免疫组化

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免疫组化

什么是免疫组化免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。

（一）免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。

即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。

通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。

组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性，因此，免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。

只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。

ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。

病理报告中“免疫组化”是什么意思

免疫组化，即免疫组织化学检测，是病理诊断中一种常用的检测手段。

即对送检的标本，无论是小标本还是大标本，进行切片、染色，进而根据化学反应使标记抗体的显色剂显色，以此来确定组织细胞内的抗原，对其进行定位、定性及定量的研究。

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免疫组化对于病理诊断中肿瘤的鉴别诊断、肺癌类型的判断，甚至对肺癌后续治疗都是十分有帮助的（
此外，免疫组化可用于肺癌分子分型的判断，即运用免疫组化的方法进行基因检测。

“+”就是指免
疫组化中染色为阳性，即有基因突变，反之，“- 就是指染色为阴性，没有基因突变。

“ + ”“ -”在鉴别诊断当中都有临床意义，并不能说“ + ”就是好, “-”就是不好。

(整理)免疫组化知识

免疫组织化免疫组织化学免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学。

它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。

1．发展简史——1941年Coons首先用荧光素标记抗体一检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。

60年代Nakane建立酶标抗体技术铁蛋白标记Ab技术。

——70年代Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。

——80年代Hsu等建立了抗生物素一生素（ABC）法之后，免疫金一银染色法、半抗原标记法、免疫电镜技术相继问世。

——90年代分子杂交技术、原位杂交技术、免疫细胞化学分类方法迅速发展。

——2000年各种免疫组化技术更加成熟，使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的一项有力工具。

其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。

2．免疫组织化学的技术分类（1）根据染色方式分成：①贴片染色；②漂浮染色。

（2）根据Ag—Ab结合方式分成：①直接法；②间接法；③多层法。

（3）按标记物的性质分成：①免疫荧光技术（免疫荧光法）；②免疫酶技术（酶标抗体法、桥法、PAD法、ABC法）；③免疫金属技术（免疫铁蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）。

3．标记物（1）必要性：组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不可见的，若在镜下检测，则必须具有可视性标记物。

（2）常用标记物①荧光素：最常用的是异硫一氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate，FITC）荧光显微镜下呈绿色荧光四乙基罗达明（rho—damineRB200）——荧光显微镜下发橙红色荧光；②酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。

③生物素：（Biotin）④铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。

其他：如同位素（因涉及污染和防护难一般不用）4．应用凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。

免疫组化检测

免疫组化SOP一．总纲（一）技术原理免疫组化全称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry，IHC）。

基本原理是抗原与抗体特异性结合，具体为带有显色剂标记的抗体在组织细胞上与抗原特异性结合，对抗原进行定性、定位和定量检测的技术。

（二）研究进展二．实验操作免疫组化基本操作流程如下：（一）切片脱蜡水化脱蜡水化的目的是将石蜡包裹住的抗原暴露于与抗体结合的水环境中，便于两者结合。

若脱蜡和水化不全，则易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。

1.实验操作如下：（1）烤片：将石蜡切片置于烤箱中烤片60min；（2）脱蜡：入二甲苯5min×3；（3）水合：100%乙醇，5min×2；95%乙醇5min；70%乙醇5min；ddH2O浸洗5min ×2。

2.技术要点：（1）注意无水乙醇和二甲苯的新旧程度，若出现雾状，则需及时更换；（2）60℃烘箱烤片时间勿过久；（二）消除内源性过氧化物酶由于在红细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、出血坏死组织等组织细胞中含有内源性的过氧化物酶，在DAB显色时，可与HRP一样催化底物显色。

为排除干扰，可用过氧化氢溶液消除该酶的活性。

1.实验操作如下：（1）ddH2O漂洗5min×2；（2）滴加3%H2O2于切片组织细胞上，湿盒中37℃孵育20min；（3）PBS漂洗5min×22.技术要点：（1）过氧化氢消除内源性过氧化酶应避光处理。

（三）抗原修复与封闭液封闭由于固定液和石蜡导致组织蛋白的氨基酸残基在分子内或分子间形成醛基，或发生蛋白交联，导致蛋白质三级结构或四级结构改变，出现空间位阻，从而封闭抗原决定簇，阻碍抗体与抗原的结合。

