CCK8试剂盒说明书
CCK8试剂盒说明书
Cell Counting Kit（CCK试剂盒）产品简介：Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较：CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）二、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。
2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
人胆囊收缩素8(CCK-8)ELISA试剂盒说明书
人胆囊收缩素8(CCK-8)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中胆囊收缩素8(CCK-8)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胆囊收缩素8(CCK-8)水平。
用纯化的人胆囊收缩素8(CCK-8)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胆囊收缩素8(CCK-8)，再与HRP标记的胆囊收缩素8(CCK-8)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胆囊收缩素8(CCK-8)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胆囊收缩素8(CCK-8)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
CCK-8的步骤
人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）ELISA试剂盒说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中CCK-8含量。
实验原理用纯化的CCK-8抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的CCK-8抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CCK-8呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。
每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50 pmol/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成50 pmol/L，25 pmol/L，12.5 pmol/L，6.25 pmol/L，3.12 pmol/L，1.56 pmol/L，0.78 pmol/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 pmol/L。
如配制25 pmol/L 标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）50 pmol/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、样品稀释液：1×20ml。
4、检测稀释液A：1×10ml。
5、检测稀释液B：1×10ml。
6、检测溶液A：1×120 /瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100 /孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。
7、检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。
PH0534 CCK8试剂盒操作手册
注 4: 细胞的种类不一样，形成的 Formazan 的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成 的 Formazan 很少，需要较长的显色时间（5-6 小时）。 注 5: 如果颜色不均匀的话，可以轻轻敲击培养板以混匀。 注 6: 建议采用双波长进行测定，检测波长 450-490nm，参比波长 600-650nm。
■ Q & A（常见问题与解答）：
Q1.设定参比波长的目的是什么？必须要设定吗？ A1.不一定要设定。 CCK 试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。 Q2.如何设定空白对照？ A2.可以在不含细胞，含有药物的培养基中加 CCK，测定 450nm 的吸光度最为空白对照。 Q3.在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
1
参考图 1
★简单！安全！重现性好！ 无需有机溶剂和放射性同位素，步骤少，无损失，结果准确
CCK 法
还原后的 Formazan 是水溶性的
1
（不需要溶解）
2
重现性好
3
操作简单
4
测定波长：450～490nm
5
为 1 瓶溶液，无需预制，即开即用
MTT 法 还原后的 Formazan 是非水溶性的
（需要加有机溶剂溶解） 重复性差 操作繁琐
Q4.不更换培养基加 CCK 试剂，有没有问题？ A4.一般没有问题。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其他培养基。我们发现以下培养基会影响测 定：
培养基
空白吸收
IMDM
1.0
McCoy/s
0.3
Q5.哪些物质会影响 CCK 的测定？ A5.当有还原性物质存在时会影响 CCK 的测定，增加 OD 值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小 OD 值；在有酚红存在 的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可；血清不影响测定。
cck8说明
试剂盒的储存及有效期
所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检 测溶液 A 以及 96 孔板保存于-20 。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20 ，避 免潮湿。有效期为 6 个月。
实验原理
本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。用纯化的抗体包被
微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中同时加入酶标的抗原和待测抗原，被测抗原 与酶标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过 氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高， 标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品 中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
