微生物检验实验图
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
微生物常规鉴定技术(带图片)
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要容。
１）细菌的培养特征包括以下容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
微生物检验15189认可
ISO15189实验室认可中临床微生物检验要点举例分析首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心苏建荣主要内容Guidance in the Field of Clinical Microbiology痰涂片：质量（回答问题），既是人员也是检验前在生物安全柜中（现场检查），也是安全Hodge试验（霍奇试验）常规？M ulti-D rug R esistanceMDR什么是MDR/PDR？摘自天津胡志东稿什么是MDR/PDR？MDR（多重耐药）指细菌对包括头孢菌素类、青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类、碳青霉烯类等在内的抗生素中的至少2-3类耐药。
PDR（泛耐药）指细菌除对粘菌素、舒巴坦可能敏感外，对临床上常见的抗生素全部耐药，PDR是MDR中的特殊类型。
PDR产KPC酶（A类碳青霉烯酶）细菌的检测◆对一种或多种头孢菌素碳青霉烯类（续）对由这些分离菌引起的感染患者，应通知临床经治医师和感染控制人员，考虑选用其他抗菌药物。
初筛试验--2009、2010初筛试验--2011天津医科大学总医院⏹执行Modified Hodge Test (MHT)试验时机?⏹初筛试验阳性和对III亚类头孢菌素（如头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟和头孢曲松）中一种或多种药物耐药改良Hodge试验耐药基因检测PCRTaq基因检测结果M 1 2 31500900700500400200100920bp注：M 为DNA marker, 1.KPC 阳性对照菌；2.临床分离肺炎克雷伯菌；3.阴性对照ATCC25922图2肺炎克雷伯菌bla KPC-2基因PCR 扩增产物电泳图小结：纸片初筛阳性5.2 设施环境5.2.1.1 实验室设施符合等级要求要有评估评估程序及依据生物安全（运送与交接）5.2.1.2 空间足够（领导）分子生物学要有独立设置三区5.2.2 闭门器洗眼设施有消毒及放水日期5.2 设施环境5.2.4 照明及电源（UPS）5.2.5 温湿度（记录）（校准的修正因子）5.2.10 病原存放遵守安全条例专人、专地、专记录设备5.3.1 设备配置（＊关键技术要求评审原则） 无菌体液的直接显微镜检查应具备细胞离心机。
微生物实验 图片和说明
1. 1. 葡萄球菌标本来源：脓汁、血液、脑脊液、食物、呕吐物、粪便染色：直接涂片革兰染色（G+）镜下描述：球形、G+、呈葡萄串状排列。
名称：G+葡萄球菌（注意只能定属、不能定种）意义（结合标本来源）：脓汁----化脓性感染；血液----菌血症、败血症；（特殊名字：脓毒败血症）脑脊液----化脓性脑膜炎；1. 2. 链球菌标本来源：脓汁（呼吸道）、咽拭子、痰、炎症渗出物、脑脊液、血液、尿液（Ⅲ超敏）染色：革兰染色，G+镜下描述：球形、G+，呈链状排列。
名称：G+链球菌意义（结合标本来源）（同葡萄球菌）：脓汁----化脓性感染；血液----菌血症、败血症；脑脊液----化脓性脑膜炎；1. 3. 肺炎双球菌标本来源：痰（铁锈色痰）、脓汁、血液、脑脊液染色：革兰染色G+镜下描述：G+、成双排列、呈矛头状、钝端相对、有透明荚膜名称（结论）：找到G+双球菌，疑似肺炎双球菌意义：铁锈色痰----大叶性肺炎脓汁----化脓性感染；血液----菌血症、败血症；脑脊液----化脓性脑膜炎；1. 4. 脑膜炎奈瑟菌标本来源：脑脊液鼻咽分泌物染色：革兰染色镜下描述：G- 成双排列、位于中心粒细胞内（外）名称；脑膜炎奈瑟菌意义：（脑膜炎奈瑟菌）诊断流脑（流行性脑脊膜炎）1. 5. 淋病奈瑟菌标本来源：泌尿生殖道分泌物眼分泌物染色：革兰染色镜下描述：G- 成双排列、位于中心粒细胞内（外）名称：淋病奈瑟菌意义：初步诊断为淋病[泌尿生殖道分泌物] 脓漏眼[眼分泌物]1. 6. 肠道杆菌、G-杆菌标本来源：粪便、血液、尿液、脓液等染色：革兰G-镜下描述：G- 杆状、不规则排列名称：（来源于粪）肠杆菌科，不能定属（来源于血液-其他）G- 杆菌意义：（粪）无意义（血）败血症 (CSF)脑膜炎7. 破伤风梭菌（有芽胞）标本来源：伤口分泌物、化脓物、坏死组织染色：革兰Ｇ+镜下描述：G+ 、细长、杆状、有芽孢、正圆形、位于菌体顶端、直径比菌体大、形似鼓槌名称：破伤风梭菌意义：标本中发现此菌，无诊断意义。
活性污泥微生物镜检解析(附图)
活性污泥微生物镜检解析（附图）一、微生物镜检概述在活性污泥中占大多数的细菌在进行显微镜观察时有诸多不便，而其中的原后生动物多以单体存在，且以游离细菌作为捕食对象，在活性污泥控制参数及环境变化时，其种类、数量、丰度等变化可用以指示活性污泥性状。
1、镜检注意事项1）取样于曝气池末端采样。
因为在活性污泥中原后生动物种群在曝气池首端常见的为非活性污泥类原生动物占优势，中段是中间性活性污泥原生动物占优势，而末端的最终原生动物以何种类占优势决定了活性污泥生物相所处功能性状。
