软脉胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织E_省略_海马CA1区n_NOS表达的影响_王四平
软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺_省略_细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响_王四平
软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响王四平 王鑫国 王菊素 徐华州 郝宪恩 张 凯 李士懋 (河北医科大学中医学院,河北 石家庄 050091) 〔摘 要〕 目的 通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl 22、Bax 蛋白表达的影响,探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆(VD )的机制。
方法 采用T UNEL 法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl 22和Bax 蛋白的表达率。
结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧引起的PC12细胞的凋亡率,使Bcl 22蛋白的表达率明显增加,同时使Bax 蛋白表达率明显降低。
结论 软脉胶囊对VD 具有治疗作用。
〔关键词〕 血清药理学;软脉胶囊;PC12细胞;细胞凋亡;血管性痴呆〔中图分类号〕 R965 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 100529202(2006)0520677203基金项目:河北省医药局科技专项资金资助项目(No 198Z0313)通讯作者:李士懋(19362),男,博士生导师,教授,主要从事心脑血管疾病研究和中药新药开发。
作者简介:王四平(19662),男,在读博士,副教授,主要从事老年性痴呆及相关疾病研究。
血管性痴呆(vascular de mentia,VD )发病率仅次于阿尔茨海默病(AD ),目前国内外对该病的治疗尚无特效方法和药物。
软脉胶囊(已获国家药品监督管理局药物临床研究批件,批号:2003L00893)是李士懋教授四十多年临床实践研制的中药新药,具有活血化痰的功效,临床治疗VD 获得较好的疗效,药理研究证明其对脑缺血再灌注大鼠有保护作用〔1〕、软脉胶囊含药血清对PC12细胞损伤具有保护作用〔2〕。
我们采用血清药理学方法,试图通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及Bcl 22、Bax 凋亡相关蛋白表达的影响,探究其治疗VD 的机制,为临床用药提供理论根据。
脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区ACP、CCO活性的影响
脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区ACP、CCO活性的影响岳仁宋;申勇;陈忠义【期刊名称】《成都中医药大学学报》【年(卷),期】2005(28)1【摘要】目的采用酶组化的方法,通过脑力苏胶囊对血管性痴呆(VascularDementiaVaD)大鼠酸性磷酸酶(AcidphosphataseACP)、细胞色素氧化酶(CytochromeOxidaseCCO)酶活性影响的研究,探讨脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠智能障碍的改善效果及作用机理。
方法根据Olsson方法,采用永久性阻断双侧颈总动脉复制VaD大鼠模型,随机分为模型组、喜德镇组、大剂量脑力苏胶囊组、中剂量脑力苏胶囊组、小剂量脑力苏胶囊组,并加假手术组(每组10只) ,共用药2 1d。
用酶组化方法对海马CA1区ACP、CCO酶活性进行观测。
结果大剂量脑力苏胶囊、喜德镇治疗后大鼠海马CA1区ACP酶活性低于模型组,CCO酶活性高于模型组。
结论脑力苏胶囊可以改善脑缺血状态,保护脑缺血性损伤,提高神经细胞对缺氧的耐受性,从而对缺血引起的VaD具有益智、增智作用。
大剂量脑力苏胶囊的作用与喜德镇相近。
【总页数】4页(P35-38)【关键词】胶囊;脑力;血管性痴呆;大鼠海马;大剂量;ACP;CA1区;CCO;影响;模型【作者】岳仁宋;申勇;陈忠义【作者单位】成都中医药大学附属医院;成都市龙泉区第一人民医院;济南军区一五四医院【正文语种】中文【中图分类】R749;R743【相关文献】1.黄蒲通窍胶囊对血管性痴呆大鼠行为学表现及海马CA1区病理变化的影响 [J], 王艳;谢道俊;鲍远程;张娟;储丹晨;韦彪;孙愘叡;丁伟军;鲍婷婷;2.脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区NOS、AchE活性的影响 [J], 岳仁宋;陈忠义3.银丹心脑通软胶囊对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马CA1区Bcl-2、Bax表达的影响 [J], 刘欣;刘芳;刘伟民4.黄蒲通窍胶囊对血管性痴呆大鼠行为学表现及海马CA1区病理变化的影响 [J], 王艳;谢道俊;鲍远程;张娟;储丹晨;韦彪;孙愘叡;丁伟军;鲍婷婷5.脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区ACP、CCO活性的影响 [J], 岳仁宋;陈忠义;申勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄蒲通窍胶囊对拟血管性痴呆大鼠神经细胞c-fos、c-jun蛋白表达的影响
黄蒲通 窍 胶 囊对 拟血 管性 痴呆 大 鼠神 经 细 胞 Ｃ ｏ 、 — ｎ蛋 白表 达 的 影 响 ～ｆｓ ｃ ｊ ｕ ’
刘 妮。 谢道俊 ， 曹仕健 ， 陈永华 ， 江停 战 ， 汪远 金 ， 胡业彬 ， 李之 和 ， 黄 为 ， 良胜 ， 尹 王莉莉
摘要 ： 目的 探 讨 黄 蒲 通 窍胶 囊 对血 管性 痴 呆 （ ） 鼠脑 组 织 ｃ ｌｓ和 ｃ ｊＢ影 响 的 机 制 。方 法 制 作 线栓 法 大 脑 中动 脉栓 ＶＤ 大 —ｏ — Ｌ Ｉ
对照组 （ 可 喜组 ） 中药组 ： 临床成 人剂量 的 ７ 给药 ， 都 。 接 倍 即
同时 也 是 神 经 细胞 凋 亡 相 关 调 控 基 因 Ｃ ｆｓ１ 材 料 与 方 法
０ ４ ／ ｇ 按 照 大 鼠 体 质 量 以 ０ ０ ／ ． ２ｇ ｋ 。 ． １ｍｌｇ的 剂 量 灌 胃 给 药 。
去 。
基 因 尤其 是 Ｃ ｏ 和 Ｃ ｕ ～ｆｓ —ｊｎ在 细 胞 生 长 调 节 和 胞 内信 号 传 递
分 泌 中具 有 极 为 重 要 的作 用 。细 胞 凋 亡 控 制 基 因在 脑 缺 血 损 害 中参 与凋 亡的 发 生 ， 高 的 ｃ ｏ 升 —ｆｓ和 ｃ ｕ —ｊ ｎ参 与 神 经 细 胞 凋 亡 ｌ 。本 研 究 基 于脑 缺血 再 灌 注 损 伤 后 的 血 管 性 痴 呆 （ ） ＿ １ ］ ＶＤ 大 鼠模 型 ， 探讨 中药 黄 蒲 通 窍胶 囊 对 Ｖ 大 鼠 学 习记 忆 相 关 基 因 ， Ｄ
冠状切片 。
１２ 药 物 及 试 剂 ．
黄蒲通窍胶囊（ 主要 由人 参 、 黄 、 智 仁 等 大 益