TMB底物
1 × 9ml
浓洗涤液(30 x)
1 × 20ml
试剂名称 96孔板覆膜 标准品稀释液 检测稀释液A(2 x) 检测稀释液B(2 x) 终止液 使用说明书
数量 4 1 × 20ml 1 × 6ml 1 × 6ml 1 × 6ml 1
本试剂盒未提供但需自备的设备及试剂
1、450±10nm 滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道和多道微量加液器及吸头 3、稀释样品的 EP 管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器
(完整word版)CCK8试剂盒说明书
Cell Counting Kit（CCK试剂盒）产品简介：Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2—(2—甲氧基-4-硝苯基)-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯)—2H—四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较:途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明:一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞.2、按比例（例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3—5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）二、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。
2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1—4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL0.1M的HCL溶液或者1％ w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化.三、细胞增值—毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5％ CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
CCK8试剂盒说明书
C C K8试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1Cell Counting Kit（CCK试剂盒）产品简介：Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较：CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）二、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。
2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
cck8中文说明书资料
cck8中文说明书资料CCK8试剂盒是用于检测细胞增殖、细胞毒性、药物敏感性等实验中常用的试剂盒之一。
下面是一份详细的CCK8中文说明书资料，包含了这个试剂盒的简介、使用方法、注意事项、贮藏条件及生产厂家信息等内容。
一、CCK8试剂盒简介CCK8试剂盒是一种方便快捷的细胞增殖、细胞毒性、药物敏感性等实验的检测试剂盒。
它是一种基于WST-8[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(4-二甲基氨基甲基)-2H-四唑单钠盐]的细胞增殖检测试剂盒。
该试剂盒使用简单，灵敏度高，结果准确可靠，被广泛应用于各种体外细胞学实验中。
二、CCK8试剂盒使用方法1.准备细胞：根据常规细胞培养方法准备好所需细胞。
2.准备试剂：将CCK8试剂从冰箱中取出，室温下平衡至室温。
3.制作标准曲线：根据需要用无血清培养基将CCK8标准品稀释成不同的浓度，然后加入96孔板中，加入100μl/孔。
将不同浓度的标准品分别加入3个复孔中，并设置空白对照。
4.加入细胞：将准备好的细胞悬液加入96孔板中，加入100μl/孔。
5.孵育：将96孔板放入细胞培养箱中孵育适当时间（根据实验需求而定），一般孵育时间为1~4小时。
6.检测：将96孔板取出，加入终止剂，轻轻混匀后，在酶标仪上检测450nm处的吸光度。
7.计算：根据所测吸光度值，使用标准曲线计算出相应的细胞浓度。
三、注意事项K8试剂盒应存放在避光、干燥、阴凉处，避免阳光直射。
2.试剂盒中的各组分应严格按照说明书中的要求进行配制和储存，避免产生误差。
3.实验操作过程中应避免试剂污染，以免影响实验结果。
4.如有异常情况，应及时联系生产厂家或相关技术支持机构进行处理。
四、贮藏条件CCK8试剂盒应在2~8℃的冰箱中保存，有效期为12个月。
如有未使用完的试剂，应及时放回冰箱中保存，以保持试剂的稳定性。
五、生产厂家信息CCk8试剂盒的生产厂家是日本同仁化学研究所（Dojindo），地址为日本东京都中央区日本桥本町1丁目12番1号。
CCK8中文说明书_MedChemExpress
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT 、MTS 等相比有明显的优点。
第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。
第四，WST-8 和 MTT 、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性。
加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
产品编号HY-K0301-100T HY-K0301-500T HY-K0301-3000T HY-K0301-12000T包装1 mL 5 mL 5 mL × 6(5 mL × 6) × 4产品名称Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-81包装清单产品概述Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。
WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1) 。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系 (图2) 。
CCK-8检测细胞活性操作手册（中英文对照版）
CCK-8检测细胞活性操作手册（中英文对照版）实验原理之前我们为大家讲解了《MTT实验测定细胞增殖详细操作手册『点击阅读』》，今天我们就为大家讲解一下CCK-8检测细胞活性的方法。
Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(图1)。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系（图2）。
图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)图2. CCK-8检测细胞活性原理图WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。
首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。
再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。
另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
中文版细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100 μl/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃, 5% CO2）。
2、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL 溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
CCK-8说明书 2019.02.22
MD01 1 set
细胞衰老检测 活死细胞双染
Cellular Senescence Detection Kit-SPiDER-βGal SG03 5 assays
Calcein-AM/PI Double Staining Kit
C542 500T
线粒体膜电位检测 JC-1 MitoMP Detection Kit
CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中；不需要预配 各种成分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验 中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测 法。WST®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄 色甲臜染料能够溶解在组织培养基中 (如图2所示)， 生成的甲臜量与活细胞数量成正比。
1.5 HeLa Cell 1
4. Mitochondrial unfolded protein response controls matrix pre-RNA processing and translation, Nature, 2016, 534, 710–713
5. Transfer of mitochondria from astrocytes to neurons after stroke, Nature, 2016, 535, 551–555
Number of Cells (x103 cells/well)
图4. 使用CCK-8与其他试剂灵敏度的比较
Medium : HeLa.......MEM, 10% FBS HL60........RPMI1640, 10% FBS
Incubation : HeLa........37℃, 5 % CO2, 2 hours HL60........37℃, 5 % CO2, 3 hours
CCK8中文说明书
Cell Counting Kit-8产品编号产品名称包装500次C0038 Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)产品简介：Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。
首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。
再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。
另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
本试剂盒检测非常便捷。
试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。
无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。
不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。
可以用于大批量样品的检测。
酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
cck8试剂盒说明书
CCK8试剂盒说明书1. 产品介绍CCK8试剂盒是一种常用的细胞增殖和存活检测试剂盒，可以用于测定细胞的代谢活性和细胞存活率。
该试剂盒采用水溶性黄色产物2,3-Bis-(2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenyl)-2H-Tetrazolium-5-Carboxanilide（CCK-8）作为底物，可通过检测还原型CCK-8的生成来间接反映细胞代谢和生长情况。
2. 试剂成分CCK8试剂盒包含以下成分：•CCK-8底物溶液•无血清细胞培养基3. 使用方法3.1 准备工作•将CCK-8底物溶液室温静置30分钟，使其达到常温；•无血清细胞培养基预先加温至37℃。
3.2 测定步骤1.将待测细胞悬液均匀分装到96孔板中，每孔约包含1-2 x 10^4的细胞数量。
2.将空白对照孔设置为仅包含细胞培养基的孔。
3.将96孔板中的培养基替换为100μL的无血清细胞培养基。
4.添加10μL的CCK-8底物溶液到每个孔中，包括空白对照孔。
5.将带有试剂的96孔板放入培养箱中，以37℃、5% CO2的条件孵育1-4小时。
6.使用包含酶标仪的96孔板读取器，在450nm波长处测定吸光度值。
4. 结果与解读CCK8试剂盒测定结果的吸光度值与细胞数量和活性呈正相关关系。
吸光度值越高，表示细胞代谢和生长能力越强，细胞存活率越高。
5. 注意事项•CCK-8底物溶液对光敏感，避免阳光直射；•试剂过期后，请勿使用；•存储温度应在2-8℃。
6. 参考文献1.Zhang D, Li S, Xi J, et al. CCK-8 Assay for Cell Viability:Some Suggestions to the Users[J]. Journal of ClinicalLaboratory Analysis, 2016, 30(6): 195-201.以上为CCK8试剂盒说明书，仅供参考。
如有任何疑问，请联系厂家或进一步咨询相关专业人士。
cck8试剂盒说明书
cck8试剂盒说明书一、产品介绍cck8试剂盒是一种常用的细胞增殖与细胞毒性分析试剂盒，通过测定细胞代谢活性的变化，可以评估细胞增殖和细胞毒性等生物学效应。
