一例猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的RT-PCR鉴别诊断方法

（ＲＳＰＲＶ）ｗｓｄｓｎｄａｄａｍｔｏｆＲ－ＣａｅｅｐｄｔｄｓｎｕｓｅｈｇｌｐｔｏｅｉａｅｉｅｎｅｄｏＴＰＲｗｓｄｖｌｅｏｉｉｇｉｔｉｙａｇｎｃｇｈｏｔｈｈｈｈ
ＰＲＲＳｆｏｔｅｃａｓｃａｔｎｕｔｄｖｃｉｅｓｒｉ．Ｔｈｔｏｓｓｎｉｉｅｔｅｅｔａｏａ．ｇＶｒｍｌｓｉｔｅａｅａｃｎｔａｎｈｅｍｅｄｗａｅｓｔｏｄｔｃｓｌｗｓ０２ｎｈｖｖｒｌｇｎｍｅ．ＰＣＶ２，ＰＲＶ，ＰｉａｅｏＰＶｎａｄＣＳＦｗｅｅｎｇｔｖｎｔｅｒｒａｔｎ．Ｖｒｅａｉｅｉｉｅｃｉｓｈｏ
ｔｅａｄｒｓｉｔｙｄｍｉｓ，ＲＳ所致的ｔｉｓ（Ｖ为代表的欧洲型．近年来，ＲＳｉｎｅｐａｒｓｎｒｅｖｕＰＲＶ）ｖｒｏｙｏｒａｖｄｒＬ）ｕＰＲＶ的
猪繁殖与呼吸综合征（ｏｃｅｒｐｏｕｔｅａｄｒｓｉ变异现象引起了人们的关注，ｐｒｉｒｄｃｖｎｐｒｎｅｉｅ — 国外的研究表明，同一ａｒｙｄｏ，ＲＳ，ｔｓｎｒｍｅＰＲ）是一种以妊娠母猪的繁殖障基因型的分离毒株之间存在明显的序列差异，别ｏｙ特
ＤｉｇｏｉｎｄＩｎｉｃｔｏｆｔｇｙＶｉｕｅｔＰｏｃｎｅＲｅｒｄｔｖａｎｓｓａｄｅｔｆａｉｎｏｈｅＨｉｈｌｒｌｎｒｉｐｏｕｃｉｅｉ

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT—PCR鉴别诊断技术及临床应用

呼吸综合征混合感染，但现有的常规诊断方法如病毒分
能区分ＰＲＲＳＶ变异株和经典株病原的特异性引物，预期扩增产物长度分别２４１ｂｐ（变异株，ＴＪＭ— Ｆ９２株）和３３２ｂｐ（经典株，ｃＨ一１Ｒ株）。
之一，因此对猪繁殖与呼吸综合征进行有效的预防和控制，研究能快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株和
猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗（经典株，ＣＨ一１Ｒ株），购自上海海利生物药品有限公司；高致病性猪繁
殖与呼吸综合征活疫苗（变异株，ＴＪＭ — Ｆ９２株），购自
照ＰＥＲ引物设计原则，用ＤＮＡＳＴＡＲ软件设计了１对
变异株其与经典株相比，存在序列上的缺失，即其中的ｎｓｐ２基因存在两处不连续的缺失，在ｎｓｐ２基因两端设计特异性引物来鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株和经典株感染。现在大部分猪场，特别是中小型规模猪场都存在有高致病性猪繁殖与呼吸综合征和经典猪繁殖与
欧洲型和北美洲型两个基因型，我国流行以北美洲型为主，而此次大流行的高致病性ＰＲＲＳＶ仍为北美洲型
１－３引物设计合成
根据ＧｅｎＢａｎｋ上已发表的ＰＲＲＳＶ变异株和经典株的ｎｓｐ２基因序列（Ｎｏ．ＡＹ０３２６２６；Ｎｏ．ＥＦ６３５００６），按

采用RT-PCR方法诊断猪繁殖与呼吸综合征

采用RT-PCR方法诊断猪繁殖与呼吸综合征吕娜娜【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2019(040)001【总页数】2页(P30-31)【作者】吕娜娜【作者单位】山东畜牧兽医职业学院宠物科技系,山东潍坊 261061【正文语种】中文【中图分类】S854.4+3山东某猪场发生以猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)为主要特征的疾病。