组成） 由安 徽 中 医 学 院 第 一 附 属 医 院 提 供 ， 号 ： ０ ３ ８ ６ ０ ４ 批 ２０ ０ １ ，． ｇ 实验 前 将 黄 蒲 通 窍胶 囊 内粉 溶 于 蒸 馏 水 中 ， 成 ０ ０ ４ ｇ ｍＬ ， 配 ． ８ ／ 的浓 度 ； 可 喜 （ ｕ ｉ 每 片 含 阿 米 三 嗪 ３ ｇ及 萝 巴 新 １ 都 Ｄ ｘｌ ， ０ｍ ０ ａ ）法 ｒｇ ： 国施 维 雅 （ Ｅ Ｉ Ｒ， 号 ： ＭＯ ５ ） 厂 ， 于 蒸 馏 水 Ｓ ＲＶ Ｅ 批 ２ １３ 药 溶
补脑软胶囊对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及海马区神经细胞损伤的影响
组、模型组、阳性对照组和补脑软胶囊高、中、低剂量组，各给药组给予相应药物灌胃。除假手术组注射生理
盐水外，其余各组大鼠均在左侧脑室海马区注射聚集态 Aβ1-42 制作 AD 大鼠模型。灌胃给药 14 d 后，采用 Morris 水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力；取大鼠海马组织，HE 染色，镜下观察神经细胞损伤修复情况；大鼠脑组
LI Xixiang, DOU Jinyan, PAN Congze, CHEN Erlin, ZHANG Zhirui, LI Xiang Gansu Provincial Hospital of TCM, Lanzhou 730050, China
Abstract: Objective To investigate the effects of Bunao Soft Capsules on learning and memory ability and hippocampal nerve cell injury of Alzheimer disease (AD) rats induced by intracerebroventricular injection of Aβ1-42; To discuss its possible mechanism for treatment of AD. Methods Totally 90 male Wistar rats were randomly divided into sham-operation group, model group, positive control group, and Bunao Soft Capsules high-, medium-, and low-dosage groups. Each administration was given relevant medicine for gavage. Except for sham-operation group, all the other rats were injected with aggregated Aβ1-42 into the left hippocampus to make AD rat models. After 14 days of gavage administration, the learning and memory ability of rats was evaluated by Morris water maze test; Rat hippocampus tissue was taken and stained with HE, and the repair of nerve cell injury was observed under microscope; Preparation of homogenate in rat brain tissue was used to determine the activity of CAT, GSH-Px, SOD and MDA content; Immunohistochemistry was used to detect β-secretase activity in rat hippocampus. Results Compared with the sham-operation group, the escape latent period of model group was significantly prolonged (P<0.01); the times of crossing target quadrant significantly decreased (P<0.01); the activity of CAT, GSH-Px and SOD in brain tissue decreased; the level of MDA increased significantly (P<0.05, P<0.01); the activity of β-secretion in the hippocampus increased significantly (P<0.05). Compared with the model group, the escape latency period of Bunao
电针对血管性痴呆大鼠记忆力及海马BDNF、PSD-95蛋白表达的影响
Chinese Journal of R ehabilitation Medicine, Aug. 2019, Vol. 34, No.8•基础研屯•电针对血管性痴呆大鼠记忆力及海马BDNF 、 PSD-95蛋白表达的影响**DOI: 10.3969/j.issn 」001 -1242.2019.0&005*基金项目：广东省中医药局科研项@(20161263)；中山市科技计划项目(2016B 1034)1中山市人民医院,广东省中山市,528400; 2中山大学孙逸仙纪念医院康复医学科作者简介:梁慧英，女，博士，副主任医师；收稿日期:2018-04-25梁慧英'廖琳'游国清'林阳阳'燕铁斌，董军涛2摘要目的：观察电针对血管性痴呆(VD)大鼠记忆力的影响，以及其对大鼠海马组织脑源性神经生长因子(BDNF)与突触后致密蛋白-95(PSD-95)蛋白表达的影响，探讨电针治疗血管性痴呆的可能分子机制。
方法:将Wistar 大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组，每组8只。
假手术组暴露双侧颈总动脉，但不结扎;模型组和电针组采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD 大鼠模型。
治疗过程中3组大鼠均采用柔软型大鼠固定器固定。
电针组选取百会、足三里穴，接通电流，每天1次，每次留针30min,连续治疗14天;模型组与假手术组只给予固定。
治疗前后采用新事物识别实验对3组大鼠进行记忆力的检测。
治疗结束后采用免疫印迹法检测大鼠海马组织BDNF 与PSD-95的蛋白质表达情况,采用Image J 图像分析系统对蛋白表达水平进行分析。
结果:经过14天的治疗后，电针组大鼠对新物体的探索指数高于治疗前(P<0.05)，高于模型组大鼠(P<0.05)。
电针组大鼠海马组织的BDNF. PSD-95的蛋白质表达均高于模型组，差异有显著性意义(P<0.05)。
结论：电针血管性痴呆模型大鼠的百会穴、足三里穴能有效改善血管性痴呆大鼠的记忆能力,提高大鼠海马组织中PSD-95、BDNF 蛋白的表达，电针对记忆力的改善可能与PSD-95、BDNF 表达增加相关，有可能是通过影响BDNF- GluA 1-PSD95信号传导通路而发挥效用。
脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响
![脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响](https://img.taocdn.com/s3/m/07430885f424ccbff121dd36a32d7375a417c62f.png)
脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响何明大;黎红【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2006(4)3【摘要】目的观察脑心通胶囊对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马神经细胞静息态游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响,初步探讨脑心通胶囊治疗VD的机制.方法采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作VD动物模型;使用胰蛋白酶消化法制备海马组织单细胞悬液,Fura-2/AM负载分离的神经细胞,双波长荧光法测定海马神经细胞内静息态[Ca2+]i.结果模型组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i为(437.42±32.14)nmol/L,显著高于假手术组(189.83±18.57)nmol/L(P＜0.05);中药组和西药组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i为(252.61±20.15)nmol/L和(237.34±19.83)nmol/L,较模型组显著降低(P＜0.05),且两组间比较无统计学意义.结论脑心通胶囊可降低VD模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i,这可能是脑心通胶囊治疗VD的作用机制之一.【总页数】3页(P223-225)【作者】何明大;黎红【作者单位】中南大学湘雅二医院,410011;中南大学湘雅二医院,410011【正文语种】中文【中图分类】R743;R255.2【相关文献】1.针刺与中枢:可以从静息的大脑中获取什么?——以静息态的脑默认网络功能影像来分析针刺治疗作用的中枢效应 [J], 李霁;汤伟军;董竞成2.脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响 [J], 黎红;何明大;黄旖旎3.血管性痴呆小鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i及CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA 表达的变化 [J], 吕佩源;李文斌;尹昱;王伟斌;梁翠萍4.盐酸多奈哌齐对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡及突触素表达的影响[J], 孙鹏;董涛;石秋艳5.石杉碱甲对血管性痴呆小鼠模型海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响 [J], 吕佩源;王伟斌;尹昱;粱翠萍;李文斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脑力苏胶囊对血管性认知障碍大鼠学习记忆障碍及额叶皮层神经元作用的实验研究
久性结扎， 术后缝合切 口， 笼内饲养， 保持室温在 ２ ０ ±１ ℃。假手术组动物与实验组做同样手术 ， 但不结
扎双侧 颈 总动 脉 。
２ ４
第１ 期
陈忠义， 脑力苏胶囊对血管性认知障碍大 鼠学习记忆障碍及额叶皮层神经元作用的实验研究 等；
力 障碍 。
１２ １ ２ 造模 方法 ．． ．
只有一条通路可达平 台。实验时若大 鼠误入盲端 ， 则将其诱人通路 。第 ４天开始记录逃避潜伏期， 第
本研究 采用 永久 性 闭塞 双侧 颈 总动 脉 （ ｏ Ｔｗ
中剂量组 、 脑力苏胶囊小剂量组 。用水迷宫进行 学 习、 记忆状 态测 定 ； 借助光学 屁微 镜对 大脑额 叶皮 层组织 形 态结构 进行 观
察 。结果 ： 中剂量脑力苏胶囊 、 大、 喜得镇 治疗 后 ＶＣ 大 鼠学习 、 忆障碍得到明显改善 （ ＜ Ｏ ０ ） 大脑皮 层神经 元数量 显著 Ｉ 记 Ｐ ．５ ； 增 多（ ＜００ ） Ｐ ．５ 。结论 ： 脑力苏胶囊 具有改善 ＶＣ 大 鼠学 习、 Ｉ 记忆 障碍 的能力 ， 其可 能的作 用机制 为改善脑 血流 量 ， 对抗缺 血 缺氧 ， 阻止皮质神经元变性坏步 。 Ｅ 关键词 ： 脑力 苏胶 囊 ； 血管性认知 障碍 ； 学习记忆障碍 ； 叶 ； 额 皮质 神经 元
与 ＮＬ 组 比 ☆ Ｐ Ｏ ０ ， ☆ ☆ Ｐ ０ ０ ； Ｇ１ ＜ ． ５ ＜ ．１
与 ＨＤ Ｇ组 比
△ Ｐ＜Ｏ ０ ， △ △ Ｐ＜０ ０ 。 ． ５ ． １
ｍ ／０ ｇ ｄ 胃（ ｌ１０ ／ 灌 相当于成人每 日用量 的 ｌ 、０ ５ ５ １ 、 倍， 药物浓度分别为 ０ ２ 、． ６ 、．２ ．５ ０ １７ ０１ ５ｇ／ｍ ）均 １， 每天给药 １ 。各实验组均连续灌药 ３ 次 周。 １２３ 观察指标及方法 ．． ①水迷宫试验 （ ｔ ｚ ｔ ｔ ： Ｗａ ｒ ｅ ｍａｅ ｅ ） 水迷 宫为一 ｓ １ ×０ ４ 的棕色有机玻璃槽 ， 的一端 有一平 ×１ ． 槽 台， 动物可爬上休息 。槽 内为迷宫状 ， 有多个盲端 ， 由表 １ 结果显示 ， 药物 治疗后 ， 大剂 量脑力 苏 组、 喜得镇组逃避潜伏期缩短 ， 进入盲端次数减少 ， 与模 型组 比差异有显著性 意义 （ ＜Ｏ ０ ） 与假 手 Ｐ ．１， 术组比差异无显著性意义 （ ＞Ｏ ０ ） 中剂量脑 力 Ｐ ．５；
软脉胶囊对脑缺血再灌注大鼠的影响
软脉胶囊对脑缺血再灌注大鼠的影响
李伟;田淑霄
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2001(023)005
【摘要】目的:观察软脉胶囊对脑缺血再灌注大鼠的影响.方法:用结扎大鼠两侧颈总动脉和迷走神经的方法复制脑缺血再灌注模型.观察血液中的NO、6-keto-PGF1a、TXB2含量变化.结果:软脉胶囊0.81g/kg、2.43g/Kg能升高6-keto-PGF1a、NO含量,有降低TXB2趋势.结论:软脉胶囊对脑缺血再灌注大鼠有保护作用,其作用可能通过抑制血小板聚集和升高NO来实现的.
【总页数】3页(P359-361)
【作者】李伟;田淑霄
【作者单位】河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091
【正文语种】中文
【中图分类】R969.4
【相关文献】
1.软脉降脂胶囊对食饵性Wistar高脂血症大鼠主动脉粥样硬化平滑肌细胞增殖的影响 [J], 张静;郑广娟;张增敏;秦芳;宋洁;张丹;马慧萍;赵洪敏
2.软脉胶囊对脑缺血再灌注大鼠的保护作用 [J], 李伟;田淑霄
3.软脉胶囊对脑缺血再灌注大鼠兴奋性和抑制性氨基酸的影响 [J], 李伟;田淑霄
4.软脉胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织ET-1、CGRP及海马CA1区n-NOS表达的
影响 [J], 王四平;吕淑静;张雪静;李国明;侯仙明;王菊素;王鑫国;郝宪恩;李士懋5.乐尔脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层组织中HO-1、SOD1、SOD2和Nrf2蛋白表达的影响 [J], 池宁娟;刘明义;冯娟;石小鹏;杨志福;文爱东
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刘斌：参芎化瘀胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1...
