大孔吸附树脂法纯化黄芩总黄酮工艺的研究_王春民
大孔吸附树脂分离纯化仙人掌中总黄酮的研究
Ｉ ＯＮ Ｅ跹 ＨＡＮＧＥ ＡＮＤ ＡＤＳ ０Ｒ ｎｏＮ
文章 编 号 ： １０ —４ ３２ １ ）１ ０ ７０ ０ １５ ９ （０ ００ － ４ —６ ０
大孑 吸附树脂 分离纯化仙人掌 中总黄酮的研 究 Ｌ
韦 国锋 黄祖 良 何有成
结果显 示 ，仙 人 掌提取物 具有 显著 的镇痛作 用 ，而总 黄酮为仙 人 掌镇痛作 用 的主要活 性成
分Ｉ。但 目前对仙人掌总黄酮的提取研究大部分停 留在有机溶剂萃取法，所得到粗提取物
中总黄 酮的含量 较低 ，为提 高总黄 酮的含量 ，本实验选 择 了 ４种大 孔吸 附树脂 对仙人 掌 中 总黄酮进行 分 离纯化 ，为大孔 吸附树 脂分离 纯化仙人 掌 中的总黄 酮提供 实验 依据 ，更好地 开发仙人 掌植物 资源 。
右江民族 医学院应用化学研究室，百 色 ５３０ ３０ ０
摘要 ：考察 了 ４种 大孔吸 附树脂对仙人掌总黄 酮的吸附分 离性能，筛选 出效 果最佳 的树脂为 Ａ 一。 以总黄酮 的吸 附量 、总黄 酮含量和 回收率为考察指标，采用紫外分光光度 法测定总黄 Ｂ８ 酮。 确定 了 Ａ ． 树脂吸附分 离 Ｂ８ 仙人 掌总黄 酮的工艺条件：上样浓度为 １ｍ ／Ｌ 仙人掌总黄 ５ｇ ， ｍ
Ｅ ｉ ｗ ｆ５ ６ ＠ｙｈ ｏｔｍ．ｌ ｍａ ： ｇ２２ ３ ａｏ． Ｃ ｌ ｏ ｌ
・ ８・ ４
Ｉｎ ｘｈｎ ｅ ｄ ｓｒｔ ｎ ｏ ｃ ａｇ ｏｐｉ Ｅ ｎ ａ Ａｄ ｏ
２ １ 年 ２月 ００
钠 、硝 酸铝 、氢 氧化钠 均 为分析纯试 剂 。
主要 仪 器：ＤＺ ＫＷ－ 型 电子恒温 水浴锅 （ ４ 北 中兴伟业 仪器有 限公 ｖ ；１ ０ 电子天 ｑ） ０ ４
大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺研究
大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺研究【关键词】黄芩苷；，，大孔吸附树脂；，，纯化摘要：目的利用AB8大孔吸附树脂纯化黄芩中黄芩苷，确定树脂纯化黄芩苷的工艺参数。
方法以黄芩苷吸附量为指标，并通过正交实验考察确定了该树脂分离纯化黄芩苷的工艺条件。
结果AB8 型树脂对黄芩苷有良好吸附分离性能，其吸附分离黄芩苷的工艺条件为:上样浓度为50 mg/ml（生药量），上样液PH值为4，吸附流速为4BV/h ，上样体积为6BV，洗脱剂为5倍量树脂柱体积50％乙醇且洗脱剂的pH值为8。
结论AB8 型大孔吸附树脂在所确定的工艺条件下，纯化黄芩苷效果良好，黄芩苷纯度可达90%左右。
关键词：黄芩苷；大孔吸附树脂；纯化Research on the Purification of Baicalin of Scutellaria baicalensis Georgi.by AB8 Macroporous ResinAbstract：ObjectiveTo set up the method for purification of baicalin from Scutellaria baicalensis Georgi.by AB8 macroporous resin . MethodsThe process technology for purification of baicalin with AB8 macroporous resin was selected by dynamic absorption ratio through orthogonal tests.ResultsThe AB 8 macroporous resin owned optimum absorption and elution ability.The optimum absorption conditions were the sample concentration of 50 mg ・ml1 ， the PH of sample at 4， the current velocity of 4BV ・h1 ， of eluant of 50 % ethanol（5BV）and the pH of eluting reagent at 8 .ConclusionThe AB 8 macroporous resin can be used to purify baicalin successfully ， the purity of baicalin is about 90 %.Key words：Baicalin; Macroporous resin; Purification黄芩是唇形科植物Scutellaria baicalensis Georg.的干燥根，其性寒味苦，具有清热燥湿、泻火解毒的功效，它的主要有效成分黄芩苷(baicalin) 具有抑菌、清热、降压、镇静、抗炎、解毒等作用［1］。
大孔吸附树脂分离纯化补骨脂黄酮的研究
氨酸类蛋白酶类[7]。
市售纤维蛋白原内常含有少量纤溶酶原,纤溶酶原可在纤溶激酶作用下变为纤溶酶,纤溶酶作用于纤维蛋白后出现纤溶圈,为了探究少棘蜈蚣纤溶活性蛋白的作用机理,将制备好的纤维蛋白平板置80℃处理30m in,使其中纤维蛋白溶酶原全部失活,制成去纤溶酶纤维蛋白平板,以未加热纤维蛋白平板做对照,对照结果发现两个纤溶圈面积相等表明蜈蚣纤溶蛋白本身具有纤溶酶活性。
参考文献:[1] 陈少鹏,韩雅莉,郭 桅,等.少棘蜈蚣纤溶活性蛋白的抗血栓作用[J ].中国药理学通报,2007,23(8):1088.[2] 曾 红,张国刚,程巨龙,等.蜈蚣中抗癌活性成分提取[J ].湖南中医杂志,2004,20(5):57.[3] A strup T,Mullertz S .The fibrin p late method for esti m ating fibrinolyticactivity[J ].A rchs B i oche m B i ophys,1952,40:346.[4] 李建武.生物化学实验原理和方法[M ].北京:北京大学出版社,1994:216.[5] 刁劲翩,沈忠耀.用于测定尿激酶原活性的纤溶板法的数字图像处理和分析技术[J ].计算机与应用化学,2001,18(4):343.[6] 韩雅莉,李张伟.地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究[J ].生物工程学报,2006,22(4):639.[7] W eon -Kyoo You,Young -Doug Sohn,et al .Purificati on and molecu 2lar cl oning of a novel serine p r otease fr om the centi pede,Scol opendra subs p ini pes mutilans[J ].I nsect B i oche m istry and Molecular B i ol ogy,2004,34:239.收稿日期:2008208206; 修订日期:2008210229基金项目:国家“十一五”攻关项目(No .2006BAK03A08)作者简介:张晓曦(19872),男(汉族),天津人,现为中国农业大学理学院化学系在读本科学生.3通讯作者简介:李 楠(19502),女(汉族),江苏金坛人,现任中国农业大学理学院教授,硕士学位,主要从事有机分析和天然产物化学方面的研究工作.大孔吸附树脂分离纯化补骨脂黄酮的研究张晓曦,李重九,张 壮,王 颖,李 楠3(中国农业大学,北京 100193)摘要:目的筛选适合分离纯化补骨脂黄酮的大孔吸附树脂并确立纯化工艺参数。
