纸片扩散法在药敏试验中的应用

纸片扩散法抗菌药物敏感试验的质量控制

纸片扩散法抗菌药物敏感试验的质量控制目的抗菌药物敏感试验是临床抗菌治疗的指导性实验。

关系到抗菌药物治疗成败。

方法多种方法中选WHO推荐使用的利于基层医院开展的纸片扩散法。

结果日常常规操作中应控制好平板厚度、琼脂浓度、细菌接种量、琼脂种类及多种因素。

结论在严把纸片扩散法抗菌药物敏感实验的操作过程的同时，有必要做好质量控制，确保结果准确性，服务于临床。

标签：纸片扩散法；抗菌药物敏感试验；质量控制Quality Control of Anti-bacterial Drug Sensitive Test of Paper Diffusion MethodZHONG Wei-pingWeihai Municipal Second Hospital Affiliated to Qingdao University，Weihai，Shandong Province，264200 China[Abstract] Objective The sensitive test of antimicrobial agents is the guiding experiment of clinical antibacterial therapy，which is related to the success or failure of antibacterial drug treatment. Methods The paper diffusion method of the primary hospital is recommended by the WHO among the various methods. Results The plate thickness，AGAR concentration，bacterial inoculation，AGAR variety and various factors should be controlled in routine operation. Conclusion In strict control of the paper diffusion method of antimicrobial susceptibility testing process，it is necessary to grasp the quality control to ensure the accuracy of the results，so as to serve the clinical practice.[Key words] Paper diffusion method；Sensitive test of antimicrobial agents；Quality control在臨床感染性疾病、菌种的耐药性、抗生素的合理应用等。

纸片扩散法实验报告

1. 掌握纸片扩散法（Kirby-Bauer法）的原理、操作方法和结果判读。

2. 了解纸片扩散法在抗菌药物敏感试验中的临床意义。

二、实验原理纸片扩散法是一种常用的抗菌药物敏感试验方法，其原理为：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后，不断地向纸片周围扩散，形成递减浓度梯度。

在纸片周围抑菌浓度范围内，待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

三、实验材料1. 标本：大肠埃希菌（18～24小时非选择性培养基上纯培养物）。

2. 试剂：营养肉汤或无菌生理盐水、直径为9cm水解酪蛋白（M-H）琼脂平板、药敏纸片（氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素、头孢曲松、环丙沙星、亚胺培南）等。

3. 器材：35℃培养箱、0.5麦氏比浊管或比浊仪、酒精灯、接种环、镊子、无菌棉拭子、毫米尺或游标卡尺等。

四、实验方法1. 菌液制备：用接种环或无菌棉拭子蘸取大肠埃希菌单个菌落，接种到有营养肉汤或0.9%无菌生理盐水的试管中，制成菌悬液，校正浊度为0.5麦氏浊度。

2. 接种平板：调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部。

3. 贴药敏纸片：用无菌镊子或纸片分配器将药敏纸片平贴于M-H琼脂平板表面，轻压。

直径9cm的平板可贴6张纸片，每张药敏纸片之间的距离24mm，距平板边缘15mm，纸片贴牢后不要移动。

4. 培养平板：将贴好药敏纸片的M-H琼脂平板置室温干燥3～5min，倒置放入35℃培养箱中培养16～24h。

5. 结果观察与记录：观察平板上抑菌圈的大小，并记录数据。

1. 氨苄西林：抑菌圈直径为18mm。

2. 头孢唑啉：抑菌圈直径为22mm。

3. 庆大霉素：抑菌圈直径为25mm。

实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性

实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。

凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。

原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。

不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。

应用前需进行试验，灵活选择。

三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。

2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。

四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。

以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。

（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。

将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。

K-B 纸片扩散法测定抗生素敏感试验

平板霉素类似物生物活性评价平板霉素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VREF)等耐药菌具有很好的抑制活性。

