实验八 甲基绿一派洛宁法
甲基绿-派洛宁染色液染色方法及注意事项
甲基绿-派洛宁染色液染色方法及注意事项货号：G1670规格：100mL/500mL保存：室温避光储存，有效期至少12个月。
产品说明：甲基绿-派洛宁染色液(Methyl Green-Pyronin Staining Solution，也称MGP染色液)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成绿色或蓝绿色，把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色的染色液。
甲基绿可以和细胞核中的DNA结合，从而产生细胞核染色；而派洛宁可以和细胞浆或核仁中的RNA结合，从而可以使细胞浆和核仁被染色。
可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。
一方面可以在本甲基绿-派洛宁染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行甲基绿-派洛宁复染。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
染色方法:（仅供参考）1.样品处理a.对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b.对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。
c.对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。
2.甲基绿-派洛宁染色对于上述处理好的样品：甲基绿-派洛宁染色液染色5分钟左右(可以根据染色结果和要求调整时间)。
蒸馏水洗涤2-3次(每次数秒钟)。
3.脱水、透明、封片或进行其它染色丙酮脱水3次，每次1-2秒。
换用丙酮/二甲苯(1:1)洗涤2次，每次1-2分钟。
二甲苯透明1-2分钟。
换用新鲜的二甲苯，再透明1-2分钟。
用中性树胶或其它封片剂封片。
显微镜下观察，细胞核呈绿色或蓝绿色，而细胞浆和核仁呈红色。
注意事项：1.需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。
如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。
2.样品数量较多时，可以使用索来宝的染色架和染色缸，便于操作。
染色方法
(一)甲基绿—派罗宁法鉴定DNA、RNAJ[原理]核酸分子因含有磷酸根呈酸性，它们对碱性染料甲基绿和派罗宁具有亲和力，但这两种碱性染料具有选择性。
RNA易被派罗宁染成红色，而DNA被甲基绿染成绿色，故可用来鉴定核酸。
[器材与试剂]器材：显微镜、载玻片、盖玻片、烧片、培养皿、吸管、镊子、刀片或切片机、分液漏斗等.试剂：(1)甲基绿的精制：市售的甲基绿中含有甲基紫，甲基紫溶于氯仿，可用萃取法除去甲基紫，方法：先配制2％甲基绿水溶液，置于分液漏斗中，然后加氯仿洗涤数次，弃除氯仿，反复多次直至氯仿层中不显紫色，水层备用。
(2)派罗宁的精制：先配制5％水溶液，置于分液漏斗中，用氯仿洗涤数次，待氯仿不显红色为止，弃除氯仿水层备用。
(3)0.2mol/L醋酸缓冲液，pH4.8(0.2mol/L醋酸40ml+0.2mol/L醋酸60ml)。
(4)甲基绿—派罗宁溶液：1ml2％甲基绿水溶液+1.75ml派罗宁水溶液+pH4.80.2mol/L醋酸缓冲液25ml+水25ml，混合液可保存一周。
[方法与步骤]1.撕取马铃薯嫩茎的表皮或洋葱鳞茎表皮(12层细胞)，或制作待鉴材料的切片。
2.把表皮或切片置于载玻片上，加甲基绿—派罗宁溶液(以浸没材料为宜)，染色1520分钟。
3.用蒸馏水洗去多余的染液(如染色太深，可用70％乙醇洗涤)。
4.用滤纸吸干水分，用丙酮脱水及分色,20分钟后镜检。
结果：细胞核(DNA)被染成绿色，其中核仁(RNA)被染成红色。
(二)孚尔根法鉴定[原理]在酸性环境(1NHCl，60℃)中，DNA的脱氧戊糖转变为醛的形式，锡夫试剂与醛基反应，产生紫色化合物，此反应可特异地显示核中的DNA。
[器材与试剂]器材：器材同前。
试剂：(1)锡夫试剂(配法见前)。
(2)10％K2S2O5。
(3)1NHCl：8.3ml浓HCl加水稀释至100ml。
(4)亚硫酸溶液：5ml10％K2S2O5加5ml1NHCl，加水稀释至100ml(也可用2％亚硫酸氢钠溶液代替)。
实验报告 脂类的化学——苏丹三染色
姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx 科目细胞生物学实验题目脂类的化学——苏丹Ш染色组别第2组一．实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二．实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三．实验仪器及试剂1.仪器解剖盘，解剖剪，镊子，盖玻片，载玻片，显微镜，胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液，甲醛钙溶液，70%乙醇溶液，蒸馏水3.材料小白鼠一只四．实验步骤1.断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