本说明书描述了cck8试剂盒的使用方法、试剂成分和注意事项，以帮助用户正确和安全地进行实验。
二、试剂成分cck8试剂盒包含以下成分：1.Cell Counting Kit-8：一种混合染料，能够与细胞内的代谢产物发生反应，生成可溶于水的发色产物。
2.试剂盒缓冲液：用于稀释和混合CCK-8试剂。
三、试剂准备1.将CCK-8试剂从冰箱取出，放置室温下30分钟，使试剂回到室温。
2.打开试剂瓶盖前，先将瓶盖上的溶液摇匀，避免试剂附着在瓶口上。
3.取出所需的量的试剂盒缓冲液，根据需求合适地稀释CCK-8试剂。
注：试剂盒缓冲液的配制方法详见附录A。
四、试验操作1.将待测的细胞均匀地分散到不粘性的96孔板中，每个孔中含有适当数量的细胞。
2.向每个孔中加入适量的培养基，并在孔板中的正常培养条件下孵育所需时间。
3.在孵育所需的时间结束后，准备CCK-8试剂溶液。
在每个孔中，将培养基完全去除，然后加入100μl的稀释后的CCK-8试剂。
4.将孔板放入培养箱中，继续孵育所需的时间。
5.孵育结束后，记录各孔中的发色情况。
使用酶标仪在450nm波长下测量光密度，记录各孔的吸光度值。
五、结果解读1.吸光度值和细胞代谢活性成正相关。
吸光度值较高表示细胞代谢活性较高，细胞增殖较多。
2.吸光度值较低表示细胞代谢活性较低，可能是由于细胞毒性引起的。
3.吸光度的变化可用于评估药物、毒素和基因表达对细胞的影响。
六、注意事项1.本试剂盒仅供科研使用，不可用于临床诊断。
2.所有的操作必须在无菌条件下进行，以避免外界因素对实验结果的干扰。
3.使用CCK-8试剂的过程中，避免阳光直射，以防止试剂受到光的影响而降低反应效果。
4.请根据实验需要，选择适当的试剂盒缓冲液稀释CCK-8试剂。
5.请按照说明书指导的方法进行试验，以确保获得准确和可靠的结果。
超灵敏型CCK-8细胞活力毒性检测试剂盒说明书
超灵敏型CCK-8（细胞活力/毒性检测）试剂盒说明书超灵敏型CCK-8细胞活力测定试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性相对定量及绝对定量检测的快速、高灵敏度试剂盒，比传统的MTT、XTT及CCK-8方法具有更好的检测灵敏度和更宽的线性范围。
产品优势：本试剂盒检测非常便扰。
试剂盒仅一管已经配制好的超灵敏型CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。
无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。
不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解反应生成物，可用于大批量样品的高通量检测。
使用方法：1、使用96孔板，细胞培养和处理完毕。
2、逐孔加入超灵敏型CCK-8试剂，每孔100μl培养基中加入10μl超灵敏型CCK-8试剂。
3、培养板放回培养箱，37℃孵育1~4小时。
4、于49Onm处测定OD值。
5、结果分析将各测试孔的OD值减去对照孔OD值。
各平行孔的OD值取平均数。
细胞活力％二（加药细胞OD-空白OD）/（对照细胞OD-空白OD）×100%6、若使用除96孔外的培养板，试剂用量按照培养基体积等比例增减。
使用注意事项：1、试剂加入后需轻轻振摇培养板，使超灵敏型CCK-8试剂与培养基充分混匀。
2、试剂加入后培养时间根据细胞种类的不同和每孔细胞数量的多少而异。
对于贴壁细胞，加入超灵敏型CCK-8的培养时间一般为1~4小时,但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度（根据细胞种类而定）。
与贴壁细胞相比，悬浮细胞较难显色。
对于悬浮细胞，在加入超灵敏型CCK-8培养1~4小时后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标仪测定。
若显色困难，可以将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。
3、如果实验中有还原剂，需要检查背景的OD值，即在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入超灵敏型CCK-8试剂在一定时间内检测，和不加药物的培养基进行比较（只加超灵敏型CCK-8试剂），如果OD值明显偏高，则说明有反应。
cck8说明书
CCK8说明书简介CCK8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞活力检测试剂，用于评估细胞对不同处理的敏感性和存活率。
CCK8试剂是由化学合成的，可通过氧化还原反应将其从黄色还原型转变为红色水溶性甲苯磺酸盐（formazan）盐，并且无毒。
本说明书旨在帮助用户正确使用CCK8试剂并解读实验结果。
实验步骤1.准备细胞悬液：使用PBS（磷酸盐缓冲液）或培养基将细胞洗涤或稀释至所需浓度；2.将待测细胞分配到孔板：将细胞悬液均匀地分配到96孔板中的各孔，每个孔的细胞数应保持一致；3.处理样品：在所需的处理孔中加入相应的处理剂，如药物、化合物等；4.添加CCK8试剂：将CCK8试剂加入包含细胞和处理剂的孔中，确保试剂均匀分布；5.孵育孔板：将孔板放入培养箱中，并在37摄氏度和5% CO2条件下孵育一定时间（通常为1-4小时）；6.计量吸光度：使用酶标仪或微孔板阅读器以450纳米波长读取吸光度值；7.数据分析：使用适当的统计工具和方法分析收集到的数据。
结果解读CCK8试剂通过形成染色物（formazan盐）来间接测量细胞活力。
染色物的生成与细胞的代谢活性密切相关，因此，活细胞含有更多的染色物。
实验结果通常以吸光度值来表示，吸光度值越高，代表细胞活力越高。
在数据分析时，可以使用下列公式计算细胞存活率：$$ 细胞存活率 = \\frac{{吸光度_{实验组} - 吸光度_{背景值}}}{{吸光度_{对照组} - 吸光度_{背景值}}} \\times 100\\% $$其中，实验组表示含有处理剂的孔，对照组表示未进行任何处理的孔，背景值为只有培养基和CCK8试剂的孔的吸光度值。
实验注意事项K8试剂对皮肤和眼睛有刺激性，使用过程中必须佩戴实验手套和护目镜；2.所有操作需在无菌条件下进行，以避免细菌和其他污染物的影响；K8试剂应保存在阴凉、避光和干燥的地方，并避免震动和高温；4.实验前应检查CCK8试剂的有效期和保存条件；5.操作过程中避免接触酸、碱和有机溶剂等物质，以免影响试剂性能；6.加入CCK8试剂后，尽量减少孔板的震动和移动，以确保试剂均匀分布。
CCK-8中文说明书
2
2. 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下 来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔 就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为 了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而 不作为指标检测孔。
6
