液相法测定那西肽效价方法标准操作

高效液相色谱法和生物效价测定法在缩宫素注射剂质量控制中的对照研究

后其效价显著降低，差异有统计学意义（Ｐ＝０．０２５）。结论
采用ＨＰＬＣ法对缩宫素注射剂测定，操作相对简便，灵敏度和准
确度高，有效避免了生物效价测定法因动物个体差异造成的误差。同时也能将人为测定的误差控制在较小的范围内。另缩宫素注射剂最佳存贮期为２年，时间过长会导致药剂中部分有效成分降解。
徐容
（南通卫生高等职业技术学校药学医技系，江苏南通２２６０００）
摘要：目的采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对缩宫素注射剂进行质量控制，同时与传统的生物效价测定法进行比照，观察两种
方法的优劣。方法选取８个企业生产的１００个批次的缩宫素注射剂，分别采用ＨＰＬＣ法和生物效价法对样本进行测定，并将结果进行比较，并进一步观察样品的长期稳定性。结果两种方法检测的缩宫素含量除两家药企外（Ｐ＝０．０２７、Ｐ＝
ｓａｍｐｌｅｓａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｅｔｅｓｔｒｅｓｕｈｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｏｘｙｔｏｃｉｎｌｅｖｅｌｓｉｎｏｘｙｔｏｃｉｎｉｎｊｅｃ — ｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｔｗｏｃｏｍｐａｎｉｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（Ｐ：０．０２７，尸＝０．０１１），ｗｈｉｌｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓａｍｏｎｇｏｔｈｅｒｏｘｙｔｏｃｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｍａｎｕｆａｃｔｕｒ — ｅｒｓｗｅｒｅｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃｌａｌｙｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔ（Ｐ＝０．５５６，０．６３７，０，６１４，０．５５９，０．３１５，０．４２９）．Ｔｈｅｏｘｙｔｏｃｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆ８ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ — ｃｌａｃｏｍｐａｎｉｅｓｗｅｒｅｗｉｔｈｉｎ５５．９％一１２６．１％．ａｖｅｒａｇｅｄ９８．５％．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｏｘｙｔｏｃｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｔｈｒｅｅｅｎｔｅｐｒｒｉｓｅｓｗｅｒｅｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｌｏｗ．Ａｆｔｅｒ２ｙｅａｒｓｏｆｓｔｏｒａｇｅ，ｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆｏｘｙｔｏｃｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｌｔｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＝０．０２５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＨＰＬＣｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｏｘｙｔｏｃｉｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｉｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｎｏｔｏｎｌｙ

效价测定的基本方法

和要求
（四）中药质量控制体系中生物检定的应用
存在的问题应用的局限性造模型的选择：功能主治多成本高，时间相对长生物误差较大对照品的选择难度
谢谢观看！ 2020
一、概述：作用
产品生物活性的信息（与临床疗效一致）评价批与批之间稳定性和一致性监测不曾预料、不易发现的构象变化所有变化的综合效应工艺与方法验证
一、概述：应用范围
药品质量控制项目性状、鉴别、检查和含量生物检定------检查类和含量类。药品（生化药品、中药）生物制品（疫苗、血液制品）
（三）异常毒性检查法
小鼠，体重17～20g，5只分别给予供试品溶液0.5ml
结果判断全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡
（三）异常毒性检查法
限值确定
急性毒性数据（LD50或LD1）限值至少应小于LD1可信限下限的1/3 （建议采用1/3～1/6）静脉注射最大剂量0.8ml/20g仍未见毒性反
应或死亡，可以此作为检查限值
（四）溶血与凝聚检查法
本法系将一定量供试品与2%的家兔红细胞混悬液混合，温育一定时间后，观察其对红细胞状态是否产生影响的一种方法
（四）溶血与凝聚检查法
结果判断
当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生，若供试品管中的溶液在3
小时内不发生溶血和凝聚，判定供试品符
合规定；若供试品管的溶液在3小时内发生
溶血和（或）凝聚，判供试品不符合规定
（四）溶血与凝聚检查法
限值
一般对注射剂原液和稀释液进行溶血与凝聚实验研究
一般应高于临床最大使用浓度
（五）过敏反应检查法
本法系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体内，间隔一定时间后静脉注射供试品溶液进行激发，观察动物出现过敏反应的情况，以判定供试品是否引起动物全身过敏反应

