几种常见荧光素极其特性介绍
有机荧光染料分子
有机荧光染料分子
有机荧光染料分子是一类能够产生荧光的化学结构,其中最常见的有机荧光染料分子包括偶氮染料、螺环芘、芴、喹啉、苯并二氮杂苯、铝酞菁等。
它们通过吸收光子能量后发生激发态跃迁,从而产生荧光,荧光的颜色和强度取决于染料分子的化学结构和环境。
偶氮染料是一类含有偶氮化合物的大分子结构的有机染料,具有特殊的色谱和光学性质。
其中最常见的是罗丹明B和甲基红等。
螺环芘是一种含有螺环结构的多环芳香族化合物,具有较强的光稳定性和发光强度,常用于生物荧光标记和光致变性材料。
芴、喹啉和苯并二氮杂苯等也是常见的有机荧光染料分子,具有不同的化学结构和光学性质,被广泛应用于传感器、荧光染料、荧光探针等领域。
铝酞菁是一类含有铝离子的酞菁类荧光染料分子,具有较强的光稳定性和发光强度,被广泛应用于荧光显微镜、分析化学等领域。
此外,还有许多其他种类的有机荧光染料分子,如杜邦染料、染料颜料等。
总之,有机荧光染料分子是一类功能多样、应用广泛的化学物质,已经成为现代生物医学、环境监测、光电器件等领域的重要工具和材料。
荧光素酶虫荧光素钾盐-概述说明以及解释
荧光素酶虫荧光素钾盐-概述说明以及解释1.引言1.1 概述:荧光素酶虫荧光素钾盐作为一种重要的生物标记物质,在生物学、医学和化学领域具有广泛的应用价值。
荧光素酶作为一种能够产生荧光的酶,在生物荧光成像和蛋白表达检测中起着至关重要的作用。
虫荧光素是荧光素酶所催化产生的产物,具有强烈的荧光特性,可用于研究生物体内的各种生理过程。
荧光素钾盐则是荧光素的一种盐类,其制备简便,具有良好的稳定性和荧光效率。
本文将介绍荧光素酶虫荧光素钾盐的相关特点和应用,对其在科研和生产中的重要性进行详细探讨。
1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三大部分。
在引言部分,将介绍荧光素酶虫荧光素钾盐的概述,文章的整体结构以及研究的目的。
在正文部分,将详细探讨荧光素酶的特点,虫荧光素在不同领域的应用以及荧光素钾盐的制备方法和性质。
最后,在结论部分,将总结荧光素酶虫荧光素钾盐在科研和应用中的重要性,展望未来可能的研究方向,并进行结束语的总结。
通过以上结构的安排,读者可以全面了解荧光素酶虫荧光素钾盐的相关知识,并对未来研究和应用提供一定的参考价值。
1.3 目的:本文旨在深入探讨荧光素酶虫荧光素钾盐的特性和应用,从荧光素酶的特点、虫荧光素的应用以及荧光素钾盐的制备与性质等方面进行详细介绍。
通过对这些内容的深入分析,旨在加深读者对该化合物的理解,为相关领域的研究工作提供重要参考。
同时,本文也旨在为未来研究方向提供一定的启示,推动荧光素酶虫荧光素钾盐在生物医学和生物化学领域的进一步应用和发展。
希望通过本文的撰写,能够为读者带来更全面的了解和认识,为相关研究工作的开展提供必要的支持和指导。
2.正文2.1 荧光素酶的特点荧光素酶是一种特殊的酶类,具有以下几个主要特点:1. 高灵敏度:荧光素酶在低浓度下也能够产生强烈的荧光信号,使其可以用来检测低浓度的物质。
2. 可定量检测:由于荧光素酶荧光信号与底物浓度成正比,因此可以通过测量荧光强度来定量分析其底物的含量。
常用神经示踪剂及其示踪特点
常用神经示踪剂及其示踪特点作者:朱贺李丽赵磊马克涛司军强【摘要】丰富的神经示踪技术极大的促进了神经解剖学的发展,为神经生物学的各种研究提供了良好基础,在此,我们概述了常用神经示踪剂及其示踪特点,重点介绍了各种荧光染料和植物凝集素IB4的示踪特点。
【关键词】神经示踪剂;辣根过氧化物酶;荧光染料;植物凝集素IB4;病毒自20世纪70年代初Kristenson首次将辣根过氧化物酶(HRP)应用于追踪神经纤维联系以来,该方面的研究取得了前所未有的迅猛发展。
此后,许多用途广泛、敏感性强并能选择性地进行顺行、逆行标记或同时具有顺、逆行标记的追踪物质被应用到神经纤维联系的研究,对神经解剖学的发展起到了积极的推动作用。
现就常用的神经示踪剂及其示踪特点综述如下:1辣根过氧化物酶1.1辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP) HRP 是一种含血红素基的植物糖蛋白。
HRP法是20世纪70年代发展并被广泛应用的一种神经追踪方法,但由于HRP显影需要许多复杂的免疫组织化学技术,而且HRP参与细胞代谢,不能在细胞内长期存留,易扩散到邻近组织造成神经元的误染,其反应产物较不稳定,易丢失,另外还存在“再摄取”现象[1],使得HRP在神经逆行示踪方面的应用大大减少。
1.2 霍乱毒素亚单位B结合的辣根过氧化物酶(CB HRP)R. N.Ranson等[2] 对传统的辣根过氧化物酶的染色方法进行了改进,采用结合了霍乱毒素亚单位B的辣根过氧化物酶(CB HRP)作为示踪剂,清晰显示了神经元的胞体和轴突结构。
近来也有采用四甲基联苯胺(TMB)为底物替代传统的二氨基联苯胺(DAB)来示踪豚鼠的面神经[3]的报道。