笔者对送检的病料进行了实验室诊断：剖检主要发现肺水肿，出血；组织病理学检测主要发现肺间质明显增宽，肾小管上皮肿胀；采用RT-PCR检测方法检测猪肺脏组织，结果被验样品在400bp扩增带为PRRSV阳性，阴性对照无扩增带出现。

诊断结果表明：该猪场发生的病例为猪繁殖呼吸障碍综合征。

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称蓝耳病，由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种有高度传染性的猪综合征。

目前根据基因序列和抗原特性的不同，PRRSV可划分为I型(原欧洲型，代表毒株为Lelystad virus株)和II型(原美洲型，代表毒株为ATCCVR-2332株)。

1987年最早发现于美国(Zeman等，1993)，1994~1995年从美国引种传入我国。

1996年我国郭宝清等第一次分离出该病毒(郭宝清等，1996)。

2001~2002年发生跨省区流行；由南向北扩散、蔓延、由华东、华南、华北、东北等10个省市(县) 发病。

2006年5月下旬起，以高热病为特征的蓝耳病，首先在南方省市发病，同年11月至12 月延伸到东北地区，全国共有19个省市(县)出现疫情(林荣泉，2007)。

2008年，我国将高致病性蓝耳病列为一类动物疫病，并进行强制免疫。

在自然流行中，PRRS仅见于猪，其他家畜和动物未见发病。

不同年龄、品种、性别的猪均可被感染，生长猪和育肥猪感染后症状比较温和，母猪和仔猪的症状则较为严重。

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断陈圣丰（生物工程 2 班）摘要:本试验采用RT－PCR方法来诊断猪疑似PRRS病毒结果为阳性，目前RT－PCR方法已经广泛应用于科研和生产中，该方法是分子生物学中的重要手段之一，是从生物界的微观领域研究生物的多用途工具,与传统的血清中和试验、酶联免疫吸附试验等方法相比具有高效特异和快速诊断和广泛实用等优点。

也是目前国内外最先进的分子生物学方法。

通过RT－PCR方法试验的多次摸索，以便熟练分离和扩增出不同类型的PRRSV株目的基因，掌握用RT－PCR技术在实验或临床上快速检测和诊断出某猪场疑似PRRS的目的。

本试验最重要的结果是扩增出PRRSV基因片段和确定其毒株类型，证实该病料带有PRRSV阳性。

因此，RT-PCR方法的建立为PRRS核酸的快速、准确诊断以及进行分子流行病学的调查和防治PRRSV提供了新的技术手段。

关键词:猪繁殖与呼吸道综合征; 核酸检测; RT－PCREstablishment of RT-PCR Method for Diagnosing Porcine Reproductive and Respiratory SyndromeCHEN Sheng-feng03 Bio-engeneering 2 classAbstract: This test adopts RT-PCR method to diagnose it is positive that the pig suspected PRRS virus result is,RT-PCR method has already been applied to scientific research extensively and in the production at present, This method is one of the important means in molecular biology, Study the biological multiuse tool from the micro field of the living nature, until traditional serum neutralize, test, enzyme unite immunity absorb method of testing etc. compare, have high-efficie. It is a domestic and international most advanced molecular biology method at present too, Try to find out many times through what RT-PCR method tested, In order to separate and amplify out different kinds of PRRSV a purpose genes skillfully, Measure and diagnose some pig farm suspected PRRS of purposes fast on mastering in the experiment with RT-PCR technology or clinical, It is to amplify PRRSV genetic fragment out and confirm its poisonous types to originally test the most important result, there is positive PRRSV to verify this pathological material of disease. So RT-PCR foundation of method core sour fastKey words:porcine reproductive and respiratory syndrome; detect ion of RNA; reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR)猪繁殖和呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS) 是一种由猪繁殖和呼吸综合症病毒(PRRSV)诱发的世界性高度接触性传染病。

猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR检测报告

猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR检测报告
邹玲
【期刊名称】《畜禽业》
【年(卷),期】2009(0)7
【摘要】@@ 猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductive and respiratory syndrome,PRBS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病[1].
【总页数】1页(P70-70)
【作者】邹玲
【作者单位】青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109
【正文语种】中文
【中图分类】S58.28
【相关文献】
1.复合RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟及猪流感等3种病毒方法的建立[J], 夏俊;石进纯;成进;张美玲;陆桂丽;汪萍
2.猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立 [J], 王洪光;汤德元;曾智勇;罗险峰;李春燕;郝飞;刘建;李达
3.多重荧光RT-PCR技术检测猪流感病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立 [J], 梁晓艳;万东山;郭兰英
4.多重RT-PCR检测猪口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和猪水疱性口炎病毒的研究 [J], 祁会彩;龚振华;杨增岐;郑增忍;潘康锁;李葳;黄秀梅;郭福生;蒋正军
5.猪繁殖与呼吸综合征和猪流感复合RT-PCR方法的建立及应用 [J], 柴春霞;夏平安;崔保安;张红英
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一例猪蓝耳病的实验室诊断

一例猪蓝耳病的实验室诊断佚名【摘要】运用实验室分子诊断技术对湖南岳阳某猪场一例疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染病例进行确诊,测定并分析其基因序列,为猪蓝耳病的防控提供依据.采集病猪淋巴组织提取RNA,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病毒核酸,构建重组栽体,经序列测定,利用DNAStar等生物信息学软件进行序列分析.结果显示,RT-PCR产物大小为657 bp,同源性比较结果显示,此毒株ORF5基因核苷酸序列与与经典美洲型毒株VR-2332的同源性为83.4％,与我国经典毒株CH-1a株的同源性为85.4％,与高致病性代表株HUN4和JXA1的同源性分别为84.5％和84.3％,与欧洲经典型毒株LV的同源性为62.8％,与GDZS2016和GD/YJ/2014的同源性分别为95.0％和95.9％.遗传进化分析表明,此毒株属美洲型毒株;美洲型毒株下分两个亚群,以近年来新流行的GDZS2016和GD/YJ/2014毒株为代表的Ⅰ亚群和以HuN4、JXA1和VR-2332等为代表的Ⅱ亚群,此毒株与GDZS2016和GD/YJ/2014等同属Ⅰ亚群.结果表明,此次病例是由美洲型PRRSV毒株感染引起,将此毒株命名为HuNYY201805.【期刊名称】《湖南畜牧兽医》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】5页(P17-21)【关键词】PRRSV;ORF5;RT-PCR【正文语种】中文【中图分类】S858.28;S855.3猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸系统综合症（Porcine reproductive and pespiratory syndrome,PRRS）是由猪蓝耳病病毒（Porcine reproductive and pespiratory syndrome virus,PRRSV）引起以繁殖障碍和呼吸道为主要症状的高度接触性动物传染病[1]。

该病导致猪发热、呼吸不畅、早产、发情推迟、死胎或弱胎增多等现象，同时该病还会导致猪免疫力下降，易继发多种疾病，发病不分年龄段和品种，但尤以怀孕的母猪和仔猪最易感[2]。

猪繁殖与呼吸道综合征病毒RT-PCR检测方法研究

猪繁殖与呼吸综合征（ｏｃｎｅｒｄｃｖ省时、省力、快速、敏感、高效等特点。本试验Ｐｒｉｅｒｐｏｕｔｅｉ
ａｄｒｓｉｔｒｖｄｏｅＲＳｎｅｐｒｏｙｓｎｒｍ，ＰＲ），又称 “ 蓝耳利用分子生物学软件设计了扩增ＰＲＶ保守基ａ猪ＲＳ
立了ＰＲＶＲ — ＣＲＳＴＰＲ检测方法。临床试验证明
ＰＳ）引起的，以母猪发热、厌食和流产、死该方法能特异、敏感、快速地从病料中检测出ＲＲＶ产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸ＰＲＶＲＳ，为猪繁殖与呼吸综合征病毒的临床快速道症状和高死亡率为特征。该病１８９７年首次爆诊断和流行病学的研究奠定了基础。
延到全国。后来被诊断为高致病性猪繁殖与呼吸品有限公司。综合征病毒所致，给我国养猪业造成了极大的经１２细胞Ｍａｃ１５细胞、Ｐ一５细胞（ＰＶ一．ｒ一４Ｋ１无Ｃ
济损失。
１染）Ｈ一１细胞由本实验室保存。污、ＢＫ２
似病猪采取病变组织器官３３份，用已建立的
１５病毒的培养与收获．
长成单层的Ｐ一５Ｒ — ＣＫ１、ＴＰＲ方法进行检测。
Ｍａｃ１５细胞分别接种ＣＦｒ一４ＳＶ、ＰＲＶ。ＣＦ２结果与分析ＲＳＳＶ
发于美国后，迅速蔓延至全球所有养猪国家和１材料和方法地区［４。２０１１０６年夏天，我国南方一些地区的养１１病毒ＰＲＶ－．ＲＳ、ＰＶＲ、ＰＶ一Ｐ、ＰＶＣ２等为