甲基绿派洛宁染色原理
甲基绿派洛宁染色原理甲基绿是一种常用的核酸染色剂，它能够与DNA发生特异性的结合，因此在生物学实验和临床诊断中得到了广泛的应用。
而派洛宁则是一种经常与甲基绿一起使用的染色剂，它们的结合可以增强染色效果，使得细胞核和染色体更加清晰可见。
本文将介绍甲基绿派洛宁染色原理，以及其在实验和临床中的应用。
甲基绿派洛宁染色的原理主要是基于甲基绿和派洛宁与DNA的特异性结合。
甲基绿是一种碱性染料，它可以与DNA的磷酸基团发生静电作用，从而使得DNA分子呈现出深蓝色。
而派洛宁则可以与甲基绿形成复合物，增强染色效果，使得细胞核和染色体更加清晰可见。
这种染色原理使得甲基绿派洛宁在核酸染色实验中得到了广泛的应用。
在实验室中，甲基绿派洛宁染色常常用于核酸电泳实验。
核酸电泳是一种常用的生物学实验方法，用于分析DNA或RNA的大小和数量。
在核酸电泳实验中，样品中的DNA或RNA经过电泳分离后，需要进行染色以观察其分离情况。
甲基绿派洛宁染色可以使得DNA 或RNA在凝胶中呈现出明显的条带，便于分析和识别。
此外，甲基绿派洛宁染色还常用于细胞核染色和染色体观察，能够帮助研究人员观察细胞结构和染色体形态，从而进行细胞生物学和遗传学研究。
除了在实验室中的应用，甲基绿派洛宁染色在临床诊断中也具有重要意义。
在临床病理学中，医生常常需要观察组织切片中的细胞核和染色体，以帮助诊断疾病。
甲基绿派洛宁染色可以使得细胞核和染色体清晰可见，有助于医生进行病理诊断。
此外，在肿瘤细胞学检查中，甲基绿派洛宁染色也常用于观察肿瘤细胞的形态和结构，为临床诊断提供重要依据。
总的来说，甲基绿派洛宁染色原理是基于甲基绿和派洛宁与DNA的特异性结合，能够使得细胞核和染色体清晰可见。
在实验室和临床中，甲基绿派洛宁染色被广泛应用于核酸电泳实验、细胞核染色、染色体观察以及临床病理诊断等领域，为科研工作者和医生提供了重要的帮助。
通过对甲基绿派洛宁染色原理的深入了解，可以更好地掌握其在实验和临床中的应用，为科研和医学工作提供更多的可能性。
实验 RNA的细胞化学——Brachet反应
【实验目的】了解Brachet反应的原理，掌握有关的操作方法。
【实验原理】甲基绿—派洛宁（Methyl green-Pyronin）为碱性染料，它能分别与细胞内的DNA、RNA 结合而呈现不同颜色。
当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿和染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择结合显示红色。
其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。
甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。
而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色，但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色。
即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成蓝绿色。
【实验仪器、材料和试剂】（一）器材显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸（二）材料洋葱鳞茎表皮（三）试剂1．Unna试剂：甲基绿—派洛宁（Methyl green-Pyronin）染色液甲液：5%派洛宁水溶液6ml2%甲基绿水溶液6ml蒸馏水16ml乙液：1M醋酸缓冲液（pH=4.8）16ml甲、乙两液分别置4℃冰箱备用，用时甲乙两液混匀。
2．1M醋酸缓冲液（pH=4.8）配方A液：冰醋酸6ml加蒸馏水至100ml 。
B液：醋酸钠13.5g加蒸馏水100ml 。
取A液40ml+ B液60ml 混匀即为pH=4.8 。
配制注意事项：（1）Pyronin可加热助溶。
（2）Methyl green批号不同，染色效果差别很大。
商品Methyl gr e en常混有甲基紫，影响染色效果，应先把药品放在分液漏斗中，加入足量的氯仿，用力振荡，然后静置，直到洗脱甲基紫为止，最后干燥备用。
【方法与步骤】1．用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于载玻片上。
2．滴一滴Unna试剂，染色30min。
3．蒸馏水洗两次，吸水纸吸去多余的水分。
4．盖上盖玻片，镜检。
对照片：（1）撕取洋葱鳞茎内表皮，经5%三氯醋酸中90℃水浴处理15min 。
实验报告脂类的化学——苏丹三染色
一．实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二．实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三．实验仪器及试剂1.仪器解剖盘，解剖剪，镊子，盖玻片，载玻片，显微镜，胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液，甲醛钙溶液，70%乙醇溶液，蒸馏水3.材料小白鼠一只四．实验步骤1.断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，并在其下放置一载玻片，用剪将连同载玻片和其上粘着的肠系膜取下。