TMB与DAB相比有不致癌和HRP反应灵敏度高,操作简便,步骤少,用时短及成本低等诸多优点。
HRP法标记的神经元经组织化学法处理后,细胞失去了活性,无法进行膜片箝等神经电生理的研究,限制了HRP法在这一领域内的应用。
荧光染料分类
荧光染料:猝不及防的五大种类荧光染料是一类可以在紫外光或蓝光激发下发出明亮的颜色或光的化学染料,被广泛地应用于生命科学、材料科学、医学与环境监测等领域。
相较于传统染料,荧光染料有更亮、更稳定的发光效果,使得研究者们可以在实验中获得更精准的结果。
然而,由于类型繁多,新手常常会被五花八门的荧光染料种类搞得晕头转向。
今天,让我们来剖析一下荧光染料的五大种类,帮助大家猝不及防地选出最适合自己实验的染料吧!一、荧光普通染料荧光普通染料是最常见的一种荧光染料,通常在化学与生命科学领域广泛使用。
其发射的荧光主要由它们的分子中的芳香环基团产生,因此常常被用于荧光免疫分析、免疫印迹和荧光染色等。
二、pH指示荧光染料pH指示荧光染料可以根据生物体液中的pH值发出不同颜色的荧光信号,因此在生物医学研究和医学诊断中得到广泛应用。
它们的收集窗口位于甲酰胺或亚胺键附近,pH的变化会导致该结构的变化,进而使荧光性质发生改变。
三、光动力学荧光染料光动力学荧光染料可以用于癌症治疗,这些染料在光照下能够被物质所激发,并且会发出特定的荧光信号。
在照射后,它们可以通过生物体的普通代谢途径排出体外。
四、DNA标记荧光染料DNA标记荧光染料可以和目标DNA结合,形成稳定的复合物,并且以稳定的荧光信号显示出来。
因此,用于 DNA 的荧光标记,是基因克隆、PCR体外扩增和原位杂交等领域的常用手段。
五、光谱比对荧光染料光谱比对荧光染料可以根据染料的反应性和化学性质发出多个波长的荧光信号,并且可以与其他荧光染料进行配对,以增加其特异性。
因此,在分析和鉴定复杂混合物的时候,经常会使用光谱比对荧光染料。
总之,在选择荧光染料的时候,需要根据实验需求、染色失真、照射条件、荧光信号等方面进行考虑。
希望以上五大种荧光染料的分类,能够帮助大家在实验中更好地选择染料,并取得更精准的实验结果。
常见荧光染料及用途
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光,并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛,涵盖了许多领域,例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR):墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料,常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号,从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB):罗丹明B是一种红色荧光染料,广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合,以显示细胞和组织的结构,帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG):草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料,主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用,可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110):罗丹明110是一种黄绿色荧光染料,常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合,罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况,特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC):荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料,常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合,在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种,它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步,新型的荧光染料不断问世,为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用,科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境,进一步推动科学的发展。
干货满满!荧光染料大总结!