猪繁殖与呼吸综合征综述及RT—PCR检测

猪繁殖与呼吸综合征综述及RT—PCR检测作者：牛宪翔来源：《农民致富之友》2016年第24期[摘要] 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称蓝耳病，以母猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病为主要症状，由PRRS病毒引起。

该传染病主要引起的症状是发热、厌食，母猪怀孕后期导致流产，木乃伊胎、死胎、弱仔等；对幼龄仔猪损害比较大，会引起呼吸系统疾病，死亡率很高。

[关键词] 猪繁殖与呼吸综合征 RT-PCR[中图分类号] S831 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2016）12-0274-01引言猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称蓝耳病，以母猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病为主要症状，由PRRS病毒引起。

该传染病主要引起的症状是发热、厌食，母猪怀孕后期导致流产，木乃伊胎、死胎、弱仔等；对幼龄仔猪损害比较大，引起呼吸系统疾病，死亡率很高。

导致严重的免疫抑制进而继发多种其他疾病而造成死亡。

由PRRSV变异株引起的“高热综合征”呈现高发病率和高死亡率的特点，我国将这种传染病称为“高致病性猪蓝耳病”，并且列为国家一类动物疫病。

1 病原学PRRSV具有两个基因型；1型是欧洲型，代表毒株为Lelystad病毒；2型是美洲型，代表毒株是VR2332病毒，欧洲型与美洲型核苷酸序列相似度为60%。

同一种基因型的PRRSV毒株之间有着较为广泛的变异，有基因突变、缺失和插入以及毒株间的基因重组现象，基因组中易变区域包括NSP2、ORF5和ORF3.不同毒株的GP5蛋白差异较大，1型与2型的同源性仅52%～55 %，相当于PRRSV与LDV的同源性。

欧洲型和美洲型病毒均具有典型的免疫抑制性。

2 流行病学2.1 传染源PRRS唯一易感染并且出现临床症状的自然宿主。

病猪和带毒猪是传染源与传播源。

处于感染猪可以通过唾液、鼻腔分泌物、公猪精液、粪便和尿液排出病毒，怀孕母猪后期以乳汁形式排毒，对本病耐过的猪也可长期带毒并且不断向体外排出病毒。

猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

4542023猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法R T-PC R检测方法的建立及应用陈雷兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014摘要为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对N SP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和N A D C30-l i ke毒株的检测方法。

该方法与C SFV、PC V2、PR V、PED V、T G EV无交叉反应。

对不同毒株类型进行检测,结果显示该方法特异性强,能够将经典株、高致病性猪蓝耳病毒株和类N A D C30株进行快速区分,为猪群快速区分PR R SV感染类型及疫苗的选择、使用提供科学防控依据。

