高效液相色谱法快速测定人血清中丙戊酸含量
高效液相色谱_荧光检测法测定人血清中丙戊酸钠浓度_崔一民
低 、中 、高(5 、25 、75mg /L)3 种浓度的血清样品 , 分别测定其室 温放置 24h 的稳定性以及冻融 3 次的稳定性 。结果表明 , 丙戊
酸钠在血清中很稳定 。
同时考察衍生化后的样品的稳定性 , 结果表明 , 衍生化后
的样品 室温放置稳定性差 , 故所有衍生 化后的样品 均要求在
2h 内测定完毕 。
院伦理委员会审查批准 , 各受试者均自愿参加试验并在试验前
由本人签署知情同意书 。
2.6.2 给药及采血方案 :本试验采用两周期随机交叉试验设
计 。 20 名受试者每日晨 7 ∶30 口服国产或进口 复方丙戊酸钠
缓释片 500mg , 连续服用 3d 后于第 4d 、5d 、6d 晨 7∶30 服药前
±9.36)、(35.48
±9.44)m
g/L
,
且单次和多次服用两种制剂Cmssi n等效
。结论
:本检测方法快速
、灵敏
、经济
,
可用于
监测人血清中丙戊酸钠的浓度 。
关键词 丙戊酸钠 ;稳态谷浓度 ;高效液相色谱 -荧光检测
Concentration Determinati on of Sod ium Valproate in Human Serum by HPLC -Fluorescence Detection Method C UI Yimi n , SUN Peiho ng , LI U Yuw ang , ZHAO Xi a , L I Rong , S UN Z ho ng min(Dept .o f P harmacy , T he Fi rst Af fi liated Ho spi tal of Bei ji ng Universit y , Beijing 100032 , C hina)
衍生化-HPLC法测定人血清中丙戊酸浓度
ｈ ｘ ｎ ｐｏ ｉｎ ｃａ ｉ ｓａ ｎｅｎ ｌｓａ ｄ ｒ ， ｅｕ ｌｓ ｍｐｅ ｗａ ｘｒｃｅ ｔ ｉｔ ｙ ｔ ｅ，２ Ｄｉｒｍｏ ｃ ｔｐ ｅ ｏ ｅ ｅ ａ ｅ ｒｐｏ ｉ ｃｄ ａ ｎ ｉｔｒ ａ ｔｎ ａ ｄ ｓ ｒ ｎ ａ ｌ ｓｅ ｔａ ｔｄ ｗｉ ｄ ｅｈ ｌｅｈ ｒ ，４ 一 ｂ ｏ ａ ｅｏ ｈ ｎ ｎ ｈ
醇一 （ ０８２ ） 流 速 ：． ｍＬｍｉ ； 温 ：５ ； 水 ７ ：： ； ２ １１ ／ ｎ 柱 ３ ℃ 紫外检 测 波 长 ：４ ｍ；结 果 血 清 中丙 戊 酸在 ５０ １ ０５Ｉ ／ ２ ８ｎ ．～ ５ ． ｚ ｍＬ浓 度 ｇ
范 围 内呈 良好线性 关 系 （ ＝０９ ９６ ， 收率 为 ９ ． １ １３ ， ｒ ．９ ） 回 ８２ ％～ ０ － 日内与 日问 Ｒ Ｄ≤５２ ％ Ｓ ． ％。 结论 本 法简 便 、 确 、 准 专
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉｎ ｏ ａ ｐ ｏ ｃ ａ ｉ ｎ ｓ ｒ ｍ ｙ ｄ ｒ ｖ ｔ ａ ｉ ｎ ＨＰ ｔ ｒ ｎ ｔ ｆｖ ｌ ｒ ｉ ｃｄ ｉ ｅ ｕ ｂ ｅ ｉ ａ ｉ ｔｏ － ｏ ｚ ＬＣ
HPLC法测定丙戊酸的血药浓度
HPLC法测定丙戊酸的血药浓度目的：建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸（VPA）血药浓度的方法。
方法：选择ω-溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，Hypersil ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为分析柱；流动相为甲醇-水（75∶25，V/V)，检测波长为248 nm，流速为1.0 ml/min。
血样经酸化后以二氯甲烷提取。
结果：内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为8.0 min和12.8 min，线性范围为25～200 μg/ml，平均回收率为100.61%，日内、日间RSD均小于4.19%。
结论：本法快速、简便、准确，适合临床常规监测需要。
[Abstract] Objective: To establish a rapid pre-column derivatization-high-performance liquid chromatography determination of valproic acid (VPA) plasma method. Methods: ω-bromoacetophenone as a derivative reagent, cyclohexane carboxylic acid as the internal standard, Hypersil ODS-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5μm) for the analytical column; mobile phase was methanol-water(75:25, V/V), detection wave length was 248 nm, flow rate was 1.0 ml/min. Blood extracted by dichloromethane after acidification. Results: The internal standard cyclohexane carboxylic acid and VPA respectively, the retention time of 8.0 min and 12.8 min, the linear range of 25-200 μg/ml, the average recovery was 100.61%, days, day RSD were less than 4.19%. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and suitable for routine monitoring of clinical need.[Key words] Pre-column derivatization; High-performance liquid chromatography; Sodium valproate; Blood drug concentration丙戊酸作為癫痫小发作、大发作和肌阵挛的首选药物之一，一直是临床医生常用的抗癫痫药物。
HPLC法测定丙戊酸血清浓度衍生化条件的考察
液１ ． ０ ｍ ｌ 至ｌ Ｏ ｍｌ 量瓶中， 用 水 定 容 至 刻 度 即 得
０ ． １ ｍ ｇ ・ ｍｌ 的内标溶 液 。
２ ． ３ 血 样处 理
精密取血清 ０ ． １ ｍｌ ， 加 入 内标 溶 液 ５ ０ ｌ ， 再 加 １ ｍ ｏ ｌ ・ Ｌ 硫酸 １ ５ ０ ￣ １ ， 混匀 ； 加 入 乙醚 ２ ｍ ｌ 涡 旋 提 取１ ｍｉ ｎ ， 离心 １ ０ ｍ ｉ ｎ （ ３ ５ ０ ０ ｒ ・ ｍｉ ｎ ） ， 吸取 上 清 液至
１ ． Ｏ ｍ ｌ ・ ｍｉ ｎ ～ ； 柱温 ： ３ ０ ｃ Ｃ； 紫外检测波长 ： ２ ４ ８ ｎ ｍ；
灵 敏度 ： １ ． ０ ０ Ａ Ｕ Ｆ Ｓ ， 进 样量 ： ２ ０ １ ￣ １ 。 ２ ． ２ 对 照 品溶液 的配 制 精密称取 ５ ７ ． ８ ｍ ｇ丙戊 酸钠 对 照 品 至 ２ ５ ｍ ｌ 容 量瓶 中， 用０ ． ２ ｍｏ ｌ ・ Ｌ 氨 水 溶 解 并 定 容 ， 得 到
【 中图分类号 ］ Ｒ ９ ６ ９ ． １ ； Ｒ ９ ７ １ ． ６
【 文献标识 码】 Ａ
丙 戊 酸 钠是 临床 上 常 用 的抗 癫 痫 药 ， 监 测 血 药 浓 度实 现 个体 化 给 药 ， 可提 高 癫痫 病 的控 制 率 和 减 少不 良反 应 。衍 生 化 一 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 。 是 目前 国 内常 用 的 丙 戊 酸 血 药浓 度 测 定 方 法 ， 但很少文献ｂ 对 衍
柳州ｔ ｉ学 ２ ０ １ ４ 年第 ２ ７ 卷第 ２ 期
பைடு நூலகம்
Ｌ ｉ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ７ ， Ｎ ｏ ． ２
高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度
高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度陈坚方维军吴芳张灯玲丁宗政!上海市松江区中心医院药剂科上海"#$%##&’摘要(目的)建立测定血浆中丙戊酸血药浓度的高效液相色谱法*方法)血浆用正己烷提取+经,-溴苯乙酮衍生后浓集进样+采用.//01234$5柱!$6#7789:%77+6;7&+以甲醇<水!5#<"#&为流动相+环己烷羧酸为内标物+在波长"95=7处测定*结果)丙戊酸的线性范围为$$:>$?$5$:##;@A7/+平均回收率大于B C D+日内和日间E F G H6D*结论)本法快速I简便I 准确+适用于丙戊酸血药浓度测定*’关键词(高效液相色谱法J丙戊酸J血药浓度’中图分类号(E B C$K:%J E B$C’文献标识码(.’文章编号($##C-99#%!"###-#"B%-#>L M N M O P Q R S N Q T RT U V S W X O T Q Y S Y Q Z Q R[M O\P]^_Q‘_X M O U T O P S R Y M W Q a\Q Z Y_O T P S N T‘b O S X_^431=c d e=+f e=@g1d h i=+gif e=@+j k l m!n j o l p k q j r k s tu v l p q l w x+y v l r z v l{y s r z|{l r z}j r k j p~s!o{-k l m+y v l r z v l{"#$%##&’"#$%&"’%("())*+,101-7d=1.e//-+d2e2d,d=01-i7123d@3/1-3+-7e=21/d4i d,23-+7e0+@-e/32 !5674&8)9%:;L$)422/+31<e=12e-1+<2/d2e2d,=e001/1201,e0e=d=01-=e/00e=,e-,8.>?,10120+-!"95=7&e=,4$52+/i7==e0i01,8F1-i70e7//1!