大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺研究
大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺研究1. 引言1.1 概述本文研究的是大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺。
黄芩苷作为一种重要有效成分，具有广泛的药用价值和应用领域。
然而，从传统方法中提取和纯化黄芩苷存在着效率低、产量不稳定等问题。
因此，开发一种高效、节约成本的工艺方法对于提高产量和保证纯度至关重要。
1.2 文章结构本文共分为五个部分：引言、黄芩中黄芩苷的重要性、大孔吸附树脂的工艺基础知识、大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的方法研究以及结论与展望。
在引言部分，将介绍研究背景、问题意识和文章结构。
1.3 目的本文旨在研究大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺，并优化关键步骤参数，提高产量和纯度。
通过实验验证和理论模型优化，找到最佳的处理方法和工艺条件，为黄芩苷的规模化生产提供理论依据和技术支持。
同时，探讨该工艺对于黄芩苷提取分离工艺的意义与影响，并指出存在的问题及未来改进方向。
通过本研究，将推动黄芩苷在药用领域的应用，并满足市场需求。
这是引言部分的详细内容，请根据需要进行适当修改。
2. 黄芩中黄芩苷的重要性：2.1 药用价值：黄芩（Scutellaria baicalensis）是一种传统中药材，广泛应用于中医药领域。
它含有丰富的生物活性成分，其中黄芩苷（baicalin）是其主要有效成分之一。
黄芩苷具有多种药理作用，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等功效。
它被广泛应用于心脑血管疾病、肿瘤治疗、免疫调节等领域的药物开发和治疗。
2.2 应用领域：黄芩苷具有广泛的应用领域。
在心脑血管领域，黄芩苷可以降低血压、改善微循环、减少动脉粥样硬化等，对于预防和治疗高血压、冠心病等心血管疾病具有显著效果。
在肿瘤治疗领域，黄芩苷表现出良好的抗肿瘤活性，可以通过诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和转移等机制来抑制肿瘤的发展。
此外，黄芩苷还可以调节免疫功能，增强机体的抵抗力，并在抗菌、抗病毒、解毒等方面显示出一定的活性。
大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展
大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展摘要:黄酮类化合物是在植物中分布非常广泛的一类天然产物, 具有多种生物活性。
大孔吸附树脂纯化是一项不需复杂设备、操作条件温和的新型分离技术。
综述了大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展。
关键词: 黄酮; 大孔吸附树脂; 分离纯化; 进展正文1 前言黄酮类化合物(Flavonoids) 是在植物中分布非常广泛的一类天然产物, 其在植物体内大部分与糖结合成苷类, 也有一部分以游离态(苷元) 形式存在, 对植物的生长、发育、开花、结果及防菌防病等起着重要的作用。
黄酮类化合物是许多中草药的有效成分, 具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、免疫调节、解毒护肝、细胞保护、防治心血管疾病、调节机体内分泌和代谢、影响细胞生长等多种生物活性, 近年来国内外学者对其颇为重视。
近十年来, 黄酮类化合物的研究倾向于其药用价值的开发, 更多地涉及提取分离纯化方法、含量测定及制剂研究等。
黄酮类化合物的分离包括黄酮类化合物与非黄酮类化合物的分离、黄酮类化合物中的单体分离。
黄酮类化合物与非黄酮类化合物的分离方法主要有提取法、色谱法、超临界萃取法、膜分离法、双水相萃取分离法等;单体分离方法主要是色谱法, 除经典的柱色谱法和薄层色谱法外,还有高效液相色谱法(HPLC)、高速逆流色谱法(HSCCC)等。
本文在此仅对大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展进行综述。
2 大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物2 1 黄酮类化合物与非黄酮类化合物的分离纯化大孔吸附树脂于20世纪70年代末逐步应用于中草药有效成分的提取分离。
大孔吸附树脂的型号有HP-30、D101、DA-201、AB-8、XAD-4、XAD-16 等, 其特点是吸附容量大、再生简单、效果可靠, 尤其适用于黄酮类、皂苷类等成分的分离纯化及其大规模生产]21[、。
李兆龙]3[等用日本产非极性大孔吸附树脂(如Diaion HP-10、HP-20、HP-21) 等分离银杏叶黄酮。
大孔吸附树脂分离纯化黄芪皂苷的工艺研究
芪皂苷的方法缺乏系统的研究 ,工艺条件和参数不 明确 。本实验针对大孔树脂精制黄芪皂苷的工艺作
了比较系统的研究 ,确定了比较适宜的吸附 2解吸条 件。 1 仪器与试剂
h,使其充分吸附 ,抽滤定容 ,按 212项下方法测定 ,
结果上样液 pH 值以 710左右为佳 。见表 2。
表 2
原液 pH对吸附的影响
原液 PH
吸附前皂苷 总量 (mg)
吸附后剩 余量 (mg)
吸附率 (mg/ g树脂 )
310 510 710 910 1210
20110 20110 20110 20110 20110
黄芪饮片 (浙江中医学院饮片厂 )经鉴定为豆 科植物蒙古黄芪的干燥根 ,符合中国药典 2005版相 应的要求 。黄芪皂苷对照品 (中国药品生物制品检 定 所 , 批 号 : 1107812200512 ) 。 D 2101 型 、DM 2301 型 、DS2401 型大孔吸附树脂 (均购自天津市海光化 工有限公司 ) ;乙腈为色谱醇 (美国 Fisher公司 ) ,水
(2006 - 06 - 21收稿 )
