增加洗板次数对HBsAg ELISA检测结果的影响
不同洗板方式对ELISA法检测HIV抗体结果的影响
可引起浊度增加［２］。免疫复合物或抗原抗体复合物是抗原与 其相臆抗体结合的产物。在正常情况下，机体防御系统作为清 除异物抗原的一种方式，清除体内免疫复合物对机体有利。但 在某些情况下体内形成的免疫复合物不能被及时清除，或沉积 于机体某一部位，如皮肤、血管壁及脏器沉积的免疫复合物称 为局部免疫复合物，游离于体液中的免疫复合物称为可溶性免 疫复合物，随血液循环的免疫复合物称为ＣＩＣ。ＩＣ的抗原成
３种洗板方法检测ＨＩＶ抗体结果
（以刚好不溢出为佳）；浸泡时间不能太长，否则易形成污染。 总之，方法３既能节省人工又能避免人为操作而形成的偏差， 值得同行人士借鉴。
参考文献
注：‘Ｓ／ＣＯ值，一表示无数据。
［１３罗俊，杨红．ＥＬＩＳＡ法检测时洗板机洗板对检测结果的影 响［Ｊ］．江西医学检验杂志，２００５，２３（２）：１８０． ［２３井新利，王喜英，齐华．酶标仪、洗板机在ＥＬＩＳＡ检测应 用中的探讨［Ｊ］．河南预防医学杂志，２０００，１１（６）：３１８．
分复杂，ＩＣ形成后可表现新的生物学功能。如能与血液中的
［１］王兰兰．临床免疫学和免疫检验［Ｍ］．北京：人民卫生出
版社，２００３：１７１－１７２．
［２］吴健民．免疫学检验一理论与临床［Ｍ］．北京：人民卫生出
版社，２００３：２９７—２９９．
［３３叶应妩王毓三．全国临床检验操作规程［Ｍ］．南京：东南
大学出版社，１９９７：３７１—３７２．
１．２仪器
３种洗板方法检测ＨＩＶ抗体的结果见表１，方法１与标定 值结果差异有统计学意义（￡一２．２４，Ｐ＜０．０５）；方法２与标定 值结果差异无统计学意义（￡＝１．２５，Ｐ＞０．０５），方法３与标定
ＲＴ－２６００Ｃ型全自动洗板机（深圳雷杜公司提
ELISA快速法检测HBsAg时手工洗板和洗板机洗板的结果比较
ELISA快速法检测HBsAg时手工洗板和洗板机洗板的结果比较作者：王静来源：《中国医药导报》2010年第09期[摘要] 目的:探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板技术,比较手工洗板和洗板机洗板对检测结果的影响。
方法:对50例临床确诊为HBsAg阴性的标本,按试剂说明要求进行检测,分别用手工洗板、洗板机洗板洗1～5次后由酶标仪判读结果,对阴性数、阳性数、假阳性率进行分析。
结果:手工洗板严格按照试剂说明书的要求操作,未出现假阳性结果;洗板机洗板1次,假阳性率高达90%;洗板2次,假阳性率为38%;洗板3次,假阳性率为2%;洗板4～5次,未出现假阳性。
结论:在ELISA方法检验当中,手工洗板和洗板机洗板没有本质上的差别,只要操作合乎要求,均能得到正确、可靠的结果。
[关键词] 酶联免疫吸附试验;手工洗板;洗板机洗板[中图分类号] R446.61 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)03(c)-069-02乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点,目前在国内实验室被广泛使用[1]。
但在操作中影响结果的因素也很多, 涉及标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,尤其洗板是一项极重要的环节, 洗板次数不够或洗涤不干净会造成假阳性的出现。
在实验室中,ELISA 测定的洗板方式一般有2种,即手工洗板和洗板机洗板。
本文就手工洗板和洗板机洗板对检测结果的影响进行了分析,现报道如下:1 材料与方法1.1 材料酶标试剂:上海实业科华生物技术有限公司生产。
阴性血清标本:50份经放射免疫法确诊为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性的非脂血,无溶血的健康成年人外周血标本分离后的血清为检测对象,由辽宁省中医药大学附属医院临床检验中心提供。
1.2 方法按试剂说明要求进行检测,分别用手工洗板,洗板机1～5次洗板后由酶标仪判读结果,对阴性数、阳性数、假阳性率进行分析。
基础医学研究中不同加样、洗板方式对ELISA结果的影响
基础医学研究中不同加样、洗板方式对ELISA结果的影响郑泽美【摘要】目的:比较自动加样机联合自动洗板机与手工加样、洗板方式对酶联免疫吸附试验(enzyme linked immuno-sorbent assay,ELISA)结果的影响.方法:采用鸡二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)双抗体夹心法试剂盒(供氢体底物为四甲基联苯胺),对倍稀释标准品成5个梯度浓度,采用自动加样机联合自动洗板机和手工加样、洗板,然后经显色后立刻用酶标仪(波长450 nm)检测系列浓度标准品的吸光度(optical density,OD)值,用SPSS软件对浓度和OD值进行相关分析和回归分析.结果:自动加样机联合自动洗板机得出的标准浓度曲线方程的相关系数r、拟合优度R2及回归系数b值明显高于纯手工加样、洗涤方式,差异有显著性(P＜0.05).结论:在基础医学研究过程应用ELISA需注意不同加样方式和洗涤方式会对ELISA结果造成影响,尽量选用自动化程度较高的方法,以减少误差.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)007【总页数】3页(P107-109)【关键词】酶联免疫吸附试验;基础医学研究;加样机;洗板机【作者】郑泽美【作者单位】430060武汉,武汉市第三医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R318;R392-33酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是目前最常用的检测抗原和抗体的方法之一。
因其操作简单、灵敏度高、特异性好，在临床检验工作中有着非常重要的地位。
但该法影响因素较多，如试剂盒的质量、标本质量、孵育时间等因素均直接影响着试剂盒的检测水平[1-3]。
随着我国科研项目的增多，ELISA在基础医学研究中的应用也越来越多并发挥着重要作用。
但是ELISA 科研实验和临床检验科检验有很大不同，标本来源多样化、参考值范围不确定等影响因素更多。
不同洗板方法对ELISA检测结果的影响
例标本进行第１次检测。采用２种洗板方法对第１次检出的弱阳性标本进行第２次检测。 结 果 ２ 种 方 法 第 １ 次 检 测 的 阳 性 标
本检出例数比较差异有统计学意义（χ２＝４．９６，Ｐ＜０．０５）。第１次检测共检出３９例弱阳性标本。２种方 法 对 ３９ 例 弱 阳 性 标 本 进 行第２次检测，阳性标本检出例数比较差异无统计学意 义 （χ２＝０．０６，Ｐ＞０．０５）。 结 论 需 进 行 大 批 量 标 本 检 测 时，采 用 改 进 洗 板 法 优 于 洗 板 机 法 ，更 有 利 于 避 免 假 阳 性 结 果 。
