG--(-(-G-GOOGG--(OOOO- 8T X 2T(---G(-GGGG--GGG(((-OOO(-(O-(-(-(-(-(O-- 8T 1 2T--G-O(-(G-G-((G----(O(OG-GO-(G(G-(-G(-G- 8T 5" 2T--OG-O(G-(-OO(GOG-GGO(----(OGGO(O(OG-O-- 8T 55 2TOO-OOOO(-(-(GGGO(O(O((G(-G(-(O-((O((OO-- 8T 5. 2T-G-(O(GG(-GOGOO-((((((G-(-(-O-(O-G((--OO 8T 58 2T----O--G(O(O-((GO(O-GG(GG-O((-(-G--O---- 8T 5! 2T-G-(O(((OG-O(((-OOG((GGOOGO(--O-(-O-G--- 8T 52 2T-O-(OOGOOG-OG(O((GG((GOG--O-GG-(G-G((O-G 8T
图; *+,- ; 酶联法检测适配子与 ()* 的亲和力
分子高亲和力结合的适配子。我们从库容为 AOAE 的随机 ")@ 库中筛选出与 ()* 特异结合的 22")@，并对其亲和力进行了检测。结果显示筛选出的 ")@ 适配子能以高亲和力与 ()* 结合，可以作为 ()* 的而拮抗剂。我们知道 ()* 与其受体的亲和力较低，用 ?<=<P 技术筛选出的与细胞因子特异结合的寡核苷酸具有高特异性，高亲和力，所以是一种理想的