(推荐)纸片扩散法药敏试验

合集下载

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验一、原理纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。

在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。

不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。

二、进行药敏实验指征为保证治疗效果，对引起感染的任何病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。

尤其当病原菌属于对常用抗菌药物能产生耐药时，就更需进行药敏试验。

若感染是公认的对某一高效抗菌药物敏感的微生物引起的，就很少需要进行药敏试验了。

三、标本要求参加药敏试验的菌株包括从临床标本中分离的常见的、快生长的菌株，如肠杆菌科菌、葡萄球菌、肠球菌、非发酵糖菌；还包括某些苛养的病原菌，如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及其他链球菌、淋病奈瑟菌等。

标本内的正常菌群，通常不作药敏。

对每一种可能致病的细菌进行敏感试验时，使用的单个菌落都应选自原始的琼脂平板，鉴定种属的过程常与此同时进行。

不同菌种的混合物不能在同一药敏平皿上进行试验。

除非在临床急症患者的标本（如阳性血培养物）经涂片革兰染色提示单一的病原菌，一般应避免直接用临床标本（如无菌体液和尿液）做药敏试验。

若用临床标本作了直接药敏试验，也必须按标准方法重复第二次药敏。

四、选药原则详见临床实验室标准化研究所（CLSI）对各种非苛养菌和苛养菌进行常规药敏试验和报告时的选药指南表。

表中的抗菌药物可满足绝大多数临床实验室的常规需要，在此表中各种抗菌药物针对具体的菌种或菌群被分成许多纵列，每一列又根据不同的选择要求分成A、B、C、U等不同的组，其中A组药物用于常规和首选试验，其结果也应常规报告。

纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析

纸片琼脂扩散法检测抗菌药物敏感试验方法分析发表时间：2013-05-21T09:52:49.343Z 来源：《中外健康文摘》2013年第12期供稿作者：刘海珠杨燕徐建利[导读] 接种菌量加大可使抑菌圈减小，反之可使抑菌圈扩大。

刘海珠杨燕徐建利 (山东省威海市立医院264200)【中图分类号】R978.5 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）12-0154-02【关键词】抗菌药物敏感试验方法抗菌药物敏感试验(AST)是指在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验，纸片琼脂扩散法又称K－B法，是将含有一定量抗菌药物的纸片贴在已接种待测菌的琼脂平板表面，药物将在培养基中由纸片往周围扩散，且浓度递减。

在抑菌浓度范围内待测菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

根据抑菌圈的大小可判断待测菌对测定药物的敏感程度[1]。

该法操作简便、选药灵活，适用于快速生长的需氧菌及兼性厌氧菌。

1 实验材料抗菌药物纸片选择直径6.35mm，吸水量20μL的专用药敏纸片，灭菌后，经逐片加样或浸泡的方法使每片的含药量相当于所示浓度。

纸片冷冻干燥后储藏于密封瓶内，－20℃保存。

日常工作用的少量纸片可保存于4℃冰箱内，1周内使用。

培养基水解酪蛋白(M－H)培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基，pH7.2～7.4，溶化后倾注平板(琼脂厚度为4 mm)。

使用前应将琼脂平板放入35℃孵育至表面干燥。

药敏试验菌液：浓度应为0.5麦氏比浊标准。

①生长法：挑取已分离纯化的菌落4～5个，接种于3～5mLM－H肉汤中，35℃孵育4h，用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准。

②直接调制法：用接种环挑取纯菌落数个，混悬于生理盐水或肉汤中，充分混匀并调整浓度为0.5麦氏比浊标准[1]。

2 实验方法2.1接种以无菌棉拭子蘸取试验菌液，在管内壁旋转挤压除去多余的菌液后，涂布于整个M－H琼脂平板表面，涂布3次，每次旋转平板60°，最后沿平板边缘涂抹1圈。

纸片扩散法药敏试验(KB法)