△ 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：３ｙｕｅ１２＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
接 受 招 工 及 单 位 体 检 的 人 员 ９３４ 例 。 １．２ 仪器与试剂 ＤＮＸ－９６２０Ａ 型 洗 板 机 购 自 北 京 普 朗 新 技 术有限公司，ＭＫ３型酶 标 仪 购 自 芬 兰 雷 勃 公 司。 乙 型 肝 炎 病 毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ＥＬＩＳＡ 诊断试剂 盒 购 自 英 科 新 创 （厦 门） 科技有限公司，（批号２０１３０７２１，有效期 ２０１４０１２０），包 括 阴、阳 性对照品 及 浓 缩 洗 涤 液。ＨＢｓＡｇ 质 控 品 购 自 湖 北 省 临 检 中 心 ，浓 度 为 １ｎｇ／Ｌ。 １．３ 方 法
２
χ
检 验。
Ｐ＜０．０５ 为 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义 。
２ 结 果
２．１ 第１次检测结果比较 洗 板 机 法 和 改 进 洗 板 法 检 测 ９３４
例标本，分别检出 ＨＢｓＡｇ阳性标本８７和 ６１ 例。χ２ 检 验 结 果 显示，阳性标 本 检 出 例 数 组 间 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义 （χ２ ＝ ４．９６，Ｐ＜０．０５）。不同方法 ＨＢｓＡｇ第１次检测结果见表１。
ELISA法检测HBsAg影响结果因素的分析
乙型肝 炎是我 国发病 率较高的传染病之一 ，常通过消化道 和血液传播 ，当人 感染 乙型 肝炎病毒 （Ｂ ） Ｈ Ｖ 后在身体 内很难清
大学 学报 ，２ ０ ，２ ４ ：２ ６ ２ ０ ０ ６ ４（） ５ — ６ ．
பைடு நூலகம்
具塞磨 口锥形瓶 中，加入 Ｎ ０ ａ Ｈ溶液 ，在室温下浸泡 ，超 声提
取 后 ，用 １％ 酸 调 节 Ｐ ０盐 Ｈ至 有 大 量 土 黄 色 沉 淀 生 成 ，调 节 Ｐ Ｈ
值为 ３ 左右 。离心 ，倾去上清液 ，沉淀用 甲醇溶解 １ ｉ ，抽 ５ ｎ ｍ 滤，滤液转入 １０ Ｌ的容量瓶 中定容至刻度 ，经 ０ ４ ０ｍ ． ５ａ ｌｍ微孔 滤膜过 滤即得供试 品溶液 。 ２ ３３ 正交 实验 结果与分析 ．． 采用 Ｈ Ｌ 法测定蛇床子 素的含 ＰＣ 量 ，其结果见表 ３ 。由表 ３直观分析 Ｒ值可知 ，影 响提 取的因 素顺序 为 Ｃ ＞Ａ ，超声时间是提取的关键因素， ＞Ｂ ＞Ｄ 浸泡 时间
重庆维普
度 （） Ｄ 四个因素 。采用 正交表进行正交试验设计 （ 见表 ２ ，优 ）
选蛇 床 子 素 提 取 工 艺 。
表 ２ 因素 水平表
和 碱 用 量 次 之 ， 浓 度 影 响 最 小 。所 以最 佳 提 取 工 艺 是 碱 ＡＢＣＤ ３ ２ １２即加 ３ ０倍 量 ２％ ａ Ｈ溶液，浸泡时间 １ ５ｈ Ｎ０ ． ，超声
表 ３ Ｌ （４ 正 交 实验方 案与 结果 （＝ ） ９ ３） ｎ３
３ 讨论
本实验 比较 了水煎煮提取 、乙醇超 声提 取、碱浸渍法 、碱
溶酸沉超声提取不 同的提取方法 ，结果表明碱溶 酸沉超声提取
法提取率最高，无需加热 ，不 使用有机溶剂 ，成本低 ，安全性
两种不同模式洗板机对ELISA法检测HBsAg结果比较
两种不同模式洗板机对ELISA法检测HBsAg结果比较摘要】目的比较两种不同模式洗板机（水平式和立式）对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板技术对检测结果的影响。
方法对61例临床确诊为HBsAg阴性和31例临床确诊为HBsAg阳性的标本，经随机排列，用同一批号HBsAg试剂进行检测，分别用手工洗板、anthos fluido水平式洗板机、基波全自动快速立式洗板机洗板，后由酶标仪判读结果（OD值≥0.105为阳性），对阴性数、阳性数进行分析。
结果 anthos fluido洗板机洗板5次，假阳性达12例,与标本原始结果相比较（χ2=6.93，p<0.01）有差异；基波全自动快速立式洗板机洗板1次，假阳性1例,与标本原始结果相比较（χ2=0.51，p>0.05）无差异；手工洗板5次，假阳性4例，与标本原始结果相比较（χ2=2.12，p>0.05）无差异。
两种模式洗板机洗板方式对ELISA法检测HBsAg结果（χ2=7.69，p<0.01）有差异。
结论在ELISA方法检验当中，立式洗板机比水平式洗板机在洗板时增加了蒸馏水冲洗和脱水的过程，减少了污染和残留，结果更加可靠。
【关键词】水平式洗板机立式洗板机 ELISA HBsAg【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）10-0052-02酶联免疫吸附试验(ELISA)来做乙型肝炎表面抗原(HbsAg)定性实验是目前实验室最经济、最普遍的试验诊断方法[1]。
ELISA操作简单，灵敏度和特异性高，但在操作中影响结果的因素也很多。
涉及标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面[2]，尤其洗板是一项极重要的环节，决定着本次实验能否成功，洗板次数不够或洗涤不干净会造成假阳性的出现[3]，洗板次数过多容易将结合的抗原或抗体洗掉造成假阴性的出现，因此洗板的充分性和洗板后的残留是关键，将直接影响显色[4]。
浅谈洗板对ELISA试验的影响
浅谈洗板对ELISA试验的影响作者：萨冬芝，杨桂芬等来源：《兽医导刊》 2019年第3期2 018 年11 月14 日，我中心实验室进行犬细粒棘球绦虫粪抗原检测试验。
试验由2 名实验员操作，另有3 名见习实验员辅助。
犬细粒棘球绦虫抗原检测试剂盒（批号：Eg-Ag20180620）由上级单位统一配发。
274 份犬粪样品事先经﹣70℃冷冻一周处理，试验当日室温解冻后每份取1 g 样品，加1 ml 样品处理液，4 000 rpm离心15 min 待用。
试验用仪器：酶标仪正常，培养箱正常，96 孔自动洗板机开机冲洗管路正常。
实验员甲操作A、B 两块包被板184 份样品的试验，实验员乙操作C块包被板90 份样品的试验。
试验过程严格按着试剂盒说明书逐步进行，洗板过程中习惯性的同一方向放入包被板，合上盖子洗板，未察觉异常。
试验结束，结果均成立。
但三块包被板之间出现非常相似的阳性结果，即A、B、C 各板的D—12、E—12、G—12 三孔均显阳性（另有A 板B—12 孔为阳性），且C 板G—12 孔无样品仍显阳性。
