三七对酒精性肝病大鼠肝组织SREBP1c表达的影响

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何首乌、三七提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织PPARα、PGC–1α水平的影响

何首乌、三七提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织PPARα、PGC–1α水平的影响

何首乌、三七提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织PPAR α、PGC–1α水平的影响作者:余轶群李军祥姬爱冬【摘要】目的:探讨何首乌、三七提取物预防大鼠非酒精性脂肪性肝炎及其肝组织PPAR α、PGC–1 α表达的影响。

方法:32 只雄性SD 大鼠,随机分为4 组,每组8 只。

除正常对照组外,高脂饲料喂养10 周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。

于造模即日起,正常对照组、模型组每天分别给予10 mL/kg 饮用水,中药组给予何首乌、三七提取物,易善复组给予易善复灌胃。

给药10 周后,处死所有大鼠,检测血清LDL、HDL、TG,ALT、AST、GGT;肝组织TG 和PPARα、PGC–1α mRNA 水平。

结果:中药组血清LDL 含量较模型组下降(P <0.05);中药组血清HDL、TG,ALT、AST、GGT 和肝组织TG 含量较模型组显著下降(P < 0.01),肝组织PPAR α、PGC–1 α mRNA 水平较模型组显著增高(P < 0.01)。

结论:何首乌、三七提取物可降低NASH 大鼠血清、肝脏脂质合成与聚积,减少炎症反应,从而有效防治NASH,具有良好的临床应用前景。

【关键词】首乌;三七;提取物;非酒精性脂肪性肝病;PPAR α、PGC–1 α〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of the extracts of Heshouwu and Sanqi (Polygonum multiflorumThunb.and Panax no toginseng)on the expression of peroxisome proliferators–activated receptor α (PPAR α) andPPAR gammacoactivator–1( PGC–1α) in non–alcoholic steatohepatitis (NASH) in rats. Methods The 32 maleSD rats were randomized into 4 groups with 8 in each. Rat model of non-alcoholic steatohepatitis was establishedwith fatty diet of 10 weeks except the normal control group. At the same time, the black group and model groupwere treated with the drinking water (10 mL/kg,daily) . The herbal group and Yishanfu group were treated with theextractive of Heshouwu and Sanqi, and Yishanfu respectively. All the rats were executed after the therapy of 10weeks. The LDL, HDL, TG, ALT, AST and GGT in the blood serum, TG, PPAR αand PGC–1αmRNA in the liverwere detected. Results Compared to the model group, the LDL in the blood serum in the herbal group decreased(P > 0.05).HDL,TG, ALT, AST and GGT in the blood serum , TG in the liver in the herbal group showed significantdifference (P > 0.01), while significantly increased (P < 0.01) in the PPARαand PGC–1α mRNA in the liver.Conclusion The extractive of Heshouwu and Sanqi can degrade lipid synthesis and accumulation in blood serumand liver of NASH rats, and decrease inflammatory reaction at the same time. The extractive of Heshouwu and Sanqican prevent and cure NASH, and could be used in clinic medicine in the future.〔Key Words〕 Panax notoginseng; Polygonum multiflorumThunb; Extracts; Non-alcoholic Steatohepatitis;PPAR α; PGC –1α(北京中医药大学东方医院,北京 100078)非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)包括单纯性非酒精性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和肝硬化。

三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶基因表达的影响

三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶基因表达的影响

三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶基因表达的影响【摘要】目的探讨三七总皂苷对实验性糖尿病性心肌病大鼠心脏谷胱甘肽转移酶(GST)基因表达的影响。

方法将50只造模成功的雄性SD大鼠随机分为治疗组30只和空白对照组10只,达美康对照组10只。

治疗4周后提取各组心肌组织总RNA通过RT-PCR,以β-actin为内参照对GST基因的表达水平进行检测。

结果不同剂量三七总皂苷组GST基因表达上调,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。

结论三七总皂苷能够诱导GST基因表达,催化谷胱甘肽与亲电子物质发生结合反应,改善心肌细胞能量代谢,减轻心肌损害。

【关键词】三七总皂苷; 糖尿病性心肌病大鼠; 谷胱甘肽转移酶类; 基因表达糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy,DC)自1974年由Hamby等首次提出以来,病因研究已深入到分子遗传、基因水平。

对其发病机制已从代谢紊乱、收缩机制异常、微循环障碍、自主神经病变等多角度进行了深入研究。

三七总皂苷(PNS)是中药三七的主要有效成分,是防治心血管疾病的一种有效药物。

为了深入探讨三七总皂苷对糖尿病性心肌病大鼠心脏超微结构的影响及基因分子水平上的作用机制,本实验进行了该方面的探讨。

1 材料与仪器1.1 主要试剂和设备链脲佐菌素为美国Sigma公司产品,RNA提取试剂Trizol Reagent购自华美生物工程公司,为Invitrogen公司产品;逆转录酶(AMV-RT ),核糖核酸酶抑制剂(RNasin),dNTP,Taq DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),随机引物(Random primers),琼脂糖(agarose)均购自美国Promega 公司。

德国产Leica 800型冰冻切片机;美国产Tracor Northern 8502型图象分析仪;日本产日立H-600透射电镜。

1.2 药物三七总皂苷片,由浙江维康药业有限公司生产。

三七总皂苷对大鼠肝组织内药物代谢酶CYP3A的抑制作用及其动力学分析

三七总皂苷对大鼠肝组织内药物代谢酶CYP3A的抑制作用及其动力学分析

三七总皂苷对大鼠肝组织内药物代谢酶CYP3A的抑制作用及其动力学分析目的:研究三七总皂苷(total saponins of the root and rhizome of Panax notoginseng,PNS)对大鼠肝组织内药物代谢酶CYP3A的抑制作用及其动力学分析。

方法:采用差速离心法制备大鼠微粒体酶,用半数效量概率单位法及Lineweaver-Burk双倒数作图法求得大鼠肝脏CYP3A的米氏常数(Km)、最大反应速度(Vmax)和三七总皂苷对大鼠肝脏CYP3A的半数抑制浓度(IC50)以及判断三七总皂苷对CYP3A的抑制类型和抑制常数(Ki,)。

结果:三七总皂苷对大鼠肝组织CYP3A有抑制作用,其IC50 689.54 mg·L-1;对底物氨基比林,CYP3A的Km 0.036 mmol·L-1,Vmax是21.01 μmol·min-1·g-1;三七总皂苷对大鼠肝组织CYP3A属于混合性抑制,其抑制常数Ki 247.79 mg·L-1,Kis 321.79 mg·L-1。

结论:三七总皂苷对大鼠肝脏CYP3A的活性有明显抑制作用。

标签:三七总皂苷;CYP3A;酶动力学;半数抑制浓度;大鼠在细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP)超基因家族中,CYP3A 是最重要的一类,不仅含量占CYP450总量的30%左右,该酶还在许多内、外源化合物的代谢中起着重要作用,参与红霉素、尼莫地平、利多卡因、HMG-CoA 还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂等多种药物在体内的代谢,据统计市售药品有50%左右通过CYP3A 代谢[1-2 ] 。