Feulgen反应显示
报告成绩实时记录成绩实验二 Feulgen反应显示DNA学生姓名学号班级座位号：同组同学日期： 2014 年 10 月 14 日备注：【Introduction】常用DNA定性和定量分析的方法及原理：（1）Feulgen反应：DNA经酸水解后，分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出游离的醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。
（2）甲基绿-派洛宁法：甲基绿-派洛宁为碱性染料，分别与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。
甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。
（3）HE染色：即苏木精-伊红染色法。
苏木精染液为碱性，使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
（4）Giemsa染色：含天青、伊红等，可与DNA上的磷酸基团结合，使染色体呈蓝紫色，而细胞质呈淡蓝色。
（5）免疫荧光技术：将已知的抗原或抗体标记上荧光素，反应后，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的黄绿色或桔红色荧光，从而确定抗原或抗体的定位，测定含量。
（6）显微光度术：利用显微分光光度计对细胞内原有能发光的物质或对细胞内各种化学成分用不同的荧光经荧光探针标记后进行定位、定性和定量地测定。
（7）流式细胞术：在细胞分子水平上对单个细胞或其他生物粒子进行多快速的定量分析，可以高速分析上万个细胞，并能同时测量细胞的物理或化学性质。
【Materials & methods】实验材料：四膜虫培养液（200μl）；Carnoy固定液；Schiff试剂；1mol/L HCl；自来水；亮绿溶液；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯；恒温水浴锅两台（60℃），恒温培养箱一台（30℃）。
实验操作：吸取少量四膜虫培养液于载玻片→干燥→用卡诺固定液固定10到20分钟→在盐酸内水浴15分钟左右→用Schiff试剂染色40分钟（要避光、30度恒温）→自来水清洗2次→亮绿溶液复染1到2秒钟→再次水洗→干燥→放在显微镜下观察。
甲基绿——派洛宁法显示细胞内DNA、RNA的分布实验报告 山东大学
科目细胞生物学实验题目甲基绿——派洛宁法显示细胞内DNA、RNA的分布甲基绿——派洛宁法显示细胞内DNA、RNA的分布【实验目的】1.学会制作血涂片；2.熟悉甲基绿——派洛宁法显示核酸的原理与操作步骤；3.观察DNA、RNA在细胞中的分布。
【实验原理】1、电离作用：脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。
在一定的条件下，可以电离而带电荷，因此都有一定的等电点。
甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，在水中电离后，都产生带阳电荷的离子，常与带负电荷的磷酸根形成盐键。
甲基绿电离后，在五价氮处产生二个正电荷，碱性较强，易与双链DNA分子（胞核等电点pH3.8～4.2）进行极性吸着而结合，使DNA显示绿色；派洛宁电离后仅产生一个正电荷，碱性较甲基绿弱，与单链RNA （胞质等电点pH4.6～5.2）吸附结合，使RNA显示红色。
2、聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA有亲和力，派洛宁对聚合低的RNA有亲和力。
因此，甲基绿选染DNA，而派洛宁选染RNA。
【甲基绿——派洛宁法实验步骤】1．取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪去下颌、舌头）制备血涂片，干燥后滴加70%的乙醇溶液固定10分钟，晾干。
2．滴染色液于血膜上，染15分钟。
（或在染色缸中）3．蒸馏水冲洗，去染液。
4．向染色液血膜滴加95%乙醇溶液分色、同时倾斜载片弃液体，晾干。
5. 观察。
甲基绿—派洛宁染液配制试剂：0.2mol/l醋酸缓冲液（PH4.8）A液：冰醋酸1.2ml+蒸馏水至100mlB液：醋酸钠（NaAc·3H2O）2.72克溶于100ml蒸馏水中使用时，A液与B液按2：3比例混合。
甲基绿—派洛宁染液A液:2克甲基绿加0.2mol/l醋酸缓冲液至100ml。
B液:1克派洛宁Y加0.2mol/l醋酸缓冲液至100ml。
临用时，A液于B液5：2混合。
甲基绿派洛宁法试剂配制（改良Cook，1974）（一）2%甲基绿水溶液：甲基绿（methyl green）1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法详后。