这样的结果引起我们的注意，回忆操作过程未出现遗漏、失误，检查洗板机发现D—12、E—12、G—12 对应的针孔堵塞，不出液体。
这样能解释为什么不同的人操作不同的反应板出现高度相似的结果，且无样品孔也出现阳性。
查出问题后，疏通洗板机针孔，随即对全部样品按原样进行复检，结果为A 板B—12 孔为阳性，有异议的各板D—12、E—12、G—12 三孔均显阴性（其中C 板G—12 孔无样品）。
该试验由抗细粒棘球绦虫特异性抗体包被的微孔板和酶标记抗棘球绦虫特异性抗体，以双抗体夹心法检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原。
试验中，加入待检样品，经过温育后，若样品中含有细粒棘球绦虫抗原，则与包被板上的抗体结合，经洗涤后除去未结合的抗原，再加入酶标记物，与包被板上的抗体- 抗原复合物结合形成抗体- 抗原- 酶标记物复合物，经洗涤除去未结合的酶标记物，在微孔中加入显色液，经酶催化形成的蓝色信号与样品中的抗原含量成正比。
影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法
影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。
我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。
操作步骤可能原因解决办法选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
加样1.血清或血浆标本分离不好即进行加样；2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
1.标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2.加样后及时放入孵箱。
3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5.标本较多时，请分批操作。
孵育1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
1.贴封片或加盖；2.按说明步骤严格控制操作时间。
洗板1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。
3.反应板过多造成洗板等待时间长。
1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；2.合理安排，或多用几台洗板机。
显色1. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2. 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
ELISA法检测HBsAg影响结果的重要因素的分析
生国塞堕堡堑堂！塑堡！旦筮！！鲞复２翅文章编号：１００７—４２８７（２００７）０２—０２１３—０３—２１３一ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ影响结果的重要因素的分析岳希全，石宏，李迎（北华大学附属医院感染科，吉林吉林市１３２０１１）摘要：目的确定温育温度、时间和条件对定性酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）涣｛定结果的影响，为临床检验提供最佳方案。
方法温育温度分别设为３７℃组和室温组。
”℃组温育时间分别为４５分钟、６０分钟、７５分钟、９０分钟和１２０分钟。
其中室温组温育中又分别采用振荡和静置两种条件，温育时间分别为４５分钟、１小时、２小时和４小时。
检测阴性血清和Ｏ．２、０．５、１、２，５ｎｇ／ｍｌｎＳｓＡｇ系列定值血清，观察这些条件下标本测定Ｓ／ＣＯ比值的差异。
结果在同一温育温度下，所有被检血清的Ｓ／ＣＯ比值均随着测定温育时间的延长而增大，浓度越低表现越为明显，以０．２ｎｇ／ｎ１１的样本，温育２小时的Ｓ／ＣＯ比值与温育１小时相比，均有明显的增加，０．２ｎｇ／ｍｌ的样本由按ＣＵＴ－ＯＦＦ值判断为阴性而转为阳性。
对照组阴性血清的Ｓ／ＣＯ比值在温育各时间则变化不大。
室温组在振动状态下反应较之静止状态下的反应，Ｓ／ＣＯ比值均有明显增加。
结论温育条件对ＥＬＩＳＡ测定结果有很大影响，尤其是弱阳性标本，由于温育条件不当会造成假阴性，增加传染机率。
关键词：酶联免疫吸附试验；温育；乙型肝炎表面抗原；定性测定中图分类号：Ｒ５１２．６＋２文献标识码：ＡＥｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅＥＬＩＳＡＹＡＯＸｉ－ｑｕａｎ，ＳＨＩＨｏｎｇ，Ｉ＿１Ｙｉｎｇ．（Ｔｈｅ够ｆｉ做矗ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＢｅｉｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，朋讥Ｃ／ｔｙ１３２０１１，Ｃｈ／ｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｉｍｅａｎｄｍｏｄｅｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｌＢｓＡｇｂｙｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅＥＬＩＳＡ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｎｅｇａｔｉｖｅｓｅｒｌｌ／ｎｓａｍｐｌｅａｎｄａｓｅｒｉｅｓｏｆｓｅｒａｓａｍｐｌｅｓ柄ｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔＨＢｓＡｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（Ｏ．２，０．５，１．０，２．０，５．０ｎｇ／ｍ１）ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｃｏｍｍｅｒｃｉａｌＨＢｓＡｇＥＬＩＳＡｋｉｔｓｕｎｄｅｒｃｏｎｄｉｔｉｏｍｓｅｔ８８ｆｏｌｌｏｗｓ：ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅｗａｓｓｅｔｆｏｒ４５，６０，７５，９０ａｎｄ１２０ｍｉｎｕｔｅｓｗｈｅｎｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｗｅｌｔ＇ｌ！ａｔ３７。
ELISA法检测HBsAg影响因素的分析