抗菌活性的测试主要针对MRSA和VREF进行测定和相比。

最小抑制浓度（MIC）被确定抑制细菌生长的最低浓度。

通过生物活性数据的反馈，进一步指导平板霉素类似物的合成方向，希望获得活性更高、药效活性更好的抗耐药菌抗生素和药物先导化合物。

纸片扩散法测定抗生素敏感试验及MIC：1.原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。

纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。

2.仪器及试剂仪器：纸片、试管、移液枪、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、pH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器、超净工作台试剂：样品溶液、培养基3.菌液的配置从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mL LB肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。

也可直接从孵育18～24h的琼脂平板上挑去纯菌落制成肉汤。

为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。

因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108CFU/mL。

4.接种平板在超净工作台中，用量筒量取15mL配置好的灭菌培养基，倒在平板中，冷却凝固。

吸取稀释好的菌液500μL于洁净的灭菌试管中，加入4500μL的培养基，冷却到不烫手，摇匀，均匀倾倒置已凝固的平板表面，放置冷却至凝固。

5.粘贴药敏纸片用纸片分配器或无菌镊子取纸片（直径6mm，厚度1mm），贴于平板表面，并用镊子尖轻压一下纸片，使其贴平。

每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm。

直接纸片扩散法对阳性血培养的药敏试验诊断价值

备０５麦氏单位浊度的细菌悬液，度须专用比浊计校正。．浊
准，定ＫＢ纸片扩散法的结果。严重误差：ｉｋ判 — Ｖｔ２耐药，ｅ纸片扩散法敏感；要误差：ｔｋ主Ｖｉ２敏感，片扩散法耐药；要ｅ纸次
１２标本．
３５革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌标本来自本２株
院２０年１月至２ｌ年１月的门诊及住院患者血培养标本。０９ｏ１１３阳性血培养瓶的处理．Ｂｃ／ｅｔＤ１０报警后，５ａｔＡｌ３２ｒ取
１３ｇａｎｇｔｅｂｃｌ，ｈｒｒ０３ａｒｅｎｅｗｅｎｔｔｏｓｗｉ．ｖｒｊｒ０９ｍａｏ，５ｒｍｅａｉａｉｉｔｅｅｗｅｅ９．ｇｅｍｅｔｂｔｅｗｏｍｅｈｄ，ｔ２４ｖｌｈｅｙｍａｏ，．ｊｒ
霉素（０／）以Ｓｉｅｔｅｔ—ｉ区分链球菌与肠球菌；发３ｚ，ｇｌｘＳｒｐｏｋｔｄ若现阴性短杆菌或球杆菌，片组合：纸阿莫西林／拉维酸（０１克２／０
仪缩短了阳性报警时问，传统的鉴定方法和药敏试验依然耗但
Ｖｔｋｉ２法鉴定和药敏的标准方法同时进行，ｅ比较两种方法的药敏结果差异。结果３５株阳性血培养中，兰阴性２革
杆菌的药敏结果与Ｖｉｋｔ２法符合率是９．，重误差２４，要误差０９，要误差６３；兰阳性球茵的ｅＯ３严．主．次．革药敏结果与Ｖｉｋｔ２法符合率是９．，重误差２４，要误差１６，要误差３３。结论革兰阳性球菌的ｅ２６严．主．次．苯唑西林和庆大霉素药敏试验结果，兰阴性杆菌的头孢呋辛、莫西林／拉维酸、拉西林／唑巴坦的纸片扩革阿克哌他