6. CCK- 8试剂中的WST®- 8会与还原剂反应生成WST® - 8甲臜，如果实验中有还原剂，请检查背景的O.D值， 即在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入CCK- 8
10
10. 如果要测定细胞的具体数量，建议先做一个标准曲
线 ( 具体方法参见P.3页的“制作标准曲线”)。
试剂内含
- 100 孔: - 500 孔: - 1,000 孔: - 3,000 孔: - 10,000 孔: 1 ml x 1 管 5 ml x 1 瓶 5 ml x 2 瓶 5 ml x 6 瓶 100 ml x 1 瓶
本页已使用福昕阅读器进行编辑。 福昕软件（Ｃ）２００５－２００７，版权所有， 仅供试用。
操作说明
细胞计数测定
1. 在96孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 )。将培养 板在培养箱预培养 (在37℃，5% CO2的条件下)。 2. 向每孔加入10 ml的CCK- 8溶液 (注意不要在孔 中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。 3. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可 以向每孔中加入10 ml 1% w/v SDS溶液或者 0.1 M HCl溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件 下。在24小时内吸光度不会发生变化。
Q&A:
1. 每孔应该接种多少细胞？ 贴壁细胞每孔至少需要接种1,000个细胞 (100 ml的培养基)，检测白细胞时由于它的灵敏度较低，每孔至少需要接种2,500 个细胞 (100 ml的培养基)，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量。如果要使用24孔板或是6孔板实验，请先计算每孔相应 的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK- 8溶液。 2. 如何设定空白对照？ 在不含细胞的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验 (细胞毒性实验) 时，还应考虑药 物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中测定450 nm的吸光度作为空白对照。 3. 哪些物质会影响CCK- 8的测定？ 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加O.D值，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红 或血清不影响测定 )。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？ 有时会有影响。如果药物具有还原性，会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有 吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的 吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. CCK- 8对细胞是否有毒？ CCK- 8对细胞的毒性相当低，同样的细胞在CCK- 8法检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验，如结晶紫检测法，中性 红检测法或DNA荧光检测法等。 6. CCK- 8稳定吗？ CCK- 8在避光0-5℃的条件下可以存放1年，在-20℃下避光可以保存2年。如果需要长期保存，我们推荐在-20℃储藏。 在常温下可以保存3周左右，颜色应该为浅红色，如果颜色发生改变，则可能会增加空白吸光度。 7. 我没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他的滤光片？ 您可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 8. CCK- 8能否对活细胞进行染色? 不能。因为CCK- 8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®- 8)，并通过电子载体1- Methoxy PMS将活细胞中的电子交 换到培养基中的WST®- 8上，因为WST®- 8及其生成的甲臜染料是高度水溶性的，不会进入细胞内，所以CCK- 8不能对 活细胞进行染色。 9. 必须设定参比波长吗？设定的目的是什么？ 不一定要设定，CCK- 8试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。 10. 如果O.D值太低，可以采取什么办法？ 可以采取2个办法： ① 适当增加细胞数量。 ② 延长加入CCK- 8试剂后的染色时间。
CCK8细胞增殖检测试剂盒操作指南
CCK8细胞增殖检测试剂盒操作指南1、产品包装和保存条件4℃干燥避光保存，有效期一年（推荐）。
-20℃干燥避光保存，有效期二年。
注：做完细胞增殖检测一般还会做细胞凋亡检测，汉恒还提供Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒。
一、实验原理CCK-8细胞增殖检测试剂盒是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的快速灵敏度试剂盒。
WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）（图1-2），其颜色的深浅与存活细胞数目的增殖成正比，与细胞毒性成反比。
使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值，可以间接反映活细胞的数量。
CCK-8法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
二、CCK-8方法的优势表1 CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较注：1、酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰；2、本试剂盒细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。
三、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100 μl/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃, 5% CO2）。
2、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl0.1 M的HCl溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
24小时内测定，吸光度不会发生变化。