实验方法
清洁 级健 康 SD 大鼠 （6 0只）
正常对照组 （10只）
假手术组 （10只）
模型组 （10只）
喜得镇组 （10只）
复方丹参组 （10只）
1、实验流程 无任何处理
仅分离双 侧颈总动脉
制作VD模型
灌胃 给药 （28 天）、 行为 学测 试 （第 29天）
处死
取脑 组织 标本
参芎化瘀胶 囊组
17.83 0.00
注：每组10只大鼠。与正常组比较★P＜0.01；与模型组比较▲P＜ 0.05，△ P＜0.01；与喜得镇组比较※P＜0.05；与丹参组比较＆P＜
0.05
模型组（×400）
喜得镇组（×400）
丹参组（×400）
参芎化瘀胶囊组（×400）
模型组缺血再灌注损伤后神经元细胞内BDNF大 量表达，明显高于正常组及假手术组 （P<0.01）。提示血管性痴呆大鼠大脑受到缺 血再灌注损伤刺激后，可能会应激性地激活脑组 织内BDNF因子的表达，进而发挥修复神经元的 作用，说明BDNF参与了血管性痴呆大鼠神经元 细胞损伤的病理过程。
0.00
65.50±5.45 64.00±8.83 39.75±4.11★
49.00±8.21 △ 51.75±1.50 △ 51.25±6.95 △
94.98
0.0
注：每组10只大鼠，与正常组比较★P＜0.01；与模型组比较▲P＜0.05，△ P＜0.01
2、HE染色结果
正常对照组 海马CA1区 200X
参芎化瘀胶囊对血管性痴呆大鼠海马 CA1区细胞凋亡及BDNF表达的影响
华北煤炭医学院附属医院神经内一科 刘斌 毛文静 马原源
➢ 血管性痴呆（Vascular dementia VD）是 老年期痴呆的常见原因之一，严重威胁老年 人的生存质量和生命，给家庭和社会造成沉 重的负担。因此探讨血管性痴呆的发病机制 与治疗已成为目前关注的热点。
脑脉泰胶囊对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及脑脂质过氧化的影响
脑脉泰胶囊对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及脑脂质过氧化的影响邹节明;李运曼;王征;祝浩杰;周静【期刊名称】《中草药》【年(卷),期】2006(37)2【摘要】目的探讨脑脉泰胶囊对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力以及脑脂质过氧化的影响。
方法采用夹闭大鼠双侧颈总动脉20 m in,再灌10 m in,再夹闭20 m in的方式造成脑缺血-再灌注损伤模型,以Y型迷宫进行学习记忆能力测试,并测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(M DA)水平;采用颈内动脉注射凝血酶生理盐水溶液造成大鼠多发性脑梗死模型,以Y型迷宫进行学习记忆能力测试,并测定脑组织中伊文思蓝水平。
结果脑脉泰胶囊能明显提高脑缺血-再灌注模型大鼠的学习记忆成绩(P<0.01),显著降低脑匀浆M DA水平(P<0.05、0.01),提高SOD活性(P<0.01);脑脉泰胶囊能明显提高多发性脑梗死模型大鼠的学习记忆成绩(P<0.05、0.01),降低脑组织伊文思蓝水平(P<0.01)。
结论脑脉泰胶囊可改善VD大鼠学习记忆功能,减轻脑脂质过氧化损伤。
【总页数】4页(P238-241)【关键词】脑脉泰胶囊;血管性痴呆;学习记忆;脂质过氧化【作者】邹节明;李运曼;王征;祝浩杰;周静【作者单位】桂林三金药业股份有限公司;中国药科大学生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R286.1【相关文献】1.脑通胶囊对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及脑组织NO、SOD含量的影响 [J], 况时祥;刘继刚;肖燕;官志忠2.脑脉泰胶囊对血管性痴呆模型大鼠学习记忆的影响 [J], 吴先旺;陈斌;汪保华;黄家彬3.丹龙醒脑片对血管性痴呆大鼠学习记忆及脑组织脂质过氧化和钙超载的影响 [J], 周小青;刘旺华;李花;罗尧岳;刘建新;邓常青4.黄芪、灯盏花素复方制剂对阿尔茨海默病大鼠记忆能力及血、脑组织中超氧化物歧化酶、过氧化脂质和乳酸脱氢酶的影响 [J], 缪建春;曾繁勇;邱双凤;蔡威黔5.脑脉泰胶囊对脑缺血再灌大鼠学习记忆功能及脑组织乙酰胆碱含量的影响 [J], 王征;李运曼;龚晓健;林军;邹节明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
软脉灵口服液对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响及机制的研究的开题报告
软脉灵口服液对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响
及机制的研究的开题报告
研究背景
拟血管性痴呆是一种老年性疾病，主要特征是皮层萎缩和脑血管损
伤导致的记忆、学习和认知功能障碍。
目前尚无特效治疗方法。
然而，
一些研究表明，中药可治疗和减轻拟血管性痴呆的症状，其中包括软脉
灵口服液。
研究目的
本研究旨在研究软脉灵口服液对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响，并探讨其机制。
研究方法
1. 动物模型: 建立拟血管性痴呆大鼠模型。
2. 药物干预: 将大鼠随机分为正常组、模型组、软脉灵组和Aricept 组。
正常组和模型组给予生理盐水，软脉灵组和Aricept组分别给予软脉灵和Aricept治疗。
3. Morris水迷宫测试: 用Morris水迷宫测试大鼠的学习和记忆能力。
4. 酶联免疫吸附实验: 实验结束后，检测细胞凋亡和神经元损伤指标。
预期成果
我们预计在Morris水迷宫测试中，软脉灵组和Aricept组的大鼠学习和记忆能力都会比模型组有所提高。
酶联免疫吸附实验结果显示，软脉
灵组神经元凋亡和损伤指标会降低，这说明软脉灵口服液可以减轻拟血
管性痴呆的症状，并具有一定的保护作用。
研究意义
本研究将提供更深入的了解中药软脉灵口服液在拟血管性痴呆治疗中的作用和机制，并为临床治疗提供新的思路。
寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠学习记忆及海马区ChAT的影响
寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠学习记忆及海马区ChAT的影响作者：牛彩琴徐厚谦张团笑【摘要】目的观察寿聪胶囊对老年痴呆（AD）模型大鼠的学习记忆、海马区乙酰胆碱转移酶（ChAT）阳性细胞的表达及病理形态学影响，探讨寿聪胶囊的防治机制。