2）采样样品应为泥水充分混合液；生物相观察用样品不可与其他样品混合。
3）取样器要洗涤干净；样品绝不可放入冷藏、冷冻箱内，需进行保存，应该常温下操作并尽早观察。
2、原后生动物分类1）原生动物通常为单细胞，没有细胞壁，但有分化的细胞器。
通常于水体中常见的有鞭毛纲、肉足纲、纤毛纲（原吸管纲并入）三大类。
鞭毛纲：具有一根或多根鞭毛，一般统称为鞭毛虫。
包括滴虫、侧跳虫、波豆虫、眼虫、内管虫等。
肉足纲：其机体仅有细胞质形成的一层薄膜，体型较小，大多无固定形态。
包括变形虫、太阳虫等。
纤毛纲：身体表面具有纤毛，并以纤毛作为运动和摄食的细胞器。
分为游泳型和固着型。
包括喇叭虫、斜管虫、豆形虫、肾形虫、草履虫、漫游虫、楯纤虫、裂口虫、扭头虫；钟虫、独缩虫、聚缩虫、累枝虫、盖纤虫等。
2）后生动物原生动物以外的多细胞动物，其中微型后生动物需要借助显微镜予以观察。
这类包括轮虫、线虫、寡毛类动物、浮游甲壳动物。
3、生物相变迁活性污泥形成过程中生物相变化情况二、常见原后生动物一览在活性污泥系统中，根据对活性污泥是否有利将原生动物分为非活性污泥类原生动物、中间性活性污泥类原生动物和活性污泥类。
1、非活性污泥类原生动物2、中间性活性污泥类原生动物3、活性污泥类原生动物4、后生动物三、生物相与运行1、活性污泥结构活性污泥絮体的大小、形状、紧密程度、构成絮体的菌胶团细菌与丝状菌的比例及其生长情况能很好地反映污水处理状况。
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
实验11环境微生物的检测_基础生物学实验（安徽大学研究生复试用,生物生命科学）
实验11环境微⽣物的检测_基础⽣物学实验（安徽⼤学研究⽣复试⽤,⽣物⽣命科学）实验⼗⼀环境微⽣物的检测⼀、实验⽬的1.学习从混杂的微⽣物群体中分离纯化微⽣物的⽅法，掌握分离纯化的基本操作技术；2.学会从菌落及培养特征辨别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四⼤类微⽣物；3.学会好氧、厌氧的微⽣物平板及斜⾯培养的⽅法。
⼆、实验原理从杂居在⼀起的微⽣物群体中获得只含有某⼀种或某⼀株微⽣物的过程称为微⽣物的分离与纯化。
具体的⽅法有1.单细胞挑取法简易单孢⼦分离法是⼀种不需显微单孢操作器，可直接在普通显微镜下利⽤低倍镜分离单孢⼦的⽅法。
它采⽤很细的⽑细管吸取较稀的萌发的孢⼦悬浮液滴在培养⽫盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴，将只含有⼀个萌发孢⼦的微滴放⼀⼩块营养琼脂⽚上，使发育成微⼩菌落。
再将微⼩菌落转移到培养基中，即可获得仅由单个孢⼦发育⽽成的纯培养。
2.平板分离法该⽅法操作简便，普遍⽤于微⽣物的分离、纯化。
基本原理包括：（1）选择适合的待分离微⽣物的⽣长条件，例如营养条件、合适的酸碱度、温度和氧等要求或加⼊某种抑制剂造成只利于该微⽣物⽣长，⽽抑制其他微⽣物⽣长的环境，从⽽淘汰⼀些不需要的微⽣物。
（2）微⽣物在固体培养基上⽣长繁殖形成的单个菌落可以是由⼀个细胞繁殖⽽成的集合体。
可以通过挑取单菌落⽽获得⼀种纯培养，获取单个菌落的⽅法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术完成。
值得⼀提的是从微⽣物群体中经分离⽣长在平板上的单个菌落并不⼀定保证是纯培养。
纯培养的确定除了观察其菌落形态外，还要结合显微镜观察到的个体形态特征后才能确定，有些微⽣物的纯培养要经过⼀系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定⽅能得到。
⼟壤是微⽣物⽣活的⼤本营，它所含微⽣物⽆论是种类还是数量上都是极其丰富的。
因此⼟壤是微⽣物多样性的重要场所，是开发微⽣物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化得到许多有价值的微⽣物菌株。
本实验将采⽤以下不同的培养基从⼟壤中分离出不同类型的微⽣物。
微生物学实验9 -cmx2010
四 实验步骤（稀释涂布平板法）
• 1）自来水 • （a）用移液枪吸取0.1 mL水样，注入肉膏 蛋白胨琼脂平板中。共做2平皿。 • （b）无菌操作用涂布棒（自己制备）均匀 涂布至水样全部吸入琼脂 平板中。 • （c）琼脂平板倒置于37℃温箱中，培养24 小时，进行菌落计数。 • 可设置一个空白对照。 • 两个平板的平均菌落数乘于10即为1 mL水 样的细菌总数。
（2）池水、河水或湖水等
1. 吸取 0.1mL 水样 ( 河水、污水或游泳池水等 ) ，注入盛有
0.9mL 无菌水的 EP 离心管中，混匀成 10-1 稀释液，注意在 吸水样前，水样及稀释水应彻底搅动均匀。
2. 吸稀释液0.1 mL按10倍稀释法稀释成10-2、10-3、10-4等连
续的稀释度。
3.吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注入2-3个 （我们只做1个）琼脂平板中，每皿0.1 mL，无菌操作用 涂布棒均匀涂布至水样吸收入琼脂 平板中。 4. 琼脂平板倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计 数。
实验 9 水的细菌学检查 1.水中细菌总数的测定
