FD-IQC-025 标准曲线的确认和更改手顺书

标准曲线不确定度的分析

标准曲线不确定度的分析(总12页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March标准曲线不确定度的分析曹涛（深圳市通量检测科技有限公司，广东深圳 518102）摘要：本文阐述了标准曲线不确定度分析的通用方法，讲解了标准曲线不确定度的分析步骤和方法。

并且通过检测过程中经典的几个项目的标准曲线的不确定度实例分析，来论证影响不确定度分析的因素；通过实验数据证明：参与标准曲线的点的个数和样品测定的次数越多，标准不确定度越小；并且样品测定的结果越靠近标准曲线的重点，标准不确定度越小；标准曲线的线性越好，斜率越高，标准不确定度越好；关键词：标准曲线，不确定度中图分类号：文献标识码：A文章编号：作者简介：曹涛（1987-06-04），男，汉族，陕西省汉中市，中山大学本科毕业，研究食品中营养成分、添加剂、农兽药残留的检测分析；E-mailAnalysis of Standard Curve’s UncertaintyCao Tao（Shenzhen Total-Test Technology Co., Ltd, Shenzhen 518102）Abstract: T his paper expounds a general method of the analysis of standard curve’s uncertainty and explains the steps of the analysis of standard curve’s uncertainty. Prove the effect of the factors of uncertainty analysis through the testing process in classical several items of standard curves of uncertainty analysis. Experiments demonstrate: Improving the test’s times of the standard curve and sample can make the standard’s uncertainty small. And The results of sample are more close to the center of the standard curve, the standard’s uncertainty is smaller. The standard curve is linear in the better, and the slope is higher, the standard uncertainty can be smaller.Key word: the standard curve. uncertainty前言：仪器分析中线性回归标准曲线测定方法，利用被测物质相应的信号强度与其浓度成正比关系，通过测定已知浓度的溶液（即标准溶液）的信号强度,通过最小二乘法将响应值和浓度的对应的线性关系拟合成一条直线，再根据未知样品的响应值推算出对应的浓度；然而测得的所有点未必全部都落在标准曲线上（除非线性相关系数r=1），因此得到的标准曲线本身具备相应的不确定性，而通过标准曲线去计算得到的浓度值就不可避免的具备不确定性，而且这个不确定性往往是整个实验不确定度的最大来源；因此对标准曲线计算不确定度非常有必要；1 标准曲线不确定度分析的概念和计算标准曲线的不确定度忽略标准溶液的不确定度的引入用线性最小二乘法拟合曲线程序的前提是假定横坐标（标准溶液的浓度）量的不确定度远小于纵坐标的量的不确定度，因此通常的C 0不确定度计算程序仅仅与响应值不确定度有关，而与校准溶液不确定度无关，也不与从同一溶液中逐次稀释产生必然的相关性[1]。

来料检验IQC检验作业指导书

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标准曲线测试注意事项

标准曲线测试注意事项分析检测中测试标准曲线目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量，所以标曲的制定是实验室工作中必不可少的工作。

在真实的实验过程中，测试标注曲线会遇到各式各样的问题，比如标准曲线弯曲、线性不够好等问题，造成不同情况的原因是什么呢？本文介绍一下。

测试要不要做平行样？应该怎样做平行样？常见原子吸收分光光度计用途及测试事项分析，实验室原始记录错误如何修改？检测报告有没有有效期？为什么要做能力验证？怎么做？关于实验室作业指导书，盘点实验室能力验证常见不满意结果的原因，检测方法的验证及确认，方法验证全知识点解读，如何做方法验证，国家标准的规定。