#:$7/&=e01<0-e201,=d03"7/e210d2=-31<e=18?e/-/-+d2e2d,d=+-@e=d2/e21-=e0,1-d.1,12e,,d=@d=0+,-1-+7+e210+/31=+=18*31+-@e=d2/e21-=e01.e/+--e01,0+,-2=100i=,1-@"00-1e78&9$A B%$)*31/d=1e-d02+3.e//-+d2e2d,=e0$$:>$C$5$:#;@A7/8*31 -1/e0d.100e=,e-,,1.d e0d+=!E F G&+3d=01--,e2e=,d=0-e-,e23+-.e//-+d2e2d,=e0/10003e=6D8*311<-0-e20d+=-12+.1-2=e07+-103e=B C D8*31,10120d+=/d7d00d=01-i7=1-1#:6;@A7/3+-.e//-+d2e2d,8’;D’B A$(;D)*317103+,d0e22i-e01e=,01=0d0d.1+0i d0e1/13+-031-e/1i0d2,-i@7+=d0+-d=@!*G E&e=, /3e-7e2+F d=10d200i,2+3.e//-+d2e2d,8’G9HI;&L$(3d@3/1-3+-7e=21/d4i d,23-+7e0+@-e/32J.e//-+d2e2d,J01-i72+=21=0-e0d+=丙戊酸!.e//-+d2e2d,&在临床上常用于抗癫治疗+由于药物的剂量和血药浓度间的个体差异很大*因此+在长期用药或增减药物剂量时对体内血药浓度进行监测显得十分必要*由于丙戊酸在紫外区无特征性吸收+故有关丙戊酸的血药浓度测定方法多为气相色谱法或酶免疫法*虽有高效液相色谱法的报道+但都各有不同J$+"K*本法采用,-溴苯乙酮将丙戊酸衍生化+生成苯甲酰甲基丙戊酸+在紫外条件下+用5674法测定血清中丙戊酸的浓度*此法快速I简便I准确+适用于丙戊酸临床血药浓度监测* L材料与方法L:L仪器M N@*E N@>""型高效液相色谱仪J M N@*E N@>>"型可变紫外检测器J M N@*E N@ G96#数据处理系统J5#-"离心沉淀器!上海手术器械厂&J5-B"微型混合器!西巴斯生物技术开发公司&J电热恒温水浴锅!上海医疗器械厂&*L:O药品和试剂丙戊酸标准品!湖南湘中制药有限公司+纯度B B:6D以上&J环己烷羧酸!f/i F e2317d1.P&J,-溴苯乙酮I正己烷I乙腈I硫酸I三乙胺I氨水均为分析纯+甲醇为色谱纯*L:Q色谱条件.//01234$5柱!$6#7789:%77+ 6;7&+流动相为甲醇<水!5#<"#&+检测波长"95 =7+流速$:#7/A7d=+灵敏度#:#6.>f F+进样量"#;/*内标为环己烷羧酸*在本实验条件+两种物质R%B"R中国临床药学杂志45S@T F T c N>E@.7N f47S@S4.765.E E.4U"###年第B卷第6期医生在线的色谱峰分离良好!血浆内源性物质峰无干扰"内标保留时间为#$%&’()!苯甲酰甲基丙戊酸保留时间为*$*+’(),图%-"[#-e __f _g G )g,O J H ’E-h G i )_g G )g,O J H ’E -j f g G k f U lU m n f,o-j p q,o-%%$&%%%$F +rD $&D +N $N &rF $*D F $*D +D $#D N N $F +rD $*%+*$#K rD $*N D $N D %N %$D D%*+$%#r&$&++N $+N r%$N *%$N *表Q 丙戊酸的日内和日间精密度‘7a Q s ?847t >7c7?>0?8@4t >7c<4@=0A 05?59:7;<450=7=0>,d[#-e __f _g G )g ,O J H ’E -u )n U m B _m l h G i )_g G )g,O J H ’E -j p q,o-u )n f U B _m l h G i )_g G )g,O J H ’E -j p q,o-%%$&%%D $N N rD $M %&$*M %D $K #rD $&*&$M *+D $#D +%$N D rF $F &F $M &+%$D +rF $M D F $K M %N %$D D%*N $N D rF $N #%$#+%*N $&+r#$F +F $+KQ $Q 专一性考虑到临床检测及药物动力学研究的干扰情况!选择了几种可能合用的药物进样!结果扑米酮L 地西泮L 苯巴比妥L 苯妥英钠和卡马西平在该色谱条件下均不出峰!可见以上药物对本法测定无干扰"Q $v 临床应用w 病例%x 男!#*l !癫病史F D m "目前用药情况T 丙戊酸钠H 丙戊酸缓释片D $#J !y _!卡马西平片D $%J !n (_"于清晨服药前抽血!在本色谱条件下!测得丙戊酸的谷药浓度为F %$F +O J H ’E!未见有卡马西平的干扰!同时在另一色谱条件下!测得卡马西平的谷药浓度为K $K M O J H ’E "分析两药合用!卡马西平可增加肝脏代谢!导致丙戊酸的谷药浓度低于治疗范围!但由于卡马西平的谷药浓度在治疗范围内!故患者的症状仍得以控制"w 病例F x 女!*l !%m 前诊断为癫"目前用药情况T 丙戊酸钠片D $&J !z (_"于清晨服药前抽血!在本色谱条件下!测得丙戊酸的谷药浓度为M +$*+O JH {*+F {中国临床药学杂志|}u W ~p ~!"#j W e I "h|I u W u |e I $}e j %e |&F D D D 年第+卷第#期医生在线!"#接近治疗范围#经与临床医师沟通#测定结果与临床症状基本相符$%讨论有文献&’(报道血清样品用正戊烷提取#但实际操作中发现#当加入正戊烷进行振荡提取时#极易发生乳化凝固现象#经过反复测试#改用正己烷提取后#克服了上述的缺点#提高了分离效果$在衍生化试剂使用方面#有文献&)#*(报道#用对溴代苯酰甲基澳和+,溴,对,硝基苯乙酮#而本法采用的-,溴苯乙酮则具有价廉.