方法选用Wistar 雄性大鼠随机分成五组：对照组、模型组、脑复康组及寿聪胶囊低、高剂量组。
用D半乳糖和东莨菪碱制备复合AD大鼠模型，应用中药复方制剂寿聪胶囊进行防治。
用跳台法测试大鼠的学习记忆能力、免疫组化法观察海马区ChAT阳性细胞的表达变化、光镜下观察脑组织病理形态学的改变。
结果寿聪胶囊组跳台潜伏时间明显延长、触电错误次数显著减少，海马区ChAT的阳性细胞数目显著增多、且染色大多呈阳性，脑组织病理损害明显减轻；与模型组相比均有显著性差异(P＜，与脑复康组相似(P＞。
结论寿聪胶囊能提高AD大鼠学习与记忆能力，减轻脑组织的病理损害，可能与拮抗东莨菪碱所致胆碱能神经系统的功能损害，提高ChAT活性，促进Ach合成有关。
【关键词】寿聪胶囊；老年性痴呆；东莨菪碱；D半乳糖；乙酰胆碱转移酶现代医学尚缺乏对于AD有效的防治方法，近年大量临床报道，中药复方制剂对AD的防治有较好的临床效果〔1，2〕。
中医认为肾虚精亏、痰瘀互阻是AD的主要发病机制，以“补肾填精、涤痰通络”为治法，配制中药复方制剂寿聪胶囊，经初步临床观察疗效较好，但其作用机制有待进一步研究。
本实验选用Wistar大鼠，根据AD患者常见的胆碱能神经系统损害学说〔3〕，用D半乳糖和东莨菪碱制备AD复合模型〔4～6〕。
通过行为学、ChAT及病理形态的观测，探讨寿聪胶囊对AD大鼠的防治机制，为临床应用提供理论支持。
1 材料与方法动物与分组健康Wistar雄性大鼠（兰州大学医学实验中心提供）清洁级，体重(250±50)g，共40只。
常规饲养1 w后，随机分为5组：对照组，模型组，脑复康组，寿聪胶囊低、高剂量组，每组8只。
六味银杏胶囊对血管性痴呆大鼠海马Bax和海马SS表达的影响
六味银杏胶囊对血管性痴呆大鼠海马Bax和海马SS表达的影响潘朝旺;罗磊;刘娥;张冕【期刊名称】《中药新药与临床药理》【年(卷),期】2010(21)2【摘要】目的观察六味银杏胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织ET、CGRP、海马Bax 和海马SS表达的影响,探讨六味银杏胶囊治疗血管性痴呆的作用机制。
方法通过反复夹闭双侧颈总动脉(CCA)结合腹腔注射硝普钠制备血管性痴呆大鼠模型,治疗后,测定大鼠脑组织ET、CGRP含量和海马Bax、海马SS阳性细胞数。
结果六味银杏胶囊能降低血管性痴呆大鼠脑组织ET含量和海马Bax阳性细胞数,提高CGRP含量和海马SS阳性细胞数,与模型组比较差异有显著性意义。
结论六味银杏胶囊可以调节CGRP与ET二者动态平衡,抑制海马Bax表达,促进海马SS表达,对控制和延缓血管性痴呆发生具有重要作用。
【总页数】4页(P140-143)【关键词】六味银杏胶囊;血管性痴呆(VD);ET;CGRP;Bax;海马ss【作者】潘朝旺;罗磊;刘娥;张冕【作者单位】荆楚理工学院化工与药学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.针刺配合益智饮对血管性痴呆大鼠海马组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响 [J], 吴咚咚;李岩;张智龙2.丁苯酞对血管性痴呆大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2表达的影响 [J], 姚刚;朱博驰;于挺敏;满玉红3.六味银杏胶囊对VD大鼠脑组织SOD、AchE活力和海马SS表达的影响 [J], 刘军利4.海人藻酸损伤成年大鼠纹状体后Nestin表达的变化/NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在生后大鼠海马的免疫组织化学表达/MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响/局灶性脑缺血后修复蛋白表达与细胞凋亡影响的实验研究 [J],5.温肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响 [J], 吴林; 邓燕; 唐农; 麻小梅; 陈炜; 郑福奎; 赵海涛; 白硕宇; 曾冬娟; 杨惠丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
醒脑胶囊治疗血管性痴呆的实验研究
醒脑胶囊治疗血管性痴呆的实验研究
陈会友;陈松盛
【期刊名称】《西安医科大学学报》
【年(卷),期】1999(020)002
【摘要】在ＭＩＤ动物模型上，以西药喜得宵宫和避暗试验观察了醒脑胶囊对痴呆大鼠学习记忆能力的影响。
同时应用化学荧光法测定痴呆大鼠海马中去甲肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）含量的变化。
结果：用药各组大鼠游迷宫所需时间和进入盲端的错误次数显著少地模型，避暗试验中潜伏期和５ｍｉｎ内错误次数又显著优于模型组，且中药大剂量组学习记忆成绩显著优于中、小剂量组和西药组。
中药大、中剂量组大鼠海马中ＮＥ含量显著高于小剂量组
【总页数】5页(P191-194,222)
【作者】陈会友;陈松盛
【作者单位】西安医科大学第一临床医学院中西医结合研究所;西安医科大学第一临床医学院中西医结合研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R277.791.3
【相关文献】
1.补肾益髓醒脑胶囊治疗血管性痴呆40例 [J], 王立军;李倜;张雅丽;刘金武
2.醒脑胶囊对拟血管性痴呆大鼠脑内 GSH－PX和 AchE活性影响的实验研究 [J], 高广生;高广慧;刘淑华;李智敏;聂亚东;张囡;孙秀琪
3.醒脑再造胶囊治疗血管性痴呆临床观察 [J], 李灿;钟炳武;何明大
4.天麻醒脑胶囊治疗轻中度血管性痴呆(肝肾不足、肝风上扰证)的随机、双盲、平行对照、多中心临床研究 [J], 陈维;胡璘媛;林亚明
5.天麻醒脑胶囊治疗轻中度血管性痴呆(肝肾不足、肝风上扰证)的随机、双盲、平行对照、多中心临床研究 [J], 陈维;胡璘媛;林亚明
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软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响