高效液相色谱法测定那西肽的纯度

ｓｏｌｕｔｉｏｎ色谱工作站；电子天平（感量０．１ｍｇ）。１．２药品与试剂那西肽原料（中国兽医药品监
察所委托企业制备）；乙腈与甲醇为色谱纯；磷酸二氢钾与磷酸氢二钾为分析纯；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ去离子水。
ｐｅｒｆｏｍｅｒｄｏｎＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ ×４．６ｍｍ，５Ｉｘｍ）ｗｉｔｈａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｐＨ５．６ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ—
肽的纯度测定。
［关键词］那西肽；高效液相色谱；纯度ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＰｕｒｉｔｙｆｏｒＮｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅｂｙＨＰＬＣ
ＺＨＡＮＧＸｉｕ—ｙｉｎｇ，ＬＵＬｉａｎ —ｓｈｏｕ，ＷＥＮＦａｎｇ，ＬＩＣｕｉ，ＤＡＩＺｈｉ —ｈｏｎｇ，ＪＩＡＮＧＨｕｉ，ＷＡＮＧＺａｉ —ｓｈｉ
ｈａｄｇｏｏｄｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ．Ｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｏｒｆｔｈｅｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎｏｆｐｕｉｒｔｙｏｒｆｎｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅ；ＨＰＬＣ；ｐｕｉｒｔｙ
中国兽药杂志

纳他霉素效价测定方法的改良及含量的快速测定

效价和含量的方法，为纳他霉素的固体发酵生产和产为检测菌液备用。
品实际应用提供参考。
无菌条件下，准确量取 10 mL 琼脂，加入水平放
1 材料与方法
置的平板中，凝固，作为底层；另取上层培养基，待其冷却至 50 ℃左右时，按 1:10 的比例添加上述检测
1.1 原料
菌悬液，振荡摇匀，准确量取 10 mL 培养基，迅速添加至已铺好底层的平皿中，待其凝固，作为菌层。
收稿日期：2014-05-07
基金项目：广东省科技计划项目（2011B020305008）
中的纳他霉素含量快速测定和生物效价测定方法的未见报道，《中国兽药典》(2005 年版)[9]收载的兽用抗生素药品效价的微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。目前多数使用者仍以管碟法为主。管碟法作为抗生素效价测定的经典方法，具有它的优点，但还存在一定的缺陷[10~12]。固体发酵中纳他霉素含量快速测定和生物效价测定方法的与液体发酵的差别在于前者的纳他霉素提取物中可能含有多孔载体本身的杂质而后者没有。室温条件下，纳他霉素在水中的溶解度很低，为 30~100 mg/L。在水和较低级醇类中，纳他霉素的溶解度随着 pH 值的变化而变化，其中，在 pH
和管碟法测定了同一批褐黄孢链霉菌固体发酵产物纳他霉素的含量。其中高效液相色谱法和紫外分光光度法测定纳他霉素固体发酵产
物含量分别为 2351.52 mg/L 和 1979.87 mg/L，前者结果准确而稳定。后者测定准确率为 96.97%（以高效液相色谱的测定结果为 100% 计）。适用于固体发酵过程中的纳他霉素含量的快速测定。管碟法测定纳他霉素平均效价为 1979.87 mg/L。改良管碟法采用正己烷封盖纳他霉素溶剂甲醇后，测定的平均效价达到 1990.29 mg/L，准确率由 84.20%提高到 84.64%（以高效液相色谱的测定结果为 100% 计）。采用正己烷封盖能有效控制纳他霉素溶剂甲醇的挥发性并提高管碟法的准确性和测定的浓度范围，而正己烷本身不具有抑菌效