Study on the Extraction Technology of Polysacchar ide from M onkshood2tuber
SHU Xiao2yan, L IU Hui, L IANG J ing, HUANG B ing, HOU Da2bin (College of L ife Science and Engineering, Southwest University of Science and Technology, M ianyang 621000, China) Abstract Objective: To study the extraction techniques of polysaccharide from Monkshood2tuber1 M ethods: Single factor test and orthogonal experiment design methods L9 (34 ) were app lied to analyze the influence of solid2liquid rate, extraction temperature, time, pH , times and ethanol concentration for p recip itation on the extraction percent of polysaccharide from Monkshood2tuber1 Results: Ex2 perimental results indicated that temperature and solid2liquid rate would significantly affect the extraction percent of the soluble polysac2 charide1 The op timum condition for the extraction technique were as follow ing: solid2liquid rate was 1∶40, temperature was 90℃, time was 2h, pH was 8, times was 1 and concentration of ethanol for p recip itation was 8051 In this condition, the extraction percent of rude polysaccharide from Monkshood2tuber was 0107% and the polysaccharide content was 9111% 1 Conclusion: The research Can p rovide a theoretical foundation for further development and utilization of polysaccharide from Monkshood2tuber1 Key words Monkshood2tuber; Soluble polysaccharides; Extraction technology
大孔吸附树脂富集玛咖总黄酮的工艺研究
中图分类号 ：Ｔ Ｓ ２ ０ ２ ． ３
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１ ０ ０ ６ ２ ５ １ ３（ ２ ０ １ ７ ）０ ７ ０ １ ５ ５ —０ ５
Ｐｕ ｒ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａｌ ｆ ｌ ａ ｖ ｏｎ ｏｉ ｄｓ ｆ ｒ Ｏ ｍ Ｍａｃ ａ ｂ ｙ ｍａｃ ｒ ｏ ｐ ｏｒ ｏ ｕ ｓ ｒ ｅｓ ｉ ｎ
（ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ，Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ ３ ５ ５ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ：Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｐ ｕ ｒ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｌ ｆ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｍａ ｃ ａ ｂ ｙ ｍａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｏ ｕ ｓ
玛 咖 ，又 名 玛 卡 ，是 十字 花科 独 行 菜 属植 物
效 。 目前 黄 酮 的 提 取 纯 化 方 法 主 要 有 超 声 提 取 法 【 、 浸提 法 ］ 、萃 取 法 ［ ］ 、膜分 离法 】 和 大孔树 脂 分离 法 【 ｌ 等。 玛 咖 黄 酮 作 为 一 种 重 要 的 黄 酮 物 质 ，对 其 研 究 主 要 集 中在 提 取 方 法上 ，而 对 于纯 化 工 艺 的 研 究 较 少 。因而 探 究 合 适 的纯 化 工 艺具 有 一 定 的 理论 实 践 意 义 。萃 取 法 主要 是 根 据 黄酮 的酸 性 不 同 ，选 用 不 同 的碱 性 溶 剂和 有 机 溶 剂进 行 反 复 萃
黄芩总黄酮的提纯和大孔吸附树脂分离纯化
1、黄芩总黄酮的提取：称取10g黄芩饮片，加10倍量水，预先浸泡30分钟（呈浅黄色），煎煮1.0 h，煎煮2次，合并煎煮液，备用（呈红褐色）。取样适当稀释（约2000倍），测定总黄酮含量。
2、AB-8大孔吸附树脂分离纯化：在所确定的样品液上柱体积和洗脱液体积条件下，用大柱子将所有的样品溶液进行分离纯化。收集流出液，60℃减压浓缩至稀浸膏，真空干燥得黄芩总黄酮。精密称取样品粉末适量，测定总黄酮含量，与《中国药典》黄芩提取物进行比较。
精密称取标准品3.4mg，于278nm处测定吸光度记录如下表2。
表2标准曲线的相关数据
对照品体积/mL
质量浓度/μg/mL
波长λ/nm
吸光度A
0.1
3.4
278.00
0.169
0.2
6.8
277.80
0.337
0.3
10.2
277.80
0.488
0.4
13.6
277.80
0.699
0.5
17.0
277.60
（1）经大孔吸附树脂纯化后，有效成分高度浓缩，杂质大大减少，能缩小剂量，提高中药内在质量和制剂水平。
（2）能有效除去水提液中大量的糖类、无机盐、黏液质等吸湿成分，减少产品的吸湿性，增强产品的稳定性，有利于多种中药剂型的生产。
（3）设备简单，免去了静置沉淀、浓缩等耗时的工序，缩短生产周期，降低成本。
本实验采用水煎煮法提取黄芩总黄酮，用AB-8大孔吸附树脂（弱极性）进行分离纯化，对分离纯化工艺进行研究，制备黄芩总黄酮。
0.856