纸片扩散法药敏试验(KB法)纸片扩散法药敏试验，又称为KB法，是一种广泛应用于临床微生物实验室的抗生素敏感性检测方法。

通过该方法，可以快速、准确地评估病原菌对抗生素的敏感性，为临床医生提供治疗选择的依据。

纸片扩散法药敏试验的基本原理是将含有定量抗生素的纸片贴在接种有病原菌的培养基上，抗生素在培养基中扩散形成浓度梯度，抑制病原菌的生长。

通过测量纸片周围形成的抑菌圈直径，可以判断病原菌对抗生素的敏感性。

抑菌圈直径越大，表示病原菌对该抗生素越敏感。

纸片扩散法药敏试验具有操作简便、成本低廉、结果易于判读等优点，是目前临床上使用最广泛的药敏试验方法之一。

然而，该方法也存在一定的局限性，如受环境因素影响较大，结果受操作人员技术熟练程度影响等。

1. 选择合适的培养基：纸片扩散法药敏试验需要使用含有适量营养物质的培养基，以保证病原菌的生长。

2. 控制接种量：接种量过多或过少都会影响试验结果，因此需要严格控制接种量。

3. 选择合适的抗生素纸片：根据病原菌的种类和临床需求，选择合适的抗生素纸片进行试验。

4. 观察抑菌圈：在规定时间内观察抑菌圈的形成情况，测量抑菌圈直径，判断病原菌对抗生素的敏感性。

5. 结果报告：根据抑菌圈直径，按照相应的标准判断病原菌对抗生素的敏感性，并将结果报告给临床医生。

纸片扩散法药敏试验(KB法)是一种简单、实用的抗生素敏感性检测方法，在临床微生物实验室中具有广泛的应用。

通过规范操作，可以提高试验结果的准确性，为临床治疗提供有力支持。

纸片扩散法药敏试验(KB法)的进一步探讨我们需要了解KB法的基本操作步骤。

将含有特定抗生素的纸片贴在已经接种了细菌的琼脂平板上。

随着时间的推移，抗生素会从纸片中扩散到琼脂中，形成抗生素浓度梯度。

如果细菌对该抗生素敏感，那么在纸片周围就会形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。

抑菌圈的大小与抗生素的浓度和细菌的敏感性有关。

KB法的准确性受到多种因素的影响。

纸片的抗生素含量必须准确，以保证试验的重复性。

实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性

实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。

凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。

原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。

不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。

应用前需进行试验，灵活选择。

三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。

2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。

四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。

以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。

（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。

将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。

纸片扩散法药敏试验原理

纸片扩散法药敏试验原理
嘿，朋友们！今天咱来唠唠纸片扩散法药敏试验原理这档子事儿。

你说这药敏试验就像是一场细菌和药物的大作战！咱得想办法知道哪种药物能把那些捣乱的细菌给收拾得服服帖帖呀。

想象一下，咱把含有药物的小纸片就像一个个小战士一样，整整齐齐地放在涂满了细菌的培养基上。

这些小纸片就开始发挥它们的魔力啦！药物会从纸片里慢慢扩散出来，就像孙悟空画的那个圈圈一样，形成一个药物浓度逐渐变化的区域。

这时候细菌们可就面临考验啦！有的细菌比较弱，一碰到稍微厉害点的药物浓度就不行啦，直接被打败，这周围就变得干干净净，没它们的影儿啦。

可有的细菌比较顽固，还能在药物浓度不那么高的地方顽强抵抗呢。

这不就跟咱生活中一样嘛，遇到困难有的人一下子就被打倒了，有的人还能撑一会儿。

那通过观察这些小纸片周围细菌的生长情况，咱不就清楚哪种药物对这些细菌最有效啦！这多重要啊，就像医生治病得找对药一样，不然那不就白折腾啦！
你看，这纸片扩散法药敏试验不就是这么个道理嘛！它就像是一个神奇的魔法，能帮我们找到制服细菌的法宝。

而且操作起来也不难呀，只要咱细心点，按照步骤来，就能得到准确的结果。

咱可别小瞧了这个试验，它可是为了咱的健康保驾护航呢！医生们能根据这个结果来给病人开药，让病人能快点好起来。

这就像是在黑暗中找到了一盏明灯，给人指明了方向。

所以啊，这纸片扩散法药敏试验原理真的是太实用啦！它就像一个默默无闻的英雄，在背后为我们的健康默默付出呢！大家说是不是呀！。

葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程

葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程1．目的规范葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2．适用范围本操作规程适用于葡萄球菌属的细菌。

3．选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSI M02和M100对葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。

3.3本单位上一年度葡萄球菌属细菌耐药监控数据。

4．质控纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。

5．材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺。

6．操作步骤根据CLSI M2-A10和M100-S19制定本操作步骤。

6.1菌液制备从孵育了18~24小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用无菌生理盐水制成悬液作为接种物，将浊度调整至0.5麦氏标准。