CYP450 酶系被抑制或被诱导是导致药物代谢性相互作用的主要原因,因为CYP 介导的药物相互作用可导致严重的药物不良反应,已致使包括特非那定、西立伐他汀等多种药物被召回[2-3] 。

三七具有止血、活血、补血,改善心肌缺血、抗心律失常、降血脂、降血压、降血糖、抗纤维化、抗氧化、改善微循环、抗炎镇痛等作用,三七总皂苷(total saponins of the root and rhizome of Panax notoginseng,PNS)是三七的主要活性成分[4-6]。

三七对酒精肝大鼠肝组织TGF-β1/Smads,CTGF表达量的影响

三七对酒精肝大鼠肝组织TGF-β1/Smads,CTGF表达量的影响

k g ~, 每天给药 1 次, 连续 1 4周 。测 定肝 功 能 、 大 鼠肝脏 Ma s s o n染色 病理 学检 查 , 以及 各 组 大 鼠肝组 织 T G F - l f l , S m a d 3 ,
S ma d 7 , C T G F mR N A的表达量。结果 : 与模 型组 比较 , 治疗组 能明显降低肝 脏 A L T , A S T, 抑制胶 原纤维沉 积 , 减 少肝组织 T G F 一 1 , S m a d 3 , C T G F m R N A的表达量 , 增加 S ma d 7 m R N A的表达量 , 三七组不 同剂量组 之间存在 显著 性差异 , 高剂 量三七 组与异 甘草酸镁组 之间无 显著性差异 。结论 : 三七可以影响 T G F - l f 1 / S m a d s 信号通路 , 减少 C T G F表达 。
1 . 1 动物
健康 成年 普通 S D大 鼠 , 雄 性 ,S P F级 ,
体重 ( 1 9 9 . 4 5± 6 . 9 9 )g , 由中南大学湘雅医学 院实 验动 物 中心 提供 。
1 . 2 药物及 试剂 三七 购 自湖南 中医研究 院药房 , 由湖南 省 中医药研 究 院周知 午 副主任 药 师鉴定 。水
在 嗜酒 者 中 , 约2 / 3可 发 展 为酒 精 性 肝 病 。 目前 酒
mL , 重 复 以上 步 骤 。合 并 2次 上 清 液 , 加 热 蒸 发 浓 缩至 2 0 0 m L 。使用 时均 稀释 至 6 6 7 m L , 即三七 溶液
质量浓度为 1 5 0 g・ L ~。市售高粱 白酒 , 酒精体 积 分数 5 0 %, 产 自北 京 牛栏 山酒 厂 。异 甘 草 酸镁 ( 商

三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、MRNA及蛋白表达的影响

三七总皂苷对大鼠肝脏药物代谢酶酶活性、MRNA及蛋白表达的影响

[关键词]三七总皂苷;细胞色素p450;荧光定量pcr技术由五加科植物三七根中有效成分三七总皂苷(panax notoginseng saponins,简称pns)提取物制成的血栓通注射液、注射用粉针血塞通,已广泛应用于临床治疗瘀血阻络、脑血管疾病后遗症、视网膜中央静脉阻塞等疾病[1-2],与其他药物联合使用也较为常见,如与纳洛酮等药物联合使用用于脑梗死急救[3]。

目前,有关中药注射剂安全性的问题报道日益增多,由药物诱导或抑制细胞色素p450导致的药物间的相互作用日益受到关注,但是有关中药复方及中药复方对cyp450的影响作用的系统研究尚未展开,有关pns对细胞色素p450的影响的研究还不够全面,本实验将从酶活性水平、mrna表达和蛋白质表达3个水平研究pns对p450的多个亚型影响,为完善该药的代谢性相互作用和指导临床合理用药奠定基础。

1 材料1.2 仪器 j-301超高速离心机(avanti 公司);荧光定量pcr仪(ab公司,real-time pcr system,型号272006169);victorx 5酶标仪(perkin elmer 2030 multilabel reader);hh?sy11-ni水浴锅(北京市长风仪器仪表公司);bs223s电子天平(sartorius公司);mhd10d003离心机(beckman公司)。

2 方法2.1 给药方法大鼠随机分为9组,每组8只,第1~5组为5个阳性对照组;第1组是大鼠肝脏cyp1a1的阳性诱导药3-甲基胆蒽组,腹腔注射3-甲基胆蒽50 mg?kg-1?d-1,每日给药1次,连续3 d;第2组是cyp1a2的阳性诱导药β-萘黄酮组,腹腔注射β-萘黄酮40 mg?kg-1?d-1,每日给药1次,连续7 d;第3组是cyp2b的阳性诱导药苯巴比妥组,腹腔注射苯巴比妥50 mg?kg-1?d-1,每日给药1次,连续3 d;第4组是cyp2e1的阳性诱导药乙醇组,腹腔注射35%乙醇1 250 mg?kg-1?d-1,每日给药1次,连续7 d;第5组是cyp3a的阳性诱导药地塞米松组,腹腔注射地塞米松 37.5 mg?kg-1?d-1,每日给药1次,连续7 d。

三七对酒精性肝病大鼠肝脏瘦素及其受体表达的影响

三七对酒精性肝病大鼠肝脏瘦素及其受体表达的影响

光镜下观察肝组织脂 肪变 、 及纤维化程度 , 炎症 病理组 织学
s D大 鼠 7 , 0只 清洁 级 , 雄性 , 重 20— 体 1 诊断标准参 考中华 医学会肝病学分 会脂肪肝和酒精 性肝病 学组 2O 年 2月修订 的“ 精性肝病诊疗指南 " O6 酒 【 。免疫 组 化 E Vsn二 步法 检测肝 组织 中 Lp n tpn—R的表 达。 n io i et 、et i l 结果评定标准 : 据着 色程度 及着色 细胞 阳性范 围进行 计 根 算, 阳性强度 : 不着色者为 0分 , 着色 淡者为 1 , 分 中等着色 为 2分 ; 色深者 为 3分。着色 细胞 阳性 范围 : 着 无着 色为 0 分, 着色阳性细胞小 于 13为 1分, 色 阳性 细胞 13—12 / 着 / /
进行干预 ,4周后 H l E染色及 M s n 色染 色, as 三 o 观察各组大鼠肝组 织病理 学改 变, 免疫组化法检测肝组 织 中瘦素及其 受体 的表达。结果 : 模型组 大鼠肝组 织 出现 中 一重度 脂肪肝 和不 同程度 炎症 , 见轻度肝 2例
纤维化表 现; 肝组织瘦 素及其受体的表达较正常组 明显增高( 00) P< .1。三七高、 剂量组及硫普 罗宁组 低