盘点实验室能力验证常见不满意结果的原因，实验室溶液配制方法与技巧，化学分析方法确认和验证指南。

前期测试注意事项1、仪器校验好。

2、移取液体体积要精确，保证迅速准确，尽可能用一根移液管；为减小人为误差同一种液体要一个人操作。

3、保证标准品的纯度，所用标准品最好是新打开的，纯度较高的固体或溶液，防止污染。

4、容器要保证洁净。

5、根据标准品理化性质注意加样的先后顺序。

6、如果要测OD值，应保证测前各管液体充分混匀。

7、若还是有某个点误差较大，应舍弃。

8、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

9、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。

而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

10、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

11、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

12、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。

13、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。

QP-025 认证产品更改程序

3.0职责
技术中心：评估设计/工艺/供应商/结构等变更是否涉及到认证变更，对将变更产品信息和所需资料提交于认证机构，并跟踪完成认证。
计划供应部：对涉及零部件更改的物料提出变更申请。
4.0定义
无
5.0工作内容
5.1产品认证更改的类型：
5.1.1商标更改；
5.1.2由于产品命名方法的变化引起的获证产品名称、型号更改；
5.1.3产品型号更改、内部结构不变（经判断不涉及安全和电磁兼容问题）；
5.1.4在证书上增加同种产品其它型号；
5.1.5 在证书上减少同种产品其它型号；
5.1.6生产厂名称更改，地址不变，生产厂没有搬迁；
5.1.7生产厂名称更改，地址名称变化，生产厂没有搬迁；
5.1.8生产厂名称不变，地址名称更改，生产厂没有搬迁；
文件修（制）订履历一览表
编制/更改日期
版本号
更改内容
修订
2006年9月24日
R01/00
新修订。
2008年5月16日
R02/00
内容有变更，具体见文件。
2013年5月13日
R02/01
变更责任单位。
2013年6月24日
R02/02
内容有变更，具体见文件
2014年4月28日
R02/03
增加5.3条内容
5.1.9生产厂搬迁；
5.1.10申请人名称更改；
5.1.11产品认证所依据的国家标准、技术规则或者认证实施细则发生了变化；
5.1.12明显影响产品的设计和规范发生了变化，如电气安全结构变更或获证产品的关键件更换；
5.1.14生产厂的质量体系发生变化（例如所有权、组织机构或管理者发生了变化）；
2014年12月1日

仪器校正作业指导书

校正作业指导书文件版本修订章节修订说明A0 --编制部门批准审核编制技术研发中心共页第页一目的：完成自动分BIN机的校正二适用范围：用于大功率自动分BIN机.。

三所用工具：防静电环，标准件，自动分BIN机。

四步骤：1. 选择标准件，根据所测试的产品型号选择相应的标准件。

2. 设置积分时间，根据产品型号即产品的光通量值，当标准件值大于150Lm时积分时间应设置在30~50ms之间，当标准件值小于150Lm时积分时间应设置在40~80ms之间，即光谱卡值应在80%左右。

3. 大功率自动分BIN机，其校正件数至少为2PCS，最多为5PCS。

选择好标准件后，在电压的校正方式选择为偏置；光通量的校正方式为增益-偏置；X、y的校正方式为偏置；主波长的校正方式为偏置4. 校正误差即校正完后测试值与标准值之间的误差，其误差范围如下：V F±0.05(V)Flux±5%x、y±0.005λD ±0.5nm5. 在校正页面的标准值框内输入正确的标准件值。

6. 保证在校正测试前，其增益都为“1”偏置都为“0”，依次测试标准件，在校正页面上会显示《测试值》，《误差值》和《误差百份比》，如有以下情况表明有标准件不符合校正要求。