因此，需要进行抗原修复暴露抗原。

修复方法有很多种，常见的为高温高压修复法。

封闭目的为细胞表面（特别是淋巴造血组织、淋巴细胞、单核细胞等）存在Fc受体，可与抗体（Ig）结合，形成非特异性染色。

免疫组化,免疫荧光

免疫组化,免疫荧光
免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光（Immunofluorescence，简称IF）是常用于研究细胞和组织中蛋白质分布和定位的实验技术。

免疫组化：免疫组化是通过使用特异性抗体来检测和定位组织切片中特定蛋白质的技术。

它包括将组织切片与特异性抗体结合，然后使用染色试剂使抗原-抗体复合物形成染色反应，从而可视化目标蛋白质的位置。

该技术常用于研究细胞分化、组织病理学和肿瘤学等领域。

免疫荧光：免疫荧光是利用荧光染料（荧光标记的二抗或直接标记的一抗）结合目标抗原的方法来检测和定位组织或细胞中的蛋白质。

通过特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后使用荧光标记的二抗或直接标记的一抗与抗原-抗体复合物结合，使目标蛋白质在显微镜下产生荧光信号，以观察其位置。

免疫荧光技术广泛应用于细胞生物学研究、免疫学和医学诊断领域。

这两种技术在原理上非常类似，但在应用上有一些区别。

免疫组化主要用于固定的组织切片，可用于定量和定位分析。

而免疫荧光通常用于固定的细胞，可以提供更高分辨率的蛋白质定位信息，并可以进行多色荧光共标记以研究多个蛋白质的相互作用和定位。

无论是免疫组化还是免疫荧光，都依赖于合适的抗体选择和样本处理步骤来确保结果的准确性。

技术的选择应根据研究
的目的和样本的性质进行评估和决策。

免疫组化和病理活检

免疫组化和病理活检
免疫组化和病理活检是病理检查中比较常规的技术，二者的区别如下：
１．准确性不同。

免疫组化根据抗原表达推断，准确性稍
逊于病理活检；病理活检能直接观察肿瘤细胞结构和细胞学特征，准确性较高。

２．侵入性不同。

免疫组化是一种非侵入性检查；病理活
检是一种小手术，属于有创检查。

３．检查目的不同。

免疫组化主要用于判断肿瘤的起源及
分类型别；病理活检不仅可以判断肿瘤类型，还可以观察癌细胞的结构、分级、淋巴结状态等，以全面了解肿瘤属性。

４．结果解释不同。

免疫组化结果较难直接解释，需要与
病理活检等结果联合判断，以确定肿瘤性质；病理活检结果易于理解和判断。

５．重复性不同。

免疫组化检查重复性较差；病理活检结
果重复性较好。

免疫组化(immunohistochemistry,IHC)

免疫组化（Immunohistonchemistry）是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。

主要应用于以下方面：恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；确定转移性恶性肿瘤的原发部位；对某类肿瘤进行进一步的病理分型；软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定；为临床提供治疗方案的选择。

服务内容
（1）组织标本的固定和石蜡包埋
（2）石蜡标本或冰冻标本的切片
（3）常规或特殊病理切片染色
（4）组织/细胞标本的免疫组化检测
（5）图片拍照及图片分析、数据统计
客户提供
组织或石蜡组织切片；细胞爬片；一抗
我们提供
页脚内容1
（1）免疫组化所需的试剂
（2）免疫组化结果（实物）
（3）实验结果图片
（4）完整的实验过程及实验报告
服务内容
（1）组织标本的固定和石蜡包埋
（2）石蜡标本或冰冻标本的切片
（3）常规或特殊病理切片染色
（4）组织/细胞标本的免疫组化检测
（5）图片拍照及图片分析、数据统计
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客户提供
组织或石蜡组织切片；
细胞爬片；
一抗
我们提供
（1）免疫组化所需的试剂
（2）免疫组化结果（实物）
（3）实验结果图片
（4）完整的实验过程及实验报告
页脚内容3。