要 目的: 观察三七对酒精性肝病大鼠肝脏瘦素及其 受体表 达的影响 , 讨三七抗 酒精性肝病的作 探
用机制。方法:0只 s 7 D大鼠随机分为正常组 、 模型组 、 三七 高剂量 组、 三七低 剂量组和硫普 罗宁组 , 大鼠
灌服 白酒 一玉米油 一 吡唑混合 液造模 , 三七高、 剂量组和硫 普罗 宁组 大鼠造模的 同时予以相应的药物 低
德生物工程 有限公 司。E v i nio s n二步法 免疫组 化试剂盒 : 丹 麦 D k 公司 。 ao 数 的秩和检验 , 相关性分析采用 Ser a pa n进行分析 。 m

三七对酒精性肝病防治作用的研究

三七对酒精性肝病防治作用的研究
维普资讯
医 研 杂 28 月 学 究 志 0 年3 第3卷 第3 0 7 期
・论
萱 ・
三 七 对 酒 精 性 肝 病 防治 作 用 的 研 究
张 洁 刘 庆生 王 小奇 蔡 丹莉 陈芝芸 严 茂祥 叶 蔚
摘 要 目 的 观察 三 七 对 酒 精 性 肝 病 的 防治 作 用 。 方 法 7 0只 S 雄 性 大 鼠 随 机 分 为 正 常 组 l D 0只 , 型 组 、 七 高 剂 量 模 三
d ml iie nof ego p :n r l ru ,=1 o y dvd d it v ru s oma o p(I 0),c nrlgo p(I 5 i g o t ru ,=l ),hg o ih—d s a c ig u (-=1 oeS n h r p / 5),lw—d s a c i o g o o eS n h go p (- 5) n ipo i ru ,=1 ru /=1 ,a d To rnn go p(I 5).I re o id c lo oi e ao ah ,a i l i h o t l ih—d s n o g n od rt n u each l h p tp ty nmas n te cfr ,hg c io oea dlw d s a c i n ip nngo p r rl oe t n XigE Gu T u( 6 eh n l5 / g oeS n h ,a dT o r i ru sweeoal d sdwi Ho g n r o o 5 % ta o ; g k ),c r i 2 / g o y h onol( mLk ),a dp rzl n yaoe ( 7 2 mg k )e eymo n r1 e s asi ih—d s a c i o oeS n h ,a dTo rnn go p ,w r rae v r f r 2 . / g v r migf 4wek .R t hg o n o eS n h ,lw d s a c i n ip i ru s eet tde e at — o e y e n o u n e1 o n d r gt 4一w e n u t n o e ao ah ,w t . S k a c i . S k i h e k id ci fh p tp ty i 1 2 / g S n h ,0 6 / g,a d 1 0 / g To rnn,rse t ey o h n 0 mg k ip i ep ci l.Al rt o v l as

三七总皂苷对大鼠肝脏肾脏的毒性作用

三七总皂苷对大鼠肝脏肾脏的毒性作用

三七总皂苷对大鼠肝脏肾脏的毒性作用韩刚;孙辉业;董延生;彭双清【期刊名称】《中国新药杂志》【年(卷),期】2006(15)24【摘要】目的:研究三七总皂苷对大鼠肝脏肾脏的毒性作用.方法:Wistar大鼠32只,雌雄各半,体重140~180 g,随机分成溶剂(注射用水)对照组和三七总皂苷50,150和450 mg·kg-1组,各组每日肌内注射相应剂量的药物或溶剂,连续给予28 d(高剂量组给药3 d),每周测定动物体重.给药2周及4周后眼眶取血,测定血清丙氯酸氯基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)及肌酐(CREA)的活性,取肝脏、肾脏,HE染色光镜观察组织病理学变化.结果:三七总皂苷450 mg·kg-1组动物体重显著下降,肝、肾功能指标(AST,ALT,BUN及CREA)显著升高,组织病理学检查出现肝细胞及肾小管上皮细胞变性、坏死.结论:三七总皂苷肌内注射450mg·kg-1对大鼠具有明显的肝脏、肾脏毒性.【总页数】4页(P2115-2118)【作者】韩刚;孙辉业;董延生;彭双清【作者单位】军事医学科学院毒物药物研究所,国家北京药物安全评价研究中心,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,国家北京药物安全评价研究中心,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,国家北京药物安全评价研究中心,北京,100850;军事医学科学院毒物药物研究所,国家北京药物安全评价研究中心,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】R965.3;R286.2【相关文献】1.食品防腐剂苯甲酸钠多次给药对雌性大鼠肝脏、肾脏及卵巢毒性的研究 [J], 朱沁玲;余蓓;蒲玟静;林红霞;黄钱;马明义2.三七总皂苷预处理对急性期缺血再灌注肾脏的保护作用 [J], 林辉;张祥贵3.君子兰总生物碱对大鼠肝脏及肾脏的慢性毒性作用 [J], 杨绍娟; 崔亚男; 卜丽莎; 曹霞4.三七总皂苷对大鼠肝脏低温保存作用的实验研究 [J], 姜楠;李立;郭永章5.三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏保护作用的实验研究 [J], 姜辉;高家荣;陈金锋;刘勇因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

何首乌与三七提取物防治大鼠非酒精性脂肪性肝病的实验研究

何首乌与三七提取物防治大鼠非酒精性脂肪性肝病的实验研究
一 1 c and SCAP in liVer tissue and non —alcoholic fatty hepatopathy. Method: Except the rats in n0m al contI. 0l
gr0up,the other rats were fed up with high—fl at diet to make up the models 0f n0n—alcoh0lic f_ atty hepat0pathy.
than in model gr0up(P<O.05). Conclusi0n:The extIl actiVes of neecenower Il 00t and notoginseng can decrease
e£fectively lipids synthesis and accumulation in NAFLD r{lt. So they can prevent and cure non — alcoh0lic fatty
32 m ale SD r;札s weIle divided into 4 groups rand0mly,and each gI.0up included 8 rats. Drinking water was given to
the rats in nonnal contm l gm up and mode1 gmup according to 10 m L/kg each day. The extm ctiVes,of neeeen0wer
SCAP in LiVer Tissue and Non—alcoholic Fatty Hepat0pathy YU Yi—qun,LI Jun—xiang,
JI Ai—dong(D0啦