6.1 光通量不符；当某个标准件光通量的误差值比其他标准件的误差值偏大或偏小5%以上证明该标准件的光通量已不符合校正要求。

6.2 电压值不符；当某个标准件电压值的误差值比其他标准件的误差值偏大或偏小0.05V以上证明该标准件的电压值已不符合校正要求。

6.3 光色值不符；当某个标准件光色值即x和y值的误差值比其他标准件的误差值偏大或偏小0.005以上证明该标准件光色值已不符校正要求。

6.4 主波长不符；当某个标准件主波长的误差值比其他标准件的误差值偏大或偏小0.5nm以上证明该标准件的主波长已不符合校正要求。

6.5如遇到以上情况，将不符合要求的标准件剔除，当符合的标准件少于3PCS时应更换标准件。

SOP-QR-025 CCD检测仪操作指导书

有限公司书页码2/4 版本号A0 1、目的为了确保操作人员在使用JC-685 CCD检测仪时能正确操作及提高工作效率故制定本标准。

2、范围2.1本标准对JC-685 CCD检测仪的使用与管理进行了规范。

2.2本标准适用于JC-685 CCD检测仪日常使用与维护保养。

3、职责3.1使用人负责JC-685 CCD检测仪的使用与维护保养工作。

3.2仪器仪表管理员负责对JC-685 CCD检测仪的使用与维护保养进行检查，并负责操作指导书的制定及修订工作。

4、设备结构图粗调节轮CCD镜头LCD显示屏有限公司书页码3/4 版本号A0 变倍比转盘卤素灯电源载物台5、操作流程5.1 接上CCD镜头电源、卤素灯电源、LCD电源。

5.2将待观察样品放于载物台上。

5.2将CCD镜头上的开关调到AUTO功能，打开LCD电源，并将其切换至A V功能，然后打开卤素灯电源。

5.3根据样品大小通过变倍比转盘调整放大倍数，然后转动粗调节轮来完成精确对焦，使待观察样品在LCD屏幕上达到清晰效果。

5.4使用结束后关闭卤素灯电源、LCD电源，并将CCD检测仪归位、摆放整齐、打扫干净。

6、注意事项6.1在转动粗调节轮时应注意待观察样品与物镜的距离，以免对待观察样品与物镜造成损坏。

6.2长时间不使用应切断CCD检测仪所有电源，以免漏电、打雷等对CCD检测仪造成损坏。

6.3请勿用手直接擦拭CCD镜头，如有脏污应用无尘布或专业镜头纸擦拭。

6.4使用完CCD检测仪后应及时将载物台清理干净，以免脏污腐蚀载物台。

6.5禁止使用人私自拆卸CCD检测仪部件，如发现仪器有故障应第一时间向仪器仪表管理员反馈，由仪器仪表管理员进行处理。

7、维护保养使用人定期对仪器进行打扫、清洁、检查，并填写仪器日维护记录表。

仪器故障记录表设备名称：设备型号：设备厂商：资产编号：仪器日保养记录表QR-066A 注：正常则填写“OK”，故障则填写“NG”，空闲则填写“Free”。

标准曲线定标标准操作规程

标准曲线定标标准操作规程
颁发部门：生产部文件编号：版本/修订：B/0
编制：审核：批准：
日期：日期：日期：
1 目的
规范标准曲线定标操作过程，保证产品质量。

2 范围
适用于荧光层析法体外诊断试剂标准曲线定标步骤的操作。

3 职责
生产部、品控部对此规程的实施负责。

4 内容
4.1 定标前准备工作
4.1.1 确认定标的产品的名称、批号，准备齐全相应的物料。

4.1.2 全过程有操作人操作，复核人对操作人的每一步操作进行复核，QA进行现场监控。

4.1.3 确认所需物料已领全，物料包括相应产品的抗原溶液、抗原稀释液、对应批次生产的冻干微球、缓冲液、试剂卡。

4.1.4 明确定标场地，定标场地必须专区专用。

4.2 设备
可调式混匀器、荧光分析仪。

确保设备均可正常工作。

4.3 操作步骤
（1）取一支对应产品的抗原溶液，使用相应抗原稀释液依梯度稀释法稀释成各待检浓度的样本。

注：CK-MB质控品的抗原浓度无法从厂家的出厂信息中获得，需要在每次定标前预先使用第三方设备对CK-MB浓度进行赋值，并在赋值的基础上进行稀释。

（2）对各浓度的样本进行层析检测，每个浓度的样本平行层析三次，记录各自的荧光检测结果。

第1 页共2 页
（3）分析荧光检测结果，根据对应的浓度和T峰/C峰比值确认标准曲线和计算公式。

4.4 记录
定标过程中要及时做好相应记录。

复核人和QA对照记录进行复核监控，确保各数据准确可靠。

4.5 清场
定标工序完成后，进行清场，并填写清场记录。

第2 页共2 页。

标准曲线的作法

标准曲线的作法(1)标准液浓度的选择：在制备标准曲线时，标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值，一般可选择5种浓度。