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。

中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。

药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

试验步骤1. 待测菌株接种物制备（1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

（2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

2.接种平板（1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

（2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。

（3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。

K-B纸片扩散法药敏试验技术要点

2.2菌液纯度由于各种细菌对药物的敏感性不同，产生的抑菌圈大小不同，若菌种不纯，试验中产生的抑菌圈大小与该菌纯培养状态下产生的抑菌圈存在较大差异，影响结果准确性，因此必须提纯各种致病菌，分别对其进行不同的药敏试验，临床医师才能综合药敏实验结果选择用药[2]。
2.3菌液的接种量细菌接种量是药敏试验结果产生较大差的原因之一，余修中[3]在K-B纸片扩散法药敏试验菌液量的规范研究中提出固定接种0.35ml菌液量的规范。到目前为止，NCCLS推荐使用的是采用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的接种菌液。然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次将平板转动约60度，最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘，对接种菌量未做客观要求。鉴于上述情况，建议在进行药敏试验用棉拭子涂布时，尽量保证选用同一品牌、大小相同的棉拭子，以减少误差，确保药敏试验的准确可靠。
3培养基
3.1培养基的选择药敏试验中，为保证结果重复性及抑菌环的大小清晰，应选择对抗生素及磺胺药物无拮抗剂的培养基。水解酪蛋白（Mueller-Hinton,MH）培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基，PH为7.2-7.4，临床实验室常规敏感试验，除了检测容易生长的在M-H培养基的需氧、兼性厌氧菌外，尚有许多不能在M-H培养基上生长或生长不良的菌株。如链球菌属、流感嗜血杆菌及淋病奈瑟菌。培养基内必须补充特殊的营养成份。流感嗜血杆菌应选用嗜血杆菌试验培养基（HTM）[4]；肺炎链球菌和其他链球菌所用培养基是在M-H琼脂中加5%脱纤维羊血。
[3]余修中，K-B法药敏试验中菌液量的规范[J],四川省卫生管理干部学院学报，2002.9（21）：177.178.
[4]王传新、王国礼，现代检验医学技术及质量控制[M]，济南，山东科学技术出版社，204:171.