干货满满!荧光染料大总结!荧光显微镜技术的基本原理是借助荧光剂让细胞成分呈现高度具体的可视化效果,比如在目的蛋白后面连一个通用的荧光蛋白—GFP。
在组织样本中,目的基因无法进行克隆,则需要用免疫荧光染色等其他技术手段来观察目的蛋白。
为此,就需要利用抗体,这些抗体连接各种不同的荧光染料,直接或间接地与相应的靶结构相结合。
此外,借助荧光染料,荧光显微镜技术不只局限于蛋白质,它还可以对核酸、聚糖等其他结构进行染色,即便钙离子等非生物物质也可以检测出来。
本文就对几种常用的荧光剂进行了具体的介绍。
免疫荧光 (IF)在荧光显微镜技术中,可以通过两种方式观察到你的目的蛋白:利用内源荧光信号,即通过克隆手段,用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连;或利用荧光标记的抗体特异性结合目的蛋白。
有些生物学问题采用第二种方法会更有用或更有必要。
比如,组织学样品无法使用荧光蛋白,因为通常来说,标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取。
此外,当有一个有功能的抗体可用时,免疫荧光法会比荧光蛋白技术快很多,因为后者必须先克隆目的基因再将DNA转染到适当的细胞中。
荧光蛋白的另一项劣势在于其本身属于蛋白质。
因此,细胞内的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性,其会导致附着的目的蛋白质发生功能紊乱或出现误释的情况。
然而,荧光蛋白技术仍然是观察活细胞的首选方法。
免疫荧光法利用了抗体可以和相应抗原特异性结合的这个特性,对此它还有两种不同的表现形式。
最简单的方式是使用可与目的蛋白相结合的荧光标记抗体。
这种方法被称为“直接免疫荧光法”。
在很多情况下,我们可以利用两种不同特性的抗体。
第一种抗体可以结合目的蛋白,但其本身并未进行荧光标记(一抗)。
第二种抗体本身就携带荧光染料(二抗),并且可以特异性结合一抗。
这种方法被称为“间接免疫荧光法”。
这种方法存在诸多优势。
一方面,它会产生放大效应,因为不只一个二抗可以与一抗相结合。
另一方面,没有必要始终用荧光染料标记目的蛋白的每个抗体,但可以使用市售荧光标记的二抗。
荧光染料的特性及应用简介
2.荧光染料
荧光染料是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长 大于吸收光的光波的物质,更具体地说,当荧光染料吸收来 自光源的光时,它们被暂时激发(能量增加的状态),然后以 光的形式发射能量以恢复到基态。这种发射的光可以被收集 和识别,使研究人员能够通过发射光的波长识别他们看到的 荧光染料。
选择荧光素(染料)的原则
W
① 尽量选择一些可以应用于所拥有的流式细胞
仪而又亮度高的荧光素。例如PE,作为最亮
的荧光素而被首选。但如果所用的细胞样本
D
具有很强的自发荧光时,不推荐用PE;此时可
以选择APC,也能产生最亮的荧光。荧光素
的强弱用染色指数(stain index)(右图) 来判断,
指的是阳性群峰值与阴性群峰值的差别与阴
5. 7- AAD 最大发射波长为647nm,大部分仪器是在FL3通道检测,可用于鉴别死、 活细胞。
6. 别藻青蛋白(APC ) 最大发射波长为660nm,一般在流式细胞仪的FL4通道检 测;其标记的抗体使用与所有配备氦氖激光器的FCM。
用于标记抗体的理想荧光染料应满足一下要求:
① 具有高的光子产量,信号强度高 ② 对激发光有较强的吸收,降低背景信号 ③ 激发光谱和发射光谱之间距离较大,减少背景信号的干扰 ④ 易于被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物的特异性 ⑤ 稳定性好,不易受光、温度、标本抗凝剂和固定剂等的影响
荧光染料的特性及应用简介
● 荧光染料是流式实验中的重要组成部分之一, 使用荧光染料标记的抗体被广泛应用于免疫学实验 中,包括检测细胞或颗粒表面的特定抗原、细胞表 型和功能分析等,荧光染料工作原理是发出荧光, 接下来,将和大家从四方面分享荧光染料的知识。
常用荧光 波长
常用荧光波长
荧光是一种物质在受到激发后发出的可见光,常用荧光波长包括蓝色、绿色、黄色和红色。
本文将从这四个方面介绍常用荧光的特点和应用。
一、蓝色荧光
蓝色荧光的波长一般在400-500纳米之间。
在日常生活中,我们经常接触到蓝色荧光的物品,比如保健品中的荧光染料和荧光笔。
此外,蓝色荧光还被广泛应用于科学研究领域,如细胞和分子生物学研究中的荧光探针。
二、绿色荧光
绿色荧光的波长一般在500-600纳米之间。
绿色荧光在荧光显微镜、荧光指示剂和荧光染料中得到了广泛的应用。
荧光显微镜利用绿色荧光染料的特性,可以在细胞和组织水平上观察生物分子的运动和相互作用。
此外,绿色荧光还被用于生物医学领域的分子标记和荧光成像。
三、黄色荧光
黄色荧光的波长一般在550-600纳米之间。
黄色荧光的应用范围非常广泛,包括荧光灯、液晶显示器和荧光染料等。