三七总皂甙对脂肪变性L02肝细胞TG水平及SREBP-1c mRNA表达的影响

三七总皂甙对脂肪变性L02肝细胞TG水平及SREBP-1c mRNA表达的影响

盒 (日本 T K R 公 司 ) S E P1 、 .cn引 物 AAA ,R B 一C Bat i
( 上海英骏生物技术有限公司合成 ) C , O 恒温培养 箱、R i B 4 多功 能冷 冻 离 心机 ( 国 T em 美 hro公 司 ) ,
T cnste 波 长 多功 能 酶标 仪 ( 地利 T C N ea— i 2全 ar 奥 EA
分别予 l 、0 / lP S O5 Il N 作用。药物作用 2 , l 4h后 油红 0染色观察肝 细胞 内脂 滴变化 , 自动生化 仪检测 . 全 I B水 平 ,T P R法检测固醇元件结合蛋白.C S E Pl R A 表达。结果 与 自然恢复组 比较 ,N R .C 1 ( R B —Cm N ) P S各治疗 组细胞 内脂滴少于其他组 , 剂 量组更 为 明显 ; G水 平 明显低 于其 他各 组 ( 低 T P<0 0 ) 低剂 量组 下 降更为 显 著 ( .5 , P<
12 I 细 胞 培养 . .
肝 细 胞 株 1 2常 规 培 养 于 含 3 3
1%小牛血清 的 R M 。 4 培养基 中, 0 P至瓶 壁 8 % 一 0 ( 每 7o %C C、 0 9% 约 2~ )用胰 蛋 白酶消化 收集 细胞并 传代 。 3d , 1 2 2 肝细胞脂 肪变性 模 型建 立 及 P S的适 宜 浓 .. N 度确定 将处 于对数 生长期 的 L 2肝细胞 接 种 于 6 0
孔培养 板 中,7o 5 C 养箱 中孵 育贴 壁 4 3 C、% O 培 8h 后更换新 鲜 培 养液 , 考 范 建 高 方 法 改 进 , 含 参 予 5 %小 牛血 清的 R M 6 0培养基 孵育 L2肝细 胞 0 PI 4 1 0 4 , 红 0染色鉴 定镜下 见较 多橘红色 脂滴 , 8h油 即肝 细胞 脂肪 变 性模 型 建 立 ] 。将 处 于 对 数 生 长 期 的 I) / 2肝细胞 接种于 9 板 中 。常规 培养 4 去 6孔 8h弃

三七皂苷R1对酒精性肝纤维化大鼠bFGF的影响

三七皂苷R1对酒精性肝纤维化大鼠bFGF的影响

三七皂苷R1对酒精性肝纤维化大鼠bFGF的影响探讨酒精性肝纤维化大鼠肝组织碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)mRNA的表达和变化,以及三七皂苷R1对肝酒精性损伤的保护作用。

结果发现bFGF参与了酒精性肝纤维化的发生和发展过程,且损伤时间越长,表达越高。

三七皂苷R1可降低肝组织中bFGF的表达,从而减轻肝细胞的纤维化,从而发挥保护酒精性肝组织损伤的作用。

标签:三七皂苷R1;肝纤维化;大鼠;碱性成纤维生长因子1资料与方法1.1所需的试剂RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit、PCR Master Mix Kit(货号:K1621,Fermentas 公司);DNA Marker、DNA上样缓冲液;TRIZOL (Molecular Reseach Center);bFGF SENCE 5’- AGTTTGCTACATAT ACTCTGCT-3’,ANTI-SENCE 5’-TGGATACTCTTTCCCATGCGA-3’,PCR產物489bp;β-actin SENCE 5’-GTCCGTAAGATCAACCTACA-3’,ANTI-SENCE 5’-CCCCGCATTTCGATGTGCT-3’ ,PCR产物大小为391bp;均由大连宝生物公司合成。

1.2 动物及其分组72只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,购自昆明医科大学动物科,重180g~220g,随机分为对照组(A组)、酒精组(B组)和三七皂苷R1组(C组),再按不同时间点分为1、2、4w 3个亚组,每个亚组8只动物。

定时给予饲料和水,所有大鼠均在同样的条件下饲养,尽量降低误差。

B 采用乙醇灌胃制作大鼠酒精性肝纤维化模型,C组同时静脉注射三七皂苷R1,剂量为100 mg/kg,A组灌服等量的生理盐水。

1.3动物模型的制备及取材制备”乙醇-橄榄油-吡唑”混悬液(60%酒精8 ml/kg·d、橄榄油2ml/kg·d、吡唑25 mg/kg·d),CCL4橄榄油注射液(CCL4:橄榄油=1:3)。

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶—13及其抑制因子—1表达的影响

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶—13及其抑制因子—1表达的影响

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶—13及其抑制因子—1表达的影响[通信作者] *姜辉,硕士,药师,主要从事肝纤维化的中医药防治研究,Tel:(0551)2838553肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,其发生和发展与细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)在肝内过度沉积有关[1]。

ECM的转换主要由基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)及其抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs )所调节。

课题组前期研究发现,三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用[2]。

本研究旨在观察PNS对肝纤维化大鼠肝组织MMP-13和TIMP-1表达的影响,以探讨其抗肝纤维化的可能机制。

1 材料1.1 动物SD大鼠,雄性,体重(200±20)g,由安徽省实验动物中心提供,SPF级,批准字号SCXK(皖)2011-002。

1.2 药物与试剂三七总皂苷(纯度>95%,南京泽朗医药科技有限公司,批号20110430);秋水仙碱(西双版纳版纳药业有限责任公司,批号20111001);四氯化碳(CCl4,汕头市西陇化工厂,批号20101152);丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20110410);兔抗鼠MMP-13(BA0574)、TIMP-1抗体(BA0575),武汉博士德生物工程有限公司;TRIZOL Reagent试剂(Introgen life technologies公司);Reverse Transcription System逆转录试剂盒、PCR试剂盒(Fermentas公司)。

1.3 仪器GL-20A全自动高速冷冻离心机(湖南仪器仪表总厂离心机厂);MAUO型电子分析天平(上海第二天平仪器厂);8453E紫外分光光度计(美国安捷伦公司);XDS-1B电子显微镜(重庆光电仪器总公司);Hema18R冷冻离心机、压缩机制冷式基因扩增仪、GSG2000核酸/蛋白凝胶图像分析管理系统(珠海黑马医学仪器有限公司)。

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的影响

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的影响

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的影响石小枫;徐曼;刘杞
【期刊名称】《中药药理与临床》
【年(卷),期】2001(017)002
【摘要】目的:观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF-β1表达的影响。

方法:用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时给与三七总皂甙治疗,免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达,纤维化程度分级。

结果:三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达,减轻肝纤维化程度。

结论:三七总皂甙具有抗肝纤维化作用,其机理尚待进一步研究。

【总页数】2页(P7-8)
【作者】石小枫;徐曼;刘杞
【作者单位】重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆 400010;重庆医科大学病毒性
肝炎研究所重庆 400010;重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆 400010
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.肝康颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β1、HA、Ⅳ型胶原影响的实验研究 [J], 郝明霞;梁芳;陈玉霞;李长秦
2.中药复方对DMN诱导的肝纤维化大鼠Ⅳ型胶原和TGF-β1蛋白表达的影响 [J], 张斌;万谟彬;王灵台
3.排钱草总生物碱对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF-β1表达的影响
[J], 钟鸣;余胜民;杨增艳;黄琳芸;陈少锋;李中华;王进声;陈清
4.苦参素穴位注射对肝纤维化大鼠Ⅳ型胶原和TGF-β1表达的影响 [J], 周爱玲;罗琳;周春辉;蒋道荣;茅家慧;朱燕
5.金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的影响 [J], 安祯祥;何远利;黄丹;唐东昕;王敏;王芳
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三七对酒精性肝病大鼠肝脏细胞因子的影响