免疫组化详细步骤

免疫组化步骤取组织、固定、制片(脱水、透明、浸蜡、包埋）、切片、烤片、抗原修复、滴加抗体一、取组织二、固定三、制片1、脱水透明的酒精梯度和时间70％酒精20min 80%酒精1h90%酒精1h 95％酒精Ⅰ2h95％酒精Ⅱ2h 无水乙醇Ⅰ15min无水乙醇Ⅱ15min 无水乙醇Ⅲ15min二甲苯酒精1：1 15min 二甲苯Ⅰ25min二甲苯Ⅱ25min 二甲苯Ⅲ15min2、浸蜡:石蜡融化后，在石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各浸蜡1h3、包埋四、切片烤片用切片机切片，取完整组织切片放于37℃温水中展片，取完整组织于载玻片上，并放入到60℃的烤箱中烤6个小时五、脱蜡至水六、抗原修复配置柠檬酸抗原修复液于微波中煮沸，在高压锅内放入自来水煮沸(不盖锅盖），将装有煮沸的抗原修复液的烧杯置于高压锅内，将水化后的玻片放入煮沸的抗原修复液中，盖上锅盖，待其压力达到最大时维持三分钟七、取出玻片，水浴逐渐降温直至完全冷却八、将玻片放置于塑料板上，滴加3％的过氧化氢室温孵育10min，以阻断内源性过氧化氢酶，10min过后PBS冲洗2次×3分钟九、除去PBS（甩干或者吸水纸吸干），每张切片滴加第一抗体（稀释相应倍数），4℃过夜十、PBS冲洗3次×2分钟，除去PBS液,每张切片滴加聚合物增强剂，室温孵育10min十一、PBS冲洗2分钟×3次，除去PBS，每张切片滴加酶标抗兔聚合物，室温孵育10min十二、PBS冲洗2分钟×3次，除去PBS，每张切片滴加新配制的DAB（二氨基联苯胺)，室温孵育2～10分钟，显微镜观察十三、苏木精复染:苏木精复染5min，水洗3min，0。

1%HCl浸提两次,水洗3min，反蓝液数秒，水洗十四、脱水透明：70％酒精3min、80％酒精3min、90％酒精3min、无水乙醇3min、二甲苯Ⅰ3min、二甲苯Ⅱ3min十五、封片。

免疫组化判读方法

免疫组化判读方法
免疫组化结果的判读方法如下：
1. 必须设阳性对照和阴性对照。

阳性对照是已知的阳性标本，用于验证试剂和技术方法的可靠性；阴性对照是已知不含待测抗原的标本，用于确定本底情况。

如果阳性对照阴性，表明检测操作方法可能有误，需要重新检测。

2. 抗原表达必须在特定部位。

有些免疫组化的定位在细胞膜，有些在细胞质，有些在细胞核，所以在特定部位阳性表明是真正阳性；如果在非特定部位阳性，或者整个切片阴性，都会判定免疫组化是阴性，或者是假阳性。

此外，根据使用的染色方法不同，判读方法也有所不同。

例如ABC法（卵
白素-生物素-过氧化物酶复合物法）和SP法（抗生物素蛋白链酶素-过氧化物酶复合物法）。

以上信息仅供参考，如果您还有疑问，建议咨询专业人士。

免疫组化是什么意思

免疫组化是什么意思免疫组化是一种常用于分析生物组织或细胞的实验技术，通过使用特定的抗体和染色试剂，可以检测和定位特定的蛋白质或分子在组织或细胞中的表达情况。

在医学、生物学和生物医学研究领域，免疫组化技术被广泛应用于诊断疾病、研究细胞生物学过程以及评估药物的疗效。

免疫组化的原理基于免疫学的核心概念，即抗原与抗体的特异性互相结合。

抗原是指能够诱导免疫系统产生抗体的分子，而抗体则是由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合形成稳定的复合物。