黄色荧光的特点是亮度高、稳定性好和发光时间长,因此在照明和显示领域有着重要的应用。
四、红色荧光
红色荧光的波长一般在600-700纳米之间。
红色荧光具有较长的波长,因此在光学成像和生物医学领域有着广泛的应用。
红色荧光染料可以用于标记生物样品中的特定分子,通过荧光显微镜观察其分布和变化。
此外,红色荧光还被用于红外线光学成像和光学通信等领域。
总结起来,常用荧光波长包括蓝色、绿色、黄色和红色。
这些荧光的特点和应用各不相同,但都在科学研究、生物医学和光学领域发挥着重要的作用。
通过研究和应用这些荧光,我们可以更好地理解和探索自然界的奥秘,并为人类的生活和健康提供更多的可能性。
常用荧光染料的激发和发射波长
常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料广泛应用于生物医学、材料科学、光电子学等领域,其特点是在受到激发后会发出可见光,具有较高的荧光量子产率和灵敏度。
在实际应用中,荧光染料的激发和发射波长显得尤为重要,因此本文将整理常用荧光染料的激发和发射波长,方便读者在实验或研究中的选择。
常用荧光染料1. FITC (荧光同型素-异硫氰酸酯)FITC是一种广泛应用于生物学实验的荧光染料,常用于标记蛋白质、抗体、药物等分子,其最大吸收波长和最大发射波长分别为495 nm和519 nm。
FITC的分子量小,荧光量子产率高,这使得它成为一种理想的荧光标记分子。
2. Rhodamine 123Rhodamine 123是一种阳离子荧光染料,可在细胞中标记线粒体,同时也可在许多生物学应用中标定其他细胞器。
Rhodamine 123的最大吸收波长和最大发射波长分别为507 nm和529 nm,其荧光量子产率高,荧光亮度高。
3. Texas RedTexas Red是一种常用的激发波长长达596 nm的荧光染料,在荧光共振能量转移等实验中被广泛应用。
Texas Red的最大发射波长在610 nm左右,其在荧光共振能量转移实验中能够提供强烈的荧光标记。
4. PE (腺苷酸酰基酯)PE是一种被广泛用于流式细胞仪实验中的荧光染料,其最大激发波长为488 nm,最大发射波长在575 nm左右。
PE作为一种非常亮的荧光染料,可用于标记和鉴定特定类型的细胞。
荧光染料的选择在实验或研究中,需要根据具体的情况选择合适的荧光染料。
对于激发波长和发射波长的选择,一些因素应该被考虑,如:•研究对象的荧光信号贡献;•其他染料的交叉激发和发射波长;•激发和发射波长的设备可用范围。
一般来说,应选择滤光片相对集中并且有较高吸收的荧光染料,以确保设备需要的能量和检测返回信号的量达到最大程度。
总结本文简要介绍了几种常用的荧光染料及其特性,这些荧光染料可以分别从不同角度用于生物学、光学、材料学等领域的研究和实验中。
生物荧光染料波长
生物荧光染料波长荧光染料是一种能够吸收特定波长的光并发射出不同波长的光的化合物。
它们在生物科学研究、医学诊断、药物开发等领域中起着重要作用。
本文将介绍几种常见的生物荧光染料及其波长特性。
一、荧光染料的波长定义荧光染料的波长通常由其吸收峰和发射峰决定。
吸收峰是指荧光染料能够吸收的最大波长,而发射峰则是指荧光染料在受到激发后发射的最大波长。
二、常见的荧光染料及其波长特性1. Alexa Fluor 488(波长:495 nm/519 nm)Alexa Fluor 488是一种常用的荧光染料,其吸收峰位于495 nm,发射峰位于519 nm。
它在细胞免疫荧光染色、蛋白质定位研究等方面广泛应用。
2. Cy3(波长:550 nm/570 nm)Cy3是一种红色荧光染料,其吸收峰位于550 nm,发射峰位于570 nm。
它常用于DNA、RNA等核酸的荧光标记,也可用于蛋白质荧光标记。
3. Texas Red(波长:595 nm/615 nm)Texas Red是一种红色荧光染料,其吸收峰位于595 nm,发射峰位于615 nm。
它在细胞荧光染色、分子探针等方面有广泛应用,常用于免疫荧光标记和显微镜观察。
4. FITC(波长:492 nm/520 nm)FITC是一种绿色荧光染料,其吸收峰位于492 nm,发射峰位于520 nm。
它常用于细胞免疫荧光染色、蛋白质标记等研究中。
5. Rhodamine B(波长:554 nm/576 nm)Rhodamine B是一种橙红色荧光染料,其吸收峰位于554 nm,发射峰位于576 nm。
它在细胞荧光染色、荧光显微镜观察等方面有广泛应用。
6. DAPI(波长:358 nm/461 nm)DAPI是一种蓝色荧光染料,其吸收峰位于358 nm,发射峰位于461 nm。
它可用于染色体核型分析、细胞核染色等。
三、荧光染料的应用领域荧光染料在生物科学领域中有着广泛的应用。
它们可以被用于细胞荧光染色、蛋白质定位、基因表达分析、药物荧光标记等方面。
2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯摩尔质量