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。

b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。

c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。

d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。

e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。

2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。

b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。

3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。

b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。

4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。

b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。

5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。

一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。

b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。

c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。

6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。

b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。

c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。

7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。

b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。

c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。

8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。

b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。

QuEChERS样品前处理-高效液相色谱法测定动物组织中那西肽残留量

ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｎｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅｉｎａｎｉｍａｌｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄａｎｄｖａｌｉｄａｔｅｄ．Ｔｈｅｓｗｉｎｅａｎｄｐｏｕｌｔｒｙ
ｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ，ａｎｄａＱｕＥＣｈＥＲＳｐｕｒｉｉｆｎｇｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈＣ１８ａｎｄＭｇＳＯ４ｗａｓｆｏｌｌｏｗｅｄ．Ｆｉｎａｌｌｙ，
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＮｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅＲｅｓｉｄｕｅｓｉｎＡｎｉｍａｌＴｉｓｓｕｅｓｂｙＱｕＥＣｈＥＲＳ
ＣｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
（浙江省兽药饲料监察所，杭州３１００２０）
［收稿日期］２０１３－１２－２８［文献标识码］Ａ［文章编号］１００２－１２８０（２０１４）０２－００５０－０４［中图分类号］￥８５９．８４
ｂｅｔｗｅｅｎ０．０１
ｍＬｔｏ２．０ｇ／ｍＬｆｏｒｎｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅ（ｒ＝０．９９９８），ａｎｄｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＬＯＤ）ｗａｓ５ｇ／ｋＡＱｕＥＣｈＥＲＳｓａｍｐｌｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｈｉｌｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）

兽用抗生素诺西肽(nosiheptide)的研究进展

［!］内提取出来，提取过程分粗提和精制两个步骤。［ !! ］文献报道的一种粗提方法流程如图 " 所示：
H I J:，是出发菌株的 7K = 倍，已经形成了一套完整的发酵工艺。已通过兽药临床试验，获得国家新兽药证书，其饲料添加剂逐渐在畜牧饲养业上得到应用，具有广阔的市场
［ 6" ， 6Q ］量、培养基组成等方面。周佩等对诺西肽的发酵工艺［ !Q ， !L ］进行了比较详细的研究，获得了较为适用于工业生产
A<? 69 +,/ B-83/ 4B 83<=4 8@<7 -/*<7(/* 4B =4*<,/0:<7/ 9 9 由图 6 可以很清楚地看出通过稳定同位素前体的加入和 CDE 分析得到的诺西肽的组成信息。其中： 7/8’8 和 >(: 骨架分别是由 ./- 和 +,- 脱水得到的； :,; 是由 #)* 和 ./- 合成； 0)-<7<=/ 是由两分子 ./- 残基尾尾相连而合成的； <=74’/ 骨架是 +-0 通过一种特殊的重排方式而形成的； :,-、 @)*、 ?’( 则分别来自于相应的氨基酸。 #" 生物合成基因根据对已知的含杂环的抗生素的新生肽链合成的机
［ !P ］目前诺西肽的检测方法主要有分光光度法，微生物［ !H ］［ !J ， !$ ］效价测定法，薄层色谱法，高效液相色谱法［ 6% ， 6! ］（ VG1#）。其中分光光度法测定诺西肽的含量能快速
合成。
万方数据球素 G! 等抗生素的生物合成是由非核糖体蛋白合成酶
［;］培养后产生的，后来的研究者又找到了产生诺西肽的其