三七对酒精性肝病大鼠肝脏细胞因子的影响

三七对酒精性肝病大鼠肝脏细胞因子的影响黄志群;陈芝芸;严茂祥;何蓓晖;蔡丹莉;刘庆生【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2011(40)2【摘要】目的观察三七对酒精性肝病大鼠肝组织TNF-α、Leptin、IL-6、IL-8等因子的影响,探讨其抗酒精性肝病的作用机制.方法 70只雄性SD大鼠随机分为模型组、三七低剂量组、三七高剂量组和硫普罗宁组各15只及正常组10只,模型组大鼠灌服白酒-玉米油-吡唑混合液14周建立酒精性肝病模型,三七低、高剂量组和硫普罗宁组大鼠在造模的同时予以相应的药物干预,正常组以蒸馏水代替,连续14周;酶联免疫法和放射免疫法检测肝组织中TNF-α、Leptin、IL-6及IL-8等细胞因子的含量.结果模型组大鼠肝组织TNF-α、Leptin、IL-6及IL-8含量较正常组明显升高(P<0.01),应用不同剂量三七及硫普罗宁干预后肝组织TNF-α、Leptin、IL-6及L-8含量较模型组明显降低(P<0.05).结论三七防治大鼠酒精性肝病的机制可能与降低ALD大鼠肝组织TNF-α、Leptin、IL-6及IL-8等细胞因子的水平有关.%Objective To evaluate the effect of Sanchi on expression of hepatic TNF - α , IL - 6 , IL - 8 and leptin in rats with alcoholic liver disease ( ALD) . thus to explore the mechanism of Sanchi in alcoholic liver disease. Methods Seventy SD rats were randomly divided into five groups: the normal group ( n = 10) , the model group ( n = 15 ) , the high - dose Sanchi group ( n = 15 ) , the low - dose Sanchi group ( n = 15 ) , and the tiop ronin group ( n = 15 ) . Alcoholic liver disease in rats of the model group waa induced with mixture of alcohol - corn oil - pyrazole in 14weeks.Rats in the high - dose Sanchi, the low - dose Sanchi, and the tiop ronin group were treated with different medicine. The contents of hepatic TNF -α,IL -6,IL -8 and leptin were examined with ELISA or RIA. Results In the model group, the amounta of hepatic TNF - α , IL - 6 , IL - 8 and leptin were higher than tbose in the normal group( P <0.01 ) , and all those in the treatment groups were lower than those in the model group ( P < 0.05 ) . Conclusion Sanchi can markedly reduce the levels of hepatic TNF - α, IL - 6 , IL - 8 and leptin. This may serve as one of the critical mechanisms through which Sanchi efficiently prevents from alcoholic liver disease.【总页数】3页(P45-47)【作者】黄志群;陈芝芸;严茂祥;何蓓晖;蔡丹莉;刘庆生【作者单位】310053,杭州,浙江中医药大学;310006,杭州,浙江省中医院消化病研究室;310006,杭州,浙江省中医院消化病研究室;310006,杭州,浙江省中医院消化病研究室;310006,杭州,浙江省中医院消化病研究室;310007,杭州市中医院【正文语种】中文【相关文献】1.三七对胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞因子的影响* [J], 李剑霜;陈芝芸;严茂祥2.三七对酒精性肝病大鼠肝脏瘦素及其受体表达的影响 [J], 何蓓晖;陈芝芸;赵振中;蔡丹莉3.三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB/IκB表达的影响 [J], 刘庆生;王小奇;蔡丹莉;张洁;来丽群;陈芝芸4.三七对酒精性肝病大鼠肝组织学和TNF-α影响 [J], 刘庆生;王小奇;来立群;叶蔚;张洁;陈芝芸5.三七对酒精性肝病大鼠肝组织SREBP1c表达的影响 [J], 苏艳霞;荀运浩;陈芝芸;施军平因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

三七对酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α、Leptin水平的影响

三七对酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α、Leptin水平的影响
Pa a t g n e g g o p r t e efle ih t e ac h lw h s o c n r to a O ,t o tme v r n x No o e s n r u a sw r ild w t h lo o o e c n e ta i n w s 5 w i se e y
个别大 鼠汇 管 区有 炎 细胞 浸 润 、 小 叶 内 出现点 状 肝
坏 死 ; 见 肝 纤 维 化 和 肝 硬 化 形 成 ; 七 大 、 剂 量 未 三 小
剂盒均 由解 放 军 总 医院 科技 开 发 中心放 免 所提 供 ,
批号 2002 。 0 4 9 8
组大 鼠损伤程度 明显 减轻 。用酒 精造 模 的四组大 鼠 肝组织均有不 同程度 的脂肪 变性 , 与正 常组 比 , 异 差 有非常显著性 意义 ( < 0 0 ) 三 七 大 、 剂 量组 大 P .1; 小 鼠肝组织脂 肪 变程 度 较模 型 组 明显 减 轻 , 异有 显 差 著性意义 ( P<0 0 ) 易善复组 与模 型组 比差 异无 显 .5 ; 著性意义 ( P>0 0 ) 见表 1 .5 ; 。
a d Le tn i l o e u w e e h g e h n t e P n x N o o i s n r u a s a d t e e wa i n fc n n p i n b o d s r m r i h r t a h a a t g n e g g o p r t n h r s sg i a t i dfe e c t ts ia l ( if r n es a itc l P< O 0 ) Co cu in: n x No o i s n a e u e t e t e c n e t fTNF— n y . 5 . n l so Pa a t g n e g c n r d c h h o t n s o Qa d Le tn i lo e u wh c sp s i l h m p ra tm e h n s f rPa a o o is n o p e e t lo o i p i n b o d s r m ih i o sb y t ei o t n c a im o n x N t g n e g t r v n c h lc a fty l e . a t i r v Ke r s ac h l a t ie , n x N o o e s n T NF a,Le tn y wo d lo o i f ty lv r Pa a t g n e g, c — p i