应在接种物制备后15分钟内接种M-H琼脂平板。

用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60°以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。

6.2接种好的平板可敞开盖子在室温下干燥3~5分钟（不要超过15分钟），然后用纸片分配器将纸片放入琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。

各纸片中心相距应大于24mm，通常150mm平板至多放置12个纸片，90~100mm平板至多放置6个纸片。

由于某些药物在纸片放入琼脂平板后几乎立即扩散，所以一旦纸片放入后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片放在平板的另一个位置。

6.3应在纸片贴好后15分钟内将平板倒置放入35℃孵箱，若超过15分钟将使纸片中的抗菌药物提早扩散。

非苛养菌的药敏解释性标准是建立在这些菌株在空气中孵育的基础上，一些药物（如氨基糖苷类、大环内酯类和四环素）的抑菌圈直径受CO2的影响有较大的改变，所以本菌属细菌不能孵育在CO2孵箱。

纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。

中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。

药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

试验步骤1. 待测菌株接种物制备（1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

（2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。

2.接种平板（1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

（2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。

（3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。

纸片扩散法常规检测淋球菌药敏试验可靠性探讨

纸片扩散法常规检测淋球菌药敏试验可靠性探讨【摘要】目的：研究分析纸片扩散方法对淋球菌药敏实验检测的有效性和可靠性，以供参考和借鉴。

方法：对2009年9月-2012年9月淋球菌感染患者200例进行本次试验，所有患者均采集淋球菌标本，使用纸片扩散方法和真菌药敏试剂盒，分别检查淋球菌药敏实验结果，对比观察两种方法的检验结果是否存在差异。

结果：使用纸片扩散方法检测，青霉素敏感为5.00%，环丙沙星为14.50%，氟哌酸为7.50%，头孢曲松为87.00%，阿奇霉素为99.00%，壮观霉素为100.00%，使用真菌试剂盒检测，青霉素敏感为5.5%，环丙沙星为13.50%，氟哌酸为8.50%，头孢曲松为85.5%，阿奇霉素为99.50%，壮观霉素为100.00%，两种方法敏感性比较差异无统计学意义（p>0.05）。

结论：使用纸片扩散发对淋球菌药敏实验检测的效果较好，可以用于临床初步检查。

【关键词】纸片扩散法；淋球菌；药敏实验中图分类号 r446.5 文献标识码 b 文章编号 1674-6805（2013）12-0053-02淋病是临床广泛流行的一种性病，其对人类的危害较大。