药敏试验纸片扩散法原理

药敏试验纸片扩散法原理药敏试验纸片扩散法是一种常用的药敏试验方法，用于评估细菌对不同抗生素的敏感性。

该方法通过将含有不同抗生素的纸片放置在含有细菌的琼脂平板上，观察形成的药物溶解圈的直径大小来判断细菌对该抗生素的敏感性。

药敏试验纸片扩散法的原理主要包括两个方面：细菌的菌落培养和药物的扩散。

需要将凝胶琼脂平板制备好，并在其中接种细菌。

然后将平板孵育，使细菌在平板上形成菌落。

菌落形成后，将含有不同抗生素的纸片放置在平板的表面，待药物从纸片扩散到平板上。

不同抗生素的纸片在孵育过程中会逐渐溶解，药物分子会从纸片上释放出来。

药物分子会通过分子扩散的方式移动到平板中的琼脂层中，根据分子浓度梯度的差异，药物分子会从高浓度区域向低浓度区域扩散。

在扩散的过程中，抗生素分子与细菌发生相互作用，若细菌对该抗生素敏感，则可发生细菌的抑制，形成抗生素溶解圈。

根据药物在平板上扩散的效果，可以观察到不同大小的抗生素溶解圈。

抗生素的溶解圈直径大小与细菌对该抗生素的敏感性成正比，溶解圈越大，表示细菌对该抗生素越敏感，反之则表示细菌对该抗生素耐药性越强。

药敏试验纸片扩散法的优点在于操作简单、成本低廉、结果可靠。

不需要复杂的设备和专业技术，只需在细菌培养平板上放置相应抗生素纸片即可。

同时，该方法可以同时评估多个抗生素对细菌的敏感性，提供了多种药物对细菌的选择。

但是该方法也存在一些局限性。

首先，由于扩散的过程是靠分子的自由扩散，扩散速度受到分子大小、分子极性等因素的影响，因此可能存在不同抗生素扩散速度差异导致的误差。

其次，该方法只能评估细菌对单一抗生素的敏感性，无法反映多种抗生素联合应用时的效果。

此外，药敏试验纸片扩散法不适用于需进行定量药敏试验的情况，只能提供一种粗略的敏感性判断。

总之，药敏试验纸片扩散法是一种简单有效的药敏试验方法。

该方法通过评估药物的溶解圈直径大小来判断细菌对抗生素的敏感性，可以为临床提供合理使用抗生素的依据。

在实验室和临床中得到了广泛应用，为抗菌治疗提供了重要的参考依据。

微生物药敏实验报告

微生物药敏实验报告本实验旨在检测微生物对不同抗菌药物的敏感性，以指导临床合理用药，提高治疗效果。

药敏实验是通过测量抗菌药物在体外对微生物的抑制作用，评估药物对病原菌的抗菌活性。

本实验采用纸片扩散法，将含有不同抗菌药物的药敏纸片放置在培养基上，观察细菌生长情况，计算抑菌圈直径，从而判断细菌对药物的敏感性。

细菌接种：将待测细菌接种于固体培养基上，用无菌棉签均匀涂抹。

药敏纸片放置：选择合适药敏纸片，用无菌镊子将其放置在培养基上，间距至少24mm。

培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

结果分析：根据抑菌圈直径判断细菌对药物的敏感性，如敏感、中介或耐药。

青霉素、阿莫西林、头孢拉定对细菌具有较好的抗菌活性，可作为首选药物。

环丙沙星具有较强的抗菌作用，可作为备选药物。

红霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的抗菌效果较弱，可作为辅助治疗药物。

克林霉素和复方磺胺甲噁唑对细菌不敏感，应避免使用。

根据药敏实验结果，建议使用青霉素、阿莫西林、头孢拉定和环丙沙星治疗该细菌感染。

在使用过程中，应注意观察患者反应情况，及时调整用药方案。

同时，应进行定期药敏实验复查，以避免耐药性的产生。

微生物在自然界中广泛存在，而临床微生物鉴定与药敏试验对于诊断和治疗感染性疾病具有重要意义。

本文将介绍临床微生物鉴定的方法和药敏试验的基本原理及其在感染性疾病治疗中的重要性。

临床微生物鉴定是指通过一系列实验方法对临床标本中分离出的微生物进行种类鉴别和抗菌药物敏感性的测定。

这有助于医生正确选择抗菌药物，提高感染性疾病的治疗效果。

细菌鉴定是通过对细菌的形态、染色特性、生化反应、血清学试验等进行测定，以确定细菌的种类。

例如，革兰染色可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，而血清学试验则可以用于鉴定链球菌、肺炎球菌等。

病毒鉴定是通过病毒的分离培养、抗原抗体检测、分子生物学等方法确定病毒的种类。

例如，分离培养可以用于检测水痘-带状疱疹病毒，而抗原抗体检测可以用于检测乙型肝炎病毒等。

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。

中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。

药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

试验步骤1. 待测菌株接种物制备（1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

（2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

2.接种平板（1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

（2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。

（3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。

纸片扩散法药物敏感试验

纸片扩散法药物敏感试验若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法，其结果是不正确的。

而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。

WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。

本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。

无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。

但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验，对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。

试验方法：一、试验材料：（一）培养基：Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。

多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基；维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。

此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。

若检测肺炎链球菌的敏感性时，须在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。

测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和2.5mg/ml辅酶I后应校正pH 7.2〜7.4。

制备MH 琼脂平板应用直径90cm 平皿。

在水平的实验台上倾制。

琼脂厚为4mm,允许误差为土1mm。

琼脂凝固后，应测一下pH。

琼脂于板应放4C 保存，在7日内用完。

若当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱（2-8C）。

每批平板都应抽样，在30-50C下培养24h或更长时间检查是否被感染。

MH 琼脂培养基配方（1L）：Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5gStarch 1.5g Agar 17.0gFinal PH 7.3 at 25C高压灭菌后立即水浴冷却至45-50 C。