三七对酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α、Leptin水平的影响

三七对酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α、Leptin水平的影响

三七对酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α、Leptin水平的影响何蓓晖;项柏康;蔡丹莉;陈芝芸;严茂祥【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2005(029)003【摘要】目的:观察三七对酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α、Leptin水平的影响.方法:62只大鼠随机分为正常组10只,模型组、易善复组、三七大、小剂量组各13只;模型组大鼠2次/日采用50%酒精灌胃,同时每天自由饮用10%酒精饮料进行造模,易善复组、三七大、小剂量组大鼠在造模的同时予相应的药物进行干预,连续14周后观察肝组织的病理学改变,放免法测定血清中TNF-α、Leptin含量.结果:模型组大鼠肝组织出现不同程度的肝脂肪变性,血清中TNF-α、Leptin含量较正常组明显升高,应用三七大、小剂量干预后,大鼠肝组织脂肪变明显减轻,血清TNF-α、Leptin含量明显降低,与模型组比差异均有显著性意义(P<0.05).结论:三七降低血清TNF-α、Leptin的水平可能是其有效防止酒精性脂肪肝发生的重要机制之一.【总页数】3页(P56-58)【作者】何蓓晖;项柏康;蔡丹莉;陈芝芸;严茂祥【作者单位】浙江中医学院附属医院,杭州,310006;浙江中医学院附属医院,杭州,310006;浙江中医学院附属医院,杭州,310006;浙江中医学院附属医院,杭州,310006;浙江中医学院附属医院,杭州,310006【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.清脂颗粒干预酒精性脂肪肝形成的实验研究及对大鼠血清 TNF-α、Leptin 水平的影响 [J], 刘维明;刘相花;王玉娟;于丽丽;李秀丽;薛杰;侯殿俊2.五味子多糖对 IR大鼠血清 Leptin、TNF-α水平的影响 [J], 马育轩;王艳丽;范越;张晓娟;付殷;芦冲;黄艳霞;张敏3.辛伐他汀和非诺贝特对非酒精性脂肪肝大鼠血清ATGL酶活性和TNF-α水平的影响 [J], 何微;喻陆;高德禄;张世俊4.辛伐他汀和非诺贝特对非酒精性脂肪肝大鼠血清ATGL酶活性和TNF-α水平的影响 [J], 何微;喻陆;高德禄;张世俊;5.重组leptin干预对营养性肥胖大鼠血清胰岛素、C-肽、内源性leptin含量及ob 基因表达水平的影响 [J], 刘倩琦;陈荣华;郭锡熔;费莉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

三七总甙防治大鼠实验性肝损伤作用的研究

三七总甙防治大鼠实验性肝损伤作用的研究

三七总甙防治大鼠实验性肝损伤作用的研究
张良
【期刊名称】《昆明医学院学报》
【年(卷),期】1989(010)002
【摘要】三七传统用作活血化瘀、消炎止痛、滋补强壮之药,三七总甙为三七的主要有效成份。

近年国内根据肝炎时有肝微循环障碍改变,提出用活血化瘀治疗肝炎,在动物实验及临床上取得较为肯定的疗效,并初步研究证实三七有对抗肝损伤的作用。

【总页数】3页(P28-30)
【作者】张良
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R975.5
【相关文献】
1.三七总甙对1型糖尿病大鼠早期肾脏病变保护作用的研究 [J], 屠庆年;施燕
2.白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用的实验研究 [J], 李莲
3.乌索酸防治大鼠实验性肝损伤作用的研究 [J], 熊筱娟;陈武;等
4.三七总甙对四氯化碳所致肝损伤的保护作用 [J], 杜芳腾;叶如美;等
5.三七总甙对实验性高脂血症大鼠脾脂质沉积的干预 [J], 蔡雪彦;纳青青;谢华;黄志伟;李少华
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三七总皂甙对大鼠肝化脾增量的影响

三七总皂甙对大鼠肝化脾增量的影响

三七总皂甙对大鼠肝化脾增量的影响邓小耿;陈积圣;陈伟强;曾炳胜;区庆嘉【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】2001(0)S1【摘要】目的:探讨促进肝化脾增量及缩短其再生周期的新途径。

方法:应用三七总皂甙于自体肝细胞脾内移植(IHAT)的动物模型上,分别于移植术后2周对病理组织学、电镜形态、肝化脾匀浆谷丙转氨酶(ALT)含量及^(99m)Tc-HIDA 摄取试验进行观察分析。

结果:三七总皂甙组(A 组)脾内肝细胞水肿、变性程度较轻,肝化脾匀浆 ALT 含量达(928.0±268.1)u/g,明显高于对照组(P<0.05),且^(99m)Tc-HIDA 摄取试验时 A组离体肝化脾显影较清晰,其放射性计数明显高于对照组(B组,P<0.05)。

结论:三七总皂甙在移植早期对脾内肝细胞有一定的抗损伤保护作用,从而促进了肝化脾的增量。

【总页数】3页(P73-75)【关键词】肝细胞移植;肝再生;三七总皂甙【作者】邓小耿;陈积圣;陈伟强;曾炳胜;区庆嘉【作者单位】中山医科大学孙逸仙纪念医院外科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.三七总皂甙对大鼠移植肝ICAM-1表达的影响 [J], 张毅;冉艳;叶启发2.三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏p-ERK1/2表达的影响 [J], 邓志云;李学东;傅华群3.三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖肝脏CX/GJIC的影响 [J], 李学东;尚西亮;傅华群;黄长文4.三七总皂甙对大鼠离体灌流肝的影响 [J], 李哲;淤泽溥5.三七总皂甙预处理大鼠供肝对细胞凋亡及TNF-α、Caspase-3表达的影响 [J], 张毅;叶启发;明英姿;许贤林;肖建生;李远明因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

丹参三七药对对大鼠酒精损伤后胃及肝脏的保护作用

丹参三七药对对大鼠酒精损伤后胃及肝脏的保护作用

丹参三七药对对大鼠酒精损伤后胃及肝脏的保护作用李世芬;胡奇;王玉翠;钟义红;王玉邦【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2014(024)028【摘要】目的研究丹参三七药对对大鼠酒精损伤后胃黏膜及肝脏的保护作用.方法取SD大鼠80只,按体质量随机分为4组,每组20只,空白对照组,模型对照组,高、低2个剂量组(2.4和0.8 g/kg),灌胃给药,每日1次,连续30 d.实验末乙醇灌胃造成大鼠急性酒精损伤模型,游标卡尺测量胃黏膜的损伤面积,试剂盒测定肝组织中丙二醛(MDA)、三酰甘油(TG)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及胃组织中蛋白酶原(PG)、生长抑素(SS)的含量,对胃部及肝脏进行病理检查.结果高剂量大鼠肝脏组织中的MDA及TG含量降低、GSH含量升高,胃黏膜组织中的PG、SS含量升高,与模型对照组相比,差异均有统计学意义.胃及肝组织的病理结果表明,高剂量组大鼠的胃黏膜病变总积分及肝脏病理总分均明显小于模型对照组,且差异有统计学意义.结论丹参三七药对对酒精性肝损伤及胃黏膜损作有一定的保护作用.【总页数】5页(P5-9)【作者】李世芬;胡奇;王玉翠;钟义红;王玉邦【作者单位】南京医科大学卫公共卫生学院,江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心,江苏南京210029;南京医科大学卫公共卫生学院,江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心,江苏南京210029;南京医科大学卫公共卫生学院,江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心,江苏南京210029;南京医科大学卫公共卫生学院,江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心,江苏南京210029;南京医科大学卫公共卫生学院,江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心,江苏南京210029【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.三七总甙、丹参对肝脏缺血一再灌注损伤保护作用的实验研究(摘要) [J], 刘剑仑;蓝瑚;王炳煌;张炳彦;2.三七总皂甙对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中肝细胞线粒体的保护作用 [J], 元文勇;姜文泉;姜惟龙;申鎔硕3.黄芪当归药对对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 聂克4.酒精对大鼠肝脏再生的影响及丹参的保护作用 [J], 王俊萍;王思元5.“瓜蒌-薤白”药对对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 张承志;韩林涛;黄芳;但汉雄因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏保护作用的实验研究