一、目的要求
• （1） 学习并掌握水体中细菌总数的检验方 法、检验的原理、数据处理和报告方法。 • （2） 强化水体细菌总数检验的卫生意义知 识。
背景知识
• 水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈 正相关。因此，它是评价水质污染程度的—个重 要指标之一。细菌总数越大，说明水体被污染得 越严重。 • 由于重金属及某些其它的有毒物质对细菌有杀灭 或抑制作用，在总细菌数少的水样中并不能排除 这些物质的污染。
表1 酵母菌数量测定结果
由表1表明，酵母菌菌 悬液浓度适中，误差较 小，酵母菌数量 为。。。。。
• 美蓝染色 不同时间不同浓度的影响----揭示了 什么？ • 台尺、血球计数板计数室----光线0X
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
微生物学实验
革兰氏染色与细胞壁： 肽聚糖 外膜
外膜蛋白
周质空间
四、实验步骤
1、革兰氏染色 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染 2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。 3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如番红，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色
三 、实验原理（革氏染色法）
1、革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的重要鉴别染 色法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳 性菌（G+)和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 2、制片（涂片，干燥，固定）→初染（结晶紫、水 洗）→媒染（加碘液覆盖涂面）→脱色（95%酒 精、水洗，）→复染（蕃红复染、水洗）→干燥 →镜检
一种介壳虫的染色体
5.相差显微镜 6. 偏光显微镜
偏光显微镜（polarizing microscope）用于检 测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、 胶原、染色体等等。
7.微分干涉差显微镜
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影 影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折 射率差别更大，故影像的立体感更强。
菌种: 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） 麦芽汁（或豆芽汁）斜面培养物。 试剂：0.05％ 和0.1 吕氏碱性美蓝染色液， 革兰氏染色用碘液 显微镜，玻片等
四 、操作步骤 1、菌种活化 将酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上， 25~28℃培养48 h左右备用。 2、美蓝镜片的观察 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色 掖，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔 放在染液中，混合均匀。
微生物实验---实验室环境和人体表面微生物的检查
一、目的要求1．证明实验室环境与体表存在微生物。
2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。
3．体会无菌操作的重要性。
二、基本原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。
每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。
因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
三、器材肉膏蛋白胨琼脂平板，无菌水，灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔（或蜡笔），废物缸。
四、操作步骤每组在“实验室”和“人体”两大部分中各选择一个内容做实验，或由教师指定分配，最后结果供全班讨论。
1．写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿底上。
如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。
用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
2．实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。
一小时后盖上两个皿盖。
（2）实验台和门的旋钮（a）用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线，如图Ⅱ-1。