2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯,化学式为C20H12Cl2O5,是一种有机化合物,具有许多重要的应用价值。
本文将从其摩尔质量角度出发,探讨该化合物的基本性质及其在各个领域的应用。
1. 基本性质2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯的摩尔质量为392.21克/摩尔。
它是一种白色固体,在常温常压下稳定。
该化合物在水中微溶,在有机溶剂中溶解度较好。
其熔点约为250摄氏度,沸点约为540摄氏度。
在常规环境下,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯具有良好的稳定性和化学惰性。
2. 应用价值2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯作为一种重要的有机化合物,具有广泛的应用价值。
在生物化学研究领域,该化合物常用于荧光染色标记,用于研究生物分子的结构和功能。
在医学诊断领域,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯可用于荧光显微镜检测细胞和组织,对于癌细胞的识别和定位具有重要作用。
在材料科学领域,该化合物可用作光敏染料,用于制备光电子器件和光化学传感器。
在环境保护领域,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯可用作环境监测的荧光标记物,用于水质和大气污染物的检测和监测。
3. 合成方法目前,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯的合成方法主要有两种:一种是通过对二氢荧光素进行氯化反应,然后与乙酸酐进行酯化反应得到产物;另一种是通过对荧光素进行二氯化反应,然后与乙酸进行酯化反应合成目标产物。
这两种合成方法均能高效、高产地制备2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯。
4. 安全性及环境影响2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯作为一种化学物质,其安全性和环境影响备受关注。
在使用过程中,需要严格遵守相关化学品安全操作规程,并采取必要的防护措施,以避免对人身健康和环境造成潜在危害。
在生产和使用过程中需要加强废弃物处理及污染物排放的监测和治理,以减少对环境的不利影响。
常用荧光基团的名称及颜色
常用荧光基团的名称及颜色
荧光基团是一类能够在紫外或可见光激发下发射荧光的化学基团。
以下是一些常用的荧光基团及其典型的荧光颜色:
荧光素(Fluorescein):激发波长约为494纳米,发射波长约为521纳米,呈现黄绿色荧光。
罗丹明B(Rhodamine B):激发波长约为540纳米,发射波长约为625纳米,呈现红色荧光。
荧光染料Cy5:激发波长约为650纳米,发射波长约为670纳米,呈现红色荧光。
荧光染料Cy3:激发波长约为550纳米,发射波长约为570纳米,呈现橙红色荧光。
亚甲基蓝(Methylene Blue):激发波长约为664纳米,发射波长约为690纳米,呈现红色荧光。
荧光素-5-异硫氰酸酯(FITC,Fluorescein Isothiocyanate):激发波长约为495纳米,发射波长约为520纳米,呈现黄绿色荧光。
吲哚橙(Acridine Orange):激发波长约为502纳米,发射波长约为525纳米,呈现橙黄色荧光。
荧光素-5-醋酸酯(CFSE,Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester):激发波长约为488纳米,发射波长约为520纳米,呈现黄绿色荧光。
这些荧光基团被广泛应用于生物医学、生物化学和材料科学等领域,用于标记和追踪生物分子,以及在荧光显微镜等技术中应用。
值得注意的是,荧光颜色可能因化合物的环境和浓度而有所变化。
1。
主要荧光素一览表
(1)荧光素类Fluorescein标准荧光素(Reference standard)之一,在其基础上进行结构改造,可产生一系列荧光素衍生物。
Fluorescein适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,有相对高的荧光吸收,较好的荧光产率以及良好的水溶性。
标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。
与其他荧光素类衍生物一样,Fluorescein具有光淬灭率高,pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。
主要应用于聚焦激光扫描微阵列(Confocal laser scanning microscopy)和流式细胞计应用(Flow cytometry)。