浓度差距最好是成倍增加或等级增加，并应与被测液同样条件下显色测定。

(2)标准液的测定：在比色时，读取光密度至少读2-3次，求其平均值，以减少仪器不稳定而产生的误差。

(3)标准曲线图的绘制：一般常用的是光密度一浓度标准曲线。

①用普通方格纸作图。

图纸最好是正方形(长：宽=l：1)或长方形(长：宽=3 ：2)，以横轴为浓度，纵轴为光密度，一般浓度的全距占用了多少格，光密度的全距也应占用相同的格数。

在适当范围内配制各种不同浓度的标准液，求其光密度，绘制标准曲线，以浓度位置向上延长，光密度位置向右延长、交点即为此座标标点。

然后，将各座标点和原点联成一条线，假设符合Lambert-Beer氏定律，则系通过原点的直线。

②假设各点不在一直线，则可通过原点，尽可能使直线通过更多点，使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两边。

③标准曲线绘制完毕以后，应在座标纸上注明实验项目的名称，所使用比色计的型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温。

④绘制标准曲线：一般应作二次或三次以上的平行测定，重复性良好曲线方可应用。

⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。

当更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时，标准曲线需重新绘制。

⑥标准曲线横坐标的标度：从标准液的含量换算成待测液的浓度。

1.5 原子吸收光谱分析的定量方法原子吸收光谱分析是一种动态分析方法，用校准曲线进行定量。

常用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和浓度直读法。

如为多通道仪器，可用内标法定量。

在这些方法中，标准曲线法是最基本的定量方法。

1.5.1 标准曲线法前面已经指出，原子吸收光谱和原子荧光光谱分析是一种相对测定方法，不能由分析信号的大小直接获得被测元素的含量，需通过一个关系式将分析信号与被测元素的含量关联起来。

标准曲线拟合不确定度评估

• 番茄红素（固体）纯度≥95%，配制成1 mg/mL的番茄红素标准储备溶液 • 天平称取0.100 g番茄红素置于100mL容量瓶中 • 称量s=0.002 g，体积重复性s(v)=0.12mL
• 纯度：
– u(P)= 0.6×0.05 /2 = 0.015 – urel(P)= 0.015/0.95=0.0158
– 标准曲线方程
利用标准物质纯度计算不确定度
• 例10 标准物质纯度≥95%，求u(P)。
解：纯度至少5%的分散，其半宽a=2.5% 估计矩形分布，b=0.6 u(P) =0.6×2.5% = 0.015
• 例11 标准物质证书P=(99.0±1.0)%，求u(P)。
解：1%为分散区半宽a=1% 估计矩形分布，b=0.6 u(P) =0.6×1% = 0.006
– 温度u(T1)= 5×2.1× 10-4×0.6×1 = 0.0006 mL
– 合成uc(V)= 0.0063 mL
• 容量瓶
– MPE±0.03 mL u(V1)=0.03 mL – 重复偏差0.01 uur(V1)=0.01 mL
– 温度u(T1)= 5×2.1× 10-4×0.6×10 = 0.006 mL
• 质量（两次称量）
– uc ud(m) = s=0.0028 g – 系统误差合成为0 – uc ud rel(m)=0.028
• 体积
– 100mL容量瓶MPE±0.05 mL， u(V1)= 0.05×0.6=0.03 mL – 重复性 u(V2)= s(v)= 0.12 mL – 温度5℃，u(T)= 5×2.1×10-4×0.6×100 = 0.06 mL – uc(V)=0.137mL – Uc rel(V)=0.00137