而流行病学调查统计，我国淋球菌感染比例正呈逐年上升趋势。

随着广谱抗生素的应用，淋球菌耐药菌株也呈逐年增多，导致药物治疗效果不佳，病情反复等[1]，因此，对淋球菌感染患者给予药敏实验可以指导临床用药。

本文研究分析纸片扩散方法对淋球菌药敏实验检测的有效性和可靠性，报告如下。

1 资料与方法1.1 一般资料选择2009年9月-2012年9月淋球菌感染患者200例作为本次试验的研究对象。

患者均经过临床确诊。

其中男90例，女110例，年龄最大71岁，最小17岁，平均（45.62±7.88）岁。

1.2 方法采集患者的尿道分泌物、宫颈分泌物等，并培养淋球菌。

采集时使用棉拭子在培养基上用划线方法接种，放置于培养箱内，温度为35 ℃，培养24 h后观察结果。

K-B纸片扩散法药敏试验技术要点

2.2菌液纯度由于各种细菌对药物的敏感性不同，产生的抑菌圈大小不同，若菌种不纯，试验中产生的抑菌圈大小与该菌纯培养状态下产生的抑菌圈存在较大差异，影响结果准确性，因此必须提纯各种致病菌，分别对其进行不同的药敏试验，临床医师才能综合药敏实验结果选择用药[2]。
2.3菌液的接种量细菌接种量是药敏试验结果产生较大差的原因之一，余修中[3]在K-B纸片扩散法药敏试验菌液量的规范研究中提出固定接种0.35ml菌液量的规范。到目前为止，NCCLS推荐使用的是采用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的接种菌液。然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次将平板转动约60度，最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘，对接种菌量未做客观要求。鉴于上述情况，建议在进行药敏试验用棉拭子涂布时，尽量保证选用同一品牌、大小相同的棉拭子，以减少误差，确保药敏试验的准确可靠。
3培养基
3.1培养基的选择药敏试验中，为保证结果重复性及抑菌环的大小清晰，应选择对抗生素及磺胺药物无拮抗剂的培养基。水解酪蛋白（Mueller-Hinton,MH）培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基，PH为7.2-7.4，临床实验室常规敏感试验，除了检测容易生长的在M-H培养基的需氧、兼性厌氧菌外，尚有许多不能在M-H培养基上生长或生长不良的菌株。如链球菌属、流感嗜血杆菌及淋病奈瑟菌。培养基内必须补充特殊的营养成份。流感嗜血杆菌应选用嗜血杆菌试验培养基（HTM）[4]；肺炎链球菌和其他链球菌所用培养基是在M-H琼脂中加5%脱纤维羊血。
[3]余修中，K-B法药敏试验中菌液量的规范[J],四川省卫生管理干部学院学报，2002.9（21）：177.178.
[4]王传新、王国礼，现代检验医学技术及质量控制[M]，济南，山东科学技术出版社，204:171.

呋喃妥因药敏实验纸片(扩散法)产品技术要求天坛

呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）
适用范围：本产品采用半定量纸片琼脂扩散法（K-B法）体外检测细菌对呋喃妥因药物的敏感性。

1.1产品型号/规格
20片/瓶，每片含药量为300 µg/片。

2.1 外观
外观应满足如下要求：
a) 呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）包装完整，无破损；外观应整洁，文字符号标识清晰；
b) 呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）呈圆形，黄色、边缘无缺口，表面平整，无裂痕；
c) 呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）的两面均有呋喃妥因的英文名称缩写(FT)和表示含量的数字（300）。

2.2 纸片直径
呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）的直径应为：6.35mm±0.05mm。

2.3 抑菌环直径
用质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC 25923或大肠杆菌ATCC 25922进行纸片琼脂扩散法试验，结果（抑菌环直径）应符合该质控菌株可接受范围(金黄色葡萄球菌ATCC 25923:18-22mm;大肠杆菌ATCC 25922:20-25mm)。

注：抑菌环直径可接受范围参照CLSI M100 规定。

2.4 批内重复性
用同一批号呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）对质控菌株进行抑菌能力试验重复检测20个纸片，最大抑菌环与最小抑菌环直径之差不大于2.5mm。

2.5 批间重复性
用3个不同批号的呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法），对质控菌株进行抑菌能力试验，每个批号各重复检测10个纸片，同一平板上最大抑菌环与最小抑菌环直径之差的平均数不大于4mm。

2.6 稳定性
储存在-20℃以下，有效期12个月，到失效期后2个月检测，检测结果应符合2.3的要求。

纸片扩散法抗菌药物敏感试验的质量控制

纸片扩散法抗菌药物敏感试验的质量控制作者：钟伟萍来源：《中国卫生产业》2017年第26期[摘要] 目的抗菌药物敏感试验是临床抗菌治疗的指导性实验。

关系到抗菌药物治疗成败。

方法多种方法中选WHO推荐使用的利于基层医院开展的纸片扩散法。

结果日常常规操作中应控制好平板厚度、琼脂浓度、细菌接种量、琼脂种类及多种因素。

结论在严把纸片扩散法抗菌药物敏感实验的操作过程的同时，有必要做好质量控制，确保结果准确性，服务于临床。

[关键词] 纸片扩散法；抗菌药物敏感试验；质量控制[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）09（b）-0038-02Quality Control of Anti-bacterial Drug Sensitive Test of Paper Diffusion MethodZHONG Wei-pingWeihai Municipal Second Hospital Affiliated to Qingdao University， Weihai， Shandong Province，264200 China[Abstract] Objective The sensitive test of antimicrobial agents is the guiding experiment of clinical antibacterial therapy， which is related to the success or failure of antibacterial drug treatment. Methods The paper diffusion method of the primary hospital is recommended by the WHO among the various methods. Results The plate thickness， AGAR concentration， bacterial inoculation，AGAR variety and various factors should be controlled in routine operation. Conclusion In strict control of the paper diffusion method of antimicrobial susceptibility testing process， it is necessaryto grasp the quality control to ensure the accuracy of the results， so as to serve the clinical practice.[Key words] Paper diffusion method； Sensitive test of antimicrobial agents； Quality control在臨床感染性疾病、菌种的耐药性、抗生素的合理应用等。