那西肽预混剂组分HPLC检测方法的建立

那西肽预混剂组分HPLC检测方法的建立韩宁宁;徐嫄;于丽娜;郝利华;赵晖【摘要】为了建立那西肽预混剂组分测定的高效液相检查法,采用十八烷基键合硅胶为填充剂,以0.025％磷酸水溶液-乙腈(50: 50)为流动相,检测波长为241 nm,并以该色谱条件对来自7个厂家的14批不同规格的那西肽预混剂进行了测定.综合结果给出组分的建议限度为:那西肽组分A的峰面积不得少于那西肽组分A与组分B 峰面积之和的88.0％.该方法具有专属性强、耐用性好、操作简便等优点.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2015(049)010【总页数】5页(P27-31)【关键词】那西肽预混剂;组分;高效液相色谱法【作者】韩宁宁;徐嫄;于丽娜;郝利华;赵晖【作者单位】中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】S859.796那西肽是一种含硫多肽类抗生素，我国于1998年批准其为国家三类新兽药，被农业部列为可在饲料中长期添加使用的饲料药物添加剂，对猪鸡有促进生长和提高饲料转化率的作用[1-2]。

那西肽预混剂工艺早期是由那西肽原料药与玉米淀粉、碳酸钙等配制而成，其质量标准收载于《兽药国家标准化学药品、中药卷》(第一册)[3]。

随着技术发展，国内那西肽预混剂生产厂家的生产工艺均已变更为那西肽发酵液的菌丝体干燥后与碳酸钙等配制而成。

而目前缺少针对发酵而得的那西肽预混剂的相关国家质量标准，相应的市场监督与质量控制也呈空白状态。

经文献检索，那西肽中含有一主组分A，同时含有一副组分B[4]。

《兽药国家标准化学药品、中药卷》(第一册)中收载的那西肽预混剂质量标准对组分B并没有相关的控制规定[3]。

根据兽药协会提供的资料，对国内7家那西肽预混剂生产企业内部控制标准中关于组分的相关规定进行了汇总，结果发现其中3家企业并无相关规定，剩余4家企业对组分B的限度规定从不得大于12%至不得大于15%不等。

猪小肠组织中那西肽残留高效液相色谱检测方法的建立

７０
中国兽医杂志２１年（４０１第７卷）２期第
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆｔｒａｙＭｅｉｎｈｎｓｏｒａｏｅｉｒｄｃｅＶｅｎｉ
猪小肠组织中那西肽残留高效液相色谱检测方法的建立
翟卫红，沈建忠。，江海洋
吸收性动物饲料添加剂，是我国农业部批准动物也
１３１样品的前处理．．
准确称取１０ｇ组织，．置于
５ＯｍＬ聚丙烯具塞离心管中。加工作液，动涡
１ｍｉ，置１ｎ加５ｍＬ乙腈，动１ｍｉ，ｎ静０ｍｉ，涡ｎ４００ｒｍｉ（ ℃ ）心１ｎ转移上层于１０ｍＬ０／ｎ４离０ｍｉ，０聚丙烯具塞离心管中，用５ｍＬ乙腈重复提取２再次，并上清液于１０ｍＬ聚丙烯具塞离心管中，合０加入１５ｍＬ正己烷上下轻摇２Ｏ次，０／ｎ离心３８０ｒｍｉ５ｍｉ，去上层正己烷，下层乙腈转入１０ｍＬｎ弃将０
药物的研究，大都采用Ｃ１反相色谱柱，测采用８检
荧光检测器。流动相使用种类报道较少，于那西由
回
肽是两性药物，流动相中能解离，与色谱柱的键在并合相发生反应，而对组份的保留时间和峰型都会从造成不良影响，采取调节流动相ｐ值的方法，Ｈ以抑制药物的解离、改善峰型。

那西肽提取工艺研究

第25卷第11期宿州学院学报Vol .25,No .11　2010年11月Journa l of Suzhou U n iver sity Nov .2010do i :10.3969/j .issn.1673-2006.2010.11.016那西肽提取工艺研究段　红1,2, 赵海泉13, 徐德聪2(1.安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥　230000;2.宿州学院化学与生命科学系,安徽宿州　234000)摘要:以那西肽发酵液为材料,采用乙醇提取那西肽。