氟试剂分光光度法标准曲线

标准曲线是一个表示物质浓度和测定反应的闭合曲线，它对生物医学
及分析测试的结果的分析和鉴定作用至关重要。

此外，标准曲线也可
以建立和测定使用特定比例范围内的化学变化和物质浓度之间的比例
关系，以此为依据进行数据处理，预测或诊断。

本文将介绍氟试剂分
光光度法建立标准曲线及其应用。

氟试剂分光光度法，也称为四氟磺栅分光光度法，是一种用于测量氟
离子的常用分光光度测定方法。

根据分子的吸收规律，氟离子在分子
辐射区的特点是，当调整分子辐射区的激发参数，氟离子会产生荧光
if3-。

因此，可以利用荧光强度来定量检测氟离子。

为了实现定量检测，需要通过建立标准曲线来确定样品中氟离子的浓度。

建立氟试剂分光光度法标准曲线需要准备已知氟离子含量的标准溶液
和未知氟离子溶液。

通过实验，可以获得不同标准溶液和未知氟离子
溶液的分光光度值，并将这些值在xy坐标系上以标准曲线的形式展现。

从而，得到一条标准曲线，该曲线可以用来确定未知溶液中氟离子的
浓度。

最后，氟试剂分光光度法在生物医学实验和分析测试中得到广泛应用。

例如，在项目中可以准确测定饮用水、对生物体毒性及其先兆的学习
研究，而建立的标准曲线可以用来检测复杂的样品立即释放的氟离子
浓度，实现高灵敏度，精确性高的分析测试处理。

总之，建立氟试剂分光光度法标准曲线有助于准确测定氟离子的含量，可以提高定量测定的精确度和准确性。

标准曲线制作、检验、使用知识大全

分析检测的首要任务是定性和定量，定性可以说是有和无的问题，定量是提供待测物质含量范围的一个过程，这当中包含了任何定性定量都有不确定度的含义。

而普遍采用的标准曲线已然是分析检测中的常规工作，本篇内容以讲解加问答的形式探讨标准曲线使用过程中的难点和误区，结合数据处理版面关于标准曲线的问题交流，以期答疑解惑、共同精进。

内容提要本文内容共分为【四个部分】1、标准曲线的本质：系列浓度待测物质与响应的关系，用以推算样品含量。

2、标准曲线的做法：3点以上，至少重复2次，浓度均匀设置。

3、标准曲线的检验：拟合检验、失拟检验和斜率、截距检验。

4、标准曲线使用中的问题。

标准曲线的本质分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量（浓度/量）的物质与仪器响应/信号之间的关系，数学处理就是曲线方程，图形表示就是标准曲线。

标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。

当我们得到一系列已知含量的物质的响应后，就会去建立函数关系，数学上称曲线拟合，由于直线最为简单，所以常常用直线方程加以拟合，当然会用到多项式拟合等其他方式。

标准曲线的核心问题要解决：1、能找到确切浓度的标准物质或标准品。

2、标准系列和待测物质一定要有相同和一致的基体，因为样品基体可能会干扰仪器的响应，从这个意义上讲，样品的前处理实际就是提供标准和样品同样的基体环境，尽量祛除干扰基体。

所以最好的标准系列应该是样品基体匹配的标准系列。

而方法建立过程中首先要考虑的当然是基体干扰的问题，推荐用标准加入曲线和Youden曲线分别考察样品基体所带来的乘积性干扰和加和性干扰。

标准加入曲线就是在样品中加入一系列标准，然后考察该标准加入曲线和标准曲线斜率的统计学差异，若有差异需考虑用标准加入法定量；而Youden曲线就是对样品做一系列稀释，然后用稀释倍数如1/10,1/5,1/2,1对仪器响应做曲线，考察该Youden曲线的截距与0的差别，若有差别则提示有加和性干扰，此时测定值要减去该截距才是真实值。

DLG-QP-25(D) 出货检验控制程序(修订)