免疫组化利用这一原理，使用特异性抗体与待检测的蛋白质结合，然后通过染色试剂的辅助作用，使该蛋白质在组织或细胞中形成可见的沉积物。

在实际操作中，免疫组化通常需要以下步骤：取得待检测的生物组织或细胞样品，首先进行固定和切片处理，以保持样品的形态结构。

然后将切片进行抗原修复处理，以恢复组织中蛋白质的三维结构，增强抗体与抗原的结合效果。

接下来，样品与特定的抗体进行孵育，抗体与待检测的蛋白质结合。

为了可视化抗原抗体复合物，通过染色试剂的作用，使抗原抗体复合物形成可见的染色沉积物。

染色沉积物的颜色和位置可以反映出目标蛋白质在组织或细胞中的表达情况。

通过免疫组化技术，研究人员可以获得目标蛋白质在组织或细胞中的空间分布信息。

例如，在肿瘤研究中，免疫组化技术可以检测癌细胞中增殖标记物的表达情况，帮助判断肿瘤的恶性程度以及预测患者的预后。

此外，免疫组化还可以用于研究细胞信号传导通路、免疫反应以及发育过程中关键分子的定位和表达。

然而，免疫组化技术也存在一些限制和挑战。

首先，由于不同抗体的特异性和亲和力可能存在差异，需要进行严格的抗体验证，确保其特异性和可靠性。

其次，免疫组化的结果通常是主观的，需要经验丰富的操作人员进行解读和分析。

此外，由于样品处理和染色过程中多个步骤的影响，免疫组化结果的重现性可能受到影响。

随着技术的发展和进步，免疫组化技术也不断更新和改进。

例如，引入了自动化设备和图像分析软件，可以提高实验的效率和结果的准确性。

免疫组化h-score分级

免疫组化h-score分级
免疫组化（immunohistochemistry，IHC）H-score是一种常用
于评估蛋白质表达水平的方法，特别是在肿瘤研究中被广泛应用。

H-score是通过对组织切片进行免疫组化染色后，根据染色强度和
阳性细胞的百分比来计算得出的分级结果。

在进行免疫组化染色后，通常会对切片中的细胞进行评分。

评
分的标准可以根据染色强度和阳性细胞的百分比来确定。

通常，染
色强度可以分为无、弱、中和强四个等级，阳性细胞的百分比则是
指在切片中阳性细胞所占的比例。

H-score的计算方法是将染色强度的分级（0-3）与相应强度的
阳性细胞百分比相乘，并将所有结果相加得到最终的H-score。

这
个得分的范围通常是0-300，其中0代表完全阴性，300代表完全阳性。

H-score的应用可以帮助研究人员对蛋白质表达水平进行定量
分析，特别是在肿瘤研究中，可以帮助确定肿瘤的分子特征和预后。

同时，H-score也可以用于评估药物治疗对蛋白质表达的影响，对
临床治疗和药物研发具有重要意义。

总的来说，免疫组化H-score分级是一种定量评估蛋白质表达水平的方法，通过对染色强度和阳性细胞百分比的综合评定，可以为肿瘤研究和临床治疗提供重要参考依据。

免疫组化操作规程

免疫组化操作规程
《免疫组化操作规程》
免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的技术，其操作规程的严谨性和标准化对于获得准确可靠的结果至关重要。

下面是一份免疫组化操作规程供参考：
1. 样本处理：将组织标本固定在适当的条件下，然后进行蜡包埋并切片。

注意保护好标本的完整性和质量。

2. 抗原修复：对标本进行适当的热处理或酶处理，以修复由于固定等步骤导致的抗原构象变化。

3. 抗体选择：选择适当的一抗和二抗，确保一抗的特异性和敏感性，二抗的来源和标记物的稳定性。

4. 标本处理：将切片标本进行脱脂、脱水和透明化处理，确保标本的透明度和形态保持完好。

5. 抗体染色：将标本与一抗和二抗分别反应，通过荧光标记或酶标记来检测靶标记的位置和强度。

6. 阅读结果：采用专业显微镜观察标本的染色结果，进行定量分析或者定性分析。

7. 结果验证：通过对照组和阳性对照进行染色结果的验证，确
保结果的准确性。

8. 结果分析：根据染色结果和临床信息进行综合分析，作出科学可靠的结论。

以上是一份免疫组化操作规程的基本内容，但在实际操作中还需要根据具体的实验室条件和要求进行进一步的细化和规范化。

希望这份规程能为从事免疫组化工作的科研人员和临床检验人员提供一些帮助。

免疫组化的定义

第四篇免疫组织化学一、免疫组织化学的定义：（一）什么叫免疫组织化学？简单地说，用已知的抗原或者抗体去检测待检组织中的抗原或抗体，根据其结合后经一系列方法的处理，呈色反应，在光镜下确定组织的来源属性和部位。

目前免疫组织化学作为病理诊断，鉴别特殊病例，是不可缺少的最重要的手段，国内在免疫组织化学的应用方面已经普遍地展开并扩展至基层单位，为病理事业做出应有的贡献。

抗原（抗原，AG）它是一类可以刺激机体的免疫系统并促进其发生免疫应答，与免疫应答产物即抗体和效应细胞，在体内或体外发生特异性结合的物质。

1）抗原的性质①异物性。

它是抗原所具有的特性，机体对进入体内的某些异物，异体大分子物质可产生免疫应答。

目前生物制剂公司利用这一原理生产出许多适合于临床诊断的抗体。

但是，并非所有的异物都是抗原。

例如矽尘等一些生物性高分子聚合物，它们不会刺激机体的免疫系统产生相应的抗体物质，而只是肺对吸入的矿物性和有机粉尘的非肿瘤性反应[1]。

矽肺是肺吸入矽颗粒沉积的结果，也是机体对另一种外来物反应的结果。

②理化性状。

凡具有抗原性的物质，其分子越大，它的免疫原性就越强。

具有抗原性的物质，其分子量都较大，起码在一万以上，抗原分子量越大，其相应的表面积也越大，接触、碰撞免疫细胞的机会就增多，这犹如一颗大树，根深叶茂，占据着大片空间，不易被风刮跑。