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏保护作用的实验研究

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏保护作用的实验研究姜辉;高家荣;陈金锋;刘勇【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2013(18)10【摘要】目的:观察三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠的保护作用。

方法:SD大鼠随机分成正常组、模型组、PNS(50、100、200mg/kg)组和秋水仙碱(Col,0.1mg/kg)组。

除正常组外,其余各组采用皮下注射50%四氯化碳(CCl4),每周2次,连续18周的方法诱导肝纤维化大鼠模型。

于造模第9周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药物,正常组和模型组给予等量溶媒,每天1次,连续10周。

实验结束后,比色法测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的水平;同时取固定部位肝脏组织,HE染色观察肝纤维化程度;免疫组织化学法检测肝组织胶原I(Collagen I)蛋白的表达,RTPCR技术测定Collagen I mRNA的表达。

结果:与模型组相比,PNS(100,200mg/kg)不仅可减轻大鼠肝纤维化程度,降低MDA含量,升高SOD、GSH水平,还可抑制肝纤维化大鼠肝组织中Collagen I的表达。

结论:PNS对大鼠肝纤维化具有一定的保护作用。

【总页数】5页(P1116-1120)【关键词】三七总皂苷;肝纤维化;脂质过氧化;大鼠【作者】姜辉;高家荣;陈金锋;刘勇【作者单位】安徽中医药大学第一附属医院,国家中医药管理局中药制剂三级实验室【正文语种】中文【中图分类】R965.2【相关文献】1.卷柏提取物改善高脂血症大鼠肝脏脂肪变及肝脏保护作用的实验研究 [J], 郑晓珂;张鑫;王小兰;侯庆伟;陈克宇;王彦志2.逍遥散对肝纤维化大鼠肝脏保护作用的研究 [J], 王优丽;郎德海3.三七总皂苷对大鼠肝脏低温保存作用的实验研究 [J], 姜楠;李立;郭永章4.三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及机制的实验研究 [J], 寇幸福;王志方5.三七总皂苷对实验性酒精性肝硬化大鼠的保护作用研究 [J], 庾少梅;周伟青;林锐珊;苏宁;刘坤东因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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SREBP 1 兔抗 ( 批 号 C0907) 为 Sant a Cruz Biot echnolog y 产品; Envision 二步法免疫组化试 剂盒 ( 批号 00029661) 为 丹麦 Dako 公 司产 品; Axy Prep 总 RNA 小 量 制 备 试 剂 盒 ( 批 号 KD10071101- G) 为 爱思进生 物技术 有限公 司产 品; T aq 酶( 批号 RP O40205) 为美国 Pr omega 公 司产品; 三磷酸脱氧核苷( dN T P ) ( 批号 070603) 为美 国 Pro mega 公 司 产 品; 标 准分 子 量 DNA marker DL 2000( 批号 F 4801) 由 T AKARA 公司 提供; GelRedT M ( 批号 8G0520) 为美 国 Biot ium 公司产品; M- ML V 第一链 cDNA 合成试剂盒( 批 号 070602) 为美国 P rom eg a 公司产品。引物由上 海生工生物工程技术服务有限公司合成: 乙酰辅 酶 A 合成酶( ACS) 上游引物: 5-' GAT GCCACTGCCCT CT GA- 3 ', 下 游 引 物: 5 -' CAGT T CCCGAAT GCCA CA- 3', 扩增片 段: 500 bp; 脂肪 酸合成酶( F AS) 上游引物: 5-' T T GAT GGCT CACACACCT ACG- 3 ', 下 游 引 物: 5 -' GT T GT AA T CGGCACCCAA GT C- 3', 扩 增 片 段: 380 bp; SREBP 1c 上游引物: 5-' GCCAT CGACT ACAT CCGCT T CT T- 3', 下游引 物: 5-' T GGGCT T T CACCT GGT T AT CCT C- 3', 扩增片段: 311 bp; B- actin 引 物 上 游: 5 -' CAT CACACT AT CGGCAA T GAG- 3', 引物下游: 5-' GACAGCA CT GT GT T GGCAT- 3', 扩增片段: 159 bp。 1. 3 大鼠 ALD 模型的建立 参考文献[ 10- 11] 及 本课题组既往 研究[ 2] 建立 A L D 模型。雄性 SD 大鼠灌服白酒- 玉米油- 吡唑混合液[ 其中56 b红星 二锅头 5 g/ ( kg # d) 、玉米油2 mL / ( kg # d) 、吡唑 27. 2 mg / ( kg # d) ] , 1 次/ d, 固定 在上午 8: 309: 00, 连续 14 周, 自 由饮水, 以普通 大鼠饲料喂
1 材料与方法
1. 1 实验动物 SD 大鼠 110 只, 清洁级, 雄性, 体重 210~ 230 g, 由上海斯莱克实验动物有限责
中国临床药理学与治疗学 2011 Feb; 16( 2)
任公司提供[ 许可证号: SCXK( 沪) 2003- 0003] , 饲 养于浙江中医药大学实验动物中心。 1. 2 主要药品与 试剂 56 b 红星二锅 头( 批号 2806011) 为北京红星股份有限公司出产; 玉米油 ( 批号 20060726) 为 上海嘉里食品工业有限公司 生产的金龙鱼牌; 吡唑( 批号 S33638- 316) 为 Sigm a 公司产品; 三七( 批号 060310) 产地云南, 由浙 江省中医院中药制剂室加工成 100 目的三七粉, 用蒸馏水配制成 12% 和 6% 的混悬液; 硫普罗宁 ( T io pronin, 商品名为凯西莱, 批号 060601) , 河 南省新谊药业股份有限公司产品。