上海德朗能动力电池有限公司
DLG（Shanghai）PowerBattery Co., Ltd
文件编号
DLG/QP-25
文件版本
D
文件页数
共页
编制部门
品保部
出货检验控制程序
编制
审核
批准
盖章
1.目的
确保产品各项检验圆满完成，且结果符合规定的要求，防止不合格品流出。
2.范围
适用于本公司所有产品的入库和出货检验。
3.定义
3.1检验：为确定产品或服务的各特性是否合格，测定、检验、实验或度量产品或服务的一种或多种特性，并且与规定要求进行比较的活动。
3.2出货检验：对公司所生产的成品或直接购入品在出货前的最后一道检验，与规定要求比较判
定其物品合格与否的检验。
3.3成品批次：在同等条件下（相同材料、设备、人员、方法）生产的同一型号相同等级的产品
2
B
修改：文件封面、文件名称、部门名称、局部内容更新；
增加：附件一。
2009.0单、部分内容调整补充:5.4.1、5.4.2条款。
2012.05.29
7.应用表单
7.1<出货检验通知单> QR-CMD-022
7.2 <出货检验报告>T-QA-OQC-001
7.3 <返工/返修通知单> T-QA-IPQC-013
7.4 <纠正与预防措施要求书>
8.附件
8.1<附件一：文件更改履历表>
附件一：
文件更改履历表
№
文件版次
更改内容
更改日期
1
A
初版发行
2004.02.01
5.程序
5.1检验标准的制定

气相色谱仪标准方法变更确认表

火焰离子化检测器（FID）检测限检定时使用的气体标准物质摩尔分数为（10～10000）μmol/mol
附录A中载气流速校正公式中的柱温
附录A中载气流速校正公式中的柱温改为检测器温度
皂膜流量计测量范围、准确度等级无特殊要求
皂膜流量计测量范围（0～100）mL/min，准确度等级不低于1.5级
铂电阻温度计测量范围、准确度等级无特殊要求
人员资质
根据工作分工安排相关人员参加了宣贯培训，并对新旧版本进行了详细的对比分析，按新规程要求更新相关的仪器设备，能够按新规程要求开展液相色谱仪的检定工作。
环境条件
规程要求检定环境温度：（5～35）℃，环境相对湿度：（20～85）%。现场检定温度为：（15～30）℃，相对湿度：（40～75）%，环境条件符合规程要求。
通用性检测器性能检定条件中，热导检测器（TCD）和火焰离子化检测器（FID）气体检定柱箱温度设定改为50℃和80℃
电子捕获检测器（ECD）检测器温度为230℃
电子捕获检测器（ECD）检测器温度改为250℃
检测限检定时进样次数和载气流速测量次数为6次
检测限检定时进样次数和载气流速测量次数改为7次
无气体标准物质摩尔分数与浓度换算公式
无定性重复性检定项目
增加了定性重复性检定项目
无法对电子捕获检测器以Hz为输出信号的气相色谱仪进行检定
增加了电子捕获检测器以Hz为输出信号的噪声和漂移的检定指标
衰减器误差均为≤1%
删除了衰减器误差
附录A为对微量注射器的校准
删除了原附录A微量注射器的校准部分
通用性检测器性能检定条件中，热导检测器（TCD）和火焰离子化检测器（FID）气体检定柱箱温号
气相色谱仪JJG700-2016
发布时间

GCMS 定量标准曲线操作

GCMS 定量标准曲线操作
1.首先打开后处理Postrun, ,进入后在Quantitative里打开标
准样品的图谱;如下所示:
2.然后对目标物色谱图进行扣除背景[-],再在EDIT下输入目标物名称,M/Z,保留时间和浓
度.如下图所示:
3.然后点Quantitative Parameters ,确定标准物浓度点,如单点则过原点,确认后再点确定
4.
5.然后点VIEW,再点FILE---方法另存为
点击保存后出现如下所示: 点OK则可.这时会出现
6.确定后点击TOP后点击是转到CALBRATION CURVE,把刚才保存方法打开(可手拉或双击)如下所示:
这时可点击DATA,把数据拉到DA TA FILES 的LEVEL 1下则OK
如下所示:
这时再在Process下点Peak integrate by ID则可,如下所示
点完后则出现下图所示,标准曲线大功告成!记住这时需保存在方法文件里.点保存则可.
见上图右下角的RESULTS,只要在用标准曲线较准后再点RESULTS则可见结果!。