甲基绿派洛宁染色原理
甲基绿派洛宁染色原理甲基绿是一种常用的生物染色剂，它可以与细胞内的DNA结合并发出荧光信号，因此在生物学研究中有着广泛的应用。
而洛宁则是一种常用的染色试剂，它可以与甲基绿结合形成稳定的复合物，从而增强甲基绿的荧光信号。
本文将重点介绍甲基绿派洛宁染色的原理及其在生物实验中的应用。
甲基绿是一种阳离子染料，它可以通过静电作用与DNA中的负电荷部分结合。
DNA分子中的磷酸基团带有负电荷，而甲基绿分子带有正电荷，因此它们之间会发生静电吸引。
当甲基绿与DNA结合时，会发出绿色荧光，这种荧光信号可以被荧光显微镜或荧光分析仪检测到，从而用于观察和分析DNA分子的位置和数量。
然而，甲基绿的荧光信号并不十分强烈，因此在一些实验中需要增强其荧光信号。
这时就需要借助洛宁这种染色试剂。
洛宁是一种螯合剂，它可以与甲基绿形成稳定的复合物，从而增强甲基绿的荧光信号。
洛宁分子中含有多个芳香环结构，这些结构可以与甲基绿分子中的芳香环结构发生π-π堆积作用，从而使甲基绿分子在洛宁的作用下形成更稳定的结构，进而增强其荧光信号。
甲基绿派洛宁染色原理的应用非常广泛。
在生物学实验中，研究人员常常利用甲基绿派洛宁染色来观察和分析细胞内的DNA分布和数量。
例如，在细胞凋亡实验中，通过甲基绿派洛宁染色可以观察到细胞核的形态变化和DNA的断裂，从而判断细胞是否发生了凋亡。
此外，在细胞培养实验中，甲基绿派洛宁染色也可以用于观察细胞的增殖和分裂情况，从而研究细胞生长和分化的机制。
总之，甲基绿派洛宁染色原理是一种重要的生物染色方法，它可以用于观察和分析DNA在细胞内的位置和数量，从而在生物学研究中发挥着重要作用。
通过了解甲基绿派洛宁染色的原理及其应用，我们可以更好地利用这一技术手段进行生物实验，并取得更加准确和可靠的实验结果。
甲基绿-派洛宁染色液
甲基绿-派洛宁染色液简介：甲基绿-派洛宁染色液(Methyl Green-Pyronin Stain ，MGP)甲基绿-派洛宁染色液是一种把细胞核染成绿色或蓝绿色，把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色或红紫色的染色液。
甲基绿又称双绿SF ，属于碱性染料，是具有金属光泽的绿色微结晶或粉末，分子量为608.78，分子式为C 27H 35Cl 4N 3Zn 。
甲基绿和细胞核中的DNA 结合，从而使细胞核染成绿色或蓝绿色，派洛宁可以和细胞浆或核仁中的RNA 结合，从而使细胞浆和核仁染成红色或红紫色。
Leagene 甲基绿-派洛宁染色液经过改良，不含甲醇，在组织或细胞染色中对细胞核进行染色，其中的甲基绿经过提纯，更容易着色。
本染色液也可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。
10ml 染色液可以染色20个样本。
组成：自备材料：1、系列乙醇、蒸馏水2、滤纸、RNase(可选)3、丁三醇或丙酮或正戊醇4、4%多聚甲醛操作步骤(仅供参考)：(一)石蜡切片染色1、组织入Carnoy 固定液或10%中性福尔马林，固定。
2、切片5μm ，常规脱蜡至水，蒸馏水稍洗。
3、入Methyl Green-Pyronin Stain ，室温浸染。
4、取出切片，用滤纸稍微吸干切片周围染色液。
5、用丁三醇(也可用丙酮或正戊醇)冲洗。
6、二甲苯透明，中性树胶封固。
(二)冰冻切片染色1、蒸馏水冲洗。
编号 名称 DN0001 DN0001 Storage Methyl Green-Pyronin Stain 50ml 100ml RT 避光 使用说明书 1份2、切片入Methyl Green-Pyronin Stain，室温浸染25～50min。
3、用蒸馏水冲洗2次，此时样本呈蓝色。
4、余下步骤同石蜡切片染色。
(三)细胞染色1、用多聚甲醛固定以上。
2、蒸馏水洗涤。
3、换用新鲜的蒸馏水，再洗涤。
4、用Methyl Green-Pyronin Stain染色。
实验八细胞内核酸的分布与显示
实验原理
孚尔根反应显示脱氧核糖核酸
主要包括DNA解离和显色两个步骤：标本
经稀盐酸解离后（1mol/L HCL, 60oC ） ，DNA 分子中的嘌呤碱基与脱氧核糖连接的键 被打开，从而在脱氧核糖的一端形成了 游离的醛基。 Schiff试剂中的无色品红 可与醛基反应， 形成含有醌基的化合物 (紫红色) ，从而显示出DNA的分布 。 通过显微分光光度计亦可做定量分析。
实验流程
洋葱鳞茎内表皮 ↓ 置于已滴MP-染液的载玻片上染色1min ↓ 洗去浮色 ↓ 制片镜检
实验结果
• 细胞核呈绿色或蓝绿色 • 细胞质和核仁呈粉红色
染料说明
N(CH3)3
(H3C)2N
O
N(CH3)2
(H3C)2N
C N(CH3)2
C H
甲基绿(methyl green)
派洛宁(pytonin)
洋葱表皮细胞Unna反应
Feulgen反应示DNA
Feulgen反应示DNA
实验报告要求
摘要及关键词
前言 材料和方法 结果与分析 参考文献
O
+
C SO3 H
C R
H
C
水解后形 成有醛基 的DNA
NH2
NH
Schiff 试剂
紫红色化合物
实验结果
• 细胞核的DNA被染成紫红色, 其主要分布于染色质(或染 色体)内,核仁和细胞质被亮 绿复染成绿色.