2、数据处理
通过以上表格数据绘制质量浓度与吸光度的线性回归方程如下：
得到线性回归方程为y=0.0511x－0.0110，
土茯苓总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺
Ｈ Ｐ ２ ０
大 孔 吸 附树 脂 对 土 茯 苓 总 黄 酮 的 纯 化 性 能 ， 优 选 最佳 性 能 的 吸 附树 脂 ， 确 定 纯化 土茯 苓 总 黄 酮 的 最 佳 工 艺参 数 。结 果 脱剂为 ６ ０ ％ 乙醇 ， 洗脱量为 ６ Ｂ Ｖ。 纯 化 １次后 ， 土茯 苓 总黄 酮含 量 由 粗提 物 的 ２ ６ ． ８ ％提 高至 ７ ９ ． ７ ％ 。结 论
ａ ｄｓ ｏ ｒ ｐｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ｅ ｓ ｉ ｎ． Ｍ ＥＴＨ Ｏ ＤＳ Ａｄ ｓ ｏ ｐｔ ｒ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｌａ ｆ ｖ ｏｎ ｏ ｉ ｄｓ ｉ ｎ Ｓ ｍｉ ｌ ａ ｘ ｇ ｌ ａ ｂ ｒ ａ Ｒｏ ｘ ｂ．ｗａ ｓ ｏ ｂｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｔ ｏ ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ｅ ｆ ｏ ｒ
Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ５ １ ０ １ ２ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｐ ｏ ｓ ｔ ｄ ｏ ｃ ｔ ｏ ｒ ａ ｌ Ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍ ｍ ｅ ，Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ，Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ５ １ ０ ４ ０ ５ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｄ ｓ ｏ ｒ ｐｔ ｉ ｏ ｎ Ｒｅ ｓ ｉ ｎ
大孔吸附树脂纯化黄芪总黄酮和总皂苷的研究
UV V is Spectrophotom eter ( SH IMADZU, UV m ini 1240) , Sartorius电子分析天平 ( 德国, d = 0 01 m g) , 电热恒温振荡水槽 DKZ 1型 (上海精密实验设 备有限公司 ) 。正丁醇、高氯酸等为分析纯, 水为制 备纯水。毛蕊异黄酮苷对照品由上海中药化学对照 品有限公司提供 ( 含测用 ) , 黄芪甲苷对照品由中国 药品生物制品 检定所提供 ( 含 测用, 批 号: 110781 20 0613 )。 黄芪 药材 购 自 广 州中 医 药 大 学 大 药 房有 限公司, 由本院李薇教授鉴定为蒙古黄芪 A m em branaceus var m ongholicu s 的干燥根。大孔 吸附树 脂购于相关厂家或经销公司。 2 方法与结果 2 1 溶液的制备 2 1 1 对照品溶液的制备: 精密称取对照品各适 量, 分别加乙醇制成每 1 mL 含毛蕊异黄酮苷 0 01 m g及每 1 mL 含黄芪甲苷 1 0 m g的溶液, 即得。 2 1 2 供试品溶液的制备: 取黄芪饮片 100 g, 加 70% 乙醇回流提取 3次, 每次 1 h, 合并提取液, 滤 过, 滤液减压回收乙醇至无液滴出现, 用水转移并定 容于 1000 mL 量瓶中, 摇匀, 滤过, 即得。 2 2 光谱条件的选择 2 2 1 黄芪总黄酮光谱条件的选择: 取上述毛蕊 异黄酮苷对照品溶液和供试品溶液, 于 200~ 400 nm 波长范围内进行光谱扫描, 结果其最大吸收波长均在 250 nm。参照文献 7!方法, 确定在 250 nm 波长处测 定黄芪总黄酮含量。 2 2 2 黄芪总皂苷光谱条件的选择: 取上述黄芪
大孔树脂法富集黄芩籽种壳总黄酮
大孔树脂法富集黄芩籽种壳总黄酮杨丽;王宏伟;李洪波;赵桂琴;张晓峰【摘要】Objective To optimize enrichment and purification technology of total flavonoids from seed shell of Scutellaria baicalensis by macroporous resin.Methods Scutellarin was selected as the index,and its content was determined by HPLC.Types of macroporous resin were optimized by static adsorption elution tests.Enrichment and purification technology was investigated by orthogonal test and single-factor tests.Results AB-8 macroporous resin showed better effects than others.Optimum purification condition was as follows:sample concentration was 30.0 g · L-1,the best adsorption capacity was 0.3 g· g-1,adsorption velocity was 1.0 mL· min-1,diameter-height ratio was 1 ∶ 3,the eluting agent was 20 BV purified water,with the total polyphenols being desorbed by 5 BV of 70％ ethanol Conclusion The technology is scientific,simple and highly reproducible.It can be applied to enrich and purify total flavonoids from seed shell of Scutellaria baicalensis by macroporous resin.%目的优选富集纯化黄芩籽种壳总黄酮的大孔树脂及工艺条件.方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定野黄芩苷含量.以野黄芩苷作指标成分,运用吸附-解吸实验优选大孔树脂型号;以单因素设计和正交实验考察大孔树脂富集纯化黄芩籽种壳总黄酮工艺.