关键词猪繁殖与呼吸综合征经典毒株高致病性毒株N A D C30-l i ke毒株文献标识码:A文章编号:1003-4331(2023)04-0027-04D evel opm ent and appl i cat i on of one st ep R T-PC R m et hod f or t he det ct i onof porci ne reproduct i ve and res pi rat ory s yndrom e vi rusChen Lei(J of unhwa Bi ot echnol ogy(Fuz hou)Co.Lt d,Fuz hou350014)A bs t ract I n or der t o di s t i nct i on t he com pl ex t ypes of por ci ne r epr oduct i ve and r espi r at or y s yndr om e vi r us(PR R SV)s t r ai ns and t he poor cr os s-i m m une pr ot ect i on am ong t he s t r ai ns,a m et hod was es t abl i s hed t o di st i ngui s h di f f er entt ypes ofPR R SV,i ncl udi ng t he cl as⁃si calst r ai n,t he hi ghl y pat hogeni c s t r ai n and t he N A D C30-l i ke st r ai n by t he condi t i on of opt i m i z at i on.The r es ul t i ndi cat ed t hat i t has no cr os s r eact i on wi t h CSFV,PCV2,PR V,PED V and TG EV.A nd t he det ect i on of di f f er ent t ypes of vi r us s t r ai ns showed t hat t he m et hod was s peci f i c and coul d di st i ngui s h t he t hr ee t ypes of vi r us st r ai ns qui ckl y,t hat's pr ovi des a r api d di scr i m i nat i on and s el ect i on bas i s ofPR R S vacci nes f or pr event i on and cont r olofepi dem i c di seas es.K ey w ords Por ci ne r epr oduct i ve and r es pi r at or y syndr om e Cl ass i cals t r ai n H i ghl y pat hogeni c st r ai n N A D C30-l i ke st r ai n猪繁殖与呼吸综合征(Pr oci ne r epr oduct i ve andr es pi r at or y s yndr om e,PR R S)主要是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PR R SV)Ⅰ型和Ⅱ型引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的传染病[1]。

猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断

的体表皮肤变红变紫，耳朵发绀。
３病理变化
低）为特征的疫病翻，给我国的养猪
业造成了巨大的经济损失。由于临床上引起猪繁殖障碍的疾病很多．再加上细菌性或病毒性的继发感染。因此为临床诊断带来了一定的难度。再者病毒分离鉴定费时费力，且不易成功。ＰＣＲ方法具有快速、特异、敏感的特点，已广泛用于许多病毒和细菌病的快速诊断。本试验采用诊断ＰＲＲＳＶ的ＲＴ — ＰＣＲ技术，在结合流行病学、临床症状、病理剖检的基础上．快速准确地诊断ＰＲＲＳＶ感染。
猪口蹄疫的抗体滴度差值均为２。因
为成年猪猪群的唾液量很大，好采集，
采用未经稀释的原液进行检测，造成
摘要２０１３年６～９月，伊犁地区某养殖小区内持续出现妊娠母猪流产，仔猪
呼吸困难，成活率低等现象，在结合流行病学调查、－ｌ盏床症状、病理剖检的基础上，利用ＲＴ — ＰＣＲ￣ｇ．对该养殖小区内￣Ｊ４家养猪户圈内分别采集４份组织病料进行了检
抗体滴度差值。如表１，图１。结果显
示，共检测成年猪４２０头，血清法与唾
猪繁殖与呼吸综合征的ＲＴ — ＰＣ断
王传锋姜丽娟比尔来斯江８３００５２）（伊犁职业技术学院，新疆伊宁

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的RT—PCR应用和分析

行扩增．果全部阴性结
关键词：繁殖与呼吸综合征；猪ＲＴ— ＣＲ：ｐＰＮｓ２缺失株中图分类号：８４４３￥５．＋文献标识码：Ｂ
文章编号：０４５９（０００ — ０８０１０ — ００２１）７００ — ２
猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ是引起猪繁殖与ＰＲＶ）呼吸综合征（ＲＳ的病原．病是一种引起母猪繁殖障ＰＲ）该
离心后小心取出，每管尽量取上清液３０ｌ经０于
ＤＰ水处理（口离心管或者ＲＡ酶抑制剂处理过）ＥＣ进Ｎ过的１ｌ菌离心管中。人３０１丙醇，匀，液氮．ｍ灭５加０异混置３ｒｉ者一０℃ 冰箱３ｉ。小心取出后，温融化．ａｎ或７０ｍｎ室４℃
２３反转录ｆ．ＲＴ）作操
有较大差别［４１试验基于检测国内缺失株和美洲株．该进
一
在基因扩增管中加入２．已溶解的病毒ＲＡ２５ｌ２中Ｎ，－然后依次加入反转录液２ｌＡ酶抑制剂２，反转录０，ＲＮｌ
１３主要设备．
按照２ｇ１０ｍｔ比例加琼脂糖和Ｔ／０ＡＥ电泳缓冲液，
溶解后按照１ｌｌ入溴化乙锭溶液，混匀稍微冷却０Ｌ／加Ｌｍ
凝胶成像系统．通ＰＲ仪，低温冷冻离心机。普Ｃ超