通过考察浓度、时间、料液比、温度4个因素对提取的影响,确定了那西肽提取最佳操作条件为浓度为80%,料液比为1∶1.2,提取温度在48℃,时间控制在40m in,此结果可为那西肽的开发利用提供技术依据。

关键词:那西肽;乙醇;提取工艺中图分类号:R978.1 文献标识码:A 文章编号:1673-2006(2010)11-0045-03收稿日期:2010-10-12基金项目:宿州学院自然科学研究项目(2008yzk12)。

作者简介段红(),女,安徽宿州人,讲师,在读硕士,主要从事微生物学研究。

通讯作者赵海泉,副教授,zxy @63。

那西肽又名诺西肽、诺肽菌素或诺肽霉素,是带有5个噻唑环的多肽类抗生素,可溶于氯仿、吡啶、二甲基酰胺二甲基亚砜、乙醇,不溶于水[1-3],是一种新型的、安全性较高的兽用抗生素[4]。

近年来,各国抗生素专家都致力于那西肽的生物合成途径及基因工程的研究,企图改变其生物合成途径,获取结构改变的类似化合物用于临床[5-7]。

我国在20世纪80年代末由周佩等开始进行研究[8]。

1992年7月,那西肽生产被列入农业部“八五”攻关项目;1998年被批准为国家三类新兽药。

2001年,农业部发文将那西肽列为可在饲料中长时间添加使用的饲料添加剂。

2002年,杭州汇能生物技术有限公司与复旦大学药学院对那西肽进行产业化研究,同年取得产品批号,商品名“诺农”,并于2003年大批量投放市场[9-11]。

高效液相色谱-荧光检测法与抗生素微生物检定法测定那西肽预混剂含量的比较研究

１０００ｇ：４０ｇ（４０００万单位）和ｌ０００ｇ：８０ｇ（８０００
万单位）等６个规格，该标准采用抗生素微生物榆定
作者简介：林仙军，高级畜牧师，研究方向为兽药、饲料和法Ｉ ·测定那西肽的含量，结果较准确、可靠，是传统的
刹质量标准，为那西肽预混剂的法定检测方法、用这两种方法分别测定三个规格那西肽预混刺的含量两种方法结果相对偏差在１．５％以内，差异不显著。高效液相色谱法影响因素少，线性范围大，操
作更便捷，出结果更快，应用于那西肽预混剂实际检测中效率更高关键词：那西肽；荧光检测器；抗生素微生物检定法；高效液相色谱法
ｔｈｅｎｏｓｉｈｅｐｔｉｄｅｐｒｅｍｉｘ．Ｔｈｅｓｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｗｅｌ。ｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅｔｈ］‘ｅｅｓｐｅｃｉｆｉ（‘ａ— ｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ￣ｌａｔｉｖｅｄｅｖｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｉｓｌｅｓｓｔｈａｎ１．５％．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｓｎｏｔｓｉｇｎｉ！ａｔｉｔ．Ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｌ’ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｌｅｓｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｆａｃｔｏｒｓ，ｔｈｅｌｉｎｅａ１‘ｒａｎｇｅｔｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｉｓｍｏｒｅｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｆａｓｔｅｒｒｅｓｕｌｔｓ，ａｐｐｌｉｅｄｔｏｎｎｓｉｈｅｐｔｉｄｅｐｌ‘ｅｌｎｉｘｈｉｇｈｍ’ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｅａｃｌｕａｌｄｅｌｅｔ。ｔｉｎｎ

多肽类药物含量_效价_测定方法及其应用(精)