# 149 #
养。 1. 4 动物分组及给药 110 只大鼠随机分为正 常组 30 只, 模型组 35 只, 三七高剂量组、三七低 剂量组和硫普罗宁组各 15 只; 正常组上午及下午 均灌服等容量的蒸馏水, 模型组造模同时每天下 午灌服等容量的蒸馏水, 三七高剂量组、低剂量组 造模 同 时 每 天下 午 分 别 灌 服 1. 2 g/ kg 体 重 和 0. 6 g/ kg 体重的三七混悬液, 硫普罗宁组在造模 的同时每天下 午灌服100 m g/ ( kg # d) 硫普罗宁 混悬液。实验开始后第 4 周、第 8 周末正常组分 别随机处死大鼠 10 只, 模型组分别随机处死大鼠 8 只; 实验第 14 周末处死剩余 所有大鼠; 实验期 间观察各组大鼠的一般情况。 1. 5 标本采集 末次给药后次日上午空腹处理 大鼠, 3% 戊巴比妥钠麻醉, 腹腔静脉取血, 分离血 清, 置于- 20 e 冰箱保存待用; 取肝右叶距边缘 1 cm处肝组织, 以 4% 多聚甲醛固定, 逐级酒精脱 水, 二甲苯透明, 石蜡包埋, 常规制备石蜡切片待 用。 1. 6 检测指标及方法 1. 6. 1 肝脏病理 常规 H E 染色及 Masson 三 色染 色观察肝组织脂肪变、炎症及纤维化程度。 病理诊断标准参考中华医学会肝病学分会脂肪肝 和酒精性肝病学组 2006 年 2 月修订的"酒精性肝 病诊疗指南"[ 1] 。M asson 染色判断标准: 胶原纤 维呈蓝色, 肌肉、弹力纤维呈红色, 纤维素呈紫红 色, 红细胞呈橘红色, 细胞核呈蓝褐色。 1. 6. 2 生化指标 肝功能( AL T 、AST ) 采用酶 法测定, 血脂 ( T G、CH OL、H DL- C、LDL- C) 采用 脂酶法测定; 检测肝组织 SREBP1c 及其下 游靶基因 ACS、FAS m RNA 表达 主要步骤如 下: ( 1) 总 RNA 提取( A xy Prep 总 RNA 小量制备 试剂盒) ; ( 2) 逆转录反 应( 采用 M- M LV 第一链 cDNA 合成试剂盒) : 用上述组织中提取的5 Lg总 RNA 在下述20 LL 反应体系中逆转录成 cDNA; ( 3) 取上述逆转录反应产物于 25 LL 反应体积中 进行 P CR 反 应; ( 4) 应用 BIO- RAD 凝胶成像图 像分析系统行吸光度扫描, SREBP1c、ACS、F AS mRNA 表达 的 相 对水 平 分 别 为 它们 与 B- actin mRNA 的比值。 1. 6. 4 免疫 组化二 步法检 测肝组 织 SREBP1c
中图分类号: R965. 1 文献标识码: A 文 章 编 号: 1009- 2501( 2011) 02- 0148- 07
酒精性 肝病 ( alcoholic liver disease, AL D) 是我国常见肝脏疾病之一, 严重危害人民健康, 但 除戒酒外尚缺乏理想的防治药物[ 1] 。我们已往进 行的研究[ 2- 4] 发现, 中药三七可通过抗氧化、抗炎 和改善肝脏微循环等机制有效防治 A LD 大鼠的 肝脂肪变。固醇调节元件结合蛋白 ( st erol regulat ory element binding prot ein, SREBP) 1c 是参 与脂代谢调控的主要核转录因子之一, 在非脂肪 组织的脂质积聚中起关键作用[ 5] ; 肝脏 SREBP1c 过表达是不同病因导致的肝脂肪变过程中的重要 分子事件[ 6- 9] , 在酒精摄入导致的脂肪肝中也起 重要作 用。 本研究 通过 观察 SREBP 1c 在 ALD 大鼠肝组织的表达及三七对其的影响, 进一步明 确三七防治 ALD 的作用机制。
1 浙江中医药大学, 杭州 310053, 浙江; 2 浙江中医药大学附属杭州第六医院, 杭州 310014, 浙江; 3 浙江中医药大学附属第一医院消化研究室, 杭州 310006, 浙江
摘要 目的: 观察三七对酒精性肝病 ( AL D) 大 鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白 ( SREBP) 1c 表 达的影响。方法: 110 只雄性 SD 大鼠随机分为 正常组 30 只, 模型组 35 只, 三七高、低剂量组和 硫普罗宁组各 15 只, 连续 14 周白酒- 玉米油- 吡 唑混合液灌胃建立 AL D 模型, 同时三七高、低剂 量组和硫普罗宁组分别灌服1. 2、0. 6 g/ ( kg # d) 的三七粉 及0. 1 g/ ( kg # d) 的 硫普 罗宁; 4 周、8 周、14 周分 别处死 正常 组大鼠 10 只, 模 型组 8 只; 14 周处死剩余大鼠。光镜观察 肝脂肪变、炎 症及 纤 维 化 程 度, RT- PCR 法 检 测 肝 组 织 SREBP 1c 及 其下 游靶 基因乙 酰辅 酶 A 合 成酶 ( ACS) 、脂肪酸合成酶( F AS) mRNA 表达, 免疫 组化法检测肝 组织 SREBP1c 蛋 白表达。结果: ( 1) 各时间点模型组大鼠肝组织脂肪变及炎症程 度计分较同期正常组明显增高( P < 0. 01) 。( 2) 正常组 大 鼠 肝 脏 可 见一 定 量 SREBP1c、ACS、 FAS m RNA 表达, 随时间延长模型组大鼠 3 个基 因的表达均逐步增加, 8 周、14 周时较正常组和模 型 4 周组明显增高( P< 0. 01或0. 05) 。( 3) 模型 8 周、14 周组较同期正常组肝组织 SREBP1c 表达 明显增高( P< 0. 01或0. 05) 。( 4) 三七高、低剂量 组及硫普罗宁组大鼠 14 周肝组织脂肪变及炎症 程度、肝脏 SREBP1c 蛋白以及 3 个目标基因的表 达均 较模型组 明显降低 ( P < 0. 01 或0. 05) 。结
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Chin J Clin P harmacol T her 2011 Feb; 16( 2)
蛋白表达 免疫组化结果均在同一条件的显微镜 下观察, SREBP 1c 阳性细胞表现为胞浆/ 胞核呈 棕黄色颗粒。着色细胞阳性范围: 无着色为 0 分, 着色阳性细胞小于 1/ 3 为 1 分, 着色阳性细胞 1/ 3~ 1/ 2 为 2 分, 着色阳性细胞> 1/ 2 为 3 分; 将每 张切片着色程度与着色细胞阳性范围得分各自相 加为其最后计分。 1. 7 统计学分析 采用 SPSS11. 5 软件进行统 计。计量指标采用单因素方差分析, 两两比较采 用 q 检验; 计数资料采用非参数秩和检验; 相关性 分析采用 Spearm an 相关分析。均以双侧水平 P < 0. 05为差异具有统计学意义。
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