Hale Waihona Puke 实验原理甲基绿-派洛宁染色方法
细胞经甲基绿-派洛宁染液处理后,其中的 DNA和RNA出现不同的呈色反应. 一般认为 这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料甲 基绿和派洛宁具有亲和力，但因此两种染 料所带电荷密度不同，当pH4.6 时与核酸 发生竞争性结合，具高电荷密度的甲基绿 将高聚分子的DNA染成蓝绿色，具低电荷密 度的派洛宁将低聚分子的RNA染成粉红色. 由此可对细胞中的DNA和RNA进行定位、定 性和定量分析。
甲基绿-派洛宁染色方法在慢性子宫内膜炎诊断中的应用
甲基绿-派洛宁染色方法在慢性子宫内膜炎诊断中的应用目的:探讨甲基绿-派洛宁染色方法在慢性子宫内膜炎诊断中的应用。
方法:采用Cook甲基绿-派洛宁提纯法染色子宫内膜组织,诊断慢性子宫内膜炎。
结果:294例子宫内膜组织有64例诊断为慢性子宫内膜炎。
结论:甲基绿-派洛宁染色方法是一种简便、经济、实用的方法,可以做为慢性子宫内膜炎诊断的首选方法。
标签：甲基绿-派洛宁;慢性子宫内膜炎;诊断慢性子宫内膜炎为子宫内膜的慢性炎症。
慢性子宫内膜炎虽然发病率较低,可一旦患病则会给患者生活、工作带来诸多影响,也给患者本人造成许多痛苦。
在子宫内膜间质内找到浆细胞是诊断子宫内膜炎的关键。
但是,混杂在子宫内膜间质细胞之间的浆细胞很不容易找到,不成熟的浆细胞就更不容易辨认。
造成慢性子宫内膜炎漏诊。
我们应用甲基绿-派洛宁染色方法帮助辨认浆细胞,确诊慢性子宫内膜炎64例,现报告如下。
1材料及方法1.1材料山西省汾阳医院门诊及住院功能性子宫出血病例294例。
1.2方法采用Cook甲基绿-派洛宁提纯法[1][试剂配制](1)甲基绿原液2%甲基绿溶液,氯仿抽提五次。
(2)派洛宁原液2%派洛宁。
(3)醋酸缓冲液(pH4.8)0.2M醋酸液41ml,0.2M醋酸钠59ml。
(4)甲基绿-派洛宁染液。
甲基绿提纯液15ml,派洛宁原液1ml,醋酸缓冲液20ml,甘油10ml。
临用前配制。
[染色步骤](1)组织切片脱蜡至水。
(2)用醋酸缓冲液(pH4.8)浸洗。
(3)置于甲基绿-派洛宁染液染色3分钟。
(4)用醋酸缓冲液(pH4.8)清洗。
(5)滤纸吸干,迅速丙酮分化30秒。
(6)用纯丙酮、二甲苯等量(1:1)混合液分化、脱水30秒。
(7)二甲苯透明,光学树胶封固。
2结果图1294例功能性子宫出血病人的子宫内膜组织,其中64例诊断为慢性子宫内膜炎。
子宫内膜组织呈淡红色,浆细胞核呈绿色,浆细胞胞浆呈鲜红色。
在HE形态下,子宫内膜间质内有散在的或成簇淋巴细胞浸润,部分淋巴细胞出现浆细胞样分化,较少出现典型的成熟的浆细胞。
甲基绿派洛宁染色原理
甲基绿派洛宁染色原理甲基绿派洛宁是一种常用的生物染色剂，广泛应用于细胞和组织的染色工作中。
它的染色原理主要是利用其与细胞或组织中的特定成分发生化学反应，从而使其呈现出特定的颜色。
下面我们将详细介绍甲基绿派洛宁的染色原理。
首先，甲基绿派洛宁是一种亲脂性染料，它可以与细胞膜中的脂质结合，从而在细胞膜上形成一层薄膜。
这一薄膜可以增强细胞的对比度，使细胞的结构更加清晰可见。
其次，甲基绿派洛宁还可以与细胞内的核酸发生作用。
在碱性条件下，甲基绿派洛宁会与DNA和RNA中的磷酸基团结合，形成稳定的染色复合物。
这种复合物呈现出绿色或蓝色，使细胞核在显微镜下呈现出明显的颜色。
此外，甲基绿派洛宁还可以与细胞质中的蛋白质结合。
在酸性条件下，甲基绿派洛宁会与蛋白质中的氨基酸发生反应，形成稳定的染色复合物。
这种复合物可以使细胞质呈现出特定的颜色，有助于观察细胞质内各种结构的分布和形态。
总之，甲基绿派洛宁的染色原理是多方面的，它可以与细胞膜、核酸和蛋白质发生化学反应，从而实现对细胞和组织的染色。
通过合理的染色条件和观察方法，可以清晰地观察到细胞和组织的各种结构和形态特征，为细胞学和组织学研究提供了重要的技术支持。
在实际的染色工作中，我们需要根据样品的特点和研究的目的，选择合适的染色方法和条件，以达到最佳的染色效果。
同时，我们也需要在染色过程中注意控制好染色时间和染色剂的浓度，避免出现染色不均匀或染色过度的情况。
总的来说，甲基绿派洛宁作为一种重要的生物染色剂，在细胞学和组织学研究中发挥着重要作用。
了解其染色原理，掌握好染色技术，将有助于我们更准确地观察和分析细胞和组织的结构特征，推动科学研究的进展。
蔬菜吸水染色实验报告
一、实验目的1. 观察蔬菜细胞在吸水过程中的形态变化。
2. 探究不同蔬菜细胞对染料的吸收情况。
3. 分析植物细胞吸水机制。
二、实验材料1. 蔬菜：黄瓜、胡萝卜、西红柿、菠菜等。
2. 染料：甲基绿-派洛宁染液。