福林－酚试剂法的缺点是易受多肽特异性的影响，即不同多肽类药物因酪氨酸和色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。Peterson法则对该法进行了改良，
进一步提高了检测的灵敏度。孙雪奇等［7］
采用Peterson法测定了视明注射液中微量多肽的含量，结果显示多肽含量在0. 98 15. 68μg内呈良好线性关系（r =0. 9997），表明该法适于微量蛋白质或多肽的含量测定。
［27］Shi C，Lu X，Ma C，et al．Enhancing the thermostability of
a novel β-agarase AgaB through directed evolution［J］．Appl Biochem Biotechnol，2008，151（1）：51-59.
［28］Craveiro K I，JúniorJ E G，Silva M C M，et al．Variant
Cry1Ia toxins generated by DNA shuffling are active against sugarcane giant borer［J］．J Biotechnol，2010，145（3）：215-221.
proteins using initiator tRNA［
J］．Methods，2005，36（3）：252-260.
［31］Thibodeaux G N，Liang X，Moncivais K，et al．Transfor-ming a pair of orthogonal tRNA-aminoacyl-tRNA syn-thetase from Archaea to function in mammalian cells［J］．PLoS ONE，2010，5（6）：e11263.

多肽含量检测方法

多肽含量检测方法一、紫外分光光度法。

这可是个挺常用的方法呢。

多肽在特定波长下有吸收峰哦。

就像是多肽在紫外光下会展现出自己独特的“小秘密”。

一般来说，在280nm左右，很多多肽会有吸收。

我们可以根据这个吸收值，再结合已知的标准曲线来计算多肽的含量。

不过呢，这个方法也有点小脾气，要是溶液里有其他在这个波长下也有吸收的物质，就可能会干扰检测结果啦，就像一场小捣乱。

二、高效液相色谱法（HPLC）这个方法就比较高大上啦。

它能把多肽和其他杂质很好地分离开来。

把样品注入到色谱柱里，就像让多肽们在一个超级赛道里赛跑，不同的多肽因为自身的性质，跑的速度不一样，最后就被分开啦。

然后通过检测每个峰的面积或者高度，再和标准品比较，就能知道多肽的含量喽。

这种方法准确性很高呢，就像一个超精准的小管家，能把多肽的含量算得明明白白。

不过呢，仪器比较贵，操作也需要一定的技术，不是随随便便就能上手的。

三、凯氏定氮法。

这个方法有点像从“氮”这个角度来抓住多肽的小尾巴。

因为多肽里含有氮元素嘛。

通过一系列复杂的化学反应，把样品里的氮都转化成氨，然后再测定氨的含量，从而推算出多肽的含量。

但是呢，这个方法不是很特异，因为除了多肽，其他含氮的物质也会被检测到，就像有时候会认错人一样，所以结果可能会有点小偏差。

四、双缩脲法。

双缩脲法也挺有趣的。

它是利用多肽分子中的肽键和铜离子发生反应，产生一种紫色的络合物。

根据这个紫色的深浅来判断多肽的含量。

这个方法比较简单，不需要啥特别高级的仪器，就像一个朴素的小能手。

不过呢，它的灵敏度不是特别高，如果多肽含量比较低的话，可能就测不太准啦。

高效液相色谱法测定饲料中那西肽A

D O I：10.15906/11-2975/s.20181311高效液相色谱法测走饲料中那西肽A林仙军，陆春波，包爱情，王彬(浙江省兽药饲料监察所，浙江杭州311100)[摘要]为建立高效液相色谱测定饲料中那西肽A的方法，根据饲料样品多样性的特点，采用乙二胺四乙酸二钠溶液和N，N-二曱基曱酰胺超声提取饲料中的那西肽A。

采用C,8色谱柱，0.02%磷酸溶液+乙腈(60:40，V/V)为流动相，流速为1.0 mL/min，荧光检测器激发波长为327 nm，发射波长为521 nm。

那西肽A在浓度0.02耀10滋g/m L时线性良好，线性相关系数为0.9999。

当添加浓度为0.5耀500 mg/k g时，平均回收率为81.6%耀95.6%，相对标准偏差 (R SD)为1.6%耀9.2%。

方法的检测限为0.2 mg/kg，定量限为0.5 mg/kg。

该方法操作简便、结果准确、稳定性好，应用于实际样品检测，结果满意，表明该方法适用于饲料中那西肽A的测定。

[关键词]那西肽A;荧光检测器；饲料;前处理；高效液相色谱法[中图分类号]S816.17 [文献标识码]A那西肽（Nosiheptide)为浅黄绿褐色或黄绿褐色粉末，是一种带有5个噻唑环的含硫多肽类抗生素（孙小青，2007)其分子式为Csi^N^O,^，相对分子质量1222.36。