纸片扩散法常规检测淋球菌药敏试验可靠性探讨

８５．５％，阿奇霉素为９９．５０％，壮观霉素为１００．００％，两种方法敏感性比较差异无统计学意义＞Ｏ．０５）。结论：使用纸片扩散发对淋球菌药敏实验
检测的效果较好，可以用于临床初步检查。
【关键词】纸片扩散法；淋球菌；药敏实验
采集患者的尿道分泌物、宫颈分泌物等，并培养淋球菌。培养箱
内，温度为３５℃，培养２４ｈ后观察结果。随后对菌株进行分离和提纯，经确定鉴定后，以进行药敏实验。
理，计数资料组间比较使用检验，检验水准为０．０５，以
１资料与方法
包括敏感、中介和耐药三项。１．２．１纸片扩散方法根据说明书制作琼脂平板，并选择药敏
纸片，包括青霉素、环丙沙星、氟哌酸、头孢曲松、阿奇霉素
和壮观霉素。采集纯培养板上的菌落，并使用无菌生理盐水对菌液的浓度进行矫正。使用无菌镊子对药敏纸片操作，将纸片贴在培养基的表面，每张纸片的距离要大于２４ｍｍ，纸片的中
感染患者２００例进行本次试验，所有患者均采集淋球菌标本，使用纸片扩散方法和真菌药敏试剂盒，分别检查淋球菌药敏实验结果，对比观察两种方法的检验结果是否存在差异。结果：使用纸片扩散方法检测，青霉素敏感为５．００％，环丙沙星为１４．５０％，氟哌酸为７．５０％，头孢曲松为８７．００％，阿奇霉素为９９．００％，壮观霉素为１００．００％，使用真菌试剂盒检测，青霉素敏感为５．５％，环丙沙星为１３．５０％，氟哌酸为８．５０％，头孢曲松为

纸片扩散法抗生素敏感试验标准操作程序

SOP_15-25 纸片扩散法（K-B法）抗生素敏感试验标准操作程序【目的】用于分离菌的抗生素敏感试验。

【适用范围】WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。

本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。

无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【试验用材料】1.培养基Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。

多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基，维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。

此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批间差异等方面均优于其他培养基。

若检测肺炎链球菌的敏感性时，在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。

测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和2.5mg/ml辅酶I后应校正pH 7.2～7.4。

制备MH琼脂平板应用直径90cm平皿。

在水平的实验台上倾制。

琼脂厚为4mm，允许误差为土lmm。

琼脂凝固后，应测一下pH是否正确。

琼脂于板应放4℃保存，在7日内用完。

2.药物纸片抗菌药物纸片直径约为6.00～6.35mm，每片的吸水量约20μl。

采用K-B法，纸片的药物含量必须与该法规定的一致，不得任意更改。

药物纸片可以购买，也可自制，用前必须做质量鉴定。

用以下两个指标判定纸片的质量：2.1片间差：是衡量不同纸片含药是否均一的指标。

测定方法：以质控菌株接种M-H琼脂平板，一块平板上贴6张相同的纸片。

35C过夜，培养后，记录6个抑菌直径，其最大和最小之差不应大于1～2mm。

2.2准确度:判定纸片的实际含药量与标量是否一致。

纸片的合理保存十分重要。

药物纸片必须在有干燥剂的容器内低温(-10℃以下)保存。

纸片扩散法药敏试验原理

纸片扩散法药敏试验原理
嘿，朋友们！今天咱来唠唠纸片扩散法药敏试验原理这档子事儿。

你说这药敏试验就像是一场细菌和药物的大作战！咱得想办法知道哪种药物能把那些捣乱的细菌给收拾得服服帖帖呀。

想象一下，咱把含有药物的小纸片就像一个个小战士一样，整整齐齐地放在涂满了细菌的培养基上。

这些小纸片就开始发挥它们的魔力啦！药物会从纸片里慢慢扩散出来，就像孙悟空画的那个圈圈一样，形成一个药物浓度逐渐变化的区域。

这时候细菌们可就面临考验啦！有的细菌比较弱，一碰到稍微厉害点的药物浓度就不行啦，直接被打败，这周围就变得干干净净，没它们的影儿啦。

可有的细菌比较顽固，还能在药物浓度不那么高的地方顽强抵抗呢。

这不就跟咱生活中一样嘛，遇到困难有的人一下子就被打倒了，有的人还能撑一会儿。

那通过观察这些小纸片周围细菌的生长情况，咱不就清楚哪种药物对这些细菌最有效啦！这多重要啊，就像医生治病得找对药一样，不然那不就白折腾啦！
你看，这纸片扩散法药敏试验不就是这么个道理嘛！它就像是一个神奇的魔法，能帮我们找到制服细菌的法宝。