!讨论"#$%&’()*%试剂盒中+包被抗体的浓度,纯度,效价,亚型的选择等对试剂的灵敏度,特异性及稳定性有很大的影响-随着单克隆抗体和基因工程抗体的应用+包被自动化程度的提高+包被抗体的浓度,纯度,效价的差异和包被抗体的加样差异造成的影响得到了一定程度的消除+而’()*%微孔板各板孔间的差异仍然难以解决-’()*%微孔板是用苯乙烯聚合物聚苯乙烯塑料制成+苯乙烯对蛋白质有吸附作用+在苯乙烯聚合成聚苯乙烯后+由于微孔板各微孔的间隙和密度不同+因此对蛋白质的吸附能力也不同-不同吸附能力的微孔在包被浓度和量相同的抗体时+会使板孔间吸附的抗体浓度不同+导致检测结果出现偏差-目前国产板条的制造工艺与进口板条有一定的距离+使得国产’()*%试剂与进口试剂质量上有较大的差别+有报道国产试剂的./值接近012345-进口试剂板条各微孔的间隙和密度均一性较好+./值可达到62-表4和表7./值都很大+说明同一块板孔间差异很大-表4%0孔和表7#8孔9:值和*;.9值超过<=>!*:+推测可能这两个孔吸附能力较强+吸附了非特异性蛋白所致-如这两孔加入质控品则会失控+加入阴性样本会出现假阳性结果-表!%4,%0,%!,%7,%6,%?,%@,%41,#0,#6孔结果虽然在A B C4*:范围内+没有失控+但*;.9D4E1+结果判断为阴性F推测可能上述孔对蛋白质的吸附能力较弱所致-如在上述孔加入临界质控品或临界待测样本会出现假阴性结果-表!%厂所有的临界值结果*;.9G4E1+为阳性结果+说明%厂的这块微孔板灵敏度比#厂高-表4%厂./值为!1E!2+表0#厂为40E42F表!%厂./值为40E?2+表7#厂为!!E!2+说明厂间,板间的差异都较大-表6%厂./值为6E82+表?#厂./值为7E!2+表明"#$%&含量达41111H&;I J时+两厂试剂都没有出现后带现象-由上述各表结果可知+’()*%微孔板孔间+板间及厂间均存在较大的差异+这些差异是导致质控失控+结果偏差的最难避免的因素+无法用室内质控来控制-因此+我们在日常工作中遇到不常见模式或与临床不符的结果时+应考虑板条的影响+用原血清重新检测-尽管每一新批号的国产试剂在投入市场前必须经过批批检+但由于批检是随机抽检+抽检量相对整批试剂量非常少+并不能保证所有试剂全部合格F上述试验仅是我们的抽检结果+也不能说明该批号所有试剂都如此+但这种情况确实存在-我们在每一新批号试剂进入我们的试验室时+应做灵敏度,特异性,符合率及均一性试验+了解该批试剂的质量+遇到与临床不符的结果可帮助我们分析检测结果偏差的原因+并及时解决-同时厂家应加大力度提高微孔板质量305+缩小国产板条与进口板条质量上的差距-参考文献4郑怀竞+王露楠+王文丽+等E全国临床免疫室"#$%&检验室内质量控制的评价3K5E中华肝脏病杂志+4@@?+7L!M N4?@ 0施根林+何海明+林国英+等E"#$%&’()*%定性检测影响因素观察3K5E现代医药卫生+0114+4O L0M N46!P467’()*%法检测"#$%&影响因素的分析江苏省姜堰市梁徐卫生院L00660?M柳林风"#$%&是实验室常见的检测项目+是诊断乙型肝炎的重要指标之一+’()*%法检测"#$%&具有灵敏度高,特异性强等优点而被广泛应用-但在具体实践工作中+有时会遇到"#$%&检测结果前后不一致或与其他单位的检测结果不一致的情况+除了使用不同的试剂盒以外+其原因是多方面的-本文就我们实际操作中的影响因素加以分析-4器材的影响一次性塑料试管以其价格便宜,不易破损,免洗,无交叉污染等优点被大部分实验室接受+但塑料试管长时间存放标本会对最后的检测结果产生影响+可能由于一次性塑料试管由聚乙烯制造+易吸附抗原物质+导致结果负向偏移+尤其对抗原滴度较低的样品长时间存放可能出现假阴性结果+建议使用玻璃试管-0标本来源方面通常我们采用静脉血分离血清后检测+对难以采血的婴儿及大批量的健康检查时+微量末梢血检测"#$%&不失为一种良好便捷的方法-但末梢血中易混有组织液+稀释了血清+增加了粘度+吸附力较强+洗板不彻底会出现假阴性结果+故需注意末梢采血时进针宜深+便于血液流出+避免用力挤压+使大量组织液混入标本内+建议尽量采用静脉血-!内源性物质的干扰方面!E4标本溶血时红细胞内"Q物质游离入血清+"Q具有类过氧化物酶活性+其作用效应与辣根过氧化物酶类似+8O6R S T U V W V X YV Z[\]^_^S\+‘_T E a b b c+d V W E a e+fV E g如果反应孔因非特异性吸附!"而残留#则会催化底物显色造成假阳性$若反应板包被质量好#操作规范#洗板充分#则可大大减少或排除非特异性吸附力的干扰$%&’脂浊血清对检验结果的干扰可能主要是乳糜粒增多引起$脂浊造成血清黏度大#但分子运动速度减慢#减少了抗原抗体的结合机率#并且乳糜微粒对抗原抗体有屏蔽效应#对测定结果产生了负干扰$%&%()*+,)补体自身抗体阳性的样品#由于这些物质能够与固相抗体#酶标抗体的)-段结合#所以易产生假阳性结果$.结果的观察肉眼观察阳性结果呈蓝色#但弱阳性结果不易判断$如果只好采用肉眼判断#检验员差异或检验员在不同条件下观察实验结果都可以出现偏差$所以应使用多功能酶标仪检测#以保证结果判断的准确性$综上所述#影响!/0(1的因素很多#这就要求我们要增强责任感#对实验条件+操作规程+试剂与仪器+实验人员的操作水平等进行严格的质量控制#充分认识和避免以上因素的影响#很好地保证检验报告的准确性$参考文献2曹文飞&酶联免疫测定的干扰因素与对策345&中国实验临床免疫学杂志#2667#289%:;<8’尤风光&=>?@(一步法检测!/0(1假阳性若干问题探讨345&中国卫生检验杂志#’882#229<:;A %2BA %’我院临床标本送检及药敏结果分析广西罗城仫佬族自治县人民医院9C .<.88:饶秋凤蒋春清为了解我院标本送检+病原菌分布及抗菌药物的耐药性#我们对近三年来临床标本培养及药敏结果进行回顾性调查分析#现报告如下$2资料与方法所有资料来自检验科#对’882年2月至’88%年C 月临床科室A ’.份送检标本及药敏结果资料进行分类调查$’结果’&2概况此期住院总人数72.’人#标本送检总数A ’.份#送检率7&76DE 检出菌.’%株#阳性率C 7&.%D#不同科室标本送检情况见表2$’&’病原菌的构成’882年+’88’年+’88%年革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌分别为’6&%7D+’A &2’D+%<&C .D 和<%&.2D+<.&.8D+C 2&6%DE 革兰阳性球菌以金黄色葡萄球菌为主#革兰阴性杆菌以大肠埃希菌为主#具体分布见表’$表2不同科室标本送检情况科室病人数送检例数送检率9D:儿科2’<’A A<&28内一C <%A 72%&7C 内二’88C %.82<&6<内三%<C A 226&.C 外一2%<A 6%<&78外二2C 8C .7%&26妇产28A C2A2&C 7表’三年病原菌分布情况炳原菌’882年’88’年’88%年合计株数D 株数D 株数D 株数D金黄色葡萄球菌%22C &67’72C &7’2’’%&8A A 22<&A 7其它葡萄球菌2%<&A 82.A &62C 6&<’%’A &C A 链球菌6.