3. 试剂：蒸馏水、氯化钠、硼酸、葡萄糖等。
4. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子等。
三、实验方法1. 将蔬菜洗净，切成薄片，用蒸馏水冲洗干净，沥干水分。
2. 将切好的蔬菜薄片分别放入盛有不同浓度氯化钠、硼酸、葡萄糖溶液的烧杯中，浸泡一定时间。
3. 取出浸泡后的蔬菜薄片，用蒸馏水冲洗干净，沥干水分。
4. 将蔬菜薄片分别滴加甲基绿-派洛宁染液，染色一定时间。
5. 用镊子将染色后的蔬菜薄片放置在载玻片上，盖上盖玻片。
6. 将载玻片放置在显微镜下观察，记录不同蔬菜细胞在吸水过程中的形态变化及染料吸收情况。
四、实验结果1. 观察到黄瓜、胡萝卜、西红柿、菠菜等蔬菜细胞在吸水过程中，细胞体积逐渐增大，细胞壁变薄，细胞膜与细胞壁之间的间隙增大。
2. 不同蔬菜细胞对染料的吸收情况不同。
黄瓜、胡萝卜、西红柿细胞对染料的吸收较好，细胞质和液泡呈现绿色；菠菜细胞对染料的吸收较差，细胞质和液泡呈现黄色。
3. 在不同浓度的氯化钠、硼酸、葡萄糖溶液中，蔬菜细胞吸水速度不同。
氯化钠溶液中，细胞吸水速度最快；硼酸溶液中，细胞吸水速度次之；葡萄糖溶液中，细胞吸水速度最慢。
五、实验分析1. 植物细胞在吸水过程中，细胞壁、细胞膜和液泡等结构发生变化。
细胞壁变薄，细胞膜与细胞壁之间的间隙增大，有利于水分进入细胞内部。
2. 不同蔬菜细胞对染料的吸收情况不同，可能与细胞膜的选择透过性有关。
黄瓜、胡萝卜、西红柿细胞膜对染料具有较好的通透性，而菠菜细胞膜对染料的通透性较差。
3. 植物细胞吸水速度受外界溶液浓度的影响。
氯化钠溶液中，细胞吸水速度最快，因为氯化钠溶液浓度较低，水分进入细胞内部动力较大；硼酸溶液中，细胞吸水速度次之；葡萄糖溶液中，细胞吸水速度最慢，因为葡萄糖溶液浓度较高，水分进入细胞内部动力较小。
细胞生物学实验报告——甲基绿-派洛宁染色
山东大学细胞生物学实验报告蟾蜍红细胞甲基绿—派洛宁染色姜政2012/10/9实验目的：学习用甲基绿—派洛宁染色观察验证蟾蜍红细胞中DNA和RNA的分布，掌握血涂片制作，了解甲基绿—派洛宁染色的基本原理和应用以及细胞化学的基本概念。
实验原理：核酸（脱氧核糖核酸，DNA；核糖核酸，RNA）的结构单体核苷酸由核糖、碱基和磷酸基团构成。
由于嘌呤碱基和嘧啶碱基环上都有含孤对电子的N，胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤都含有-NH2，因此，在水溶液中，核苷酸碱基（图1）上这些含有孤对电子的N既可以接受质子（-NH2+H+→-NH3+，N：+H+→N+:H），也可以释放质子（-NH3+→-NH2+H+，N+:H- H+→N：+H+）。
通常，核苷酸中的磷酸基团存在两步解离，且碱基N上H+的解离常数在磷酸基团一级解离（-PO3H2→-PO3-H+H+）常数和二级解离（-PO3-H→-PO32-+H+）常数之间，所以，当磷酸基团一级解离与碱基N上H+的解离恰好使核苷酸静电荷为零时，核苷酸就达到了等电点。
因此，在水溶液中，核酸分子可以被看作是两性电解质，由于DNA与RNA的组成不同，两者等电点不同，在同一份溶液中的电性就略有不同。
图1. 五种核苷酸碱基的结构和孤对电子示意图（左，引自Stacey D. Wetmore等，2000）和甲基绿、派洛宁的分子结构（右）。
甲基绿（Methyl Green）和派洛宁（Pyronin）都是具有芳香体系且能够发生电离的染料分子（图1），在水中发生电离后都成为带正电的分子。
因此，甲基绿和派洛宁都是碱性染料，专染酸性核酸分子。
电离后的甲基绿分子带两个正电荷，派洛宁分子带一个正电荷。
这种电荷上的差异使两种染料分子具有不同的染色性质。
加之两种染料分子具有完全不同的颜色（甲基绿是亮绿色，派洛宁是红色），两种染料配合使用的染色剂（Unna试剂）很早就成为区分细胞中DNA与RNA分布的常用试剂[1]。
甲基绿-派洛宁对核酸着色的机理可以分解为两步，第一步是电荷相互作用下染料分子向特定核酸分子的靠近，第二步是疏水相互作用下染料分子与核酸分子的结合[2,3]。
甲基绿—派洛宁—马休黄组合染色法在显示乳腺组织凋亡细胞中的应用
甲基绿—派洛宁—马休黄组合染色法在显示乳腺组织凋亡细胞中的应用发表时间：2012-04-16T16:05:19.920Z 来源：《中外健康文摘》2012年第7期供稿作者：邹阳强[导读] 甲基绿是一种生物染色剂，是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末，溶于水。