而且操作起来也不难呀，只要咱细心点，按照步骤来，就能得到准确的结果。

咱可别小瞧了这个试验，它可是为了咱的健康保驾护航呢！医生们能根据这个结果来给病人开药，让病人能快点好起来。

这就像是在黑暗中找到了一盏明灯，给人指明了方向。

所以啊，这纸片扩散法药敏试验原理真的是太实用啦！它就像一个默默无闻的英雄，在背后为我们的健康默默付出呢！大家说是不是呀！。

细菌药敏试验的原理及其应用

细菌药敏试验的原理及其应用细菌药敏试验（Antibiotic sensitivity test），是指用不同的药物或药物组合对感染性病原体进行敏感性试验，以选择最有效的药物或药物组合进行治疗。

这项检测技术在临床医疗和科学研究领域都有很广泛的应用，为治疗感染性疾病提供了重要的依据。

本文将介绍细菌药敏试验的原理及其应用。

一、细菌药敏试验原理常用的细菌药敏试验包括扩散法（disc diffusion method）和测MIC方法（minimum inhibitory concentration method）。

下面将分别介绍这两种药敏试验的原理。

1.扩散法扩散法是最常用的敏感性试验方法，也称为Kirby-Bauer试验。

其原理是将细菌涂于一层琼脂平板上，然后将不同药物浓度的药物纸片放置于琼脂平板表面，在恰当的条件下，药物会扩散到周围的琼脂平板中，形成特定的药物浓度梯度。

当细菌生长到纸片周围时，能被药物抑制生长的菌落就会停止扩散和形成，药物敏感性可根据抑菌区域大小来判定。

扩散法可快速、可靠地预测某些药物或药物组合对一个特定的细菌是否敏感。

2.测MIC法测MIC（Minimum Inhibitory Concentration）法是指测定从一个特定细菌菌株分离出的标准菌株对各种药物的最低有效浓度。

其原理是将精确浓度的药物加入以特定细菌为基底的墨菌平板，在药物的影响下，细菌生长可能会被完全抑制或减缓，通过测定最小抑菌浓度，即MIC值，来判断细菌对该药物或药物组合的敏感性。

二、细菌药敏试验的应用细菌药敏试验在病原体的鉴定、合理用药及流行病学调查等方面具有重要意义。

下面将从以下三个方面介绍药敏试验的应用。

1. 细菌鉴定细菌药敏试验是细菌鉴定的有力工具，经常在临床医学和科研中使用。

鉴定病原体种类和药敏试验是治疗感染病的基础，细菌药敏试验可以帮助医生选择最合适的治疗方法。

对于一些发病症状不明显的感染病以及病原体不明的疾病，药敏试验尤其重要。

纸片琼脂扩散实验报告

一、实验目的1. 了解纸片琼脂扩散法的原理和操作步骤。

2. 掌握纸片琼脂扩散法的应用，评估细菌对不同抗菌药物的敏感性。

3. 分析实验结果，为临床用药提供依据。

二、实验原理纸片琼脂扩散法（Kirby-Bauer法）是一种常用的细菌药敏试验方法。

其原理是将含有定量抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平板上，药物在琼脂中扩散，形成递减的浓度梯度。

当纸片周围的药物浓度低于细菌的最小抑菌浓度（MIC）时，细菌生长被抑制，形成无菌生长的透明圈，即抑菌圈。

抑菌圈的大小与药物浓度和细菌敏感性呈负相关。

三、实验材料1. 细菌菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。

2. 抗菌药物纸片：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、庆大霉素等。

3. 琼脂培养基：水解酪蛋白琼脂（Mueller-Hinton琼脂，MH琼脂）。

4. 无菌器械：接种环、镊子、酒精棉球等。

5. 环形量器、纸片分配器、计时器等。

四、实验步骤1. 准备工作：将MH琼脂培养基熔化，待冷却至约45℃时，倒入平板中，待凝固。

2. 接种：用接种环挑取适量细菌菌种，涂布于平板表面，均匀分布。

3. 贴药片：用纸片分配器或镊子将抗菌药物纸片贴于平板表面，纸片中心距离平板边缘不小于15mm，纸片间距不小于24mm。

4. 观察与记录：将平板放入37℃恒温箱中培养18-24小时，观察并记录抑菌圈的大小。

5. 结果分析：根据抑菌圈的大小，查阅药物敏感谱，判断细菌对不同抗菌药物的敏感性。

五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌：对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟均表现为敏感，抑菌圈直径分别为15mm、10mm、20mm；对庆大霉素表现为耐药，无抑菌圈形成。