四、细胞增殖-毒性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100 μl）。
CCK-8中文说明书
人胆囊收缩素(CCK-8)ELISA试剂盒(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
用抗人CCK-8 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的CCK-8与单抗结合，加入生物素化的抗人CCK-8，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，CCK-8浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中CCK-8浓度。
试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（Coated Wells）96孔酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）12ml10×标本稀释液（Sample Buffer）12ml 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）50ml标准品（Standards）：80ng/瓶2瓶底物工作液（TMB Solution）12ml第一抗体工作液（Biotinylated12ml 终止液（Stop Solution）12ml Antibody）准备试剂与收集血样1. 收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。
2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成80ng/ml的溶液。
设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。
在第一管中加入80ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。
如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。
第八管为空白对照。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Cell Counting Kit （CCK 试剂盒）
产品简介：
Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST （水溶性四唑盐，化学名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒
性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较:
CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
操作说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度, 每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定0D值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数
量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK 后的培养时间。
）
二、细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液（100 ^L孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37C ,5% C02的条件下）。
2、向每孔加入10 的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响0D值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
5、如果暂时不测定0D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 yLO.IM的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24 小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测
1、在96孔板中配置100 的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37C, 5% CO2的条件下）。
2、向培养板加入10 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
12后/24h
4、想每孔加入10^L CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
（2h 后）
6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 uL0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
备注：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的培养时间。
（怎么判断哪个时间好？）
②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。
加入CCK试剂时，建议斜贴着培养
板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。
③白细胞可能需要培养较长时间。
④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔（100 （1L培养基）。
检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔（100 （1L培养基）。
如果要使用24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK 溶液。
⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
活力计算：
]100
细胞活力* （%）=[A（加药）-A （空白）]/[A （0加药）-A （空白）
A （加药）：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A （空白）：具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药）：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
* 细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
保存条件：
4C干燥避光保存，有效期一年。