结果 AB-8型大孔树脂吸附-洗脱效率最高,较理想的纯化工艺条件为:上样浓度30.0 g·L-1,最佳吸附量0.3 g·g-1,吸附流速1.0 mL·min-1,树脂柱径高比1∶3,除杂需纯化水量20 BV,5 BV 70％乙醇洗脱.结论该工艺条件下AB-8型大孔树脂富集纯化黄芩耔种壳总黄酮效率较高,工艺条件科学、简便,重复性好.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2017(036)004【总页数】5页(P420-424)【关键词】野黄芩苷;总黄酮;种壳;正交试验;大孔树脂【作者】杨丽;王宏伟;李洪波;赵桂琴;张晓峰【作者单位】河北省中药研究与开发重点实验室、承德医学院中药研究所、河北省中医药抗痴呆重点研究室,承德067000;河北省中药研究与开发重点实验室、承德医学院中药研究所、河北省中医药抗痴呆重点研究室,承德067000;河北省中药研究与开发重点实验室、承德医学院中药研究所、河北省中医药抗痴呆重点研究室,承德067000;河北省中药研究与开发重点实验室、承德医学院中药研究所、河北省中医药抗痴呆重点研究室,承德067000;河北省中药研究与开发重点实验室、承德医学院中药研究所、河北省中医药抗痴呆重点研究室,承德067000【正文语种】中文【中图分类】R282;TQ460.6DOI 10.3870/j.issn.1004-0781.2017.04.016黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)，亦称黄金荣、空心草，是多年生管状花目唇形科的草本植物。
大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺研究
ｃｍ ｏｅ ｔｆ ｍ ｓｉ ｓｃｅ ｏ ｆｈ ａ ｕｏｍｂｓｃｓ Ｊ ． ｏｉ ｎ ｏ ｐ ｎｎｓｒ ｋｎ ｅｒｔ ｎｏ ｅｔ ｄＢ ｆ ｃｃｎ 『 】Ｔ ｘ ｏ 。 ｏ ｉ ｔ ｏ ｃ ２ ｏ ４ （ ：７ ． ｏ ５．５ ６）７ ７
ｎ ａ ｖ Ｖ，Ｋｈ ｓ ｂ ｋｏ ａＺＡ，Ｓ ｒｗ ｕ ｈ ａ ｔｖ ｙｏ ＶＮ， ｔａ． ｒ ｉｔ ｐｉ ｃｉｉ ｃ １Ｃａｄｏｒ ｃａ ｔ ｔ ｏ ｖｙ ［ Ｕｓ ｏ ａ Ｉ ４］ ［ ］ 贾彩云 。 １ 呼文 亮 ， 俞小瑞 ， 蟾蜍灵对 白血病 Ｕ３ 等． ９７细胞生长抑 制 ｏ ｏａ ｕａ ｉｎ ｌ ｅ ｒｍ ｈ ｏｓｎ ｏ ｎｒｌＡｓａ ｏｄ Ｂ ｆ ｉｄｓ ｆｔｔｌｂ ｆｄ ｅ ｏｉ ｓｆｏ ｔｅｐ ｉｏ ｆＣｅ ｔａ ｉ ｔａ ｕｏｖｒ ｉ ｄ ｎ ｉ 和凋亡诱导作用 ［］ 中草药 。 ０ ， （ ）２ ４ Ｊ． ２ ５３ ２ ： ． ０ ６ ４ ［ ］ Ｅ ｓ ｌ ａ ａｏ ２０ ， （ ） ２ ． Ｊ ． ｋｐＫｉ Ｆｒ ｋｌ ０ ２６ ４ ： ｎ ｍ 。 ５ ３ ［ ］ Ｅ ｏ ｏ ， ｈ Ｃ Ｋ ｍ ｙ ａ ， ． ｈ ｉ ｒ ｅｅｔｏ ｂ ｆ ｉ — ［ ］ 周学敏 ， 培元 。 ２ ｎ ｍ ｔ Ａ Ｒ ｏ ， ｏ ｉ ｍ ｃ ａ Ｉ ｉ ｔ ｙ ｆｃ ｕ ｄｅ ５ ｏ Ｍ ａ ｋ ｔ１ ｎ ｂｏ ｓｆ ａ ｎ 程 许美 娟， 蟾酥 成分 的分析 方 法 ［ ］ 中草 药 ， 等． Ｊ． ｏ ｄｓ ｎ ｎ ｒ ｕ ｉ 一 Ｈ 一 ０ ｃｌ ［ ］ ａ Ｐｏ ， Ｏ ４ ６ ｌ ｅ ｏ ｔ ｌ ｋ ６ｉ Ｍ ｉ ｉ ｅｅ ｎ ｎ ６ ｅｓ Ｊ ．ＪＮ ｔ ｒ ２ ｏ ，７ ｌ ｄ ｌ９ ２ （ ：９ ． ９ ２．３ ９）４ ０
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时珍 国医国药 ２０ ０ ６年第 １ 第 １ ７卷 ０期
大孔吸附树脂纯化黄芪多糖工艺的研究
要得到高纯度的多糖，常规水提醇沉得到的黄芪粗多糖纯度不高，我们采用离子交换层析法、大孔吸附树脂法和聚酰胺柱层析技术等均在多糖的纯化中有应用，现采用以上三种柱层析纯化方法，对黄芪多糖进行分离纯化研究，以得到黄芪多糖柱层析纯化的最佳工艺。
1黄芪多糖样品制备[1]取500g 的黄芪粉末，过1mm 孔径筛，用80℃蒸馏水提取2次，第一次加8倍量水，第二次加7倍量水，每次1h 。
提取液浓缩到浓度为1g/mL ，加3.5倍量95%乙醇醇沉，沉淀用60℃真空干燥，得到黄芪粗多糖。
2标准曲线的制备取葡萄糖标准品0.1g ，精密称定，置100ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用。
精密吸取0.5mL 、1.0mL 、1.5mL 、2.0mL 、2.5mL 储备液，倒入25mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。
再分别吸取1mL 于10mL 居有塞试管中，加硫酸蒽酮液4mL ，放入冰水中冷却，然后放入到沸水浴中加热10min ，迅速冷却到室温，于620nm 处测定吸光度值。
得到回归方程为Y=20.2425X-0.0359，R 2=0.99933三种方法纯化黄芪多糖的比较[2，3]3.1阳离子交换树脂上样和含量测定：称取10g 黄芪多糖样品，用蒸馏水溶解，上阳离子(柱体积为2400mL)，上柱流速为3mL/min ，吸附12h ，分别用10000mL 去离子水洗脱，洗脱流速3mL/min ，将洗脱液蒸干，称重，测定多糖纯度。
3.2大孔吸附树脂上样和含量测定：称取10g 黄芪多糖样品，用蒸馏水溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱(柱体积为2400mL)，上柱流速为2mL/min ，吸附12h ，分别用10000mL 30%乙醇洗脱，洗脱流速2mL/min ，将洗脱液蒸干，称重，测定多糖纯度。
3.3聚酰胺上样和含量测定：称取10g 按最佳分离方法得到的黄芪多糖，用蒸馏水溶解，上聚酰胺柱(柱体积为2400mL)，上柱流速为2mL/min ，吸附12h ，分别用10000mL 去离子水洗脱，大孔吸附树脂纯化黄芪多糖工艺的研究胡正明1，马海勇2，程建明2※（1.淮安市楚州医院，江苏淮安223200，2.南京中医药大学，江苏南京210029）【摘要】目的：探讨柱层吸附法纯化黄芪多糖，并进行工艺优化。
大孔吸附树脂纯化黄芩总黄酮工艺研究
ＡＢ ８大孑 吸 附树 脂 的动 态 吸 附分离 效 果 最好 ， 一 Ｌ 上样 药 液浓 度 为 ８ ０ｍｇ药材／ 径 高 比为 １ ， 附流 速 为 １Ｂ ／ ， ｍＬ， ：吸 ８ Ｖ ｈ 除杂 溶剂 为水 ， 除杂体 积 为 ４Ｂ 除 杂流 速 为 １Ｂ ／ 洗 脱溶 剂 为 ５ ％乙醇 ， Ｖ， Ｖ／。 Ｖ， Ｖ ｈ
