实验八 甲基绿一派洛宁法

实验八核酸细胞化学——甲基绿一派洛宁法

(methyl green—pyronin method)

【目的要求】

(1) 学会制作血涂片。

(2) 熟悉甲基绿一派洛宁法显示核酸的原理及操作步骤。

(3) 观察DNA、RNA在细胞中的分布。

【实验原理】

甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，与带负电荷的磷酸根形成盐键。甲基绿分子有两个正电荷，易与双链DNA分子结合，使DNA显示绿色，派洛宁分子有一个正电荷，易与单链RNA结合使RNA显示红色。也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关(图5—5)。

【实验用品】

(1) 器材：注射器、载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜。

(2) 试剂：①0.2mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：A．冰醋酸1.2ml加蒸馏水至100ml。B．醋

酸钠(NaAc·3H20)2.72g溶于100ml。使用时，A液与B液按2：3比例混

合。②甲基绿一派洛宁染色：A．2 g甲基绿加0.2mol／L醋酸缓冲液至100ml；

B．1.0g派洛宁Y加醋酸缓冲液至100ml；临用时：甲液与乙液5：2混合

即成。

甲基绿中常混有甲基紫，如不除去，会影响染色效果。纯化甲基绿的方法是：先把甲基绿倒入分液漏斗，加入氯仿，用力摇匀，静置，弃去溶有甲基紫的氯仿，再换入新氯仿。如此，反复几次，直到氯仿无甲基紫的颜色为止，干燥之后备用。此法为显示DNA、RNA的经典方法，配制染色试剂时要注意比例适当。

(3) 材料：蟾蜍血涂片。

【方法与步骤】

(1) 蟾蜍血涂片，干燥后入70％乙醇溶液固定10min，取出晾干。

(2) 滴染色液于血膜上，染15min。

(3) 蒸馏水冲洗。

(4) 95％乙醇溶液分色，晾干，封片。

【观察结果】

蟾蜍红细胞的核因含DNA显绿色，细胞质及核仁因含RNA显示红色。【作业】

绘蟾蜍红细胞图示DNA、RNA的分布。