抗原性物质由于分子量大，盘踞着较大地方，在体内存留着一定的时间，时间越长，其对机体的刺激作用就越强。

③特异性。

各类抗原物质结构繁琐，组成的化学结构也很复杂，但是能够刺激机体并与抗体发生结合反应的化学组成，仅仅是抗原物质表面的一些具有活性的化学基团，化学结构及空间构型，称为抗原决定簇。

即一种抗体只能与相应的抗原起反应而不能与其它的抗原起反应[2]，这就是抗原的特异性，称之为特异性抗原。

虽然如此，特异性抗原也只是相对的，因为人们希望这种特异性抗原只存在于某种细胞及结构而不存在于其它细胞及结构的特有抗原[3]，但至今为止，仅发现较为狭小范围的特异性抗原，如前列腺特异抗原（Prostatespecific 抗原,PSA）,它是由前列腺上皮细胞合成的一种糖蛋白，目前认为是具有特异性的肿瘤标记物之一，它可以用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断，但不能用于同源的前列腺肿瘤的良恶性诊断，因为它还不是非常特异性的抗原，前列腺增生的上皮也可以呈阳性反应。

免疫组化

第一抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。

种类包括单克隆抗体和多克隆抗体；第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。

二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。

用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。

免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。

样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。

elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。

免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。

Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。

western bolt先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。

免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。

以下western 和Elisa的区别不是原创，是找的资料。

western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。

WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。

免疫组化是什么意思

免疫组化是什么意思免疫组化是一种在生物学领域中常用的实验技术方法，用于检测、定位和鉴定分子结构和细胞组分。

它通过使用抗体特异性地与目标分子或细胞相互作用，并利用染色剂、辅助试剂或其他检测方法来实现目标物质的可视化。

免疫组化技术的原理基于免疫学的基本原理，即抗原与抗体的特异性结合。

在免疫组化中，首先需要制备一种特异性抗体，这种抗体可以识别并与目标分子或细胞特异性结合。

抗体可以来源于动物体内产生的抗原抗体或通过体外合成的克隆抗体。

然后，将制备好的抗体标记上染色剂、荧光剂等标记物质，以便于目标物质的可视化。

在实验操作中，通常需要对待测标本进行固定、切片和免疫染色处理。

固定处理可以固定细胞和组织的结构，以保持其原有形态和抗原性。

切片处理是将固定好的组织切成薄片，通常采用切片机或冰冻切片技术。

免疫染色处理是将切片中的目标物质与特异性抗体结合，并利用标记物质使其可见。

免疫染色处理通常包括一系列的步骤，如抗原解脱、抗体孵育和可视化等。

抗原解脱是为了使目标物质（抗原）暴露在细胞或组织的表面，以便于抗体结合。

这一步骤可以通过煮沸、酸碱处理、酶消化等方法来实现。

抗体孵育是将制备好的抗体加到标本上，以特异性地与目标物质结合。

通常，抗体需要在孵育液中与标本反应一段时间，以确保充分结合。

最后，通过可视化方法来检测目标物质的存在和位置，如荧光显微镜、光学显微镜等。

免疫组化技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。

在生物医学研究中，免疫组化可以用于检测和定位特定蛋白质、细胞因子、受体和激素等，从而揭示其在生物学过程中的功能和相互作用。

在临床诊断中，免疫组化可以帮助医生确定疾病的类型和分级，如癌症的诊断和预后评估。

在药物研发中，免疫组化可以用于评估药物的效果和毒副作用，并帮助优化治疗方案。

总之，免疫组化是一种重要的实验技术方法，通过抗体的特异性结合和可视化检测，可以对分子结构和细胞组分进行定位和鉴定。

它在生物医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值，为揭示生物学过程和疾病机制提供了有力的工具。