&<.<%&%6’%&7C 2A .&8’肠球菌.’&8<F F F F .8&6C 肺炎克雷伯菌22C &<A 28&C <’%&7C 2.%&%2大肠埃希菌%22C &67’’2’&.%A 2%&.<<82.#27铜绿假单胞菌2%<&A 8C ’&7’’%&7C ’8.&A %其它假单胞菌2.A &’’2728&2A F F %’A &C A 福氏志贺菌C ’&C 7%’27&87.A &<6.26&<6不动杆菌A %&<22’<&A 7%C &A A ’’C &’8变形杆菌6.&<.C ’&7’22&6’2C %&C C 其它G H杆菌%%2A &822628&A .72C &%6<82.&27G H杆菌28&C ’.’&’<22&6’<2&.’G H球菌A %&<86C &8622&6’2A .&8’真菌<%&86’2&2%.A &<62’’&7%合计26.2882A A 288C ’288.’%2886A C 医学文选’88.年28月第’%卷第C 期。
ELISA检测HBsAg影响因素探析
中图分类号
EL ISA 方法具有简便 、 灵 敏度高、 特异 性强 等特点 而被 广 泛应用 , 成 为 目前 检测 H BsA g 的常 用方 法。但 EL ISA 进 行 HBsAg 检测时易受试剂、 标本、 操作等 诸多因 素影响 出现假 阳 性或假阴性结果 , 因此 应从 以下 几方面 加强 监测 , 减少 错误 结 果的产生。 1 仪器设备 目前 ELI SA 法检测 HBsAg 以半自动 检测为主 , 通常会 用 到酶标仪、 洗板机、 水浴箱、 冰箱、 移液器等 仪器设备 , 在日常 工 作中应保证各种仪器正常运行 , 定期检修。 2 试剂因素 选择正规厂家生产的具有批批检合格 报告的试剂 , 且在 试 剂有效期内使用。试剂盒在使用前应从 4 ! 环境取出 , 在室 温 条件下平衡 30 min, 恢复 至室温 方可拆 封进 行检测 , 避 免温 度 过低在微孔板底形成冷凝水影响检验结 果。研究表明 , 平衡 时 间在 30 min 时间以内 , 灰 区及 阳性 标本 的吸 光度 会随 着平 衡 时间的延长而增高 [ 1] 。剩 余的 微孔板 条及 时放 入带干 燥剂 的 密封袋内 , 冷藏于冰箱内备用。 3 标本因素 HBsAg 检测最常用的标本为 血清 , 也可用 血浆检 测 ; 血 清 标本应在 37 ! 水浴 30 min 充分凝 集 , 离 心时使红细 胞和纤 维 蛋白充分沉淀以分离彻底。吸样时避免吸 到纤维蛋白 , 以防 洗 板时堵塞洗板机吸头 导致洗 涤不 充分。标 本分 离时应 避免 溶 血 , 因为血红蛋白具有 类似 于过 氧化物 酶活 性 , 导致非 特异 性 显色而出现假阳性结果 , 某些细菌污染也 会出现类似 结果 [ 2, 3] 。 对于当天不能检测的样本应放置在冰箱冷 藏 , 与 试剂盒一样 恢 复至室温再行检测。 4 4. 1 操作因素 加样
浅析影响ELISA实验结果因素
保 证 反应 温 度
５ 试 剂
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ是实 验 室检 测 抗 体最 常 用
的检测方 法 ，具有 灵敏性 高 、特 异性 强 等特点 ，不 需要 特殊仪 器设 备就 可
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 成 品 试 剂 盒 为 检 测 工 作 提
供 了方便 ，按 照说 明书进行 操作 就 可 以完 成实验 ，但 人为操 作 时候很 多 细 节也会导致实 验误差 。
３ ． １ 包被
冬 季由于室外温度较低 ．冻土层较厚 ，采 用焚烧法对动
物尸体进行无害化处理 。每次处理要进行严格 消毒 。
可 以是 血清 、全血 、唾 液 、尿 液 等 ， 但 大部 分还 是 以血清为 样 品。作 为血
检 测 的 品很多 ，根据 检测 项 目不 同
人 工洗 板 时 ，弃 去洗 涤 液时 方法
一 辽宁省 葫芦岛 市动 物疫病 预防控 制中 心
清 样 品 ，应 避 免 溶 血 ，溶 血 可 能 会 增
春 、夏 、秋 季采 用深埋 法 。根据 Ｇ Ｂ １ ６ ５ ４ ８ — ２ ０ ０ ６《 病 害
动物和病害动物产 品生物 安全处理规程》要求 ，深埋法无 害
化动物尸体应满 足以下条 件 ：远离学校 、公共 场所 、居 民住
点 ，按照每 次处理动物尸体 的多少确 定掩埋坑的大小 ，并严 格按照要求进行规范操作 ，确保处理效果达到疫病防控要求 。
头等。
ELISA法检测HBsAg影响因素分析
边缘效应
１
【中图分类号ｌ
Ｒ４４ ６．６
ｌ文献标识码ｌ
【文章编号Ｊ
６７４－－０７４２（２００９）０９（ｂ）－－０１
７２－－０２
ＨＢｓＡｇ是实验室常见检测项目，是诊断乙型肝炎的重要指标 之一。ＥＬＩＳＡ发检．坝Ｉ］ＨＢｓＡｇ具有高灵敏度，特异性强而被广泛应 用，现就此方法在实际操作中的影响因素进行分析。
Ｍｅｄｉａｔ，２００７，８３（３）：１８８—１９７．
【４】Ｓａｐｅｙ Ｅ，Ｂａｙｌｅｙ Ｄ，Ａｂｒｏａｄ Ａ，Ｎｅｗｂｏｌｄ Ｐ’ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｒ～ｒｅｌａｔｉｏｎ—
ｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｔａｂｌｅ ＣＯＰＤ ｗｉｔｈ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ：ｉｎｔｒａ～ｐａｔｉｅｎｔ ａｎｄ ｉｎｔｅｒ～ｐａｔｉｅｎｔ
１ ７２
中外医疗ＣＨＩＮＡ ＦＯＲＥＩＧＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ
万方数据
综述
３８孑Ｌ）和中央孔Ａ值作成组配对ｔ检验，结果见表２。 ３讨论 内源性物质干扰因素，从表１中可以看出溶血和非溶血，乳糜
血与非乳糜血两组样本测定吸光度Ａ值无统计学意义，即两者对 明显。
ＣＨＮＡ
２ＱＱ２ 型鱼：２§ ＦＯＲＥＩＧＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ
ＣＨＩＮＡ ＦＯＲＥＩＧＮ ＭＥＤＩＣＡＬ
ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ中外医疗
１ ７３
万方数据
检验提供最佳参考方案。结果实验表明溶▲，脂血的标本用ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ吸光度值无统计学意叉，对检测结果无影响。而边缘效应