染料法荧光定量标准曲线

标准曲线的重要性对于染料法定量PCR而言，标准曲线是一个非常重要，甚至可以说必不可少的一个要素。

通过标准曲线我们可以直观的判断以下重要信息：1.qPCR反应体系是否有效，是否能够分辨初始模板浓度的不同如果标准曲线没有线性关系，则说明反应体系没有准确的模板浓度识别能力，检测无效2.qPCR反应体系对模板浓度的有效识别范围理论上来讲，只有待测模板Ct值位于标曲线性范围内，检测才有效3.qPCR反应的扩增效率有多高，能否使用2-△△Ct进行相对定量分析如果扩增效率大于0.9，可粗略使用2-△△Ct进行分析；如果扩增效率太低，需要对计算公式进行矫正之后才能计算。

总而言之，标准曲线是判定定量体系、定量结果有效性的必须指标！影响标准曲线的因素有很多：试剂、仪器、反应程序、引物序列、反应体系引物浓度等等。

每当这些因素更改之后都应重新绘制标准曲线。

标准曲线的制作方法1.选择并制备标准品标准曲线是使用“标准品”进行qPCR获得的。

正确的标准品选择对标准曲线制作至关重要。

根据制作标准曲线目的分类，标准品选择依据如下：如果需要做绝对定量：绝对定量标准品必须具有已知的拷贝数浓度，可用作标准品的样品包括A.扩增产物B.将扩增产物克隆到载体后得到的质粒选择其中一种（推荐后者，扩增产物极易产生污染，慎用），将产物纯化后测定绝对浓度，然后根据分子量计算摩尔浓度或拷贝数单位。

如果仅需使用标曲来判断反应有效性：有效性判断无需标准品的拷贝数浓度，可用作标准品的样品包括A.扩增产物B.将扩增产物克隆到载体后得到的质粒C.基因组、cDNA等2.标准品梯度稀释使用灭菌蒸馏水或者专用稀释液将制备好的标准品做数个10倍梯度稀释，取其中4-6个梯度样品进行上机检测。

需要注意以下三点：A.因标准品类型不同，最佳稀释倍数大不相同。

如使用cDNA作为标准品，推荐稀释梯度为1:10，1:100，1:1000，加上原有不稀释样品，使用共计4个浓度梯度进行上机检测；如使用扩增产物或质粒作为标准品，稀释倍数可能需要达到1:10000-1:100000，甚至更高。

溶液配制,标准曲线的制作,检测限等

溶液配制,标准曲线的制作,检测限等一、定性方法：保留时间或相对保留值步骤：溶液配制：：1.准确称取雌酮，雌二醇，雌三醇，黄体酮各2.5mg ，分别置于4个50ml 容量瓶中，用少量甲醇溶解，定容，得到浓度均为0.05mg/ml 的四种标准性激素液2.将上述四种性激素的标准溶液和待测物样品溶液，按照标准品，样品，标准品，样品的进样步骤以此进样，得到四种性激素各自的色谱图和待测物的色谱图进行比对。

二、定量方法：标准曲线的制作用标准品配制4种性激素的一系列不同浓度溶液，在设定的实验条件下，分别在高效液相色谱仪下测得其保留值和峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，做峰面积-浓度曲线，得出4种性激素的标准工作曲线，求出回归方程(斜率为灵敏度)，作为样品定量测量的依据。

步骤：1.用移液枪分别移取以上各溶液适量于25ml 容量瓶中，甲醇定容，制成不同浓度的标准混合溶液2..分别用上述配好的标准系列溶液在设置好的色谱条件下测定，得出各自对应的峰面积，峰面积-浓度曲线，并求出回归方程三、检出限（文献记录的四种性激素在该条件下的检出限约为0.2---2.3ng/g ）以恰好产生三倍噪声信号时的浓度为检测限（课本：2倍信噪比，文献：3倍信噪比）步骤：1、观察上述标准混合溶液的响应信号，若最低浓度的混合液各激素响应信号均大于三倍信噪比，则将上述1号标准混合液按梯度稀释，分别稀释. 5/ 10/20/100 倍等（依据实际情况确定），再次检测，直到稀释浓度恰好等于三倍信噪比对应的浓度，此为检测限。