邹阳强（贵州航天医院病理科贵州遵义 563000）【中图分类号】R655.8【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）7-0193-02【关键词】组合染色乳腺组织凋亡细胞凋亡细胞的检测有苏木精—伊红染色、特殊染色、原位末端标记法、免疫组织化学、琼脂糖凝胶电流、ELISA检测法、电镜、FCM检测法等方法，众多研究方法各具特点，也有其局限性[1]。
形态学检测是凋亡细胞一种较常用、较直观的检测方法，为了提高凋亡细胞的染色效果，本实验利用甲基绿—派洛宁—马休黄组合染色显示乳腺组织中凋亡细胞获得满意结果，为乳腺组织凋亡细胞的研究提供一种较好的形态学研究方法。
现介绍如下。
1 材料和方法1.1 材料收集贵州航天医院病理科2011年01月至2011年10月临床手术切除送检的乳腺标本30例，其中乳腺增生症10例，乳腺纤维腺瘤10例，乳腺癌10例。
4%中性甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋。
1.2 试剂配制 2%甲基绿水溶液：甲基绿1g，蒸馏水50ml，充分溶解后取2%甲基绿水溶液20ml，置分液漏斗中，再加入20ml三氯甲烷摇荡3min，静置10min可见甲基绿和三氯甲烷分成两层，打开活塞放掉比重高的三氯甲烷，经多次反复洗除后至三氯甲烷无色即可得改造后的甲基绿，置冰箱内保存[2]。
派洛宁染色液：派洛宁2.5g，蒸馏水100ml，充分溶解。
马休黄染色液：马休黄0.5g，95%乙醇100ml，磷钨酸0.2g，充分溶解待饱和后使用。
应用染色液：改造后的甲基绿10ml，派洛宁染色液5ml，丙三醇15ml，0.2M醋酸缓冲液（pH4.8）20ml。
1.3 染色程序①石蜡切片4μm，常规脱蜡至水洗。
毛囊组织制备实验报告
一、实验目的1. 学习毛囊组织的采集和制备方法。
2. 掌握毛囊组织在显微镜下的观察技巧。
3. 了解毛囊组织的基本结构和功能。
二、实验原理毛囊组织是皮肤的重要组成部分，负责头发的生长和更新。
本实验通过采集毛囊组织，制备成切片，在显微镜下观察其结构和功能。
三、实验材料1. 新鲜动物皮肤2. 刀片3. 无菌生理盐水4. 玻片5. 70%乙醇6. 热水浴锅7. 显微镜8. 光学切片机9. 甲基绿-派洛宁染色液四、实验步骤1. 采集毛囊组织取新鲜动物皮肤，用刀片沿毛囊方向切取，避免损伤毛囊组织。
将采集到的毛囊组织放入70%乙醇中消毒。
2. 制备毛囊组织切片将消毒后的毛囊组织放入无菌生理盐水中，用刀片将其切成薄片，厚度约为5-10微米。
将切片放入70%乙醇中固定。
3. 染色将固定好的切片放入甲基绿-派洛宁染色液中，染色时间为30分钟。
染色后，用蒸馏水冲洗切片，去除多余染料。
4. 观察显微镜将染色后的切片放在玻片上，用显微镜观察毛囊组织。
调整显微镜焦距，观察毛囊的基本结构和功能。
5. 记录实验结果观察毛囊组织的细胞结构、毛囊生长阶段、毛囊附属器官等，并记录实验结果。
五、实验结果与分析1. 毛囊组织细胞结构毛囊组织主要由毛囊、毛囊鞘、毛囊乳突和毛囊皮脂腺组成。
毛囊位于毛囊鞘内部，由毛囊母细胞、毛囊外根鞘细胞、毛囊内根鞘细胞和毛囊上皮细胞组成。
2. 毛囊生长阶段毛囊生长阶段分为生长期、退化期和休止期。
在显微镜下，可以观察到毛囊生长阶段的变化。
3. 毛囊附属器官毛囊附属器官包括毛囊皮脂腺、毛囊汗腺和毛囊神经。
在显微镜下，可以观察到毛囊附属器官的结构和功能。
六、实验结论通过本实验，我们成功制备了毛囊组织切片，并在显微镜下观察到了毛囊的基本结构和功能。
实验结果表明，毛囊组织在皮肤的生长、代谢和调节等方面具有重要作用。
七、实验讨论1. 实验过程中，应尽量减少毛囊组织的损伤，以保证实验结果的准确性。
2. 毛囊组织切片制备过程中，切片厚度要适中，过厚或过薄都会影响观察效果。
下午-甲基绿-派诺宁染色法检测细胞的凋亡2011.10.27
细胞的凋亡的形态学检测一、甲基绿-派诺宁染色法检测细胞凋亡实验目的：1、了解细胞凋亡在光镜下的细胞学现象。
2、通过实验观察，了解细胞凋亡与死亡的本质不同。
3、通过本实验，熟练掌握甲基绿-派诺宁染色法检测细胞凋亡。
实验原理：细胞凋亡是指机体在一定的生理、病理条件下，为维持内环境稳定，通过基因控制而使细胞主动有序地死亡，且表现一系列形态和生化方面的特征。
是细胞正常的死亡，它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用，不造成炎症和自体的损伤，是细胞为了更好地适应自下而上环境而主动争取的死亡过程。
因这一死亡过程严格受到程序的控制，又称为细胞程序性死亡。
与凋亡不同，细胞坏死是指细胞在各种致损伤因素的作用下无序死亡的过程，形态特征为细胞胀大，特别是细胞器肿大，胞膜破裂，胞浆内容物外泄，而核变化较慢，DNA降解不充分，局部严重的炎症反应等。