一起猪瘟与猪繁殖障碍与呼吸道综合征混合感染的RT-PCR检测方法

一起猪瘟与猪繁殖障碍与呼吸道综合征混合感染的RT-PCR检测方法李琼;张以芳;王军【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2007(34)12【摘要】猪瘟是一种急性、热性和高度接触传染的病毒性疾病。

其特征为发病急，高热稽留和细小血管壁变性，引起全身泛发性小点出血，脾梗死。

一年四季不分大小猪只均可发生，此病是对养猪业危害最大的传染病之一，严重威胁着养猪业的发展，常给养猪业带来巨大经济损失。

猪繁殖障碍与呼吸道综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是20世纪80年代末发生的严重危害养猪业的一种新的病毒性传染病，【总页数】2页(P95-96)【作者】李琼;张以芳;王军【作者单位】云南农业大学动物科学技术学院,昆明,650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明,650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明,650201【正文语种】中文【中图分类】S858.28【相关文献】1.一起猪繁殖障碍与呼吸综合征和猪瘟混合感染的诊治 [J], 吴锦艳;田宏;吴慧珍;尚佑军;刘湘涛2.猪繁殖障碍与呼吸道综合症RT-PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 杨斌;白卫兵;沈学文3.RT-PCR检测猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒方法的建立与应用 [J], 郝福星;蔡丙严;孙国波;张壮4.采用PCR方法对猪场猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒、猪圆环病毒2型混合感染的诊断研究 [J], 赵德明;闫若潜;赵明军;盛敏;赵雪丽;吴志明5.非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 [J], 王建华;陈小金;赵丹;王玉玲;张俊哲;肖妍;董志珍;赵祥平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RT—PCR检测临床组织病料中的猪繁殖与呼吸综合征病毒

肾等组织，品于一８样０℃冰箱保存备用。
１．分子生物学试剂２ＴＩｌＮ提取试剂盒为大连宝生物工程公ＲｚＡｏＲ司产品；ｌｏｄ）８购自大连ＴＫＲＯｉ（Ｔ１ｇａａａ公司；脂琼
的去离子水溶解．５ｘ取ｊＬ用于Ｒ — ＣＴＰＲ反应模板。
６１～２月份送检的猪流产胎儿和可疑猪的肺、巴结、淋
溶液并尽可能吸走残留酒精溶液（反复２次）。
（）空干燥３５ｍｎ或室温条件下使残留酒６真～ｉ
精完全挥发掉。
（）取的基因组ＲＡ用２～０ｘＥＣ处理７提Ｎ０４ｔＤＰＬ
１０ｒｉ２００／ｎ离心５ｎｍ如下：１材料与方法
１１临床病料样品与处理．由江西农业大学兽医院通过ＥＩＡ方法鉴定为ＬＳＰＲＶ阳性的５份临床病料样品，江苏和福建省ＲＳ为
（）上清液于另一Ｅ４取Ｐ管中，异丙醇ｌＬ加ｍ，
１．总ＲＡ提取４Ｎ
病料样本ＲＡ的提取参考大连宝生物工程公司ＮＴＩｌＮＲｚＡ提取试剂盒说明书在无菌操作台上进行。ｏＲ（）５ｇ组织，人匀浆器中，１取０ｍ放加入５０Ｌ０ｊｘ
预冷的列解液于冰水中匀浆。（）匀浆液移入１ｍＬ的Ｅ２将．５Ｐ管中，３５加７～７０Ｌ的氯仿一戊醇（４比１，０１￣异２）振荡摇匀，后以然