纸片扩散法药敏试验

药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

2.接种平板（1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。

（3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。

纸片扩散法抗生素敏感试验标准操作程序

SOP_15-25 纸片扩散法（K-B法）抗生素敏感试验标准操作程序【目的】用于分离菌的抗生素敏感试验。

【适用范围】WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。

本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。

无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【试验用材料】1.培养基Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。

多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基，维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。

此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批间差异等方面均优于其他培养基。

若检测肺炎链球菌的敏感性时，在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。

测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和2.5mg/ml辅酶I后应校正pH 7.2～7.4。

制备MH琼脂平板应用直径90cm平皿。

在水平的实验台上倾制。

琼脂厚为4mm，允许误差为土lmm。

琼脂凝固后，应测一下pH是否正确。

琼脂于板应放4℃保存，在7日内用完。

2.药物纸片抗菌药物纸片直径约为6.00～6.35mm，每片的吸水量约20μl。

采用K-B法，纸片的药物含量必须与该法规定的一致，不得任意更改。

药物纸片可以购买，也可自制，用前必须做质量鉴定。

用以下两个指标判定纸片的质量：2.1片间差：是衡量不同纸片含药是否均一的指标。

测定方法：以质控菌株接种M-H琼脂平板，一块平板上贴6张相同的纸片。

35C过夜，培养后，记录6个抑菌直径，其最大和最小之差不应大于1～2mm。

2.2准确度:判定纸片的实际含药量与标量是否一致。

纸片的合理保存十分重要。

药物纸片必须在有干燥剂的容器内低温(-10℃以下)保存。

纸片扩散法药物敏感试验

纸片扩散法药物敏感试验若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法，其结果是不正确的。

而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。

WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。

本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。

无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。

但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验，对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。

试验方法：一、试验材料：（一）培养基：Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。

多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基；维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。

此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。

若检测肺炎链球菌的敏感性时，须在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。

测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和2.5mg/ml辅酶I后应校正pH 7.2〜7.4。

制备MH 琼脂平板应用直径90cm 平皿。

在水平的实验台上倾制。

琼脂厚为4mm,允许误差为土1mm。

琼脂凝固后，应测一下pH。

琼脂于板应放4C 保存，在7日内用完。

若当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱（2-8C）。

每批平板都应抽样，在30-50C下培养24h或更长时间检查是否被感染。

MH 琼脂培养基配方（1L）：Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5gStarch 1.5g Agar 17.0gFinal PH 7.3 at 25C高压灭菌后立即水浴冷却至45-50 C。