易得的特点#并且为衍生化反应提供了多种选择$国内有报道&’(的检测波长为+/*和+0/1!#但经紫外扫描后我们发现苯甲酰甲基丙戊酸的紫外最大吸收波长应为+*21!$国内外所报道&’#/(的采用荧光检测的高效液相色谱法#虽然检测灵敏度高#但需有荧光检测器#检测条件要求较高#一般医院难以开展$而本法所采用的条件简便.价廉#并且灵敏度.精密度.准确性及专一性均符合测试要求#适用于丙戊酸的临床治疗药物浓度监测$3参考文献4&)(郝润喜#闫彩萍#刘玉玺5高效液相色谱,柱前衍生法测定丙戊酸镁血药浓度5药物分析杂志#)667#)78’9:)7+&+(郁健#王广基#杜春波#等5高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠的含量5中国药科大学学报#)662#+68)9:*/&’(黄希顺#唐敦立5丙戊酸类药物的药理与临床5郑州:河南医科大学出版社#)667#)/*;)/0&*(胡纪原#谢晓梅#洪铭范5等5<=>=?法结合紫外吸收衍生法测定血清丙戊酸浓度5安徽医学#)667#)2809:00&/(<@A B#C@!D A@E#F1G D H C#I J K L5M H N H A!O1@N O G1G P Q@"R A G O S@S O T O1U D!@1V H A D!W X U O Y U,R H A P G A!@1S H"O Z D O T S U A G!@N G Y A@R U X [O N UP"D G A H V S H1S H T H N H S N O G15\O G"=U@A!\D""#)666#++869:67/8+]]],]/,)2收稿9;26+;中国临床药学杂志?<F<=B=>?@><d A?B?A F<F?d A=<d>Ed?C+]]]年第6卷第/期。
高效液相色谱法测定丙戊酸钠片剂的含量
ｍａｏｒｐ ｉ ｃｎ ｉｏ ｓ 】 ｏｅａ、ｍ ｉ ｈｓ ｆｍ ｔａｏ— ｆ ｒｓｌ ｉ （ ｒｌ Ｌ Ｔ ｔ ｂ ｔｌｒ ｍ ｔ ｙｒｘ ｅ ２ ｔｇａ ｈ ｄｔ ｎ：ｃ ｃｌ ｎ ａ ｌ ｐａｅｏ ｅｈｎ ｌｍ ｆ ｏｕ ｏ ５ｍｒ － ｅｒ ｕｙ ｒ ￣ｔｎｈ ｄｏ ｉ ， ０ ｃｏ ｉ ｍ ｂ ｅ ｔ ｅ ｔｎ ￣ ａ ａｍ ｒ ｄ ｍｍｏ。 。 ｍｏ ｏａｉ ｐ ｔ￣ｕ ｈ ｓｈｔ）７ ：５ ，１ ｒ ｅｅｔｎａｄＰａ ｒｓｃｌ ｌ ｏ Ｅ Ｕ Ｔ Ｔ ｅｅＷ ．ａ 。 ｌＬ 。 ￣ ｂｓ ｏ ｓ ｍ ｐ ｏｐ ａ （ ５２ ）２ ３ｍ ｆ ｔｃｉ ｎ ｅｋ￣ｅ ａ ｕ ６ ｎ Ｒ Ｓ Ｌ Ｓ ｃ ｓ ｉ ｅ ｏｄ ｏ ． ｃａ ｈｒ ｆ ｄ １ ｑ
［ 收一 日期 】 ０ —６ ０ ２ １ － ０ ０２
高效 液 相 色谱 法 测定 丙戊 酸 钠 片剂 的含量
孙伟 张 ，曾仁 杰 ，张勤 ， 利 ，潘素琼 ，张 丽娜 景 （ 成都军区总医院， 四川 成都 ６０８） １０３
［ ］ 目的 ： 摘要 建立高蛀液相 色 法测定 丙戊酸钠 片荆含量的方法：方法 ： 用反相 ＧＲ 谱 采 色谱拄 ， 以甲醇一 冲液（ ｒ ・ 缓 ５ｒ￣ｌ Ｉ ｎ Ｌ
Ｄ ｔ ｍｎ ｔ ｎｏ ｄｕ ｖ ｌｒａｅｔｂ ｔ ｈ ｔ Ｌ ｅ ｒ ｉａｉ ｆ ｏ ｉｍ ａｐ ｏ ｔ ａ ｌ ｓ ｙＩＰ Ｃ ｅ ｏ ｓ ｅ
Ｓ ＵＮ ｅ Ｚ ａｇ， Ｅ Ｗ ｉ ｈ ｎ Ｚ ＮＧ Ｒｅ－ｉ， Ｉ ４ ｑ Ｑｉ，ｔａ （ － ｎＪｅ Ｚ￣ ２ Ｇ ｎ ｅ ｌ Ｈ ｏ Ｃ ｇｕｌ ｌ ｒ ａ ａ ｄ，ｈ ｈａｇ０岫 ｆ ％ｍ ｄ ｖ ｉ ｙＣ ｒ ￣ｔ ｓ ｍｒ Ｓ ｉ ｕ ｎ Ｃ ６ 帅８ ） １ ３
冈 Ｉ 丙戊酸钠色谱图
高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量
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高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量
最低 检 出质 量 浓 度 为 １６ ｇ ｍ ， 均 回收 率为 ９ ．７ ， ．４￣ ／ Ｌ 平 ８ ３ ％ 其他 常 用抗 癫 痫 药物 不 干扰 测 定 ， 分析 范 围 内具有 良好 的 线性 关 系。 在 结论 该 方
丙戊 酸钠又名二丙 基乙酸钠 ， 至今仍 是临床上使用 较多 的抗
癫痫 药 物 。 由于 丙 戊 酸 钠 的 治疗 剂量 范 围 窄 ， 效 及 毒 性 与 血 药 浓 疗 度 关 系密 切 ， 患 者 间个 体 差 异 很 大 ， 且 因此 对 其 体 内血 药 浓 度 进 行 监 测 十分 必 要 。 丙戊 酸钠 分 子结 构 中缺 乏 有 效 的 紫外 吸 收 ， 用 因 采 紫外 检 测 的高 效 液 相 色 谱 （ Ｐ Ｃ 法 测 定 其 血 药 浓 度 时 灵 敏 度 较 ＨＬ） 低 且 干 扰 因素 多 ， 以 大 多 采 用 荧 光 检 测 的 Ｈ Ｌ 所 Ｐ Ｃ法 ， 检 测 条 件 但 要 求 比较 高 。 者 利 用 丙 戊 酸 钠 与 溴 苯 乙酮 在 一 定 条 件 下 衍 生 化 笔 后 具 紫 外 吸 收 的特 点 ， 立 了 比较 简 单 的紫 外 检 测 的 Ｈ Ｌ 建 Ｐ Ｃ法 ， 并 常 规监 测 了 ２ 例 癫 痫 患 者 ， 报 道 如 下 。 ０多 现