建议免疫组化什么意思

建议免疫组化什么意思建议免疫组化，是指对于生物体内所含有的某种物质或生命现象进行鉴定和定位的一种技术手段。

在免疫组化的过程中，利用特异性抗体与待检测物质进行结合，并通过染色或荧光标记的方式进行可视化观察，从而确定待检测物质的存在与定位。

免疫组化技术在医学领域有着重要的应用价值。

首先，免疫组化技术可以辅助病理学家对患者组织、细胞等进行详细的鉴定和分类。

通过检测特定蛋白在组织中的表达情况，可以帮助医生更准确地诊断疾病、确定治疗方案，提高治疗效果。

其次，免疫组化技术可以用于筛查潜在的肿瘤标志物和细胞表面受体，为肿瘤的早期诊断和治疗提供重要的依据。

此外，免疫组化技术还可以用于研究疾病的发生机制、新药的研发等方面，在科学研究上具有广泛的应用前景。

为了充分发挥免疫组化技术的作用，建议在以下几个方面进行优化和改进。

首先，免疫组化技术需要进一步提高检测的灵敏度和特异性。

目前的免疫组化技术在某些情况下可能出现假阳性或假阴性结果，对结果的准确性和可靠性提出了挑战。

因此，需要研发更加敏感和特异的抗体，并针对免疫组化过程中可能出现的干扰因素进行筛查和优化，提高技术的准确性和可靠性。

其次，建议加强对免疫组化技术的标准化和规范化。

由于目前免疫组化技术的操作步骤和分析方法存在较大的差异，不同实验室之间的结果可能存在较大的差异性。

因此，制定统一的实验操作规范和结果评估指标，加强对免疫组化技术的质量控制和质量评估，可以提高技术在不同实验室之间的可比性和可重复性。

此外，建议加强免疫组化技术与其他检测手段的联合应用。

虽然免疫组化技术在一定程度上可以提供定性的信息，但对于定量分析仍然存在一定的局限性。

因此，可以将免疫组化技术与其他定量分析技术（如质谱技术、核酸检测技术等）相结合，以提供更全面、准确的信息。

最后，建议加强免疫组化技术在临床实践中的推广和应用。

虽然免疫组化技术具有重要的应用价值，但在一些医疗机构中仍未得到广泛应用。

需要加强对医生和医学生的培训，提高其对免疫组化技术的认识和应用能力。

免疫组化的固定时间

免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）的固定时间取决于所使用的固定剂类型、组织类型和实验目的等因素。

一般来说，固定时间可以在数分钟到数小时之间。

常用的固定剂如甲醛通常需要较长的固定时间，一般在15 分钟到数小时不等，以确保组织充分固定。

对于较小的组织样本，固定时间可能较短，而对于较大或较厚的组织样本，可能需要更长的固定时间。

固定时间的选择也需要考虑组织类型。

不同类型的组织对固定剂的反应和固定时间的要求可能不同。

例如，一些软组织可能需要较短的固定时间，而硬组织可能需要较长的固定时间。

此外，实验目的也会影响固定时间的选择。

如果需要保留组织的抗原性或细胞结构，可能需要较短的固定时间，以减少抗原的遮蔽或结构的改变。

而对于某些特殊的实验目的，可能需要更长的固定时间来确保组织的稳定性和可重复性。

最佳的固定时间应根据具体情况进行优化，并在实验前进行适当的预实验来确定。

同时，固定时间还应考虑到后续的免疫组化实验步骤和抗体的要求。

建议参考相关的实验指南和文献，以获得更具体的建议和指导。

免疫组化定位

免疫组化定位
免疫组化定位是一种生物化学技术，用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的存在和分布。

其原理是利用特定抗体与目标蛋白质结合，然后通过染色或荧光标记等手段进行可视化，从而确定目标蛋白质在组织中的位置。

免疫组化定位可以在细胞和组织级别上进行蛋白质定位分析。

一般的步骤包括固定细胞或组织样品、抗原修复、孔隙堵塞、抗体孵育、洗涤等，最后使用染色剂或荧光标记进行显色或荧光显微镜观察。

通过可视化的结果，可以确定目标蛋白质在细胞器、细胞膜、细胞核等位置的分布和表达情况。

免疫组化定位在生物医学研究中广泛应用，如研究细胞分化、细胞增殖、蛋白质相互作用等。

此外，免疫组化定位还可用于诊断疾病，如肿瘤细胞表面标记物的检测、病毒感染细胞的鉴定等。

通过免疫组化定位，可以在细胞和组织水平上观察和研究蛋白质的空间分布和功能定位，为生物医学研究和临床诊断提供重要信息。