四、线性范围最大进样浓度和检测限浓度的比值精密度标准偏差和标准误（测定某一固定浓度的性激素标准混合溶液）将3号标准混合液平行测定6次，计算相对标准偏差和平均值的标准偏差%100?=xSRSD准确度样品加标回收率（高中低三个梯度）取4份体积为10ml 的试样，其中一份为不加标准物质，另外三分分别加入高中低（取上述用于制作标准曲线的1、 3、 5号溶液）三个浓度的高浓度小体积标准混合液，按照以下公式测定加标回收率加标回收率（%）=(加标样品测定值－样品测定值)/加标量×100% ns s x =。

标准曲线方法验证

标准曲线是分析化学中常用的一种方法，用于通过已知浓度的标准溶液来确定未知浓度样品的含量。

其基本原理是通过建立浓度与某种测量响应（如吸光度）之间的线性关系，来对未知样品进行定量分析。

在实验过程中，标准曲线的绘制和验证是至关重要的，以下是详细介绍：标准曲线的建立步骤：1. 选择合适的分析方法：根据样品的性质和分析目的，选择一个或多个合适的分析方法，如光谱分析、色谱分析等。

2. 准备标准溶液：准确配制一系列不同浓度的标准溶液，这些溶液应涵盖预计样品中待测物质的浓度范围。

3. 测定标准溶液：使用所选的分析方法测定各标准溶液的响应值（如吸光度、峰面积等）。

4. 绘制标准曲线：以标准溶液的浓度为横坐标，相应测量响应值为纵坐标，在坐标图上绘制数据点，并拟合得到一条直线，即标准曲线。

5. 验证标准曲线：对所绘制的标准曲线进行线性回归分析，计算相关系数（R），以确保浓度与测量响应值之间存在良好的线性关系。

标准曲线的验证指标：1. 准确度：通过回收率来反映。

通常要求在不同浓度水平下，回收率应在98.0%-102.0%之间，相对标准差（RSD）不大于2.0%。

2. 线性：通过线性回归方程来表示。

浓度在80%至120%范围内变化时，相关系数（R）应不小于0.998，且线性回归方程的截距应接近100%响应值。

3. 精密度：反映测量结果的重复性和稳定性，一般用相对标准差（RSD）表示，要求不大于2%。

4. 检测限：指能被可靠地检测出的最低浓度，越低越好。

5. 定量限：指能被准确测量的最低浓度，越低越好。

实际操作中的绘制和验证：在实验操作中，可以使用如Excel或WPS表格等软件来绘制和验证标准曲线。

具体步骤如下：1. 选中数据源：在软件中输入标准溶液的浓度和相应的测量响应值。

2. 插入图表：点击“插入”菜单，选择图表类型为XY散点图。

3. 添加趋势线：在图表中点击数据点，选择添加趋势线，并勾选“设置切距”为零，同时勾选“显示公式”和“显示R的平方”。

分光光度法标准曲线

分光光度法标准曲线
分光光度法标准曲线是指利用可逆的光吸收反应，反应物所有的光吸收律都是相同的，我们可以根据这条吸收律建立一条标准直线，可以用来测定未知物质浓度。

根据Beer-Lambert定律可以知道，沿流动系统中物质的浓度分布是由它的吸光度和光路长来决定的，对此，如果将未知物质的吸光度与已知浓度的样本的吸光度进行比较，就可以得出未知物质的浓度。

分光光度法标准曲线的构建主要分为以下几个步骤：
首先，选择一种可测试的物质，用它来制备标准溶液，以确定可测试物质的相应吸光度与浓度之间的比例关系；
其次，为了验证这一关系，利用所制备的标准溶液中物质吸光度来逐步调整未知物质的吸收值；
然后，在吸光仪上把未知物质与标准溶液进行检测，将检测结果与浓度之间的关系画出标准曲线；
最后，依据标准曲线可以直接测定之前未知物质的浓度。

通过标准曲线可以更准确的测定某一物质的浓度，通过这种方式，可以根据物质的体积比例，计算出未知物质的精确浓度。

它主要适用
于非共价结合，电离反应，pH的测定，以及含量的测定等，在各个领域，都有着广泛的应用。