２ ０ 第 ｌ 第 ６期 ０９年 ８卷
药物 研究
高效液相色 谱法测定人血清 中丙戊酸钠 含量
展 翔 徐 ，
HPLC
HPLC-FLU法测定人血浆样本中丙戊酸浓度一、摘要丙戊酸分子式为C8H16O2，分子量：144.21，CAS号：99-66-1。
丙戊酸为无色液体，沸点221℃，相对密度1.1，折光率1.425，闪点111℃，略溶于水。
双丙戊酸在肠道内分解为丙戊酸，其体内吸收与丙戊酸钠的吸收量相似，丙戊酸与血浆蛋白的结合率随药物浓度增加而减少，在4040mg/L时蛋白结合率为90%，丙戊酸主要经肝脏代谢，尿液中原型药物的排泄量仅占总给药量的3%左右。
双丙戊酸钠单次给药后的半衰期为9到16H，监床患者连续服用7天（250mg,Bid）后血浆中丙戊酸浓度在50-100mg/L范围内波动。
二、关键词丙戊酸庚酸双丙戊酸钠癫痫双丙戊酸钠HPLC三、引言丙戊酸（Valproic Acid）为一种不含氮的广谱抗癫痫药。
本品对多种方法引起的惊厥，均有不同程度的对抗作用。
对人的各型癫痫如对各型小发作、肌阵挛性癫痫、局限性发作、大发作和混合型癫痫均有效。
一般认为它对癫痫症疗效归因于增加脑部γ氨酪酸（GABA）的浓度。
亦用作心境稳定剂，有效控制躁狂或抑郁发作而不会引起转相、长期使用可有效预防躁狂或抑郁复发。
丙戊酸盐比锂盐具有更好的安全性，无须监测血药浓度，副作用与患者耐受性更好，近10年来已成为心境稳定剂中的主要用药，国内外医生接受程均较高。
四、仪器与设备Agilent1200型高效液相色谱仪；METTLER TOLEDO AB135-S型十万分之一天平；XW-80A涡旋混合器；TDZ4-WS低速台式离心机；TGL16M型冷冻离心机；DZG-303A型实验室纯水系统五、试药与检测条件庚酸对照品，三乙胺，1，2-丙二醇，乙醚：国药集团化学试剂有限公司甲醇，乙腈：美国Tedia公司，色谱纯Agilent C18色谱柱；流动相：乙腈：水（72：28v/v）流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
荧光检测器激发波光长325nm，发射波长398nm。
反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度
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｛ ｊ ７ Ｉ ４１ 采 ￣ｍ 摘要： 目的 ： 剧定凡血 清中丙戊瞳钠浓度 方 以反相高效液 搠色谱法 甲辞 水 ｆ ０ Ｉ】为流 动 相 蹬测 波 长 为 ２ ，： ； 用衍 生 击： ‘ 法 ． 己 境鞋 美 为 内标 结 果 雨 戊驻 钠 求 度 在 １ ４ ２ ８ ｆ ｇ 【ｌ ￡ 环 ● ７ １ Ｉ 范禹 内呈 现 ＆奸 线 性 关 系 结论 ： 方 法 简 便 、 确 ． 合 于 ｆ １ 谴 准 适 朱血 药 浓 度监 羽 ！ 关 键词 ： 反扫 高效 液 千 色谱 法 ： 戊 酸 钠 ； 生 化 目 丙 衍 Ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｎ ｅ ｒ ｔｏ ｆ Ｖａ ｐ ｏ ｃ Ａｃ ｄ ｉ ｅ ｎ Ｗ ｉｈ ＲＰ— ＨＰ ｅ ｅ ｍ ｎ ｔｏ ｆ ｔ ｅ Ｃｏ ｃ ｎｔ ａ ｉ ｎ ｏ ｌ ｒ ｉ ｉ ｎ Ｓ ｒ ｍ ｔ ＬＣ
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EMIT法与HPLC法测定人血中丙戊酸浓度的比较
【 文章 编 号１ ６ ４ ４ ２ （ ０ ） ９ ｃ 一 ０ — ３ １ ７ — ７ １ ２ １ ０ （ ）０ ５ ０ １
Ｏ ｅｃｎｒｒ，ｈ ｅｒｅｏ ｒｃｓ ｎｆｒＨ Ｌ ｔｏ ａ ｅ ｅ ａ ａ ｆ ＭＩ ｔｏ Ｐ ００ ）５ ａ ｓ ｆ ｅｕｔ ｎｔ ｏ ｔ ｙ ｔｅｄ ｇｅ ｆ ｅｉ ｏ Ｐ Ｃ ｍｅ ｄｗ ｓｂ ｔ ｒ ｈ ｎｔ ｔ Ｔｍｅｈ ｄ（＜ ．１． ２ｐ ｉ ｓｌ ｈ ａ ｐ ｉ ｏ ｈ ｔ ｔ ｈ ｏＥ ｒｏｒ ｓ
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高效液相色谱仪测定丙戊酸的方法探讨
０．１５ｍｇ·ｍＬ一，放 置 于 ４℃ 冰箱 中 备 用 。 ２．２．３ 衍 生化试剂的配制 ：精密称量 Ｗ一溴苯乙酬 ０．２５００ｇ放 置于 ２５ｍＬ容培瓶 中，用 少 量 乙腈 溶 解 ，然 后 加 乙腈 定 容 到 ２５ｍＬ，摇 匀 ，配 置 成 浓 度 为 １０ｍｇ·ｍＬ 的 Ｗ一溴 苯 乙酮 乙腈 溶 液 ，放 置于 ４℃冰箱 中备用 。 ２．３ 样品处理及 ＨＰＬＣ分 析 将 血样 离心 （４５００ｒ·ｒａｉｎ ） 分离出血清 ，精 密 吸 取血 清 ＩＯ０￣Ｌ，加 内标 溶 液 ５０１ｘＬ，再 加 ５０ｔ．ＬＬ ０．２ｍｏｌ·Ｌ 氨 水 、１００￣Ｌ １．０ｍｏｌ·１ 硫 酸 、２ｍＬ乙 醚 ， 涡旋革 取 １０ｒａｉｎ，５０００ｒ·ｒａｉｎ～．离心 ５ｎｌｉｒｌ。取 Ｌ层 乙醚 层 ｌｍＬ于具塞玻璃 管 中，加 １０ｔｘＬ三 乙胺 ，ｌＯｐ．Ｌ澳 苯 乙酮 ，涡旋 ２０ｓ，盖 上 塞 反 应 １０ｒ ａｉｎ，去 塞 ５５℃ 水 浴 反 嘘挥 乙 醚 ｌＯｍｉｎ。 加 １００１ｘＬ甲醇 ，涡旋 ｌｍｉｎ进 样。在上 述色 谱条件下 测定 ，记 录 内 标 及 ＶＰＡ衍 生 物 的峰 面 积 。 ３ 结 果 ３．１ ＨＰＬＣ法 色 谱 行 为 在 上 述 所 定 实 验 条 件 卜，样 及 空 白血清的色谱图 （见 图 １）。由 １町 ，ｍ样 ｒ｝Ｉ内标峰 和样 品 峰 能 与 其 他 成 分 的 色 谱峰 很 好 的分 离 ．他 们 的 保 留 ｝ｌ寸问 分 别 为 １０．２７０ｎｆ ｉｎ、１７．８４３ｎｆ ｉｎ。