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的RT—PCR检测

江苏农业科学
２０１３年第４１卷第４期
一１９９一
蒋成砚，杨秋艳，鲁念，等．猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的ＲＴ— ＰＣＲ检测［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（４）：１９９ — ２００
猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的ＲＴ—ＰＣＲ检测
参考文献：
胰腺消化酶活性的影响［Ｊ］．湖南农业大学学报：自然科学版，
２０１１，３７（４）：４２５— ４２８．
［５］吕
美．黄芪多糖粗提物对肉仔鸡生长及代谢调控的研究［Ｄ］．
郑州：河南农业大学，２００５：１６—１９．
蒋成砚，杨秋艳，鲁念，王琴，唐悦，郑娥（红河学院生命科学与＆术学院，云南蒙自６６１１００）
摘要：根据ＮＣＢＩ登录的ＰＲＲＳＶＧ５、ＣＳＦＶＥ２的全基因序列，设计２对引物，以ＰＲＲＳＶ、ＣＳＦＶ总ＲＮＡ为模板，通
脏、脾脏、淋巴结、肾脏，置一２０℃保存。
中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故又被称为蓝耳病。猪瘟病毒（ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＳＦＶ）是黄病毒科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉ — ｄａｅ）瘟病毒属（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）的成员，猪是该病的唯一宿主。近

利用RT-PCR对病料中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测

２１年第４期（０１总第１１）７期
试验研究
利用Ｒ－Ｃ对病料中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测ＴＰＲ
许瑞利① 梁俊昌② 朱瑞良① ②
（山东农业大学动物科技学院 ①
摘要
泰安２１１ ② 山东省枣庄市市中区畜牧兽医局）７０８
合征病毒ＪＡ１株，设计合成目的基因ＰＲＳｐ基因Ｘ毒ＲＶＮｓ２
片段引物Ｐ、Ｐ２扩增ＯＲ５因的引物Ｐ１Ｐ２Ｎ１Ｎ和Ｆ基５、５，
１材料与方法
１１材料．
同时根据已发表的ＣＦＳＶ核酸序列，选择高度保守性５
３．（４１２。这与王仕荣等在广西“ 高热综合征” １％５／７）４猪主
图１引物特异性分析
要病原调查中，检出率最高的为ＰＲＶ变异株毒株占５．ＲＳ９
５％（７１６相似，与李维华（０８等报道的ＣＦ９８／４）２０）ＳＶ感染的
（稿日期：２１＿３０）收０１ｏ— ４Ｊ
山东畜牧兽医
１．特异性试验．３２分别取实验室保存的ＰＲＳＸ１ＲＶＳ一变２３多重Ｒ．Ｃ检测病料．ＴＰＲ
２１年第３０１２
异毒株与ＣＳＶ疫苗毒株作为阳性对照，使用表１对引Ｆ中４
取３ｌ模板，进行多重Ｒ－Ｃ扩增以检测其敏感性。 ¨作为ＴＰＲ

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断方法的建立

江西农业学报２１，（）１０—１２０２２７：４４４
ＡｅａＡｇｉｕｕａｉｎｘｔｒｈｒｅＪａｇｉｅ
猪繁殖与呼吸综合征ＲＴ—ＰＲ诊断方法的建立Ｃ
杨克礼李勇，，段正赢，黄祥勇，刘泽文，锐梁望旺，郭，袁芳艳周丹娜，，田永祥￥
繁殖与呼吸障碍综合征诊断方法有多种，如检测病原的有病毒分离、免疫组化、免疫荧光试验等方法，检测抗体来自１材料和方法
１１试验病料及对照毒株自江西、．湖南、湖北、广西等省市部分发病猪场采集的８份猪血清、６肺脏、脾脏、淋巴
收稿日期：０２一Ｏ２１５—０８基金项目：湖北省研究与开发计划项目（０１Ｂ００；２１ＢＢ８）湖北省农业科技创新中心资助项目（０１６０－００３；２１－２０１－０）动物胚胎工程及分子
ｔｒｙｄｒｍｅ．ｏｓｎｏｙ
Ｋｅｒｓｏｃｎｅｒｄｃｉｅａｄｒｓｉａｏｙｄｏ；Ｒ —ＰＲ；Ｄｉｇｏｉ；Ｅｐｄｍｏｏｙｙｗｏｄ：ＰｒｉｅｒｐｏｕｔｎｅｐｒｔｒｓｎｒｍｅＴｖｙＣａｎｓｓｉｅｌｇｉ
及免疫学的研究进展［］安徽农业科学，００３（３：７６Ｊ．２１，１）６１８
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［］ｉ，ｕｎ，ｉｇ，ｔ．ｕｐｓｏｒｎｐｏｕ — ７ＬＧＨａｇＪＪｎｅａＳｐｒｓｎｏｐｃｅｅｒｃａＰ１ｅｉｆｏｉｒｄ