软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响王四平;王鑫国;王菊素;徐华州;郝宪恩;张凯;李士懋【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2006(26)5【摘要】目的通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆(VD)的机制.方法采用TUNEL法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率.结果软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧引起的PC12细胞的凋亡率,使Bcl-2蛋白的表达率明显增加,同时使Bax蛋白表达率明显降低.结论软脉胶囊对VD具有治疗作用.【总页数】3页(P677-679)【作者】王四平;王鑫国;王菊素;徐华州;郝宪恩;张凯;李士懋【作者单位】河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091;河北医科大学中医学院,河北,石家庄,050091【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用 [J], 王四平;徐华洲;王鑫国;郝宪恩;王菊素;李士懋2.β淀粉样蛋白25~35对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响 [J], 王瑞婷;王爱霞;狄婷婷;张美;申兴斌3.软脉胶囊含药血清对PC12细胞损伤的保护作用 [J], 王四平;郝宪恩;王鑫国;徐华洲;王菊素;李士懋4.中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响(英文) [J], 李君;李斌;周文江;赵凡桂;李大金;王文君5.三七提取物含药血清对MNNG转化后GES-1细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响(英文) [J], 李军祥;王志斌;朱陵群;牛福玲;崔巍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
复智胶囊对血管性痴呆大鼠海马线粒体凋亡通路的影响
复智胶囊对血管性痴呆大鼠海马线粒体凋亡通路的影响孙邈;马云枝;沈晓明【期刊名称】《影像研究与医学应用》【年(卷),期】2017(001)006【摘要】目的：研究复智胶囊对VD大鼠海马细胞凋亡的保护作用，探索复智胶囊修复神经细胞功能的可能机制。
方法：双侧颈总动脉永久结扎法（2-VO）制备VD大鼠模型，分为模型组、安理申组、复智胶囊高剂量组、复智胶囊低剂量组，并设假手术对照组。
灌胃4周后MorriS水迷宫进行行为学检测，ELISA测定血清中的CleavedCaspase-3表迦Real-timePCR检坝4海马组织中Bcl_2和Bax的mRNA基因变化水平。
结果：较之假手术组，行2—v0术后各组大鼠学习与记忆能力下降，表现为逃避潜佚期增长、游泳路径延长，跨越原平台次数明显减少，CleavedCaspase-3明显过表达，凋亡抑制基因Bcl-2表达降低，而促凋亡基因Bax表达升高，Bcl-2／Bax的比值变小；较之模型组，复智胶囊高、低剂量组和安理申组大鼠学习记忆能力均得到提升，逃避潜伏期和游泳路程均有缩短，跨越原平台次数明显增多，CleavedCaspase--3表达下降，促凋亡基因Bax降低，并且凋亡抑制基因Bcl-2升高，Bcl-2／Bax的比值改变（P〈O．05）。
结论：复智胶囊对VD大鼠学习记忆能力有一定的改善作用，可能是通过线粒体凋亡通路启动抗凋亡机制，以达到对vD的神经元保护。
【总页数】3页(P195-197)【作者】孙邈;马云枝;沈晓明【作者单位】[1]北京中医药大学,北京100029;[2]河南中医学院第一附属医院,河南郑州450000【正文语种】中文【中图分类】R969.5【相关文献】1.复方绞股蓝总甙胶囊对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的影响 [J], 彭跃钢;黄立武2.益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠VEGF基因表达及线粒体凋亡通路的影响 [J], 雷裕君; 吴鹏; 黄立武; 唐农; 林飞3.沉默Apaf-1基因对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响 [J], 张彐宁;高维娟;周晓红;靳晓飞4.复智胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织海马区神经细胞凋亡的影响 [J], 马云枝;史继鑫;孟闯;沈晓明;张可可;任应国;兰瑞;李梅5.复智胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经元细胞凋亡时效的影响 [J], 张杰;马云枝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脑力苏胶囊对VD小鼠海马NGB mRNA表达的影响
脑力苏胶囊对VD小鼠海马NGB mRNA表达的影响梅建伟;张英强;王小芳【期刊名称】《中国医学创新》【年(卷),期】2011(8)8【摘要】目的探讨脑力苏胶囊对小鼠海马区脑红蛋白(neuroglobin,NGB)mRNA 表达的影响.方法采用双侧颈总动脉结扎反复脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型.模型成功建立后,随机分为假手术、模型、喜得镇组、脑力苏胶囊高、低剂量组,其中后3组为治疗组.术后15天进行行为学实验,并采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测实验小鼠海马组织NGB mRNA表达的影响.结果模型组小鼠学习成绩与记忆成绩下降,各治疗组小鼠学习成绩与记忆成绩均有提高.模型组小鼠脑组织海马区NGB mRNA的表达较假手术组增加,各用药组均较模型组增加.结论脑力苏胶囊对血管性痴呆小鼠有治疗作用,其作用机制可能与调节海马组织NGB mRNA的表达,减轻缺血再灌注损伤有关.【总页数】3页(P10-12)【作者】梅建伟;张英强;王小芳【作者单位】610051,成都誉美医院;成都中医药大学;成都中医药大学【正文语种】中文【相关文献】1.脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区NOS、AchE活性的影响 [J], 岳仁宋;陈忠义2.脑力苏对血管性痴呆小鼠海马细胞增殖及凋亡表达的影响 [J], 柳振华;张弛;张新芳;张英强3.醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠海马组织NGB mRNA表达的影响 [J], 杨牧祥;武常生;于文涛;徐华洲;胡金宽4.脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区ACP、CCO活性的影响 [J], 岳仁宋;陈忠义;申勇5.脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区ACP、CCO活性的影响 [J], 岳仁宋;申勇;陈忠义因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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软脉胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织ＥＴ-1、ＣＧＲＰ及海马ＣＡ1区ｎ-ＮＯＳ表达的影响王四平 吕淑静1 张雪静 李国明 侯仙明 王菊素 王鑫国 郝宪恩 李士懋 (河北医科大学中医学院,河北 石家庄 050091) 〔摘 要〕 目的 探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆的机制。
方法 采用双侧颈总动脉结扎,制作慢性脑灌注不足动物模型,观察软脉胶囊对大鼠脑组织ＥＴ-1、ＣＧＲＰ及海马ＣＡ1区ｎ-ＮＯＳ表达的影响。
结果 软脉胶囊可降低大鼠脑组织中ＥＴ-1,升高大鼠脑组织中ＣＧＲＰ,同时可明显提高大鼠海马ＣＡ1区ｎ-ＮＯＳ的表达。
结论 软脉胶囊对慢性脑灌注不足大鼠脑组织具有保护作用。
〔关键词〕 软脉胶囊;血管性痴呆;内皮素(ＥＴ-1);降钙素基因相关肽(ＣＧＲＰ)〔中图分类号〕 Ｒ749.1+6 〔文献标识码〕 Ａ 〔文章编号〕 1005-9202(2006)12-1655-03ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＲｕａｎｍａｉｃａｐｓｕｌｅｏｎＥＴ-1,ＣＧＲＰｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｎ-ＮＯＳｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＣＡ1ｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｖａｓｃｕ-ｌａｒｄｅｍｅｎｔｉａＷＡＮＧＳｉ-Ｐｉｎｇ,ＬǜＳｈｕ-Ｊｉｎｇ,ＺＨＡＮＧＸｕｅ-Ｊｉｎｇ,ｅｔａｌ.ＴＣＭＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ,Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ050091,Ｈｅｂｅｉ,Ｃｈｉｎａ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＲｕａｎｍａｉｃａｐｓｕｌｅｔｏｔｒｅａｔｖａｓｃｕｌａｒｄｅｍｅｎｔｉａ(ＶＤ).Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅｂｉｌａｔｅｒａｌｃｏｍ-ｍｏｎｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｉｅｓｗｅｒｅｌｉｇａｔｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｃｈｒｏｎｉｃｃｅｒｅｂｒａｌｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎａｎｄｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＲｕａｎｍａｉｃａｐｓｕｌｅｏｎＥｎ-ｄｏｔｈｅｌｉｎ-1(ＥＴ-1),Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ-ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ(ＣＧＲＰ)ｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｎ-ＮＯＳｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＣＡ1ｉｎＶＤｒａｔｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ ＲｕａｎｍａｉｃａｐｓｕｌｅｄｅｇｒａｄｅｄＥＴ-1ａｎｄｈｅｉｇｈｔｅｎｅｄＣＧＲＰｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅ,ａｎｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｎ-ＮＯＳｉｎＣＡ1ｏｆＶＤｒａｔｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｒｕａｎｍａｉｃａｐｓｕｌｅｃａｎｐｒｏｔｅｃｔｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｈｙｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎｒａｔｓ.【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｒｕａｎｍａｉｃａｐｓｕｌｅ;Ｖａｓｃｕｌａｒｄｅｍｅｎｔｉａ(ＶＤ);Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ-1(ＥＴ-1);Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ-ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ(ＣＧＲＰ)基金项目:河北省医药局科技专项基金资助项目(Ｎｏ.98Ｚ0313)1 石家庄桥西区医院通讯作者:李士懋(1936-),男,教授,博士生导师,主要从事心脑血管疾病研究及中药新药研发。
作者简介:王四平(1966-),男,副教授,博士,硕士生导师,主要从事老年痴呆及相关疾病研究。
软脉胶囊(已获国家药品监督管理局药物临床研究批件,批号:2003Ｌ00893)是根据李士懋教授四十多年临床实践研制的中药新药,具有活血化痰之功效,临床治疗血管性痴呆(ＶＤ)获得较好的效果,药理研究证明其对脑缺血再灌注大鼠有保护作用〔1〕。
本文通过观察软脉胶囊对慢性脑灌注不足大鼠模型的影响,了解软脉胶囊对大鼠脑组织ＥＴ-1、ＣＧＲＰ及海马ＣＡ1区神经元型一氧化氮合酶(ｎ-ＮＯＳ)表达的作用,探究其治疗ＶＤ的机制,为临床用药提供理论根据。
1 材料与方法1.1 实验动物 Ｗｉｓｔａｒ大鼠,雄性,3月龄,体重为250～300ｇ,购自河北医科大学实验动物中心。