（b）取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图Ⅱ-2，B），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出（图Ⅱ-2，C）。
微生物平板划线试验法
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
牛膏蛋白胨培养基是最常用 的基础培养基
基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养
按
物质制成的一类营养丰富的培养基
用
途
加富培养基
不 同 划
选择培养基
用来将某种或某类微生物从混杂的 微生物群体中分离出来的培养基
各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀 释的目的。
4、平板划线接种法
图2-5 四区划线
4、平板划线接种法
4、平板划线接种法
（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放， 送进37℃温箱培养。
（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表 面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表 面结构、透明度、颜色等性状。
之用
二、细菌的接种方法
将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是 其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在 琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半 固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法 可相应的分为四种。
②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上 的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。 灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板 1/5），此视为二区。
4、平板划线接种法
③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷 却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板 1/4），此为三区。
④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三 区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。
微生物图谱
金黄色葡萄球菌革兰染色显示典型成簇的革兰阳性球菌。
金黄色葡萄球菌由金黄色葡萄球菌引起的败血症病人血培养的革兰染色。
炭疽芽胞杆菌吕弗勒多色亚甲基蓝染色。
炭疽芽胞杆菌的芽胞染成红紫色（多色亚甲基蓝，放大1000倍）炭疽芽胞杆菌/蜡样芽胞杆菌血琼脂培养，显示具有波状边缘的大的灰白色菌落。
各种腐生芽胞杆菌通常是溶血的。
炭疽有高度传染性，在实验室处理标本时要特别小心。
（血琼脂，18小时，37℃）大肠埃希杆菌，革兰染色染色显示肠杆菌科典型的革兰阴性杆菌。
大都有相似的形态，所以不能用革兰染色鉴别。
（革兰染色，放大1000倍）在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌大肠埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。
麦康基培养基是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指示剂中性红。
乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变红。
（麦康基琼脂，18小时，37℃）患脑膜炎球菌脑膜炎病人脑脊液的革兰染色染色显示脑膜炎奈瑟菌为排列成对的革兰阴性双球菌,染成粉红色的为白细胞。
（革兰染色，放大1000倍）脑膜炎奈瑟菌巧克力琼脂培养在热血（巧克力）琼脂上，显示灰白色菌落，其氧化酶阳性。
（热血琼脂，18小时，37℃）霍乱弧菌碱性蛋白胨水培养革兰染色显示革兰阴性、逗号状的霍乱弧菌。
它们的特征性外形有助于霍乱的推测性诊断。
（革兰染色，放大1000倍）在碱性蛋白胨水中培养的霍乱弧菌室温6小时后，在气液交界面可见生长。
碱性蛋白胨水是用于可疑霍乱病例的粪便或直肠拭子的转移培养基。
（碱性蛋白胨水，6小时，室温）含有铜绿假单胞菌的痰液的革兰染色囊性纤维变性病人痰液显示葡萄球菌和铜绿假单胞菌、细的革兰阴性杆菌。
（革兰染色，放大1000倍）铜绿假单胞菌培养于麦康培养基，铜绿假单胞菌为非乳糖发酵菌，经常产生稍带绿色的绿脓菌素色素，其氧化酶阳性。
（麦康基琼脂，18小时，37℃）产气荚膜梭菌（魏氏梭菌）取自气性坏疽病人脓液的革兰染色，显示粗的砖形革兰阳性杆菌。
（革兰染色，放大1000倍）破伤风梭菌，革兰染色破伤风梭菌是细的末端有芽胞的革兰阳性杆菌。