１０ ９ ， ｈｎ ； ．ｅ ｉｇＹ ｌ ｇＰ ａ ａ ｅｔ ａ Ｃ ．Ｌｄ， ｅ ｉｇ １０ ２ ， ｈｎ ０ １ １ Ｃ ｉａ ２ ｉｎ ｉｎ ｈ ｒ ｃ ｕｉ ｌ ｏ， ｔ．Ｂ ｉｎ ０ ０ ７ Ｃ ｉａ Ｂ ｊ ｉ ｍ ｃ ｊ 【 ｓｒ ｃ】 ｊｃｉｅＴ ｖｓ ｇｔ ｔｅｐｏ ｅｓ ｆ ｓｌｔ ｎａ ｄｐ ｒ ｃ ｔ ｎｏ ｔ ａ ｏ ｅ ｏ Ｓ ｕｅｌ ｉ ａａｅ ｓｂ Ａｂ ｔａ ｔ Ｏｂｅｔ ｏｉ ｅｔ ａｅ ｈ ｒｃｓ ｏ ｏａｉ ｎ ｕ ｆ ａ ｏ ｆ ｏ ｌ ｖｎ ｓ ｒｍ ｃ ｔ ａ ａｂ ｃｌ ｖ ｎ ｉ ｉ ｏ ｉ ｉ ｉ ｔａ ｆ ｌ ｆ ｌｒ ／ ｙ
２２ ４ 第 卷 １ ０ 年 月 ９ 第Ｏ １ 期
・制剂 与技 术 ・
大孔吸 附树脂纯化黄芩总黄酮工艺研 究
吕子 明 ， 李 志宏 ｚ 梁俊 清 刘 晓 燕 王 永 屠 鹏 飞
１北京 大学 药学 院 天然 药物 及仿 生 药物 国 家重点 实 验室 ， 京 １ ０ ９ ； 一Ｅ 以岭药 业有 限公 司 ， 京 １０ ２ ． 北 ０ １１２ 京 北 ００ ７ 【 要】目的 研 究 大孔 吸 附树 脂 分 离 和纯 化 黄 芩 总黄 酮 的工 艺 条 件 。 方 法 以总 黄 酮 的 吸 附量 和 解 吸 率 为考 察 指 摘
大孔吸附树脂分离纯化葎草总黄酮的工艺研究
脂对 总黄 酮综合 性 能较好 ， 适合 于律草 总黄 酮的 分 离纯化 。 关键 词： 草 ； 荐 总黄 酮 ： Ｂ ８树 脂 ； 离纯化 Ａ 一 分
Ｓｅ ａ ａｉｎ ａ ｄ ｐ ｒｉａ ｉｎ ｏ ｌｖ ｎ ｉｓｆＯ Ｈｕ ｕｕ ｐ ｒｔ ｎ ｕ ｉｃ ｔ ｆｆ ｏ ｏｄ ｒ ｍ ｍ ｌｓ ｏ ｆ ｏ ａ
Ａｂ ｔ ｃ：Ｏ ｊｃｉｅ ｏ ｓ ｄ ｈ ｅｈ ｏｏｙ ｆ ｕｉｃｔ ｎ ｏ ａｏ ｏ ｓｆ ｍ Ｈ ｍ ｌｓ ｓａ ｄ ｎ ｓｒ ｔ ｂｅｔ Ｔ ｔ ｙｔｅｔｃ ｎ ｌ ｏ ｐ ｒ ａｉ ｆｆ ｖ ｎ ｉ ｒ ｕ ｕｕ ｃｎ ｅ ｓ ａ ｖ ｕ ｇ ｒ ｉ ｆ ｏ ｌ ｄ ｏ
Ａ 一 Ｂ ８大孔吸 附树 脂 具有 最佳 的吸 附洗脱 参数 ，其动 态饱 和 吸 附一 洗脱 量达 ４ ． ／ ， 体 积蒸 ２３ ｇ５倍 ｍｇ
馏 水 、 倍 体积 ５ ％乙醇依 次洗脱 ，总黄 酮收率 为 ９ ％， 量分数 为 ８ ％。 结论 Ａ 一 ６ ０ ０ 质 ５ Ｂ ８大孔 吸 附树
ｌ 舭枇 Leabharlann ｉ２８１ 验 究 ０．试 研 ０１
大孔吸附树脂分离纯化萑草 总黄酮 的工艺研 究
肖道 安 石 秋 杰 屹 闻永 举 申秀丽
（ 宜春学 院 ，江西 宜春 ， ３ ０ ０ 南 昌大 学化 学研 究所 ， 昌， ３ ０ １ ３ ６０ ： 南 ３０３ ）
摘要： 目的研 究大孔 吸 附树 脂 纯化 律草 总 黄 酮的 工 艺。 方法 采 用 Ｄ１ １ＨＰ ０ 、 Ｄ４ ０ Ａ 一 ０ 、 Ｄ３ ０ ＨＰ ０ 、 Ｂ ８ 大孔 吸 附树 脂对 律草 总黄 酮进 行 吸 附纯化 。以总黄 酮 的收 率、 量分数 为考 察指 标综合 评 价 。 质 结果
ｍｕｕ ｅｎ ｅｓ （ｏ ｒ Ｍｅｒ Ｔ ｅｙｅ ｓａｄｐ ｒｉｓ ｆｈ ｏ ｕ ｔ ｗ ｒ ｏ ｐ ｒｄ ａ ｉｄ ｘｓ Ｒ — ｌｓｓａ ｄ ｎ Ｌ ｕ） ｒ ｈ ｉ ｄ ｎ ｕ ｔ ｅＰ ｒ ｃｓ ｅｅｃ ｍ ａｅ ｓ ｎ ｅｅ ． ｅ ． ｌ ｉｅｏｔ ｄ
大孔吸附树脂分离纯化大黄中总蒽醌苷提取物
大孔吸附树脂分离纯化大黄中总蒽醌苷提取物焦飞（陇东学院生命科学与技术学院甘肃庆阳 745000）摘要：比较6种不同类型和型号的大孔吸附树脂：AB-8、D-301、X-5、D-140、S-8和D-101对大黄水提物中总蒽醌苷的吸附性能，对大孔树脂的类型和吸附纯化条件进行了优化。
实验结果为，X-5型树脂对大黄总蒽醌苷静态吸附率和动态吸附率均最高。
X-5型树脂对大黄总蒽醌苷最适宜交换吸附条件为：pH=9，流速为 1 mL/min，洗脱剂为5％氢氧化钠和75％乙醇混合液。
X-5型大孔树脂交换吸附大黄总蒽醌苷的纯化方法可取，具有良好的应用前景。
关键词：大孔吸附树脂；大黄；分离纯化；总蒽醌苷Macroporous adsorption resin purification anthraquinoneextraction from rhubarbJIAO Fei(Life science and technology of Long Dong university Gan Su Qing Yang 745000 ) Abstract:Compared with five kinds of macroporous resin X-5, D-301 and D-301, S-8 and D101 adsorption performance of rhubarb total anthracene quinone, macroporous resin adsorption and purification condition for the filter. Experiment, X-5 resin of rhubarb anthraquinone always both static and dynamic adsorption rate is higher, X-5 resin of rhubarb anthraquinone always appropriate exchange adsorption conditions for: pH=9, flow rate of 1 mL/min, 5% NaOH and 75% ethanol elution agent mixture, desorption effect is better.X-5 type macroporous resin exchange adsorption purification method of rhubarb anthraquinone always desirable, has a good application prospect. Key words：macroporous resin；Radix Et Rhizoma Rhei；purification；total anthraquinones大黄[1]是我国传统中药，为蓼科植物大黄属掌叶组掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄的干燥根茎。
大孔吸附树脂分离纯化橄榄总黄酮的工艺研究
ｖｌｍｅ ｉｌ ｅ ｃ ｙｏ Ｂ ／ ． Ｃ ｎｌ ｉｎ Ｔ ｉ ｐｏｅ ｕｅｉ ｇｏ ｎ ｉ ｐｅ ａｄｃｕｄｂ ｓｄｔ ｓｐｒｔ ａｄｐ ｒ ｔｅｔａ ｏ ｔ ｌ ｉ ２ Ｖ ｈ ｕ ｗ Ｉｖ ｏ ｔ ｆ ｏｃ ｓ ｈｓ ｒ ｄ ｒ ｓ ｏｄａｄｓ ｌ．ｎ ｏ ｌ ｅｕｅ ｅａａｅ ｎ ｕ ￣ ｈ ｔ ｕｏ ｃ ｍ ｏ ｉ ｏｌ