的中央孔和周围孔在３种不同时间，不同的温孵方式中，吸光度值王著差异，水溶相对较小，孵育较大，室温ｉ为明里，而且同一温育温度
洗板次数与浸泡时间对ELISA法HBsAg检测结果的影响
ａ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｇ ｏ ｌ ｄ ｎ ａ ｎ ｏ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｓ ａ ｓ ａ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｎ ｇ ｐ ｌ ａ ｔ ｆ ｏ ｒ ｍ［ Ｊ ］ ． Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｔ ， ２ ０ １ ３ ，
ｆ ｏ ｒ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ａ ｂ ｌ ｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｏ ｆ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｏｎ ｉ ｎ Ｉ
物 的应 用 准则 Ｅ Ｊ ］ ． 中华检验医学杂志 ， ２ ０ ０ ２ ， ２ ５ （ ３ ） ： １ ８ ５ — １ ８ ９ ． ［ ２ ３ Ｐ ｒ ｉ ｃ ｅ Ｃ Ｐ ． Ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ｏ ｆ ｃ ａ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ［ Ｊ ］ ． Ｂ ＭＪ ， ２ ０ ０ １ ， ３ ２ ２ （ ７ ２ ９ ７ ） ： １ ２ ８ ５ —
国际检验医学杂志２ ０ １ ５ 年１ １ 月第 ３ ６ 鲞箜 塑
』
！
！ ！
！ ！ ： 堑！ ：
［ ９ ３ Ｆ ｕ ｋ ｕ ｎ ａ ｇ ａ Ａ， Ｔｓ ｕ ｍｏ ｔ ｏ Ｋ． Ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ａ ｆ ｆ ｉ ｎ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ ｎ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ ｆ ｏ ｒ ｉ ｔ ｓ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｖ ｉ ａ ｌ ｏ ｎ ｇ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｃ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ
洗液成分不同对HBsAg ELISA检测结果的影响
． ． ． ． ． ＝ ０ ． 二 ． ． ： 一 二 ， ．二 ．二 ． 二 ． 二■‘二 ． 二 ． ． 二 ＿ ． ： 二． 二 二 ． 二． 二 二． ． 二 ． 。 二 ． ． ． ． ． ．： ．】 ．二 ．
生物，在人体抵抗力强时不会致病 。当人体的正气充足 （ 气、
血 、津 液 ）人 体 细 胞才 能合 成 ，生 成 各 种 细胞 及 抗 体 ，使 之 精
一
除于体外 ，不得复生 。如何延缓 Ｃ ４Ｔ细胞血红蛋 白、白细 Ｄ 胞、 血小板 的下 降就能延缓病情的发展， 提高患者的生活质量 。 参ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ文献
ｒ№ 远
的各 个 细 胞 中 ，维 持各 个 细 胞 功 能 正 常 ，各 种 抗 体 的产 生 是 需
程 体 的细菌和病毒等致病微生物，血小板的功能相当于中医的营 教
育 气 ，能将精微物质 固摄于脉管 内。从上面外周血 白细胞的检查 来看 ，患者 的 Ｃ ４Ｔ细胞与 白细胞有一定关系 ，可 能为 Ａ Ｄ Ｄ ＩＳ
［】杨凤 珍， 建华 ， １ 烟 王健 ， 艾 滋病 元气 损伤 病机 的研 究 啪 ． 等． 中国 中医基 础 医 学杂 志． ０ ， （）１７ １ ８ ２ ５２ ２ ： —４ ． ０ ７ ４ 【］彭 勃 ， 华 伟 ． 医 药 治 疗 艾 滋 病 的 实 践 与 思 考 ｆ ． 苏 中 医 药 ． ０ ， ２ 李 中 Ｊ江 ］ ２ ６ ０
神饱满 ，能抵御各种细菌和病毒 的侵袭 。人体细胞 的生长活动
为 临床 上 气 的不 足 没 有 一 个 可 观 察 的 指 标 ，而 血 的不 足 通 过 进 行 一
洗板因素对ELISA方法检测HIV抗体的影响
洗板因素对ELISA方法检测HIV抗体的影响目的探讨洗板次数在ELISA方法检测HIV抗体的影响。
方法由同一人使用同一洗板设备经5次洗板和6次洗板后，检测10次两种质控物的OD值。
结果增加洗板次数会造成检测样本的OD值下降，从而造成HIV检出阳性率下降。
结论运用ELISA方法检测HIV抗体时必须严格按说明书进行操作，不能随意增加洗板次数标签：ELISA；HIV抗体；洗板次数酶联免疫吸附法(ELISA)检测HIV抗体特异性强，灵敏度高，操作简单易行，是卫生部推荐的首选方法，HIV抗体检测是发现HIV感染的有效途径，而对疑似艾滋病HIV感染者的实验确诊是防治艾滋病的重要环节。
但检测结果的正确性易受多种因素的影响，如试剂本身质量、实际存放温度、实际的有效期、实验操作步骤、加样方式、反应温度、洗板次数和方式、显色时间长短、显色时避光与否、洗涤液浓度及洗涤中是否含有金属离子的对结果有较大影响［1,2］，其中洗板在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败，控制不严就会影响试验结果，本文通过比较由同一人使用同一洗板设备经不同洗板次数后的两种质控物的检测结果，发现增加洗板次数对HIV抗体ELISA检测结果的影响较大，报告如下。
1材料与方法1.1标本从郑州三叶公司购买的1 NCU/ml和2 NCU/ml质控物，批号均是1001。
1.2试剂和仪器人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体检测试剂为北京万泰生物药业股份有限公司，仪器奥地利产autu2010酶标仪、深圳产PW-960洗板机。
1.3方法按试剂说明和《全国临床检验操作规程》要求正规操作。
洗板机各项指标在说明书要求范围内，为避免人为误差，洗板过程由同一人使用同一台洗板机进行操作，把1NCU/ml和2NCU/ml质控物当成普通标本分成两组，按试剂说明书要求，第一组洗板5次，第二组设定为6次，浸泡30 s，两组同时操作，重复检测10次。
2结果两组1NCU/ml和2NCU/ml质控物检测10次后的样本OD值见表1。