那西肽能促进猪(沈顺新，2008)、鸡生长(Cromwell，1984)，提高饲料效率（Benazet，1980a、b)。

按那西肽A计算，混饲每1000 k g饲料，猪2.5 ~ 20 g，鸡2.5 g (Y u，2009)，广泛应用于畜牧业生产中（Jiang，2015)。

饲料中添加浓度较低的那西肽即能促进畜禽生长（N iu，2011)，提高伺料效率(W ojtas，2016;W ang，2014;Pascal，1979)。

农牧函〔1998〕7号批准那西肽及那西肽预混剂为国家三类新兽药。

高效液相色谱法测定饲料中那西肽A

八仙花的栽培与管理八仙花（Hyd randea macrop hy lla）在植物学上为虎耳草科（Saxifragaceae）绣球属落叶小灌木。

属名“Hyd rangea'’一词，来源于希腊词“lrydor”（水）和“angei on"（容器），意为花的形态像盛水的杯子或碗。

这是因为八仙花的花序比较大而且花序周围大多都有漂亮的装饰花八仙花花多、朵大、易养护是其重要的特点。

自然开花的时节多在6-8月.其花碧叶葱葱，清雅柔和，风姿自然。

夏季时众花怒放，或雪花压树，或蝴蝶翩跹，十分艳丽多姿，种植在庭院或别墅前后，别有风韵。

很多花初开时为白色，其后变成浅蓝，再后转变成粉红色，真如少女换新装。

八仙花的品种繁多，如大八仙花、紫茎八仙花、齿瓣八仙花、蓝边八仙花、银边八仙花等，各品种的花色风姿绝伦，妙不可言是倍受人们喜爱的观赏花木。

八仙花属植物天然分布于亚洲东南部和拉丁美洲中西部。

在我国则分布于东北东部、山东半岛以南及长江流域。

在亚洲除我国外，日本和朝鲜也有分布，东南亚地区也有少量分布。

我国是作为观赏花卉种植八仙花最早的国家。

八仙花多自然生长在山谷疏林和溪流坡地。

性喜温暖而湿润的气候条件，不耐干旱。

喜阴，忌强光直射，喜酸性土壤，不耐碱，在碱性土壤中生长不良枝叶发黄。

适宜富含腐殖质的肥沃土壤。

耐寒性羞北方适宜作盆栽冬季入室越冬1育苗繁殖方法八仙花的繁殖方法有很多在生产中多采用扦插、分株、压条法进行繁殖。

1.1扦插繁殖八『山花的扦插繁殖很容易既可以用休眠枝作插条进行硬枝扦插，也可以用正处在伸长生长的新梢作插穗进行绿枝扦插，所以温、湿度适宜的条件下，一年四季均可以进行扦插繁殖。

自然条件下，一般早春3月时结合修枝整形作硬枝扦插5-7月份时作绿枝扦插E匕较理想。

1.1.1硬枝扦插插条的准备：硬枝扦插的插条最好在la 生的枝条上剪取，为保证扦插质量，插条应从生长健壮、无病虫害、硬度大、成熟度好的枝条上剪取。

高效液相色谱测定法标准操作规程

标准操作规程STANDARD OPERATION PROCEDURE1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。

2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。

3责任：QC人员对本SOP实施负责。

4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。

超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2〜8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。

抗体效价测定操作规程

抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤：一．IgG类1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。

第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。

这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。

2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。

（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。

通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。

二．IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。

第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。

这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。