及 ＶＰＡ 衍 生 物 的 保 留 时 间 分 别 为 １０ ２７０ｒ ａｉｎ、ｌ７．８４３ｒ ａｉｎ，标 准 曲 线 回 归 方 程 为 Ｙ＝７４．３６５Ｘ 一９．６０２８，Ｒ ＝０．９９７５，丙 戊 酸 钠 浓 度 在 １１．７２— １４０．６４ｐｇ·ｍＬ 范 围内内标峰 和样品峰 的峰 面积 比与丙戊酸 钠浓度 呈现 良好线性 关 系、结 论 此 方法快速准确 、经济有效 ，适合 用于 丙戊酸 钠 的 血 药浓 度 监 测
高效液相色谱法测定人体外周血丙戊酸钠浓度
高效液相色谱法测定人体外周血丙戊酸钠浓度摘要】目的：建立人体外周血中丙戊酸钠浓度检测方法。
方法：色谱柱Pronaos EP-C18柱，流动相：乙腈-水（70:30），流速：1.0mL?min-1，进样量为20μL，柱温35℃，检测波长λ=248nm。
结果：本法在丙戊酸钠浓度（X）为11.5～115μg?mL-1(r=0.9999)内线性关系良好。
三种不同浓度（11.5、46.0、115.0?g?mL-1）相对回收率分别为98.26%、99.35%、99.47%，精密度的RSD小于5%。
结论此法样本需求量少，血浆处理方法简单，具有专一性，适用于临床丙戊酸钠血药浓度监测。
【关键词】丙戊酸钠；血药浓度检测；高效液相色谱【中图分类号】R446.112 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）13-0376-02丙戊酸钠为广谱抗癫痫药，其抗痫谱广、疗效高，是较理想的抗癫痫药物。
近年来，临床用于治疗偏头痛、原发性三叉神经痛、迟发性运动障碍等也有较好疗效[1-2]，但其在临床上的治疗指数低，安全有效血药浓度范围较窄，而且服药周期长，容易发生不良反应[3]。
患者长期服用丙戊酸钠治疗的过程中，密切注意影响丙戊酸钠血药浓度波动的因素，必须综合考虑各方面的因素，实行个体化给药，以血药浓度为依据，而确保患者的用药安全。
本法通过优化血浆中丙戊酸钠提取方法，减少干扰因素，通过HPLC法测定肿瘤患者血浆中丙戊酸钠的含量，其专属性强、结果可靠，为临床使用丙戊酸钠做好药学监护提供了依据。
1.仪器与试药LC100高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；BSM电子天平（上海卓精电子科技有限公司），HX-03超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）。
丙戊酸钠对照品由中国食品药品生物制品检定研究所提供（批号：100963-201302）；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；正己烷、甲醇、三乙胺均为分析纯；空白血浆由血库供应。
一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法[
专利名称：一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：代伟,李兰兰,虎亚光,杨涛
申请号：CN202010320591.6
申请日：20200422
公开号：CN111337601A
公开日：
20200626
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，是将催化剂、丙戊酸衍生化试剂置于密闭玻璃管中，采用一锅煮合成法制备得到的衍生物。
本发明提供的一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，利用超声化学原理，加速分子运动，促进衍生化反应，提高反应效率，缩短反应时间；采用“一锅煮”的方法，简化衍生化反应后处理步骤，无需蒸干或氮气吹干再加流动相溶解进样，可减少因挥发或氮气吹干导致的衍生化产物的损失；而采用衍生化结束后冰浴冷却吸取下层溶液直接进样，后处理方法简便，同时减少误差，为高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度提供一种高效、快捷、方便的衍生化方法。
申请人：代伟
地址：730050 甘肃省兰州市七里河区七里河北街89号(甘肃省妇幼保健院)
国籍：CN
代理机构：兰州锦知源专利代理事务所(普通合伙)
代理人：勾昌羽
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高效液相色谱法测定丙戊酸镁血药浓度的方法改进及质控评价