ELISA操作：Elisa实验结果不理想,应出现的问题总结
ELISA操作：Elisa实验结果不理想，应出现的问题总结ELISA操作：Elisa实验结果不理想，应出现的问题总结优化ELISA的重点之一在于洗涤。
洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。
每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。
而不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。
在做ELISA实验时，洗板有两种方法：手工法洗板和洗板机洗板。
二者没有本质的差别，只要操作合乎要求，均能得到正确、可靠的结果。
手工洗板手工洗板人为因素比较大，实验人员必须经验丰富，洗涤次数要足够，冲击力又不要太大，加入的洗液量以说明书为准，防止孔口内有游离酶未能洗净，同时防止孔与孔之间液体交叉。
洗涤结束后扣干亦非常重要，否则易造成假阳性。
每次洗完板后，在吸水纸上轻轻拍干，拍板时要垂直，避免交叉感染。
用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离;吸水纸要一次性使用，应使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。
酶结合物不耐干燥，特别在较高的温度下更易失活，所以拍干的反应板应尽量缩短在空气中暴露的时间，时间越长，吸光度值越低。
手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种方法：浸泡式1. 吸干或甩干孔内反应液;2. 用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去);3. 浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1～2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短;4. 吸干孔内液体。
吸干应，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;5. 重复操作步骤3和4，洗涤3～4次(或按说明规定)。
在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。
洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。
聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。
ELISA实验操作中常见问题分析
由于ELISA(酶联免疫试验)具有灵敏度较高、特异性好的特点，已广泛应用于各种传染性疾病的筛查如肝炎、爱滋、优生优育等。
虽然洗板只是ELISA实验重要环节中的一个，但作为专业的洗板机生产厂家，我们必须对影响ELISA实验结果各因素有一定的认识。
优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。
如不注意，就易出现白板、花板、色弱和假阳性等现象。
尤其是花板现象（就是空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却明显偏高）是各个厂家洗板机调试中经常遇到的问题。
现将ELISA实验操作中注意事项总结如下，以期给大家带来一些启发，以改善洗板机的安装调试水平，提高临床检测质量。
1 标本及采集、贮运因素严重溶血，以HRP 为标记的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不彻底、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。
一般说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。
超过一周测定的需－20℃保存。
冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。
混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存；最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
表D!两组*=>质控物检测%-次的 ST 值 % * + 4 & 5 1 6 ? %第%组 -,55--,&?--,&?%-,&**-,&-5-,5-%-,5%&-,&55-,&?--,5+& 第*组 -,&*6-,&61-,&+5-,411-,44?-,&+?-,&&&-,&6%-,&6*-,&6注%两组比较2U&* !B ’-3-&
C! 材 料 与 方 法
C,C!标本 ! 从 本 省 临 检 中 心 购 买 的 -,&=> 和 *=> 质 控 物 %批 号 依 此 是 -&-+!-&-*’( C,D! 试 剂 和 仪 器 ! !RD#>VQO0# 试 剂 %厦 门 新 创!批 号 -4%%&%-6’":;DL2= ^a) 酶 标 仪 %芬 兰 Q#R0g0CV^’" CV.#U 洗板机%瑞士 CV.#U’( C,E! 方 法 ! 将 洗 板 机 各 项 指 标 按 说 明 书 控 制 在 要 求 范 围 内!洗板过程由同一人同一台洗板机操作(把-,& 和 *=>质
血小板长时间 的 保 存!尤 其 是 贮 存 于 W6-X 又 要 在 +6 #4*X水浴中 融 化!这 样 大 的 高 低 温 差 对 血 小 板 的 物 理 刺 激!加上冰冻过程中的冰晶机械作用$化学损伤$细胞 融 化 反 应造成的损伤!也是产生血小板析出物的客观条件( 所 以 血 小板加入冰冻剂后应立即贮存W6-X冰箱!以减少血 小 板 的 能量和脂质花生四烯酸代谢的消耗!在贮存过程中应确 保 温 度恒定在’W6-X!袋 与 袋 之 间 有 一 定 间 隙 以 充 分 速 冻"冰 冻血小板在融化过程中应边融边摇使之受热均匀!避免 温 度 过高或过低造成纤维蛋白的析出和血小板的损伤而产生析 出物 (要强调的 是 融 化 后 应 尽 快 输 注!以 减 少 T^0S 对 血 小板的毒性反应(
C! 材 料 与 方 法
C,C! 样 本 来 源 ! 本 站 *--4 年 % 月 % 日 #%* 月 +% 日 无 偿 献 血样本+*4&?份中抗$!.Z 检 测 结 果 落 在 灰 区 内 的 样 本 *4 份" C,D!试剂与 仪 器 ! ^F7;‘ 丙 型 肝 炎 病 毒 抗 体 诊 断 试 剂 盒 #美国雅培公司!酶 联 免 疫 法$"/0"*-- 型 全 自 动 样 品 处 理 系统#瑞士帝肯公 司$!贝 灵 ! 全 自 动 酶 联 免 疫 系 统 #美 国 德 灵 公 司 $" C,E!方法!严格按 试 剂 说 明 书 进 行!阈 值 定 为 阴 性 对 照 组 检测值加上-,5"灰区定为阈值下+-@的范围!落 在 灰 区 内 的样本用同一试剂重复检测+孔!只要有一孔阳性则 结 果 报