2. 大肠杆菌：对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟均表现为耐药，无抑菌圈形成；对庆大霉素表现为敏感，抑菌圈直径为18mm。

3. 肺炎克雷伯菌：对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟均表现为耐药，无抑菌圈形成；对庆大霉素表现为敏感，抑菌圈直径为16mm。

根据实验结果，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟敏感，对庆大霉素耐药；大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟耐药，对庆大霉素敏感；肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟耐药，对庆大霉素敏感。

肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程

肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程1．目的规范肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2．适用范围本操作规程适用于肠球菌属的细菌。

3．选药原则3.1现行版本的CLSI M02和M100对肠球菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。

3.3本单位上一年度肠球菌属细菌耐药监控数据。

4．质控纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。

5．材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7．判断标准见表5-51.表5-51 肠球菌属细菌纸片扩散试验判断标准判断标准（mm）药敏纸片备注敏感（S）中介(I) 耐药(R)氨苄西林（10µg）≥17 ≤16 参见结果解释9.1、9.2万古霉素（30µg）≥17 15~16 ≤14 参见结果解释9.3替考拉宁（30µg）≥14 11~13 ≤10庆大霉素（120µg）≥10 6 参见结果解释9.4、9.5 左氧氟沙星（5µg）≥17 14~16 ≤13呋喃妥因（300µg）≥17 15~16 ≤14利奈唑胺（30µg）≥23 21~22 ≤20磷霉素（200µg）≥21 13~15≤12氯霉素（30µg）≥18 13~17≤128．注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

但万古霉素的抑菌圈应该用透视光源量取。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

如在抑菌圈内任何可辨别的菌落生长，则报告该菌株对万古霉素耐药。

纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析

纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析发表时间：2013-05-21T09:52:49.343Z 来源：《中外健康文摘》2013年第12期供稿作者：刘海珠杨燕徐建利[导读] 接种菌量加大可使抑菌圈减小，反之可使抑菌圈扩大。

刘海珠杨燕徐建利 (山东省威海市立医院264200)【中图分类号】R978.5 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）12-0154-02【关键词】抗菌药物敏感试验方法抗菌药物敏感试验(AST)是指在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验，纸片琼脂扩散法又称K－B法，是将含有一定量抗菌药物的纸片贴在已接种待测菌的琼脂平板表面，药物将在培养基中由纸片往周围扩散，且浓度递减。

在抑菌浓度范围内待测菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

根据抑菌圈的大小可判断待测菌对测定药物的敏感程度[1]。

该法操作简便、选药灵活，适用于快速生长的需氧菌及兼性厌氧菌。

1 实验材料抗菌药物纸片选择直径6.35mm，吸水量20μL的专用药敏纸片，灭菌后，经逐片加样或浸泡的方法使每片的含药量相当于所示浓度。

纸片冷冻干燥后储藏于密封瓶内，－20℃保存。

日常工作用的少量纸片可保存于4℃冰箱内，1周内使用。

培养基水解酪蛋白(M－H)培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基，pH7.2～7.4，溶化后倾注平板(琼脂厚度为4 mm)。

使用前应将琼脂平板放入35℃孵育至表面干燥。

药敏试验菌液：浓度应为0.5麦氏比浊标准。

①生长法：挑取已分离纯化的菌落4～5个，接种于3～5mLM－H肉汤中，35℃孵育4h，用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准。

②直接调制法：用接种环挑取纯菌落数个，混悬于生理盐水或肉汤中，充分混匀并调整浓度为0.5麦氏比浊标准[1]。

2 实验方法2.1接种以无菌棉拭子蘸取试验菌液，在管内壁旋转挤压除去多余的菌液后，涂布于整个M－H琼脂平板表面，涂布3次，每次旋转平板60°，最后沿平板边缘涂抹1圈。