1.2 方法1.2.1 药品、试剂、与仪器 软脉胶囊(由姜黄、水蛭、三七、天竺黄、石菖蒲、海藻等药物组成,每克干粉含生药4.8ｇ);喜得镇(Ｈｙｄｅｒｇｉｎｅ,天津华津制药厂、北京诺华制药有限公司合作生产)。
内皮素-1(ＥＴ-1)和降钙素相关基因肽(ＣＧＲＰ)试剂盒(由解放军总医院科技开发中心放免所提供);一氧化氮合酶(ｎ-ＮＯＳ)免疫组化试剂盒(购自武汉博士德);其他试剂购自北京中山生物技术有限公司。
大鼠跳台仪ＤＴＴ-2,由中国医学科学院药物研究所研制;ＦＪ-2008型γ计数器,国营二六二厂生产;Ｌｅｉｃａ切片机(ＲＭ2125型,德国),ＺＨＰＹ型恒温切片展片仪(河北医科大学);ＳＨＡ-Ｃ型恒温振荡器;ＤＨＰ-2000型电热恒温培养箱(天津);ＺＤ-Ⅲｂ型医用微波炉(上海);ＨＰＩＡＳ-1000型高清晰度彩色病理图文分析系统(同济医科大学千屏影像工程公司)。
1.2.2 模型制作 参照Ｏｈｔａ等制作慢性脑灌注不足动物模型〔2〕。
大鼠购买后,适应性饲养1ｗ,然后造模。
大鼠术前12ｈ禁食,不禁水。
用10%的水合氯醛350ｍｇ/ｋｇ腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。
仰卧固定,颈前部去毛消毒后沿颈正中切开分离出双侧颈总动脉,双侧丝线结扎,缝合皮肤,放入笼中饲养。
术中大鼠肛温保持在36.5～37.5℃。
假手术组动物仅行颈前切开,分离双侧颈总动脉,但不结扎。
选造模成功后大鼠,随机分为5组,每组13只,分别为模型组、软脉胶囊低剂量组(0.81ｇ/ｋｇ)、软脉胶囊高剂量组(2.43ｇ/ｋｇ)、阳性对照喜得镇组(0.5ｍｇ/ｋｇ)和假手术组。
每天灌胃给药1次,容量为1ｍｌ/100ｇ,连续60ｄ。
模型组和假手术组给等量蒸馏水。
1.2.3 行为学测试 跳台实验,末次给药后开始进行学习训练。
训练时,将大鼠放入反射箱内,先适应3ｍｉｎ,然后通电。
大鼠受到电击时,正常反应是跳回跳台以避免电击,大鼠双足着铜栅为触电,视为错误反应。
如此训练5ｍｉｎ,记录后5ｍｉｎ内的错误次数,以此作为学习成绩。
24ｈ后重作测试,即记忆·1655·王四平等 软脉胶囊对血管性痴呆大鼠脑组织ＥＴ-1、ＣＧＲＰ及海马ＣＡ1区ｎ-ＮＯＳ表达的影响 第12期保持测验。
记录大鼠第1次跳下平台的潜伏期和5ｍｉｎ内错误反应次数,即记忆期5ｍｉｎ内错误反应次数。
秒表计时。
1.2.4 标本的收集1.2.4.1 ＨＥ染色或ｎ-ＮＯＳ免疫组化染色切片的制备 行为学测试结束后,每组随机选取3只大鼠,10%水合氯醛350ｍｇ/ｋｇ体重腹腔注射麻醉,仰卧固定于手术台上,迅速开胸,暴露心脏,输液器针头插入左心室,立即用生理盐水快速灌注。
切开右心耳,使液体流出,直到流出液澄清。
左心室迅速推注4%多聚甲醛,进行内固定。
迅速取脑,将脑组织浸于装于4%多聚甲醛的广口瓶中,固定48ｈ,酒精逐级脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,连续4μｍ切片。
然后进行ＨＥ染色或ｎ-ＮＯＳ免疫组化染色。
1.2.4.2 大鼠脑组织匀浆的制备 行为学测试结束后,其余大鼠断头迅速取出脑组织,吸去血迹,放入ＣＯ2干冰冷冻后,至-40℃冰箱保存,用时从脑正中线切开,取部分脑组织称重后尽快放入0.1ｍｏｌ/ＬＨＡＣ略做研磨,然后在100℃水浴中煮沸10ｍｉｎ,再次研磨制成匀浆,3000ｒ/ｍｉｎ,取上清备用。
1.2.4.3 检测方法 采用放射免疫分析法测定脑组织ＥＴ-1和ＣＧＲＰ浓度。
待测脑组织匀浆液4℃、3000ｒ/ｍｉｎ,离心10ｍｉｎ,分别取上清100μｌ和ＥＴ-1和ＣＧＲＰ标准品各100μｌ,分别加入抗ＥＴ-1和ＣＧＲＰ血清和125Ｉ标记的ＥＴ-1和ＣＧＲＰ,混匀,4℃冰箱24ｈ,加分离剂(ＰＥＧ)500μｌ,3500ｒ/ｍｉｎ离心15ｍｉｎ。
弃上清液,于γ放射免疫计数器上计数,测定沉淀放射性强度。
标准管(样品)沉淀计数率减去仪器本底计数率得Ｂ,零标准管沉淀计数率减去仪器本底计数率得Ｂｏ,以Ｂ/Ｂｏ为纵坐标,以ＥＴ-1和ＣＧＲＰ标准浓度为横坐标,根据样品管的Ｂ/Ｂｏ,从标准曲线上求得样品ＥＴ-1和ＣＧＲＰ的浓度值,再换算成每ｍｇ湿重脑组织ＥＴ-1和ＣＧＲＰ的含量。
1.2.4.4 ｎ-ＮＯＳ组织化学染色方法 ①3%Ｈ2Ｏ2去离子水37℃孵育10ｍｉｎ。
以消除内源性过氧化物酶活性。
②ｎ-ＮＯＳ胰酶消化。
滴加0.1%胰蛋白室温10ｍｉｎ。
③0.1ｍｏｌ/ＬＰＢＳ37℃5ｍｉｎ×3振洗,滴加正常山羊血清封闭液,37℃30ｍｉｎ,甩去多余液体,不洗。
④滴加1∶50稀释的ＣＨＡＴ兔ＩｇＧ抗体,4℃过夜,或滴加1∶80稀释的ｎ-ＮＯＳ兔ＩｇＧ抗体4℃过夜。
⑤ＰＢＳ37℃5ｍｉｎ×3振洗。
⑥滴加生物素标记山羊抗兔ＩｇＧ,37℃30ｍｉｎ。
⑦ＰＢＳ37℃5ｍｉｎ×3振洗。
⑧滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液37℃30ｍｉｎ。
⑨ＰＢＳ37℃5ｍｉｎ×3振洗。
⑩ＤＡＢ显色。
1自来水充分冲洗。
12苏木伊复染,脱水、透明、树胶封片,显微镜观察。
1.2.4.5 大鼠海马ＣＡＩ区ｎ-ＮＯＳ阳性神经元分析 半定量观察,每只大鼠选1张切片,40倍高倍镜下,每张切片随机选取5个视野,以每个视野ＨＰＩＡＳ-1000型高清晰度彩色病理图文分析系统所采集的图像显示于屏幕上的ｎ-ＮＯＳ染色阳性神经元数目,半定量反映脑组织ｎ-ＮＯＳ活性。
2 结 果2.1 行为学实验 结果见表1,在训练期和记忆期模型对照组大鼠5ｍｉｎ错误次数明显高于假手术组(Ｐ<0.01),表明ＶＤ模型已经形成,软脉胶囊(0.81、2.43ｇ/ｋｇ)组和喜得镇组可明显延长第1次跳下平台的潜伏期及减少5ｍｉｎ错误次数(Ｐ<0.01,Ｐ<0.05)。
表1 软脉胶囊对ＶＤ大鼠记忆的影响(ｘ±ｓ)组别(ｎ)剂量训练期5ｍｉｎ错误次数潜伏期(ｓ)记忆期5ｍｉｎ内错误次数假手术组(13)-2.6±0.722)183.63±80.842)1.8±0.622)模型对照组(11)-5.0±0.9757.81±35.313.4±1.21软脉胶囊组(12)0.81ｇ/ｋｇ3.8±0.861)79.73±40.652.7±0.78 (13)2.43ｇ/ｋｇ3.5±0.612)97.91±43.711)2.4±0.691)喜得镇组(13)0.5ｍｇ/ｋｇ3.3±0.582)106.72±47.811)2.2±0.611) 与模型对照组比较:1)Ｐ<0.05;2)Ｐ<0.01,下表同2.2 软脉胶囊对ＶＤ大鼠脑组织ＥＴ-1和ＣＧＲＰ含量的影响 结果见表2,模型组与假手术组比较ＥＴ-1含量升高,ＣＧＲＰ含量降低,两组比较均有显著性差异(Ｐ<0.01)。