增加洗板次数对 !RD#>VQO0# 检测结果的影响
刘祖勇 %永州市中心血站!湖南VQO0# 检测!洗板次数!漏检 中 图 分 类 号 !!445! ! ! 文 献 标 识 码 !L! ! ! 文 章 编 号 !%--4$&4?B"*--5#-*$-%+&$-*
D! 结 果 #表 %!*$
表C!两组-,&=>质控物检测%-次后的 ST 值 % * + 4 & 5 1 6 ? %-
第%组 -,%&4-,%&&-,%*+-,%*4-,%%--,%5?-,%4%-,%*4-,%*%-,%+% 第*组 -,%+4-,%4? -,%---,%%&-,%*5-,%%&-,%*6-,%*4-,%-5-,%%4 注%.dC(KK’-A%-&为假阴性结果&2U&-!B ’-3-&
阳 性 !检 测 结 果 为 阳 性 按 报 废 处 理 "
D! 结 果
*4份样 本 中!经 复 检 有 & 份 阳 性!占 *-,6@&1 份 仍 落 在 灰 区 内 !占 *?,*@ &%* 份 为 阴 性 !占 &-,-@ "
E! 讨 论
酶联免疫吸附法特异性好!灵敏度高!操作简便!目 前 已 成为采 供 血 机 构 检 测 抗$!.Z 的 常 规 方 法" 然 而 抗$!.Z 样本的浓度介于试剂盒临界范围时!由于受到各种不确 定 因 素如试剂盒的敏感 度*操 作 人 员 技 术 熟 练 程 度 及 其 责 任 心* 实验室温度*加样器 等 影 响!很 可 能 造 成 假 阳 性 或 假 阴 性 的 结果"笔者对检测值落在灰区内的样本进行重复检 验!结 果 发现有*-,6@#&)*4$的 样 本 检 测 结 果 高 于 阈 值!明 显 高 于 不设置灰区未重复检测者"文献曾报 道 用 VQO0# 法 检 测 抗 $!.Z 灰带区血 样 经 重 复 检 测 有 %*,5@ #%%)61$的 假 阴 性 率’*("许 斌 等’+(对 落 在 灰 区 范 围 内 的 随 机 抽 样 样 本 进 行 的 "./ 检测中!!.Z/U# 的阳性率为%6@ #+)%1$!表 明 灰 区
! ! 关 键 词 !抗$!.Z! 献 血 者 ! 灰 区 中 图 分 类 号 !!445A5*! ! ! 文 献 标 识 码 !L! ! ! 文 章 编 号 !%--4$&4?B"*--5#-*$-%+5$-*
!!不同抗$!.Z 的 检 测 试 剂 对 丙 型 肝 炎 的 检 测 结 果 有 明 显差异’%(!设置 抗$!.Z 检 测 灰 区 的 必 要 性 越 来 越 引 起 各 血液检测的重视"本站*--4年 开 始 设 置 抗$!.Z 的 检 测 灰 区!将抗$!.Z 检测值位 于 阈 值 下 +-@ 的 范 围!落 在 灰 区 内 的样本需重 复 检 测" 笔 者 对 抗$!.Z 检 测 值 落 于 灰 区 内 的 *4 份 样 本 的 重 复 检 结 果 进 行 分 析 !报 告 如 下 "
!!酶联免疫试验 因 其 操 作 简 单$灵 敏 度 和 特 异 性 较 高!现 已被广泛应用!但影 响 酶 免 试 验 结 果 的 因 素 也 较 多 %如 加 样 量!洗板和温育等’!控 制 不 严 就 会 影 响 试 验 结 果!特 别 是 洗 板因素!许多实验室设定洗板次数的随意性较大(笔 者 通 过 比较由同一人使用同一洗板设备经不同洗板次数后的两种 质控物的检测结果 !发现增加 洗 板 次 数 对 VQO0# !RD#>检 测 的 结 果 影 响 较 大 !报 告 如 下 (
入血小板血浆中!部 分 血 小 板 和 血 浆 蛋 白 将 会 受 到 热 灼 伤! 通常减慢添加速 度!可 以 挽 救 部 分 血 小 板!但 仍 有 &@ 左 右 血小板被激活而影响血小板的 功 能( 而 将 T^0S 原 液 加 生 理盐水稀释成1&@ 的 浓 度!且 降 至 W5-X 时 再 加 入 已 采 集 的富血小板血 浆 中!不 仅 能 使 T^0S 释 放 的 热 量 被 盐 水 吸 收!还可利用低温溶 液 吸 收 产 生 的 热 量!从 两 方 面 降 低 添 加 T^0S 对 血 小 板 产 生 的 热 灼 伤!保 护 血 小 板 的 功 能!发 挥 冰 冻 血 小 板 的 最 佳 止 血 效 果)+*(
E! 讨 论
据报道纤维蛋白和血小板的损伤正是冰冻血小板融化 后出现析出物的主要原因)**(笔者的观察显示!冰冻 机 采 血 小板在采集制备阶段!其在离体机器运转状态下时间越 长 被 激活或损伤的机会就越大"穿刺不顺利!血流不畅!血 浆 流 速 过低!采集时间延长$脂肪血等!亦均为血小板的激活 创 造 条 件"血小板采集后未能完全解聚即急于加冰冻剂同样会 使 部 分血小板不能充分接触防冻剂!而造成血小板的损 伤( 所 以 将采集后的血 小 板!在 血 小 板 振 荡 仪 中 摇 +-#5-J<=!可 使 富血浆中的血小板充分解聚!在加冰冻剂时能确保冰冻 剂 进 入每个血小板细胞内(
参考文献
%!李金民,如何正确的进行 VQO0# 测定 操 作 ’Y(,检 验 诊 断 与 实 验 室 自 动 化 !*--4!4& #*--&$-&$%1 收 稿 !-&$*- 修 回 $ 本 文 编 辑 %夏 ! 玲 ! 蔡 ! 辉
抗$!.Z 检测设置灰区的探讨
佘毅敏!黄锦红!周晓真!王丽梅#福州市中心血站!福建福州 +&---&$
中 国 输 血 杂 志 *--5 年 4 月 第 %? 卷 第 * 期 !.G<=YRI((8C72=DKFD<(=!#H7<I!*--5!Z(I,%?!U(,*
+ %+& +
D! 结 果
D,C!机器 运 行 对 血 小 板 析 出 物 的 影 响 ! 在 检 测 的 *-- 袋 中!%1-袋正常!其中 仅 % 袋 出 现 析 出 物"另 外 +- 袋 在 机 器 运行中出现异常#血流不畅$机器反复报警1-状 态 有 %+ 袋! 采后血小板解聚不佳$肉眼可见颗粒1袋!血浆流速过 低%’ %&JI&J<=’&袋!抗凝 剂 反 应 * 袋!脂 肪 血 * 袋!产 品 冲 红 % 袋!但却有5袋出现析出物%!* U*%A%5!B ’-A-%’( D,D! 两 种 方 法 加 入 T^0S 对 冰 冻 血 小 板 析 出 物 的 影 响 ! 用注射器抽 取 原 液 T^0S 缓 慢 推 入 &- 袋 富 血 小 板 血 浆 中! 观察到血小板融化时有&袋出现析出物"将原液用生 理 盐 水 稀释成1&@的浓度 再 降 温 至 W5-X 加 入 1- 袋 富 血 小 板 血 浆中!观察到血小板融化时仅%袋出现析出物(两种 方 法 差 异有显著性意义%!* U&&A+&!B ’-A-&’(