FITC异硫氰酸荧光素,Fluorescein isothiocyanate,是荧光素衍生物的一种,5-FITC较6-FITC更经常使用。
FITC的异硫氰酸基能与氨基反应,可用于标记氨基修饰DNA,一旦形成,产物极为稳定。
适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,Abs/Em=492/519nm(pH=9.0)。
与蛋白的结合力也强。
FITC具有荧光素衍生物的普遍特性。
在水中易变坏,不能长久保存。
FITC-Oligo 广泛用于杂交探针;FITC-多肽用于Edman降解蛋白测序;FITC也经常被用于蛋白电泳检测(即使是毛细管电泳)和荧光能量激发转移测试。
FAM羧基荧光素,Carboxyfluorescein,是荧光素衍生物的一种,5-FAM较6-FAM更经常使用。
Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester,即5-FAM(NHS)广泛存在于荧光标记试剂盒。
与FITC相比,FAM与氨基反应更快,产物也更稳定,但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。
FAM也适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,Abs/Em=492/518nm(pH=9.0),具有荧光素衍生物的普遍特性,在水中稳定。
5-FAM主要应用于DNA自动测序中,标记其中的d/ddCTP(PE公司),也经常用于PCR产物定量,核酸探针等。
荧光染料的分类与介绍
荧光染料分类荧光染料是在荧光剂的帮助下对细胞成分进行高度特异性的可视化。
可以是一种荧光蛋白、例如 GFP在基因上与感兴趣的蛋白质相关联。
接下来,新研博美的小编带大家了解一下我们公司荧光染料的分类。
一、花菁染料1、Cyanines(Cyanine dyes花菁染料)花青素(Cyanines)是在两个具有离域电荷的氮原子之间含有聚甲炔桥的分子:花青素(Cyanines)染料主要用于通过光学方法监测细胞、细胞器和囊泡中的膜电位差。
用于通过光学方法监测细胞、细胞器和囊泡中的膜电位差。
这些对电位敏感的染料在分子结构、电荷和通过膜的渗透性方面有所不同。
根据染料的不同,涉及到与膜的电位依赖性结合以及二聚体和更高聚集体的形成。
花菁染料有两种:非磺化花菁和磺化花菁。
对于许多应用,它们是可互换的,因为它们的光谱特性几乎相同。
磺化和非磺化染料均可用于标记生物分子,例如DNA和蛋白质。
染料之间的区别在于它们的溶解度:硫化染料是水溶性的,并且它们在水性环境中不使用有机助溶剂进行标记。
它们不易在水中聚集。
在某些情况下,需要使用一种类型的花菁。
非磺化花菁染料Cyanine3 NHS esterCyanine3.5 carboxylic acidCyanine5 azideCyanine5.5 hydrazideCyanine7 amineCyanine7.5 tetrazine磺化花菁染料sulfo-Cyanine3 DBCOSulfo-Cyanine3.5 alkyneSulfo-Cyanine5 NHS esterSulfo-Cyanine5.5 azideSulfo-Cyanine7 maleimideSulfo-Cyanine7.5 carboxylic acid2、ICG吲哚菁绿Indocyanine Green,ICG,吲哚菁绿CAS:3599-32-4是一种三碳菁染料,具有良好的水溶性,分子量为775,吲哚菁绿完全可以在血浆和全血液中几乎完全与血浆蛋白结合,可以保证其几乎完全留在血管中,不易向外扩散,因此被作为一种常用的血管造影剂使用。
常用的荧光素及荧光颜色
常用的荧光素及荧光颜色
荧光素是一类把电磁能转化为可见光的物质,其中常用的荧光素
有荧光粉、荧光染料和发光二极管。
它们具有可观察的荧光光谱,能
够把紫外线的能量转换成不同的荧光颜色。
荧光粉通常可以在室温下发出蓝、紫、青、绿等光谱发射,并且
有明显的荧光颜色。
它可以应用在涂料、油漆、塑料、纸品等生活物
品的色彩表示中。
常用的荧光粉颜色有白、黄、红、绿、蓝等。
荧光染料可以分为两类,N滤渣和N染渣,可以根据紫外照射波长,发射不同颜色的光谱。
其中常用的荧光染料有赤红、金黄、湖蓝等,这些都有荧光颜色的发散。
发光二极管技术已经在展示产品的色彩表示中得到了广泛的应用,发光二极管有多种颜色,红、黄、绿、蓝等,都有不同的发光色,可
以构成明确的色彩形状,为场景表现更加生动有趣。
总之,荧光素作为一种能把电磁波转换成可见光的物质,具有不
同的荧光颜色发射,可以用来制作涂料、染料、发光二极管等,能够
把物体非常生动形象地展示出来。
主要荧光素一览表
(1)荧光素类Fluorescein标准荧光素(Reference standard)之一,在其基础上进行结构改造,可产生一系列荧光素衍生物。