ｐ ｒ ｕ ｅ ｉ ． Ｍｅｈ ｄ Ｄｙ ａ ｃ ａ ｓ ｒ ｔ ｎ ｄ ｓ ｒ ｔ ｎ ｍｅｈ ｄ ｒ ｄ ｐ ｅ ｃ ｅ ｎ ｔ ｅｏ ｔ ｌ ｃ ｏ ｏ ｕ ｅ ｉ ． ｈ ｅ ａ ａｉｎ ｏｏ ｓｒｓ ｎ ｔｏ ｓ ｎ ｍｉ ｄ ｏ ｐ ｉ — ｅ ｏ ｉ ｔ ｏ ｓｗｅｅ ａ ｏ ｔ ｄ ｔ ｓ ｒ ｅ ｈ ｐ ｉ ｏ ｐ ｏ ｏ ｍａ ｍａ ｒ ｐ ｒ ｓｒ ｓｎ Ｔ ｅ ｓ ｐ ｒｔ ｏ ｏ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓｗｅｅ ｅ ａｕ ｔｄ ｂ ａ ｕｉ ｇ ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｏ ｅ ｔｔ ｌ ａ ｏ ｏ ｄ ｉ ｏ ｄｔ ｎ ｒ ｖ ａｅ ｙ ｍｅ ｓ ｒ ｈ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆｔ ｏ ａ ｖ ｎ ｉ ｓ ｗ ｔ ＵＶ— ｓ ｓ ｅ ｔ ｐ ｏ ｏ ｔｒ ｉ ｌ ｎ ｏ ｈ ｌ ｆ ｈ Ｖｉ ｐ ｃｒ ｈ ｔ ｍｅｅ ． Ｒ ｓ ｌ Ｔ ｅ ｏ ｔ ｏ ｅ ｕｔ ｈ ｐ ｉ ｓ ・ ｍｕ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓｗｅｅ ａ ｏｌ ｗ ｎ ：ｈ ｙ ｅ ｏ ｃ ｏ ｏ ｏ ｓ ｒ ｓ ａ Ｏ ｔ ｅ ｓ ｍｐ ｅ ｆ ｉ ａ ｔ Ｈ ５ ｗ ｔ ｅ ｖ ｌｃｔ ｆｌ ｍ ｏ ｄ ｔ ｎ ｒ ｓｆｌ ｉ ｇ ｔｅ ｔ ｐ ｆ ｉ ｏ ｍａ ｒ ｐ ｒ ｕ ｅ ｉ ｗ ｓＤＩ １， ａ ｌ ｕ ｄ ｗ ｓ ａ ４． ｉ ｔ ｅｏ ｉ ｏ ｔ ｏｄ ｎ ｈ ｌ ｐ ｈｈ ｙ ｆ ｗｏ
大孔树脂在分离纯化畲药十二时辰总黄酮工艺中的应用
畲药十二时辰总黄酮所需要的分离条件ꎮ 结果 研究发现畲药十二时辰总黄酮的含量有了较明显的提高ꎬ比未经过分离纯化提高了 ２ ９１ 倍ꎮ
结论 Ｘ￣５ 型号的大孔树脂对畲药十二时辰总黄酮的纯化作用效果良好ꎮ
量各种烘干后树脂的重量ꎬ进行记录ꎬ最后计算各种树脂的含
水量ꎮ
２ ５ 静态吸附量 取 １ｇ 经过处理的大孔树脂ꎬ倒入畲药十
二时辰总黄酮提取液 ４０ｍＬ 中ꎬ在 ２８℃ 下ꎬ通过 ２４ｈ 的振荡ꎬ
４５
海峡药学 ２０２０ 年 第 ３２ 卷 第 ３ 期
２ ２ ２ 精密度的计算:取 １ｍＬ 芦丁进行实验ꎬ显色后ꎬ吸光
附率作为指标ꎬ利用 ＵＶ 法来研究 Ｘ￣５ 大孔树脂在吸附畲药
２ ２ ３ 重复性检验:称取 ３ｇ 畲药十二时辰的样品ꎬ共 ６ 份ꎬ
附方法的选择上ꎬ本文采用了动静结合的方法ꎬ将解吸率和吸
十二时辰总黄酮所需要的分离条件ꎬ为能更好更有效地开发
分别于 １ｈ、２ｈ、４ｈ、６ｈ、８ｈ、１２ｈ 各测定 １ 次ꎬ共测定 ６ 次吸光度
１ １ 供试样品 畲药十二时辰由福建省宁德市霞浦县民间
为毛茛科植物重瓣铁线莲( Ｃｌｅｍａｔｉｓ ｆｌｏｒｉｄａ ｖａｒ ｐｌｅｎａ) ꎬ采集取
样对象是重瓣铁线莲的根部ꎮ 晒干经处理后做供试样品ꎮ
１ ２ 实验试剂 大孔树脂:ＡＢ￣８、ＤＭ１３０、ＤＭ３０１、Ｘ￣５、Ｓ￣８、
关键词:畲药十二时辰ꎻ大孔树脂ꎻ总黄酮
中图分类号:Ｒ２８４ 文献标识码:Ａ 文章编号:１００６￣３７６５(２０２０) ￣０３￣０５１９０￣００４５￣０５
畲药十二时辰为福建福安盛产的一种民间草药ꎬ学名叫
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大孔吸附树脂法纯化黄芩总黄酮工艺的研究王春民,刘 刚,费 艳,赵 卉,杨冬丽,王 睿(承德颈复康药业集团有限公司,河北承德 067000)摘 要:目的 考察8种大孔吸附树脂对黄芩总黄酮的分离纯化的影响,优选出纯化黄芩总黄酮的大孔吸附树脂,并确定纯化黄芩总黄酮的工艺参数。
方法 以黄芩总黄酮为考察指标,采用静态和动态吸附两种方法,优选出对黄芩总黄酮吸附性能最佳的大孔吸附树脂,并对其工艺进行筛选,确定了纯化黄芩总黄酮的最佳工艺参数。
结果AB28型大孔吸附树脂对黄芩总黄酮有最佳的吸附分离性能,其纯化黄芩总黄酮的工艺条件为:黄芩提取液直接上样,最大上样体积为3BV,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为7BV。
结论 AB28型大孔吸附树脂在所确定的工艺条件下,纯化黄芩总黄酮效果良好。
关键词:黄芩;总黄酮;大孔吸附树脂;纯化中图分类号:R28412;R286102 文献标识码:A 文章编号:0253-2670(2010)01-0058-03 黄芩是唇形科植物黄芩S cutell ari a baicalensis Georgi的干燥根,性寒味苦,具有清热燥湿、泻火解毒的功效,其有效成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抗变态、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等广泛药理作用。
以往只是对黄芩中的黄芩苷进行提取,黄芩中的其他黄酮类成分没有被充分利用,因此研究纯化黄芩总黄酮的生产工艺显得尤为重要。
目前大孔吸附树脂分离纯化技术在中草药有效成分的提取分离中得到了日益广泛的应用,其优点在于吸附容量大、再生简单、效果可靠,尤其适合分离纯化苷类、黄酮类、皂苷类等成分[1～3]。
由于大孔吸附树脂品种多,在结构、极性、孔径等性能指标上均有不同,因此寻找具有良好选择性、吸附容量大、易解吸的树脂,对于充分利用黄芩资源,改善中药制剂质量具有积极意义。
本实验对8种型号大孔树脂进行了比较,采用静态吸附和动态吸附方法优选出纯化黄芩中总黄酮的最佳的树脂,之后对此大孔吸附树脂富集纯化黄芩总黄酮的工艺条件进行研究,探讨其工艺流程,以其为开发黄芩总黄酮为主要成分的中药新药提供物质基础。
1 仪器与材料UC—2401PC紫外分光光度计(日本岛津), Mettler A104分析天平(上海梅特勒2托利多仪器有限公司),CX520型超声波清洗机(北京医疗设备二厂)。
黄芩药材为市售,经承德颈复康药业集团有限公司张雪荣高级工程师鉴定为唇形科植物黄芩S1 baicalensls Georgi的干燥根。
黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号1107152200514);无水乙醇(分析纯),高纯水。
D4020(批号060405)、N KA2II(批号060113)、D3520(批号061018)、D4006(批号060102)、N KA29(批号060110)、X25 (批号060821)、D2101(批号070305)、AB28(批号060905)大孔树脂均购自天津市海光化工有限公司。
2 方法与结果211 上柱液的制备:称取黄芩药材粗粉(粉碎粒度为10目),加8倍量水,煎煮115h,煎煮3次,合并煎煮液,备用。
212 黄芩总黄酮的测定[4]21211 标准曲线的制备:精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品2138mg,用70%乙醇超声至完全溶解,定容至10mL,摇匀,作为对照品溶液。