高效液相色谱法测定丙戊酸镁血药浓度的方法改进及质控评价杨颖达;何秋月;李德秀;王天褀【摘要】目的改进测定人血清中丙戊酸镁浓度的高效液相色谱法.方法血清样品经1.0 mol/L硫酸沉淀,以环己甲酸为内标,以2-溴-4′-硝基苯乙酮为衍生试剂.采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Hypersil C18柱(200 mm×4.6 mm,10μm),流动相为甲醇-水(81:19),检测波长为265 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃.并对2016年度医院216份质控样本进行统计分析.结果内标和丙戊酸镁衍生物的保留时间分别为4.1 min和5.4 min,质量浓度线性范围为11.0~200.0μg/mL(r=0.9993),平均回收率为98.2%~102.5%,批内、批间精密度RSD<2.3%,稳定性试验RSD<3.9%,2016年度质控数据批间RSD<15%,符合2015年版《中国药典(四部)》要求.2016年度质控基本符合正态分布,所有质控数据均为在控.结论改进后的方法简便、快速、准确,适用于临床丙戊酸镁血药浓度监测,室内质控评价保证了血药浓度监测质量.%Objective To improve the HPLC method for determining the concentration of magnesium valproate in human serum. Methods The serum was precipitated by sulfuric acid ( 1. 0 mol/L ) , the cyclohexane carboxylic acid was used as an internal standard and 2-bromo-4′-nitroacetophenone was used as derivation agent. The HPLC method was used, the chromatographic column was C18 column ( 200 mm × 4. 6 mm, 10 μm ) , the mobile phase was methanol-water ( 81:19 ) , the detection wavelength was 265 nm, the flow rate was 1. 0mL/min, and th e column temperature was 25 ℃. Totally 216 quality control samples of the hospital in 2016 were statisti-cally analyzed. Results The retention time of cyclohexanecarboxylic acid derivate and magnesiumvalproate derivative were 4. 1 min and 5. 4 min, respectively, the linear range was 11. 0-200. 0 μg/mL ( r=0. 9993 ) , and the average recovery was 98. 2% -102. 5%, the RSDs of within batch and between batch were less than 2. 3%, RSD of stability was less than 3. 9%, RSD of quality control data in 2016 were less than 15%, which accorded with the requirement of Chinese Pharmacopoeia ( 2015 Edition, Volume Ⅳ) . The quality control basically accorded with the normal distribution in 2016, and all the quality control data were in control. Conclusion The improved method is simple, rapid and accurate, it is suitable for monitoring the concentration of magnesium val-proate in serum, and the internal quality control ensures the monitoring quality of serum concentration.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2017(026)023【总页数】4页(P10-13)【关键词】丙戊酸镁;高效液相色谱法;血药浓度监测;质控评价【作者】杨颖达;何秋月;李德秀;王天褀【作者单位】湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000;湖北省中西医结合医院药学部,湖北武汉 430000【正文语种】中文【中图分类】R914.1;R971+.6丙戊酸镁（magnesium valproate）是继丙戊酸钠后的临床一线抗癫痫药[1]。
高效液相色谱法快速测定人血清中丙戊酸含量
高效液相色谱法快速测定人血清中丙戊酸含量
肖红;张石宁
【期刊名称】《色谱》
【年(卷),期】1998(16)4
【摘要】测定了血清中丙戊酸的高效液相色谱快速分析法，用ＺｏｒｂａｘＯＤＳ柱，ＰＨ４．２硫酸溶液为流动相，检测波长２１０ｎｍ，流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ，线性范围０．８２ｍｏｌ／Ｌ－１．８ｍｍｏｌ／Ｌ（ｒ＝０．９９６）最低检测限０．８２μｍｏｌ／Ｌ平均回收率为９８．３２％±２．２７％，日内与日间的变异系数分别为３．３１％和４．８２％。