植物细胞凋亡检测方法的实质就是区分正常的细胞、正在进行凋亡的活细胞和坏死或凋亡结束后死亡的细胞。
通常主要采用的手段有：形态学观察法、生化及分子生物学法、免疫学方法、生理学检测法等。
甲基绿-派诺宁染色法：细胞凋亡和坏死均可表现为细胞核固缩等细胞死亡形态，但两者发生机制不同。
细胞凋亡是一种细胞主动死亡过程，需要有细胞内蛋白酶的激活，细胞质内常有mRNA表达的增强。
而坏死则是一种被动的细胞死亡过程，细胞质内常有RNA损失。
根据这一特点，可利用试剂甲基绿对DNA染色的特异性和派诺宁对RNA的亲和性，甲基绿对染色质中的DNA选择性结合显示绿色或者蓝色；派诺宁与核仁、细胞质中的RNA选择结合显示红色。
如果细胞质内核糖核酸呈派诺宁阳性染色(呈现红紫色)者为凋亡细胞，呈现阴性染色者（蓝绿色）为坏死细胞。
实验仪器、材料和试剂：（1）仪器、用具：光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、吸水纸、50ml小烧杯、冰箱（2）材料：洋葱根尖、洋葱鳞茎内表皮、大蒜根尖、鸡血细胞、小鼠肝细胞( 3) 试剂：Unna试剂：甲基绿派诺宁染液甲液：5%Pyronin水溶液（可加热助溶）6ml2%甲基绿水溶液6ml蒸馏水16ml乙液：1M醋酸盐缓冲液（pH=4.8）16ml；甲、乙两液分别置4℃冰箱备用，用时混匀。
实验报告脂类的化学-苏丹三染色参考模板
一．实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二．实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV 或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三．实验仪器及试剂1.仪器解剖盘，解剖剪，镊子，盖玻片，载玻片，显微镜，胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液，甲醛钙溶液，70%乙醇溶液，蒸馏水3.材料小白鼠一只四．实验步骤1.断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，并在其下放置一载玻片，用剪将连同载玻片和其上粘着的肠系膜取下。
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实验八核酸细胞化学——甲基绿一派洛宁法
(methyl green—pyronin method)
【目的要求】
(1) 学会制作血涂片。
(2) 熟悉甲基绿一派洛宁法显示核酸的原理及操作步骤。
(3) 观察DNA、RNA在细胞中的分布。
【实验原理】
甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，与带负电荷的磷酸根形成盐键。
甲基绿分子有两个正电荷，易与双链DNA分子结合，使DNA显示绿色，派洛宁分子有一个正电荷，易与单链RNA结合使RNA显示红色。
也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关(图5—5)。
【实验用品】
(1) 器材：注射器、载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜。
(2) 试剂：①0.2mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：A．冰醋酸1.2ml加蒸馏水至100ml。
B．醋
酸钠(NaAc·3H20)2.72g溶于100ml。
使用时，A液与B液按2：3比例混
合。
②甲基绿一派洛宁染色：A．2 g甲基绿加0.2mol／L醋酸缓冲液至100ml；
B．1.0g派洛宁Y加醋酸缓冲液至100ml；临用时：甲液与乙液5：2混合
即成。
甲基绿中常混有甲基紫，如不除去，会影响染色效果。
纯化甲基绿的方法是：先把甲基绿倒入分液漏斗，加入氯仿，用力摇匀，静置，弃去溶有甲基紫的氯仿，再换入新氯仿。
如此，反复几次，直到氯仿无甲基紫的颜色为止，干燥之后备用。
此法为显示DNA、RNA的经典方法，配制染色试剂时要注意比例适当。
(3) 材料：蟾蜍血涂片。
【方法与步骤】
(1) 蟾蜍血涂片，干燥后入70％乙醇溶液固定10min，取出晾干。
(2) 滴染色液于血膜上，染15min。
(3) 蒸馏水冲洗。
(4) 95％乙醇溶液分色，晾干，封片。
【观察结果】
蟾蜍红细胞的核因含DNA显绿色，细胞质及核仁因含RNA显示红色。
【作业】
绘蟾蜍红细胞图示DNA、RNA的分布。