药敏实验报告

药敏实验报告药敏实验报告一、实验目的：通过药敏实验，了解抗生素对细菌的抑制作用，评价细菌对抗生素的敏感性。

二、实验原理：药敏实验主要是通过将不同抗生素涂布在含有培养基的平板上，观察不同细菌对不同抗生素的敏感性。

常用的实验方法有，纸片扩散法、落法等。

本实验采用纸片扩散法。

三、实验步骤：1.准备工作：将所需的培养基制备好，将抗生素溶液稀释成不同浓度。

2.接种细菌：用接种环沾取待测试的细菌悬液，均匀涂布在培养基上。

3.放置纸片：将含有抗生素的纸片均匀地放置在培养基上。

4.培养：将试管倒置盖在平板上，置于恒温培养箱中，在37°C下培养24小时。

5.观察结果：观察平板上的细菌生长状况，例如菌落的大小、形态等。

四、实验结果：根据观察结果，在平板上能够观察到不同的菌落，根据菌落的大小、形态等可以判断细菌对抗生素的敏感性。

对于敏感的细菌来说，抗生素会抑制其生长，菌落较小，或无法生长。

而对于耐药细菌来说，由于其对抗生素的耐受性，菌落会较大，生长繁盛。

五、讨论与分析：本实验通过药敏实验评价细菌对抗生素的敏感性，可以用于指导临床上的抗生素治疗。

根据实验结果，可以对不同的细菌选择合适的抗生素进行治疗，提高治疗的效果。

然而，需要注意的是，实验结果只是一种辅助参考的方法，最终的抗生素选择还需要结合临床情况进行判断。

六、实验总结：通过本次实验，我了解了药敏实验的原理和步骤，以及如何评价细菌对抗生素的敏感性。

药敏实验是一种常用的实验方法，对临床抗生素治疗具有重要的指导意义。

但是，实验结果只是一种参考，具体的抗生素治疗还需要根据医生的临床经验进行判断和决策。

七、参考文献：无。

3.6药敏试验卫生微生物检验实验方法与技能

含药纸片抑菌圈
2. 培养基和抗菌药物纸片
抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，厚1mm，吸水量为 20μl的专用药敏纸片。
培养基：水解酪蛋白（M-H）琼脂，倾注直径为90 mm的平板，厚度 4±0.5 mm。
Hale Waihona Puke 3. 实验方法①平板制备：将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为 90mm的平板，其厚度 4mm。 ②菌液准备：从平板上无菌挑取4～5个菌落，置无菌生理盐水，混匀制成菌悬液，校正浊度为0.5麦氏浊度。
试管架、酒精灯等
2023/12/28
3
一、纸片扩散法（K-B法）
1. 原理：
– 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
– 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
抑菌圈直径(mm)
耐药中介
敏感
≤13 14~16 ≥17
≤17 18~20 ≥21
≤12 13～14 ≥15
≤13 14～22 ≥23
≤15 16～20 ≥21
≤19 20~22 ≥23
相应MIC值 (μg/ml)
耐药
中介
敏感
≥32
16 ≤8
≥128
32~64 ≤16
≥16
8
≤4
≥8
1~4
≤0.5
2023/12/28
11
⑤孵育：35℃培养16～18 h，对苯唑西林和万古霉素等敏感应培养24h。

纸片扩散法资料

抗生素灵敏实验——纸片扩散原理：纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。

在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株那么继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。

不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速度的阻碍而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的灵敏程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小原理通俗说法：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。

该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁衍具有抑制作用。

通过测定抑菌圈的直径大小，能够判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。

而且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株取得的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方式相对应地测试各类据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处置，可取得一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，二者呈负相关关系，即MIC愈小，抑菌圈直径愈大。

材料（以大肠杆菌为例）：1.药品及细菌——诺氟沙星、新霉素、硫酸链霉素、氟苯尼考、卡那霉素、泰乐菌素、生理盐水、磷酸盐缓冲液、MH营养肉汤、MH琼脂培育基、大肠杆菌。

2.器材——纸片、试管、移液器、烘箱、培育皿、培育箱、镊子、1000ml烧杯、PH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器方式1.培育基的制备：2.药敏纸片的制备纸片制备：选择优质新华1号滤纸，用打孔器制成直径6mm的圆形滤纸片。

每200张一管，经120℃2h灭菌后备用药物稀释每张以吸入20μL药液为标准，如纸片薄，药物原液需作调整。

纸片扩散法药敏试验要求的菌液浓度

纸片扩散法药敏试验要求的菌液浓度
多物理场耦合是指不同的物理场之间存在相互作用和耦合关系。

在高速列车的牵引电机轴承中，涉及到了多个物理场的耦合问题，包括机械场、电磁场、热场等。

首先，机械场是指牵引电机轴承的机械特性，包括轴承的运动学和动力学特性。

研究轴承的机械场问题，需要考虑轴承的载荷、摩擦、磨损等因素。

同时，还需要考虑轴承的振动和声响等问题。

其次，电磁场是指牵引电机的电磁特性。

牵引电机轴承中的电磁场主要与电机的电流、磁场等因素有关。

这包括了电机的电磁力、电磁振荡等问题。

研究轴承的电磁场问题，需要考虑牵引电机的电气特性和电磁特性。

最后，热场是指牵引电机轴承的热学特性。

在高速列车牵引电机运行的过程中，由于电流、摩擦等因素，轴承会产生大量的热量。

这会导致轴承的温度升高，从而影响轴承的性能和寿命。

因此，需要研究轴承的热场问题，包括轴承的热传导、热辐射等。

研究多物理场耦合的高速列车牵引电机轴承故障动力学及其应用，可以通过建立相关的数学模型和仿真模拟进行。

通过对多个物理场的耦合关系进行量化和分析，可以揭示牵引电机轴承故障的机理和特点，并为其故障检测、预测和维修提供科学依据。

此外，还可以通过优化设计和控制方法来提高牵引电机轴承的性能和可靠性。

纸片扩散法药敏试验要求的菌液浓度通常为0.5麦克法尔登（McFarland）浓度。

这相当于菌液的光密度为0.08-0.10（在625nm波长下测量）。

要达到这个浓度，可以使用迅速细菌分析仪（如比色计或光度计）对菌液进行测量，然后通过适当的稀释来调整菌液的浓度。