Fluorescein适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,有相对高的荧光吸收,较好的荧光产率以及良好的水溶性。
标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。
与其他荧光素类衍生物一样,Fluorescein具有光淬灭率高,pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。
主要应用于聚焦激光扫描微阵列(Confocal laser scanning microscopy)和流式细胞计应用(Flow cytometry)。
FITC异硫氰酸荧光素,Fluorescein isothiocyanate,是荧光素衍生物的一种,5-FITC较6-FITC更经常使用。
FITC的异硫氰酸基能与氨基反应,可用于标记氨基修饰DNA,一旦形成,产物极为稳定。
适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,Abs/Em=492/519nm(pH=9.0)。
与蛋白的结合力也强。
FITC具有荧光素衍生物的普遍特性。
在水中易变坏,不能长久保存。
FITC-Oligo 广泛用于杂交探针;FITC-多肽用于Edman降解蛋白测序;FITC也经常被用于蛋白电泳检测(即使是毛细管电泳)和荧光能量激发转移测试。
FAM羧基荧光素,Carboxyfluorescein,是荧光素衍生物的一种,5-FAM较6-FAM更经常使用。
Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester,即5-FAM(NHS)广泛存在于荧光标记试剂盒。
与FITC相比,FAM与氨基反应更快,产物也更稳定,但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。
FAM也适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线,Abs/Em=492/518nm(pH=9.0),具有荧光素衍生物的普遍特性,在水中稳定。
5-FAM主要应用于DNA自动测序中,标记其中的d/ddCTP(PE公司),也经常用于PCR产物定量,核酸探针等。
【技术资料】多色流式实验荧光素的选择
【技术资料】多⾊流式实验荧光素的选择近⼗年来流式细胞仪已经成为临床医⽣、免疫学家和细胞⽣物学家必不可少的⼯具,这项技术在不断进步。
流式细胞仪的多参数细胞分析这⼀独特的功能让⼤多数细胞分析成为了可能。
Coon⾸先提出了荧光抗体标记细胞内的⽬的蛋⽩技术,在20世纪80年代,细胞亚群仅仅通过检测单⼀的细胞表⾯标志物来确定,使⽤的单抗和荧光素很受限制。
基因表达技术的诞⽣和新的单抗以及荧光素的获得使更复杂的多参数分析成为可能。
1. 常⽤荧光素的种类及特性1). FITC(Fluorescein)⼜称异硫氰酸荧光素,其标记的抗体适⽤于所有配备488nm氩离⼦激光器的流式细胞仪;FITC的最⼤发射波长为525nm,在流式细胞仪的FL1通道检测。
2). PE(R-Phycoerythrin)⼜称藻红蛋⽩,有R-PE和RD1的别称,其标记的抗体适⽤于所有配备488nm氩离⼦激光器的流式细胞仪;PE的最⼤发射波长为575nm,在流式细胞仪的FL2通道检测。
3). PE-TR(PE-TexasRed)/ECDPE-TR⼜名ECD,是由PE和TexasRed(TR)组合⽽成的Tandem荧光素;其标记的抗体适⽤于所有配备488nm氩离⼦激光器的流式细胞仪;PE-TR的最⼤发射波长为615nm,在流式细胞仪的FL3通道检测;PE-TR标记的抗体可⽤于毫⽡级激光器的⼩流式细胞仪,也适⽤于配备有全功率激光器的⼤流式分选仪。
4). PI(PropidiumIodide)⼜称碘化丙啶,其标记的抗体适⽤于所有配备488nm氩离⼦激光器的流式细胞仪;PI的最⼤发射波长为617nm。
在流式细胞仪的FL3通道检测。
5). PE-Cy5(TRI-COLOR,TC)⼜称TRI-COLOR或TC,是由PE和Cy5组合⽽成的Tandem荧光素;其标记的抗体适⽤于所有配备488nm氩离⼦激光器的流式细胞仪;PE-Cy5的最⼤发射波长为670nm,在流式细胞仪上⽤FL3通道检测;PE-Cy5标记的抗体可⽤于毫⽡级激光器的⼩流式细胞仪,也适⽤于配备有全功率激光器的⼤流式分选仪。
5-羧基荧光素的检测方法
5-羧基荧光素的检测方法5-羧基荧光素(5-Carboxyfluorescein)是一种常用的荧光染料,广泛应用于生物医学研究、分子生物学和细胞生物学等领域。
本文将介绍5-羧基荧光素的检测方法及其在科学研究和应用中的重要性。
一、5-羧基荧光素的特性5-羧基荧光素是一种强荧光染料,具有较高的荧光量子产率和稳定性。
它在激发光源的作用下会发出明亮的绿色荧光。
5-羧基荧光素的化学结构中含有羧基,使其具有良好的水溶性,可方便地与生物分子进行偶联反应。