精密吸取对照品溶液011、0114、012、013、014、015 mL于10mL量瓶中,再用70%乙醇定容至刻度,以70%乙醇为空白,于278nm处测定吸光度(A)。
以质量浓度(C)为横坐标,吸光度为纵坐标,得回归曲线方程A=0106C+010256(r=019995)。
21212 样品溶液的测定:取样品液稀释到一定质量浓度,于278nm处测定吸光度值,按回归曲线方程计算样品液中总黄酮的质量浓度。
213 上柱液中总黄酮的测定:煎煮液适当稀释,在278nm处测定吸光度,代入回归曲线方程,计算得总黄酮的质量浓度为1318mg/mL,折算含生药量为6212mg/mL。
214 大孔树脂型号的筛选・85・中草药 Chinese T raditional and H erb al Drugs 第41卷第1期2010年1月① 收稿日期:2009203207 基金项目:河北道地中药材产业体系建设示范研究项目(072764442) 作者简介:王春民(1968—),男,河北承德人,硕士,高级工程师,长期从事新药研发工作,发表论文10余篇。
Tel:(0314)2292453 E2mail:cdtcmwchm@yahoo1com21411 静态吸附行为的考察:取已处理好的8种大孔树脂各1g(湿质量),置100mL具塞锥形瓶中,分别精密加入上样液15mL,时时振摇24h,滤过,滤液适当稀释后测定吸光度,计算静态吸附量和吸附率。
加95%乙醇40mL于锥形瓶中,时时振摇24h,滤过,同法测定吸光度,计算滤液中总黄酮的质量浓度,并得到解吸量和解吸率,结果见表1。
可以看出,AB28和D2101两种树脂的静态吸附结果明显好于其他6种树脂,其静态吸附黄芩总黄酮量高达130143mg/g(湿质量)树脂和134mg/g(湿质量)树脂。
吸附量=(上样液中总黄酮的质量浓度×样液的体积-水洗液中总黄酮的质量浓度×水洗液的体积)/树脂的质量 吸附率=(上样液中总黄酮的质量浓度×样液的体积-水洗液中总黄酮的质量浓度×水洗液的体积)/上样液中总黄酮的质量浓度×样液的体积×100% 解吸量=醇洗液中总黄酮的质量浓度×醇洗液的体积/树脂的质量×100% 解吸率=醇洗液中总黄酮的质量浓度×醇洗液的体积/ (上样液中总黄酮的质量浓度×样液的体积-水洗液中总黄酮的质量浓度×水洗液的体积)×100%表1 8种型号树脂对黄芩总黄酮的静态吸附行为T able1 Static adsorption of total flavonoids in S1baica2 lensis by eight types of m acroreticular resins树脂类型吸附量/(mg・g-1)吸附率/%解吸量/(mg・g-1)解吸率/%N KA2II20129101131112455139D352061196301884419672156N KA2946187231413319372140X25124122621087018857106D4020101197501806514064114D4006103113511636313261139AB28130143651077613358152D2101134175671408511063115 21412 动态吸附行为的考察:分别称取8种大孔吸附树脂,每种10g(湿质量),分别湿法装柱。
将已知浓度的上样液分别通过这8种大孔树脂柱,进行动态吸附,上样完成后用蒸馏水洗涤树脂柱至水洗液呈无色,水洗液与流出液合并,体积V1,紫外分光光度法测定总黄酮的浓度C1。
再各用95%的乙醇以相同的体积流量进行洗脱,收集洗脱液,测定洗脱液的体积V2,依法测定洗脱液中总黄酮的浓度C2,根据回归曲线方程计算,评价吸附和解吸附效果。
测定结果见表2。
结果表明,动态吸附的考察结果和静态吸附的考察结果基本一致,综合考虑选择AB28型大孔吸附树脂作为纯化黄芩总黄酮的最佳大孔吸附树脂。
表2 8种型号树脂对黄芩总黄酮的动态吸附行为T able2 Dynamic adsorption of total flavonoids in S1baica2 lensis by eight types of m acroreticular resin树脂类型吸附量/(mg・g-1)吸附率/%解吸量/(mg・g-1)解吸率/% N KA2II91109128411445146D352024160251102315395166N KA2916190171281113667106X2563130641594019064161D402051130521344117881145D400646188471843412873112AB2855113561264615784146D210162197641254712375101 215 工艺研究21511 上样质量浓度的考察:将黄芩煎煮液适当稀释,分别通过AB28型大孔吸附树脂,保持上样量和体积流量相同,考察不同的上样质量浓度对大孔吸附树脂吸附效果的影响,结果见表3。
结果表明不同上样质量浓度对AB28型大孔吸附树脂的吸附行为影响不大,因此选择黄芩煎煮液直接上样,有利于操作。
表3 不同上样质量浓度对吸附效果的影响T able3 E ffect of different concentration on adsorption上样质量浓度/(mg・mL-1)吸附量/(mg・g-1)吸附率/% 3146110066195619571886811013185917067115 21512 泄漏曲线的绘制:按上述所确定的吸附条件,进行动态吸附,分段收集流出液。
每份10mL,收集25份。
以测定黄芩总黄酮质量浓度为考察指标,绘制泄漏曲线,结果见图1。
可以看出,当上样大约40～50mL(3～4BV)时,黄芩总黄酮就已经明显泄漏了,因此确定最大上样量为3BV的样品液。
图1 泄漏曲线Fig11 Leakage curve21513 洗脱剂的选择:按所确定的吸附条件饱和AB28型大孔吸附树脂,先用100mL水进行洗脱,再依次用10%、30%、50%、70%、95%乙醇各100 mL洗脱,体积流量为1mL/min,收集洗脱液,以黄芩总黄酮质量为考察指标,绘制梯度洗脱曲线,结果见图2。
可以看出,95%乙醇洗脱液中已经几乎没有黄芩总黄酮了,选择太低体积分数的乙醇洗脱液・95・中草药 Chinese T raditional and H erb al Drugs 第41卷第1期2010年1月图2 洗脱剂体积分数的选择曲线Fig 12 Curve of different concentration of eluting agent需要较大用量才能将吸附的黄芩总黄酮洗脱出来,因此选择70%乙醇作为洗脱剂。
21514 洗脱剂用量的选择:按所确定的吸附条件饱和AB 28型大孔吸附树脂,用蒸馏水洗至无色,然后用70%乙醇洗脱,体积流量为1mL/min ,每份收集15mL (1个柱体积),共收集10份,以总黄酮质量浓度为考察指标,绘制曲线,结果见图3。
结果表明,7BV 的70%乙醇能将98%以上树脂所吸附的黄芩总黄酮类成分洗脱下来,因此确定洗脱黄芩总黄酮的洗脱剂的用量为7BV。