【总页数】1页(P365)
【作者】肖红;张石宁
【作者单位】南京医科大学附属脑科医院;南京医科大学附属脑科医院
【正文语种】中文
【中图分类】R971.6
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1.高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量分析 [J], 朱伊
2.柱前衍生高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度 [J], 汪宝军;胡庭杰
3.高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量 [J], 展翔;徐玫
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高效液相色谱法测定丙戊酸血浓度
高效液相色谱法测定丙戊酸血浓度
陈淇芳;胡朝欣
【期刊名称】《儿科药学》
【年(卷),期】1999(005)003
【摘要】本文建立了采用ＢｒＭＭＣ将丙戊酸转化为可紫外检测的酯，再经ＲＰ－ＨＰＬＣ测定的丙戊酸血浓度测定方法。
在１５－２００ｕｇ／ｍｌ范围内，峰高比与浓度呈良好的线性关系。
ｒ＝０．９９９１；平均回收率为１０１．２％，方法准确、灵敏、选择性强、重现性好，操作简便快速，应用于３４例患者的治疗药物监测。
取得良好的临床效果。
本法适于临床研究与应用。
【总页数】3页(P23-25)
【作者】陈淇芳;胡朝欣
【作者单位】青岛市儿科临床研究所临床药理室;青岛市儿科临床研究所临床药理室
【正文语种】中文
【中图分类】R971.6
【相关文献】
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第 卷第 期色 谱
年 月
高效液相色谱法快速测定人血清中丙戊酸含量α
肖 红 张石宁
南京医科大学附属脑科医院 南京
提 要 建立了血清中丙戊酸的高效液相色谱快速分析法∀用 柱 硫酸水溶液为流动相 检测波长 流速 线性范围 Λ ∗ ρ 最低检测限 Λ 平均回收率为 日内与日间的变异系数分别为 ν 和 ν ∀关键词 高效液相色谱法 丙戊酸 血浓度分类号
前言
丙戊酸钠和丙戊酸镁为目前较常用的抗癫痫药∀临床监测血中丙戊酸常用气相色谱法 荧光偏振分析法 高效液相色谱法 ∀这些方法很繁琐∀本文建立的高效液相色谱直接分析法不需衍生反应 可用于临床药物监测及药物动力学研究∀
实验部分
试剂及血样 丙戊酸钠标准对照品 连云港制
药厂 Α 苯溴乙酮 比利时 公司 其它试剂为分析纯∀水为重蒸去离子水∀空白血清来自江苏血站∀病人血样采自本院单服丙戊酸钠一个月以上的癫痫病人 服药后 抽血 分离血清放入冰箱中备用∀
色谱条件 岛津 型高效液相色谱仪 紫外检测器 数据处理机 色谱柱
为 ≅ 粒径 Λ 流动相为硫酸水溶液 流速 检测波长 柱温 ε 灵敏度
进样量 Λ ∀色谱图见图
∀
图 标准品 α 血清 β 和血清 标准品 χ 色谱图
Φιγ Χηρο ατογρα σοφστανδαρδϖαλ ροιχαχιδ α
σερυ β ανδστανδαρδ σερυ χ
血样处理 取血清 加入 硫酸 和 正戊烷 振荡 离心
取上层正戊烷液于另一试管中 在 ε水浴
中挥干 残渣用 Λ 水溶解 进样 Λ ∀
结果与讨论
线性关系及检测限 在空白血清中加入不同
浓度的丙戊酸钠 分别配制成系列浓度标准血清各
按 节处理后测定 得浓度Χ
与峰面积Α的线性回归方程Α ≅ Χ
ρ ∀线性范围为 Λ ∗
最低检测浓度为 Λ ∀ 回收率及精密度 配制浓度分别为 Λ 的含丙戊酸标准血清各 份分析测定
测得丙戊酸的平均回收率为 结果见表 ∀取浓度为 Λ 含丙戊酸的标准血清
份 当日测定 求得日内变异系数为 ν 另取样品 份 每日测一份 连续 天 求得日间
变异系数为 ν ∀
表 血清中丙戊酸的回收率 ν
Ταβλε Ρεχοϖερψοφϖαλ ροιχαχιδινσερυ ν
配制浓度
Λ
测得值
Λ 回收率
平均回收率
讨论 流动相 值的变化 对丙戊酸的分离
影响较大∀ 时 丙戊酸峰与血清中杂质峰不能分离 时 丙戊酸峰扩展 拖尾严重∀故本文选定流动相最佳 值为 ∗ ∀用两种方法同时测定了 份标准加样血清和 份服用丙戊酸钠病
α
本文收稿日期 修回日期
表 衍生化法与直接法测定比较 Λ ολ Λ
Ταβλε Χο αρισονβετωεενδεριϖατιζατιον ετηοδ
ανδδιρεχτ ετηοδ Λ ολ Λ
样品
衍生化法测得值
直接法测得值
Λ
Λ Λ
人血清 见表 ∀结果表明本法快速 准确 可以作为临床用药监测血药浓度的一种方法∀
参
考文献
王宏毅 阮旭中 宋丙鹏 临床神经病学杂志
∗
∆ετερ ινατιονοφςαλ ροιχΑχιδΛεϖελινΣερυ βψΗιγηΠερφορ ανχεΛιθυιδΧηρο ατογρα ηψ
ΝανϕινγΒραινΗοσ ιταλ ΝανϕινγΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ Νανϕινγ
Αβστραχτ ≅ Λ Λ Λ ρ Λ ν ν Κεψωορδσ
色 谱
卷。