1. 荧光显微镜观察5-羧基荧光素可被荧光显微镜直接观察。
将待检样品中的5-羧基荧光素标记物染色后,使用荧光显微镜观察样品的荧光强度和分布情况,可以快速获得关于样品结构、功能和定位等信息。
2. 荧光光谱分析5-羧基荧光素的荧光光谱可用于定量分析。
通过测量5-羧基荧光素在特定波长下的发射光谱,可以确定其浓度和纯度。
同时,荧光光谱还可以用于研究5-羧基荧光素与其他分子之间的相互作用,如荧光共振能量转移(FRET)等。
3. 荧光强度测定荧光强度测定是常用的5-羧基荧光素检测方法之一。
通过测量5-羧基荧光素在特定波长下的荧光强度,可以定量获得样品中5-羧基荧光素的含量。
这种方法简单、灵敏,可以应用于生物样品中5-羧基荧光素的定量分析。
4. 荧光染色技术5-羧基荧光素可作为荧光染料用于标记生物分子。
通过与其他分子或材料的偶联反应,可以将5-羧基荧光素引入到待检样品中,实现对目标分子的定位和可视化观察。
荧光染色技术广泛应用于细胞生物学、分子生物学和生物医学研究中。
三、5-羧基荧光素的应用1. 生物成像5-羧基荧光素作为一种优秀的荧光染料,可用于生物样品的成像研究。
通过将5-羧基荧光素标记于生物分子或细胞上,可以实现对生物过程和细胞内分子的实时观察和定量分析,为生物学研究提供了重要的工具。
2. 分子探针5-羧基荧光素还可用作分子探针,用于检测生物样品中特定分子的存在和活性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
荧光素(英语:Fluorescein,又称为荧光黄)是一种合成有机化合物,它是具有光致荧光特性的染料,外观为暗橙色/红色粉末,可溶于乙醇,微溶于水,在蓝光或紫外线照射下,发出绿色荧光。荧光染料种类很多,目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种:异硫氰酸荧光素,四乙基罗丹明,四甲基异硫氰酸罗丹明,酶作用后产生荧光的物质。目前荧光素广发应用在免疫荧光、免疫荧光染色实验中。
4、其它荧光素
单激光束三色荧光分析时,要求单激光激发,所选择的三种荧光素的发射光波长应该有所不同。除FITC(发射绿光)、PE(发射橙光)外,还应选择发射红光或深红光的藻红蛋白-花青素(phycoerythrin and cyanidinPC5)、叶绿素蛋白(peridinin chorophyll protein,PerCP)或藻红蛋白-德克萨斯红(phycoerythrin and Texas Red tandem,ECD)。因为这些荧光素在受到488nm的蓝光激发CD是由在空间结构上互补的两个荧光素分子通过共价键结合而成,组成一个荧光分子。PC5由PE和cyanidin 5组成,ECD由PE和Texas Red组成。他们前一个分子的发射光波谱与后一个分子的激发光波谱相重合,这样,当前一个分子受激光激发后,产生的发射光可直接激发后一个分子,最后由后一个分子的发射光体现出整个组合的荧光特性。因此,此组成上说是两个分子,但表现为一个分子的物理性质。
(2)PerCP是从一种生活于深海区域的鞭毛虫中发现的色素,其功能为将可渗透入深海的落光传递至鞭毛虫的叶绿素发色基团,进而发出红光。需注意的是PerCP为单个分子。
(3)别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)和花青素5(cyanidin 5,Cy5)这两种荧光素的激发光波长要求在630nm左右,需第二根激光来激发。
3、PI和EB。两者都具有嵌入到双链DNA和RNA的碱基对中并与碱基对结合的特异性。为了获得特异的DNA分布,染色前必须用RNA酶处理细胞,排除双链RNA的干扰。
PI和EB不能进入完整的细胞膜,因此,又可以用于检测死活细胞。PI和EB各种理化性质相似,但PI比EB的发射光光谱峰向长波方向移动,因而在做DNA和蛋白质双参数测量时,PI的红色荧光和FITC的绿色荧光更易于区分和测量。另外,PI比EB测得的DNA分布的变异系统(CV值)低,所以PI得到更广泛的应用。
2、藻红蛋白,简称“PE”。相对分子质量较大,约为240kD,最大吸收峰为564nm,当使用488nm激光激发时其发射荧光峰值约为576nm,故可能会对其它大探针产生空间位阻。
但PE的化学结构非常稳定,有很高的荧光效率,并易与抗体分子结合。需要注意的是PE作为天然染料,因来源不同可能造成荧光素结构上的微小差别,导致其特征的不一致。
下面介绍几种常用荧光素及其基本生物学特性:
1、异硫氰酸荧光素,简称“FITC”。是一种小分子荧光素,其效率取决于于溶液的pH值,因此,在使用FITC时应注意溶液的酸碱度。FITC分子量为389.4,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。
FITC在冷暗干燥处可保存多年,是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感,通常切片标本中的绿色荧光少于红色。